乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA載量與α-SMA、AFP及肝纖維化的關(guān)系

廖洪柳, 徐海鋒, 徐維蔓

達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川達(dá)州 635000

乙型肝炎肝硬化常由慢性乙型肝炎病毒感染、炎癥長期刺激所致[1]。全球每年死于乙型肝炎肝硬化的患者多達(dá)100萬人,因此關(guān)注乙型肝炎肝硬化的防治工作尤為重要,應(yīng)選擇合適的臨床檢測指標(biāo)對該類人群進(jìn)行病情評估[2-3]。乙肝病毒脫氧核糖核酸(hepatitis B virus DNA,HBV-DNA)具有良好的靈敏度和特異度,常被用于評估乙型肝炎病情進(jìn)展[4]。α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)同時(shí)具有成纖維細(xì)胞和肌細(xì)胞的特性,近年來研究發(fā)現(xiàn)α-SMA可以用于評估肝組織損傷[5-6]。既往已有研究證實(shí),甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在慢性乙肝類型疾病病情評估中有較好的臨床價(jià)值[7-8],但關(guān)于其與HBV-DNA載量水平關(guān)系的研究報(bào)道相對較少。鑒于此,本次研究旨在探討乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA載量與α-SMA、AFP及肝纖維化的關(guān)系,旨在為臨床診治工作提供一定幫助。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2020年5月—2022年5月收治的乙型肝炎肝硬化患者108例,參考李寧俠等[9]方法檢測HBV-DNA載量,并依據(jù)其水平將患者分為低水平組(35例,HBV-DNA<1.0×103拷貝/mL)、中水平組(39例,1.0×103拷貝/mL～1.0×107拷貝/mL)和高水平組(34例,HBV-DNA≥1.0×107拷貝/mL)。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[10];②未接受過抗病毒治療,或入組前半年內(nèi)未進(jìn)行抗病毒或免疫治療;③無其他類型肝炎病毒感染。排除標(biāo)準(zhǔn):①肝癌、胃癌、膽管癌;②免疫系統(tǒng)疾病;③心、腎等重要臟器功能損傷;④妊娠期或哺乳期婦女;⑤臨床資料不完整。本研究為回顧性研究,檢測指標(biāo)所需樣本采集均取得患者及家屬知情同意,并簽署同意書,且符合赫爾辛基宣言。各組一般資料比較差異無顯著性(P>0.05;表1)。

表1 各組一般資料的比較

1.2 α-SMA的檢測

所有患者均行肝組織活檢術(shù)采集肝組織標(biāo)本,以SP法依次切片、脫蠟、水化、修復(fù)、一抗和二抗溫浴、顯色、復(fù)染、脫水、透明和封片后,以PBS代替一抗為空白對照,胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色即可判定為陽性細(xì)胞,由Image 6.0軟件計(jì)算α-SMA光密度(optical density,OD)。

1.3 肝纖維化指標(biāo)檢測

采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清肝纖維化指標(biāo),包括透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)、層粘連蛋白(lanminin,LN)、Ⅳ型膠原(type Ⅳ collagen,Ⅳ-C)和Ⅲ型前膠原(procollagen Ⅲ,PC-Ⅲ)。儀器選擇羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,試劑和試劑盒均為儀器配套產(chǎn)品。

1.4 肝功能指標(biāo)和AFP的觀察

比較各組谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOT)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)水平。采用ELISA法檢測血清AFP水平,試劑與試劑盒購自美國Sigma公司,操作步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平的比較

隨著HBV-DNA載量水平升高,各組GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組(P<0.05;表2)。

表2 各組GPT、GOT、TBIL、α-SMA、AFP水平的比較

2.2 各組肝纖維化指標(biāo)的比較

隨著HBV-DNA載量水平升高,各組HA、LN、Ⅳ-C和PC-Ⅲ水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組(P<0.05;表3)。

表3 各組肝纖維化指標(biāo)的比較 mg/L

2.3 HBV-DNA載量與各指標(biāo)的相關(guān)性

對HBV-DNA載量水平進(jìn)行變量賦值,HBV-DNA載量低水平、中水平和高水平分別賦值為1、2、3。Pearson相關(guān)性分析顯示,HBV-DNA載量水平與α-SMA、AFP、HA、LN、Ⅳ-C、PC-Ⅲ均呈正相關(guān)(P<0.05;圖1)。

圖1 Pearson相關(guān)性分析HBV-DNA載量水平與各指標(biāo)的相關(guān)性1為HBV-DNA載量低水平;2為HBV-DNA載量中水平;3為HBV-DNA載量高水平。

3 討 論

乙型肝炎肝硬化因早期缺乏典型的臨床表現(xiàn)常被人們所忽視,一經(jīng)確診多已處于較為嚴(yán)重的階段,預(yù)后不甚理想[11]。故選擇有效的血清學(xué)檢測指標(biāo)對患者進(jìn)行病情評估很有必要。

本研究發(fā)現(xiàn),隨著HBV-DNA載量水平升高,各組GPT、GOT、TBIL水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組。持續(xù)的HBV感染可以誘導(dǎo)肝臟炎癥反應(yīng),引起肝組織纖維化,當(dāng)病情進(jìn)展到一定程度時(shí),可發(fā)展為肝硬化。GPT存在于肝臟細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),GOT主要存在于線粒體,在肝細(xì)胞受到損傷時(shí),GPT、GOT會(huì)相繼釋放入血,其血清水平升高可以反映肝細(xì)胞損傷程度。此外,肝細(xì)胞損傷還會(huì)影響肝細(xì)胞對膽紅素的攝取和轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致血清TBIL水平升高。

本研究結(jié)果顯示,隨著HBV-DNA載量水平升高,各組α-SMA、AFP水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組。α-SMA在肝內(nèi)膠原形成和肝纖維化中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,其作用機(jī)制可能與轉(zhuǎn)化生長因子-β/Smad信號(hào)通路有關(guān)[12]。臨床可以通過降低血清α-SMA表達(dá),抑制肝星狀細(xì)胞活化,進(jìn)而改善肝纖維化。AFP是由卵黃囊和胎肝細(xì)胞產(chǎn)生,目前多被認(rèn)為是肝癌高特異性蛋白質(zhì)[13]。HBV-DNA與肝細(xì)胞DNA結(jié)合后,改變了細(xì)胞的遺傳特性,使AFP調(diào)控基因發(fā)生改變,AFP大量合成[14]。肝細(xì)胞的損傷和修復(fù)過程均會(huì)伴隨肝臟纖維化形成,而修復(fù)與再生的肝細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生大量AFP,故而呈現(xiàn)較高水平AFP。本文進(jìn)一步分析可見,HBV-DNA載量水平與α-SMA、AFP均呈正相關(guān),表明α-SMA、AFP水平檢測可以用于評估其病情進(jìn)展,指導(dǎo)臨床治療,但具體關(guān)系仍需未來進(jìn)一步深入研究。

本研究發(fā)現(xiàn),隨著HBV-DNA載量水平升高,各組HA、LN、Ⅳ-C和PC-Ⅲ水平比較,均低水平組<中水平組<高水平組,且相關(guān)性分析可見,HBV-DNA載量水平與上述指標(biāo)均呈正相關(guān)。HA是由肝臟間質(zhì)細(xì)胞組成,對于診斷肝硬化患者肝臟纖維化具有較好的靈敏度。LN主要存在于基底膜中,伴隨纖維細(xì)胞增加可生成大量LN。Ⅳ-C是基底膜重要組成部分,常被作為肝臟纖維化的臨床診斷標(biāo)志物。肝臟纖維化病變會(huì)使PC-Ⅲ水平明顯升高,PC-Ⅲ常被用于早期肝硬化的診斷與評估工作[15]。乙型肝炎肝硬化患者由于長期HBV感染,使肝臟長期處于損傷的病理狀態(tài),肝臟結(jié)締組織增生,不斷促進(jìn)肝臟纖維化進(jìn)程,臨床可以通過上述指標(biāo)檢測評價(jià)肝臟的纖維化程度,以此評估HBV復(fù)制的活躍性。

綜上所述,乙型肝炎肝硬化患者HBV-DNA載量水平越高,α-SMA、AFP水平越高,肝臟纖維化程度越嚴(yán)重,且α-SMA、AFP及肝纖維化水平與HBV-DNA載量水平呈正相關(guān),臨床可以通過上述指標(biāo)檢測判斷疾病的嚴(yán)重程度,為疾病的防治提供參考和借鑒。