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    基于礦物元素指紋分析地理標(biāo)志的品牌腐乳產(chǎn)地溯源*

    2024-01-09 04:51:06趙四標(biāo)張加穩(wěn)刁玉華
    昆明學(xué)院學(xué)報(bào) 2023年6期
    關(guān)鍵詞:腐乳產(chǎn)地礦物

    趙四標(biāo),張加穩(wěn),王 燦,陳 嫻,刁玉華

    (昆明市食品藥品檢驗(yàn)所 食品檢驗(yàn)中心,云南 昆明 650034)

    腐乳在我國有悠久的歷史[1],具有儲(chǔ)存時(shí)間長、風(fēng)味獨(dú)特、食用方便、營養(yǎng)物質(zhì)豐富等優(yōu)點(diǎn)[2].這種發(fā)酵食品,以其低廉的價(jià)格、美味的口感而被廣泛選用[3],一直深受消費(fèi)者的青睞.尤其是油腐乳,它以細(xì)膩的口感和香甜的滋味[4],成為云貴川地區(qū)獨(dú)具特色的發(fā)酵食品,深受當(dāng)?shù)厝嗣竦臍g迎.牟定腐乳作為省級(jí)地理標(biāo)志產(chǎn)品[5],在云南轄區(qū)內(nèi)知名度高,受眾面廣,但在流通過程中,品牌較多、工藝水平差異大、質(zhì)量參差不齊等食品安全問題日益突出[6-8],引起消費(fèi)者和相關(guān)部門關(guān)注.

    越來越多科研工作者通過產(chǎn)地溯源、產(chǎn)地保護(hù)、元素指紋鑒定等技術(shù)手段參與到地理標(biāo)志產(chǎn)品和食品安全保護(hù)中.隨著礦物元素指紋分析技術(shù)的發(fā)展,它已經(jīng)成為一種重要的產(chǎn)地溯源手段,被廣泛應(yīng)用于各種農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)之中.從馬鈴薯[9]、食用油[10]、葡萄酒[11]、蜂蜜[12]、茶葉[13]、大米[14-16]、大豆[17]、咖啡[18]、苦蕎[19]等植物性農(nóng)產(chǎn)品,到包括羊肉[20]、牛肉[21]、豬肉[22]在內(nèi)的動(dòng)物性農(nóng)產(chǎn)品,都可以通過這種方式進(jìn)行溯源,上述研究結(jié)果顯示,基于礦物元素的分析技術(shù)在產(chǎn)地溯源、元素指紋鑒定等領(lǐng)域,具有科學(xué)性、準(zhǔn)確性和普遍性,可以有效地幫助企業(yè)實(shí)現(xiàn)溯源目標(biāo).現(xiàn)有關(guān)于腐乳的研究主要集中在安全性[23]、微生物種群[24,25]、風(fēng)味物質(zhì)[26,27]、營養(yǎng)成分[28]及制作工藝[29,30]等方面,而關(guān)于礦物元素指紋分析應(yīng)用于腐乳產(chǎn)地溯源尚未見相關(guān)報(bào)道.

    本研究擬以不同產(chǎn)區(qū)不同品牌的31個(gè)腐乳樣品為實(shí)驗(yàn)材料,通過礦物元素含量分析討論,開展腐乳產(chǎn)地判別研究,建立適合于腐乳中礦物元素指紋分析的方法,為地理標(biāo)志產(chǎn)品牟定腐乳開展產(chǎn)地判別、品牌鑒定及產(chǎn)地溯源保護(hù)提供一定的參考與依據(jù).

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    ICP分析用26種元素標(biāo)準(zhǔn)溶液,使用Bi、Ge、In、Li、Lu、Rh、Sc、Tb多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(內(nèi)標(biāo)液)(標(biāo)液元素質(zhì)量濃度分別為 100 μg/mL、10 μg/mL,標(biāo)液介質(zhì)為15%(V/V)HCl,5%(V/V)HNO3,2%(V/V)HF);國家標(biāo)準(zhǔn)樣品汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(以上標(biāo)液來源于國家有色金屬分析測(cè)試中心,濃度為 1 000 μg/mL,標(biāo)液介質(zhì)為 1 mol/L HNO3,唯一標(biāo)識(shí):211002-7);硝酸(優(yōu)級(jí)純、川東化工);過氧化氫;待測(cè)樣品腐乳;超純水(18.2 MΩ·cm).

    1.2 儀器與設(shè)備

    電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(廠家:賽默飛,型號(hào):ICP-MS iCAP Q)、微波消解儀(廠家:安東帕、型號(hào)Multiwave PRO、聚四氟乙烯消解罐41支)、分析天平(梅特勒、型號(hào)AL104,感量為 0.000 1 g)、自動(dòng)控溫恒溫電熱板(BHW-09A45)、超純水機(jī)(賽多利斯ariumbagtank 50)、高純氬氣(純度>99.999%)、高純氦氣(純度>99.999%).

    1.3 方法

    1.3.1 樣品采集

    隨機(jī)采集3個(gè)產(chǎn)地,14個(gè)品牌的市售腐乳產(chǎn)品,共計(jì)31個(gè)樣品,采樣相關(guān)信息見表1.將隨機(jī)采集的腐乳樣品調(diào)制均勻待用.

    表1 樣品信息表

    1.3.2 樣品分析

    為了準(zhǔn)確地檢測(cè)腐乳樣品中各種礦物元素含量,按照現(xiàn)行國標(biāo)GB 5009.268—2016[31]開展實(shí)驗(yàn).稱取 0.300 g 腐乳樣品置于消解罐中,加入 7 mL 濃硝酸后放置過夜,之后按照GB 5009.268—2016第一法的升溫方式進(jìn)行消化處理,以確保消解完全.消解完成后,使用控溫電熱板 80 ℃ 趕酸 1.5 h,純水定容至 50 mL,待測(cè).使用經(jīng)調(diào)諧后,各元素靈敏度、氧化物、雙電荷各參數(shù)條件符合的電感耦合等離子質(zhì)譜儀測(cè)定樣品中Na、K、Ca、Mg、Zn、Fe、Cu、Mn、Ni、Ti、V、Cr、Cd、As、Se、Sr、Tl、Pb、Mo、Co、Sn、Sb、Ba、Hg 24種元素的含量,用外標(biāo)法進(jìn)行定量,通過三通在線添加內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正.電感耦合等離子體質(zhì)譜儀的工作條件參照GB 5009.268—2016附錄B儀器參考條件B.1.檢測(cè)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)內(nèi)標(biāo)回收率在90%~110%之間,偏差高于±10%時(shí),重新測(cè)定,單個(gè)腐乳樣品采用連續(xù)重復(fù)測(cè)定3次后取平均值進(jìn)行定值.

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    使用Excel 2019與SPSS 19兩種不同的數(shù)據(jù)處理軟件,解析出不同的分析結(jié)果,包括方差分析、主成分分析、判別解析以及聚類分析.

    2 結(jié)果與分析

    2.1 方法學(xué)考察結(jié)果

    對(duì)不同元素的線性方程、相關(guān)系數(shù)、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)偏差、檢出限和定量限進(jìn)行考察,見表2,結(jié)果顯示:各種元素的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性關(guān)系好,相關(guān)系數(shù)R2均大于等于 0.999 5,檢出限和定量限都很低,該檢測(cè)方法科學(xué)、準(zhǔn)確、可行,能夠準(zhǔn)確測(cè)定腐乳中24種元素含量.

    表2 各元素的線性回歸方程及相關(guān)參數(shù)

    2.2 不同產(chǎn)地腐乳中礦物元素含量差異分析

    不同產(chǎn)地腐乳中無機(jī)元素含量對(duì)比見表3,該表中均值是指同一產(chǎn)地中同一元素的含量平均值,先通過平均值算出標(biāo)準(zhǔn)差,再通過均值、標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得到表4中的平方和、均方、F值和P值.P值是一個(gè)關(guān)鍵指標(biāo),根據(jù)表3、表4的數(shù)據(jù)可以看出,24種礦物元素中,有11種元素(Na、V、Cr、Mn、Fe、Zn、As、Se、Sn、Ba、Tl)的P值超過了0.05,這意味著它們之間的差異并不顯著,而另外13種元素的P值則低于0.05,這意味著它們之間的差異顯著,由此可見:腐乳中部分元素的含量會(huì)因地域不同而有顯著的差異.

    表3 不同產(chǎn)地腐乳中無機(jī)元素的含量對(duì)比 mg/kg

    表4 不同產(chǎn)地腐乳中無機(jī)元素的含量方差分析結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    續(xù)表4

    2.3 礦物元素含量主成分分析

    主成分分析是指應(yīng)用礦物元素含量數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上計(jì)算得到的初始特征值、提取平方和載入結(jié)果等參數(shù),找出數(shù)據(jù)群體中主要影響因子,用數(shù)據(jù)群體中的少數(shù)關(guān)鍵性、特征參數(shù)、重要指標(biāo)或單個(gè)因素可以用來代表數(shù)據(jù)群體中的其余眾多指標(biāo)或因素,從而將問題簡化的一種多元統(tǒng)計(jì)分析方法[32,33].采集31個(gè)腐乳樣品中礦物元素的主成分分析如表5所示,提取匯總數(shù)據(jù)中初始特征值大于1的成分作為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)進(jìn)行成分分析研究,得到前8個(gè)主成分貢獻(xiàn)率分別為17.439%、16.532%、15.377%、8.732%、6.941%、5.899%、5.681%、4.351%(表5),篩選出的8個(gè)主成分的累積貢獻(xiàn)率達(dá)到了80.957%,它們能夠完整地展示、重現(xiàn)、描述各種來源的腐乳樣本的各種元素的含量及其構(gòu)成,從而更好地把握其本質(zhì)特征.

    通過對(duì)礦物元素的主成分分析,可發(fā)現(xiàn)了表6中的前8個(gè)主要因子,對(duì)這些因子進(jìn)行了特征向量劃分,以便更清晰地識(shí)別出其中的關(guān)鍵元素,目的在于能夠更準(zhǔn)確地分析出這些元素.

    表5 腐乳樣品中礦物元素含量的主成分分析

    表6 腐乳樣品中24種礦物元素的主成分貢獻(xiàn)率分析 %

    續(xù)表6 %

    通過分析礦物元素的主成分,可以從表5中獲取信息.按照張新昕[9]、鹿保鑫[34]的方法,一一挑選出腐乳樣品中的各種元素.將第1個(gè)、第2個(gè)因子的載荷值分開,并將它們的絕對(duì)值分布在圖1、圖2上(原數(shù)據(jù)見表6),以便更好地理解它們的特性.這些因子的載荷值有助于更準(zhǔn)確地識(shí)別出各種元素,從而更好地分析出腐乳的組成成分.隨著載荷值的增加,元素的方差貢獻(xiàn)也會(huì)增加,從而使得分析結(jié)果更加準(zhǔn)確.根據(jù)圖1,Co、Cu、Cd、Hg、Sr、Sn、K、Na、Ca、Pb的載荷值均超過了0.40,表明這10個(gè)元素的載荷值相對(duì)更高,能夠更好地反映第1個(gè)主成分的特征.K、Ca、Sr、Pb 4個(gè)重要的金屬元素的載荷值絕對(duì)值不僅在第1主成分載荷值超過0.40,且在第2個(gè)主成分因子中介于0.48~0.75之間,值較大,4個(gè)元素也能夠準(zhǔn)確地揭示出第2個(gè)主要組成部分的含量.結(jié)合第1、2主成分因子的載荷值絕對(duì)值含量,Co、Cu、Cd、Hg、Sr、Sn、K、Na、Ca、Pb這10個(gè)元素不僅能提供有價(jià)值的區(qū)域性信息,而且還能提供有效的腐乳產(chǎn)地追蹤依據(jù).

    圖1 第1主成分因子載荷值的絕對(duì)值

    圖2 第2主成分因子載荷值的絕對(duì)值

    2.4 不同產(chǎn)地腐乳礦物元素含量判別分析

    2.4.1 不同產(chǎn)地腐乳礦物元素含量的判別和分類分析

    通過對(duì)不同產(chǎn)地腐乳樣品中24種礦物元素含量分析,可以準(zhǔn)確識(shí)別云南省楚雄州牟定縣、昆明市石林縣、貴州省貴陽市三大主要食品產(chǎn)區(qū)的腐乳,利用Fisher函數(shù)、交叉檢驗(yàn),采取逐步判別法進(jìn)行判別分析[15,33],分析結(jié)果表明:楚雄牟定、昆明石林、貴陽判別正確率分別為100%、100%、96%,利用24種礦物元素之間的含量差異,可以將貴州省和云南省楚雄州兩大生產(chǎn)區(qū)進(jìn)行區(qū)分,以此實(shí)現(xiàn)昆明市石林縣、楚雄州牟定縣原產(chǎn)地的溯源,能夠滿足腐乳產(chǎn)品的溯源要求.

    在產(chǎn)地判別應(yīng)用中,如果同時(shí)測(cè)定24種礦物元素含量,對(duì)儀器設(shè)備、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、試劑耗材等消耗較大,檢測(cè)周期長,經(jīng)濟(jì)成本較高.為了更有效地識(shí)別產(chǎn)地,可使用SPSS軟件的識(shí)別功能,篩選出有效的礦物物元素.在確保識(shí)別準(zhǔn)確性的前提下,可采用逐步識(shí)別的方法來追蹤不同地區(qū)的腐乳樣品的產(chǎn)地.經(jīng)過分析,發(fā)現(xiàn)6種元素被納入了判別模型,它們分別是Co、Cu、Cd、Hg、Sr和Sn.經(jīng)過回代檢驗(yàn),這些元素的正確判別率達(dá)到了93.5%,可以滿足實(shí)際工作需求.根據(jù)這些元素的特性,建立了一個(gè)線性判別函數(shù),具體系數(shù)參見表7.

    表7 判別式分類函數(shù)系數(shù)

    2.4.2 驗(yàn)證判別分析結(jié)果

    為驗(yàn)證主成分分析的可靠性,采集楚雄牟定腐乳6份,貴陽腐乳2份,并將3個(gè)產(chǎn)區(qū)的31個(gè)腐乳樣品的礦物元素?cái)?shù)據(jù)以及用于判定的8份腐乳樣品作為分組變量進(jìn)行結(jié)果判別.通過判別6個(gè)礦物元素指標(biāo)、6個(gè)判別組樣品均判別準(zhǔn)確,昆明石林、楚雄牟定2個(gè)產(chǎn)地樣品存在錯(cuò)判率,交叉檢驗(yàn)的錯(cuò)判率為3.3%小于10%,錯(cuò)判率較小,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)腐乳產(chǎn)地判別的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值,證明6種礦物元素Co、Cu、Cd、Hg、Sr、Sn,對(duì)貴州貴陽和云南省內(nèi)腐乳,以及楚雄牟定和昆明市石林生產(chǎn)的腐乳都具有有效的判別能力,可以很好地把楚雄牟定腐乳區(qū)分出來.

    2.5 基于礦物元素含量的聚類分析

    圖3 不同腐乳產(chǎn)地的礦物元素聚類分析

    使用SPSS 19.0軟件,將不同產(chǎn)地的31個(gè)參試腐乳樣品(包含14個(gè)腐乳品牌)中24種元素進(jìn)行聚類分析,采用Ward聚類方法計(jì)算歐式距離,用最短距離法得到樹狀圖[9],結(jié)果如圖3所示.以最小分類級(jí)別為分割線,所有樣品可以分為6類,其中牟定與貴陽產(chǎn)地腐乳元素含量的歐式距離較遠(yuǎn),被完全分離,其礦物元素組成差異較大,牟定與石林樣品存在交叉現(xiàn)象,同時(shí)也發(fā)現(xiàn)牟定樣品也被劃分為5類,石林不同地區(qū)在礦物元素的組成上存在較大差異,證明了礦物元素的組成也可應(yīng)用于石林不同品牌腐乳的品牌鑒別、產(chǎn)地區(qū)分.

    3結(jié)論

    通過對(duì)腐乳樣品中礦物元素含量和組成進(jìn)行分析,說明不同產(chǎn)地腐乳中不同礦物元素組成和含量均存在顯著差異.使用Fisher函數(shù)和逐步判別分析法,可以準(zhǔn)確地識(shí)別出腐乳中礦物元素含量,再通過對(duì)腐乳中礦物元素含量的方差分析、主成分分析、判別分析進(jìn)行礦物元素特征指標(biāo)確認(rèn),結(jié)合Ward聚類分析計(jì)算歐式距離,并使用最短距離法生成樹狀圖.通過判別分析結(jié)果的驗(yàn)證,結(jié)果表明:

    96.7%的樣本中含有Co、Cu、Cd、Hg、Sr和Sn 這6種重要的金屬元素,判別結(jié)果良好,可以作為楚雄州牟定縣腐乳產(chǎn)地區(qū)分、品牌溯源的關(guān)鍵指標(biāo).本研究利用微波消解進(jìn)行樣品前處理,結(jié)合電感耦合等離子體質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定腐乳中的24種礦物元素,由于腐乳加工工藝成熟,具有地域特色,影響因素較小,數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、結(jié)果可信度高、可行性強(qiáng),故該技術(shù)可以作為腐乳的產(chǎn)地溯源和質(zhì)量控制的有效指標(biāo),實(shí)現(xiàn)對(duì)腐乳的產(chǎn)地溯源、質(zhì)量控制、特色地理標(biāo)志食品的保護(hù)、真?zhèn)舞b別等目的.

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