青紫藍(lán)兔致死性腹瀉病的病理學(xué)觀察

李宏瑞，魏娟鵬，張 楠，李懷銀，高 明

（蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司，甘肅 蘭州 730046）

青紫藍(lán)兔譯稱智利兔、青智利兔、琴其拉兔、山羊青兔、青林子兔，因其被毛顏色酷似南美洲產(chǎn)的珍貴毛皮動物青紫藍(lán)色毛絲鼠而得名。它是世界育成較早的皮肉兼用型品種，也是制備單克隆抗體、熱原檢測、眼科研究、皮膚反應(yīng)試驗等最常用的實驗動物之一。腹瀉病是以腹瀉為主要癥狀的一類疾病的統(tǒng)稱，是普通級青紫藍(lán)兔養(yǎng)殖過程中的常見疾病，一年四季均可發(fā)生，幼兔發(fā)病最多，死亡率較高。患病兔臨床癥狀表現(xiàn)為食欲減退、消化不良，腹瀉和便秘交替發(fā)生，更有繼發(fā)細(xì)菌感染、病毒感染、寄生蟲感染的風(fēng)險。腹瀉病的誘因包括但不限于病毒、細(xì)菌、寄生蟲感染以及飼養(yǎng)管理、用藥不當(dāng)或應(yīng)激等因素[1]，其中細(xì)菌主要包括大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、銅綠假單胞菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌等[2]，病毒主要包括輪狀病毒、細(xì)小病毒、腺病毒、冠狀病毒、星狀病毒等，以輪狀病毒最為常見[3]。本試驗解剖的病兔臨死前精神狀態(tài)不佳，喜歡蜷縮臥地，嚴(yán)重腹脹和腹瀉，耳朵和四肢冰涼，部分病兔的糞便呈膠凍樣并有特殊腥臭味，發(fā)病5 d后死亡。通過解剖觀察病兔胃、腸以及部分實質(zhì)器官的組織病理學(xué)特征，旨在為該病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

普通級青紫藍(lán)兔，2月齡，由蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司提供。

1.2 主要試劑

甲醛溶液、二甲苯溶液、無水乙醇、切片石蠟，均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蘇木素-伊紅染色液，購自南京森貝伽生物科技有限公司；中性樹膠，購自北京索萊寶科技有限公司。

1.3 主要儀器

組織脫水機(jī)、組織包埋機(jī)、組織切片機(jī)，均購自德國美康Microm公司；生物組織攤烤片機(jī)，購自孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 肉眼觀察 解剖病死兔，肉眼觀察其器官病變情況。

1.4.2 組織病理學(xué)觀察 采集病兔胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、膽囊等組織，經(jīng)10%福爾馬林溶液固定后制作石蠟切片，并進(jìn)行蘇木素-伊紅染色（HE染色）。經(jīng)HE染色后的切片利用德國樹膠進(jìn)行封片，置于顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 肉眼觀察

病兔腹部嚴(yán)重鼓脹，盲腸近端阻塞大量紅棗大小的深黑色干硬糞便（圖1），腸壁極薄并充滿氣體，結(jié)腸內(nèi)有膠凍樣液體（圖2），實質(zhì)器官未見明顯異常。

圖1 腹部眼觀結(jié)果

圖2 結(jié)腸眼觀結(jié)果

2.2 組織病理學(xué)觀察

病兔胃黏膜淺表性糜爛，大量黏膜上皮細(xì)胞壞死和脫落，病變周圍有少量嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤（圖3）。十二指腸黏膜上皮細(xì)胞大量壞死和脫落，病變周圍有大量嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，杯狀上皮細(xì)胞分泌亢進(jìn)（圖4）。空腸黏膜上皮細(xì)胞大量壞死和脫落，隱窩細(xì)胞變性壞死，病變周圍有少量嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，空腸黏膜杯狀上皮細(xì)胞分泌亢進(jìn)（圖5）?；啬c黏膜杯狀上皮細(xì)胞減少，腸絨毛頂部上皮細(xì)胞壞死和脫落，回腸腺泡管腔內(nèi)有膿細(xì)胞，腸隱窩細(xì)胞變性壞死，黏膜固有層細(xì)胞增生，病變周圍及黏膜下大量淋巴細(xì)胞浸潤（圖6）。盲腸絨毛頂部上皮細(xì)胞壞死和脫落，腸腺管腔擴(kuò)張，黏膜固有層和黏膜下層水腫，病變周圍少量淋巴細(xì)胞浸潤（圖7）。結(jié)腸絨毛上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，未見細(xì)胞壞死和脫落，黏膜固有層見少量淋巴細(xì)胞浸潤（圖8）。直腸絨毛上皮細(xì)胞壞死和脫落，腸腺管腔擴(kuò)張，管腔內(nèi)有一些壞死細(xì)胞集聚，黏膜固有層細(xì)胞增生，少量淋巴細(xì)胞浸潤，黏膜下層顯著水腫（圖9）。心肌組織結(jié)構(gòu)正常，未見異常變化（圖10）。肝小葉結(jié)構(gòu)正常，未見肝細(xì)胞變性和壞死，門管區(qū)未見炎癥反應(yīng)，毛細(xì)膽管內(nèi)膽汁淤積，小膽管未見異常（圖11）。

圖3 胃的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖4 十二指腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖5 空腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，100×）

圖6 回腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖7 盲腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖8 結(jié)腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖9 直腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖10 心臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖11 肝臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

膽囊絨毛呈分支狀，膽囊黏膜水腫，大量黏膜上皮細(xì)胞壞死和脫落，大面積黏膜固有層裸露，膽囊黏膜的部分絨毛斷裂明顯，病變周圍有極少量的嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞（圖12）。

圖12 膽囊的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

脾臟白髓組織減少，脾小結(jié)淋巴細(xì)胞減少，脾呈現(xiàn)淋巴細(xì)胞耗空景象（圖13）。肺臟輕度肺泡性肺炎。肺支氣管黏膜上皮大量壞死和脫落，阻塞氣道。肺泡隔明顯增厚，肺泡腔內(nèi)有大量嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞（圖14）。腎臟輕度間質(zhì)性腎炎。嗜中性粒細(xì)胞廣泛浸潤，腎小管管腔擴(kuò)張，部分腎小管上皮細(xì)胞變性和壞死，腎集合管內(nèi)出現(xiàn)細(xì)胞管型（圖15）。

圖13 脾臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖14 肺臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖15 腎臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

3 討論與結(jié)論

青紫藍(lán)兔致死性腹瀉病主要發(fā)生在斷奶期，直觀原因可能是對病原體具有保護(hù)作用的母乳變成了固定飼料，這種飲食上的強(qiáng)烈改變使幼兔免疫力降低，易受到消化系統(tǒng)疾病和外部刺激的影響，其他諸如病原體、極端溫濕度、母體抗體水平低和遺傳背景等因素也會提高其易感性，這些因素往往共同發(fā)力，給該病的防治帶來挑戰(zhàn)。本試驗病理學(xué)結(jié)果證實了這種復(fù)雜性：病兔大部分器官有不同程度的炎癥，結(jié)合其生長環(huán)境，可能的生物性致炎因子有細(xì)菌、病毒等，甚至存在混合感染。病理結(jié)果雖未觀察到不同發(fā)育階段的寄生蟲，但并不排除有寄生蟲的因素，尤其是球蟲。球蟲和大腸桿菌對斷奶幼兔消化道疾病的影響存在相關(guān)性，球蟲除了具有致病性，還能改變腸道的pH值，從而使大腸桿菌過度生長[4]。

復(fù)雜的病因使疫苗研制只能針對具體某一誘因進(jìn)行相關(guān)研究，Zhao等[5]成功分離出一株名為Z317的兔星狀病毒株，分析了Z317衣殼（Cap）蛋白的基本特性，篩選出了10個線性B細(xì)胞表位，為后續(xù)研究兔星狀病毒對家兔的影響進(jìn)行了前期探索；Pu等[6]證明了艾美爾球蟲的表面抗原rEmSAG10可以誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，是兔大型艾美爾球蟲重組亞單位疫苗的候選抗原。除了接種疫苗外，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理也是預(yù)防青紫藍(lán)兔致死性腹瀉病的方法[7]，如訪問管理，嚴(yán)格規(guī)范訪客的移動區(qū)域；健康管理，實時監(jiān)測和治療疾病、制定檢疫規(guī)程；運營管理，包括尸體和廢棄物的處置、設(shè)施管理、飲水安全、害蟲控制措施等；飼喂方面，適量的飼喂限制可以降低腹瀉率和死亡率，并提高消化酶活性和抗氧化能力[8]。此外，避免冷應(yīng)激也非常重要，冷應(yīng)激會破壞青紫藍(lán)兔腸道菌群的平衡性。冬季飼喂溫水可提高幼兔的生長性能并優(yōu)化其腸道菌群[9]。

使用抗生素治療家兔腹瀉病也是常用方法，但抗生素耐藥性和藥物殘留問題一直備受關(guān)注。Wang等[10]的研究表明，在斷奶兔腹瀉病發(fā)病機(jī)制中，腸道微生物群的改變與無抗生素飼料引起的腹瀉有關(guān)。益生菌、益生元、合生元、酶、細(xì)菌素、有機(jī)酸、草藥及其提取物等天然物質(zhì)作為抗生素的替代物，在控制微生物群、避免胃腸道功能紊亂、改善腸道健康和提高機(jī)體免疫力方面表現(xiàn)優(yōu)異[11]。Liu等[12]探尋了在不使用抗生素的情況下預(yù)防家兔腹瀉病的方法，發(fā)現(xiàn)泛醌和其他萜類化合物可以增加腺苷5'-單磷酸（AMP）激活蛋白激酶的活性，促進(jìn)細(xì)胞代謝和自噬，有預(yù)防炎癥和緩解腸道疾病癥狀的可能。韓昱等[13]發(fā)現(xiàn)中草藥復(fù)方中使用黨參和黃芪對仔兔氣血進(jìn)行滋補，可以提高仔兔機(jī)體抗病力和免疫力，從而顯著降低斷奶仔兔腹瀉率和死亡率。Liu等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在兔飼料中添加艾草可以降低兔腹瀉發(fā)生率并調(diào)節(jié)其腸道免疫功能，而不會影響生長性能。Wang等[15]研究表明，芽孢桿菌菌株混合物可以減輕產(chǎn)腸毒素大腸桿菌引起的損傷，并通過改善斷奶獺兔的特定腸道微生物群成員和免疫力來增強(qiáng)抗病能力。因此，患致死性腹瀉病的普通級青紫藍(lán)兔大部分器官患有不同程度的炎癥，可能的生物性致炎因子有細(xì)菌、病毒等，甚至存在混合感染。在防治該病時，建議加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，同時進(jìn)行藥物干預(yù)，從而提高機(jī)體抗病能力。