多波長自動(dòng)融合指紋圖譜策略及其在蜂膠質(zhì)量評價(jià)中的應(yīng)用

姜慧潔，章 越，慎凱峰，姜 艷，周丹英，趙洪靜

（1. 浙江省中藥研究所有限公司，浙江 杭州 310023；2. 國家市場監(jiān)督管理總局食品審評中心，北京 100070）

蜂膠收載于2020 年版《中國藥典》，為蜜蜂科昆蟲意大利蜂（Apis melliferaL.）工蜂釆集的植物樹脂與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合而成的固體膠狀物，蜂膠乙醇提取物是用乙醇浸提蜂膠得到的物質(zhì)［1-2］。蜂膠中大量的黃酮和多酚類物質(zhì)與其生理活性密切相關(guān)，建立蜂膠中黃酮和多酚類物質(zhì)的指紋圖譜方法是提高蜂膠質(zhì)量評價(jià)的重要手段［3-4］。研究蜂膠指紋圖譜的文獻(xiàn)大多采用270、280、310 nm或者其他單一波長作為檢測波長。由于黃酮、多酚等物質(zhì)的紫外吸收不一致，導(dǎo)致單波長指紋圖譜所包含的信息量不夠全面，不同指紋圖譜間的差異不明顯，相似度評價(jià)或化學(xué)模式識別不顯著［5-9］。

目前多波長融合技術(shù)是豐富指紋圖譜信息的一種重要手段，只有合理整合各波長下各色譜峰的吸收信息，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)辨識關(guān)鍵信息，才能準(zhǔn)確表征待測樣品的全組分質(zhì)量［10-12］。有的多波長融合技術(shù)為切波長技術(shù)，即根據(jù)化學(xué)成分的不同保留時(shí)間選擇不同的檢測波長［13-15］。該方法增加了多組分下色譜峰的信息，但對方法保留時(shí)間的耐用性要求較高。有的多波長融合技術(shù)經(jīng)過權(quán)重法、均值法和投影參數(shù)法等數(shù)學(xué)方法整合各波長的信息，然后進(jìn)行綜合的差異評價(jià)［16-17］。有的多波長融合技術(shù)通過多個(gè)波長的數(shù)據(jù)處理，融合成一個(gè)新的指紋圖譜，再進(jìn)行差異評價(jià)。如許平翠、于洋等［18-19］在不同波長色譜圖上選擇指紋峰信號最大且峰數(shù)最多的區(qū)段，采用Matlab軟件進(jìn)行等基線波長融合。Zhang等［20］介紹的多波長指紋圖譜融合方案為設(shè)定主波長與次波長，若某個(gè)次波長的色譜峰峰面積大于主波長的，則次波長的色譜峰峰面積信息替換主波長的，形成新的峰面積棒狀色譜圖。該多波長融合的數(shù)據(jù)需人工處理，若指紋圖譜的色譜峰、檢測波長及樣品批次多，則數(shù)據(jù)處理過程較費(fèi)時(shí)。Yang、Yan、馬迪迪等［21-23］提出的多波長指紋圖譜融合方案需使用“中藥指紋超級信息特征數(shù)字化評價(jià)系統(tǒng)”軟件構(gòu)建一個(gè)新的指紋圖譜，該軟件屬于具有專利的收費(fèi)軟件，其他科研人員無法直接使用。上述文獻(xiàn)中對于多波長數(shù)據(jù)的融合處理較為繁瑣或需要特殊軟件，不利于融合指紋圖譜的推廣應(yīng)用。

本研究提出了一種可以簡化數(shù)據(jù)處理過程的多波長自動(dòng)融合指紋圖譜策略，并以蜂膠乙醇提取物為研究對象進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。通過超高效液相色譜（UPLC）技術(shù)采集蜂膠多個(gè)波長下的指紋圖譜信息，巧妙運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)”軟件，簡化了多波長數(shù)據(jù)融合的復(fù)雜處理過程，準(zhǔn)確生成多波長融合指紋圖譜，并進(jìn)一步通過相似度評價(jià)、主成分分析和聚類分析比較了不同廠家蜂膠的質(zhì)量差異。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

超高效液相色譜儀（1260 Infinity II Prime LC，安捷倫公司）；十萬分之一電子天平（XS105DU，梅特勒公司）；萬分之一電子天平（ME204，梅特勒公司）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500，昆山市超聲儀器有限公司）。

15批中國蜂膠乙醇提取物分別來源于杭州天廚蜜源保健品有限公司、浙江福賜德天然蜂產(chǎn)品有限公司、浙江蜂之語蜂業(yè)集團(tuán)有限公司、浙江金童生物科技有限公司、浙江知元堂生物藥業(yè)有限公司，蜂膠原料均為楊樹屬，產(chǎn)地浙江（見表1）。蘆?。ㄅ?00080-202012，純度92.2%，下同）、槲皮素（100081-201610，99.1%）、山奈素（110861-201611，95.5%）、芹菜素（111901-202004，99.4%）、異鼠李素（110860-201611，99.8%）、綠原酸（110753-202119，96.3%）、阿魏酸（110773-201915，99.4%）、異阿魏酸（111698-201904，99.3%），購于中國食品藥品檢定研究院；楊梅素（PS001011，98.0%）、咖啡酸（PU1191-0025，98.0%）、ρ-香豆酸（PS1415-0100，98.0%）、3，4-二甲氧基肉桂酸（PS2514-1000，98.0%）、肉桂酸（PU0942-0050，98.9%）、咖啡酸苯乙酯（PS1444-0050，98.0%），購于成都普思生物科技股份有限公司；喬松素（MUST-17022604，純度99.52%）、白楊素（MUST-17040901，99.57%）、高良姜素（MUST-17020912，98.73%）、異綠原酸A（MUST-22110413，98.46%）、異綠原酸C（MUST-22081001，99.77%），購于成都曼思特生物有限公司。阿替匹林C（A26GB159041，97.0%），購于上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純，美國TEDIA）；甲醇、磷酸（分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

表1 蜂膠樣品信息Table 1 Sample information of propolis

1.2 多波長自動(dòng)融合指紋圖譜策略

多波長自動(dòng)融合指紋圖譜策略的步驟包含：①UPLC分析方法的開發(fā)；②多批次樣品的多波長檢測與數(shù)據(jù)收集；③多波長數(shù)據(jù)的自動(dòng)融合；④融合對照指紋圖譜的生成與相似度評價(jià)；⑤多波長融合數(shù)據(jù)的化學(xué)模式識別。其中步驟③基于均值法，即A=（a1+a2+……an）/n，式中A為融合指紋圖譜中某個(gè)峰的峰面積，a為單波長指紋圖譜中某個(gè)峰的峰面積，n為檢測波長數(shù)量。僅通過運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)”軟件即可完成多波長數(shù)據(jù)的融合處理，且處理過程基本不受指紋圖譜復(fù)雜程度的影響。

1.3 蜂膠多波長自動(dòng)融合指紋圖譜的研究

1.3.1 蜂膠UPLC 指紋圖譜方法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Agilent，Poroshell 120 EC-C18，3 mm×100 mm，2.7 μm）；以甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫：0～3 min，15%～25% A；3～13 min，25%～40% A；13～38 min，40%～48% A；38～45 min，48%～55% A；45～55 min，55%～75% A；55～60 min，75%～90% A；60～65 min，90%～15% A；流速為0.6 mL/min；柱溫為35 °C；檢測波長為220、245、270、320 nm。

供試品溶液的制備：取樣品0.25 g，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇20 mL，超聲處理30 min（功率250 W，頻率40 kHz），放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

對照品溶液的制備：取蘆丁、楊梅素、槲皮素、山奈素、芹菜素、異鼠李素、喬松素、白楊素、高良姜素、綠原酸、咖啡酸、ρ-香豆酸、阿魏酸、異阿魏酸、異綠原酸A、3，4-二甲氧基肉桂酸、異綠原酸C、肉桂酸、咖啡酸苯乙酯、阿替匹林C 對照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度依次為21.74、25.82、15.75、22.87、54.68、12.22、9.43、47.17、14.44、13.85、17.89、19.50、9.50、17.92、17.45、20.85、16.57、19.43、19.50、22.55 μg/mL的混合對照品溶液。

測定法：分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液3 μL，注入液相色譜儀，測定，對色譜圖進(jìn)行積分處理，導(dǎo)出各樣品在220、245、270、320 nm波長處的AIA文件。

1.3.2 蜂膠多波長數(shù)據(jù)的自動(dòng)融合方法依次將每個(gè)樣品在4個(gè)波長處的AIA文件導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)”（2012.130723 版本），參照圖譜為S1，對照圖譜生成方法為平均數(shù)，時(shí)間窗寬度為0.1，全峰匹配生成多波長融合指紋圖譜，并單獨(dú)導(dǎo)出XScp 文件。指紋圖譜軟件自動(dòng)識別同一樣品不同波長下相同保留時(shí)間的色譜峰，多波長融合指紋圖譜中各色譜峰的保留時(shí)間即為原色譜峰的保留時(shí)間，各色譜峰的峰面積為多波長下峰面積加和的平均值，不同批次樣品的指紋圖譜在自動(dòng)融合時(shí)均遵循相同的處理規(guī)則。

1.3.3 多批次蜂膠多波長融合指紋圖譜的生成將收集的15 批蜂膠樣品按照上述方法測定，依次生成多波長融合指紋圖譜。將生成的15 批蜂膠多波長融合指紋圖譜XScp 文件重新導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)”，生成多波長融合對照指紋圖譜。其中生成的融合對照指紋圖譜的保留時(shí)間即為多個(gè)融合指紋圖譜各色譜峰的保留時(shí)間加和平均值，峰面積即為多個(gè)融合指紋圖譜各色譜峰的峰面積加和平均值。

1.4 單波長與多波長融合模式的對比

通過“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)”、Excel軟件、SIMCA 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，分別從共有色譜峰、相似度評價(jià)、主成分分析、聚類分析方面對蜂膠270 nm 波長指紋圖譜和多波長融合指紋圖譜進(jìn)行對比。

2 結(jié)果與討論

2.1 蜂膠多波長融合指紋圖譜的研究

2.1.1 多波長的選擇依據(jù)根據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研考察了20種黃酮與酚酸類對照品，根據(jù)色譜峰的定性研究，蜂膠指紋圖譜中可定性14個(gè)共有峰，故測定了14個(gè)代表性黃酮、酚酸類成分的紫外吸收曲線，各成分的最大吸收值見表2。若選擇的檢測波長數(shù)量過多或存在不合適的波長，則經(jīng)過各個(gè)波長下同一個(gè)物質(zhì)色譜峰的加和平均后，色譜峰的峰面積偏小，差異性反而下降。蜂膠預(yù)實(shí)驗(yàn)的檢測波長為220、245、270、320、360 nm，但在數(shù)據(jù)處理時(shí)發(fā)現(xiàn)360 nm 下的成分較少，且此時(shí)，這些成分在320 nm 波長下均有體現(xiàn)，綜合考慮選擇220、245、270、320 nm這4個(gè)波長全面表征蜂膠成分信息。波段分布均勻且基本涵蓋了各成分的最大吸收值。

表2 各黃酮、酚酸類成分的最大紫外吸收情況Table 2 Maximum UV absorption of various flavonoids and phenolic acids

2.1.2 多波長融合指紋圖譜的生成單個(gè)蜂膠樣品的4個(gè)單波長指紋圖譜經(jīng)過軟件自動(dòng)融合形成1個(gè)多波長融合指紋圖譜（見圖1A）。相同方法處理后得到15批蜂膠樣品的多波長融合指紋圖譜（見圖1B）。

圖1 4個(gè)波長生成的融合指紋圖譜（A）以及15批蜂膠的多波長融合指紋圖譜（B）Fig. 1 Fusion fingerprint generated by wavelengths （A） and multi-wavelength fusion fingerprints of 15 batches of propolis （B）

2.1.3 多波長融合指紋圖譜的方法學(xué)考察由多波長融合對照指紋圖譜（圖2B）可以看出，8號峰峰面積大小適宜，分離效果較好，通過對照品對比定性為槲皮素，故選其作為參照峰用于計(jì)算相對保留時(shí)間與相對峰面積。取同一份蜂膠供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣5 次，進(jìn)行精密度檢測。結(jié)果顯示融合共有色譜峰的相對保留時(shí)間的RSD 為0.02%～0.16%，相對峰面積的RSD 為0.56%～3.85%，表明液相檢測方法與融合圖譜生成方法的精密度較好。取同一份蜂膠供試品溶液，在0、4、8、12、24 h 進(jìn)行穩(wěn)定性檢測。經(jīng)計(jì)算融合共有色譜峰的相對保留時(shí)間的RSD 為0.04%～0.15%，相對峰面積的RSD 的為0.97%～4.67%，方法的穩(wěn)定性較好。取同一份蜂膠樣品，按照供試品溶液制備方法分別制備5份，依次進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示融合共有色譜峰的相對保留時(shí)間的RSD 為0.01%～0.13%，相對峰面積的RSD 為1.02%～4.39%，方法的重復(fù)性良好。

圖2 單波長對照指紋圖譜（A）、多波長融合對照指紋圖譜（B）與對照品色譜圖（C）Fig. 2 Single wavelength reference fingerprint（A），multi-wavelength fusion reference fingerprint（B），and reference chromatogram（C）

2.2 單波長指紋圖譜與多波長融合指紋圖譜的對比

2.2.1 對比波長的選擇以蜂膠270 nm 單波長指紋圖譜與多波長融合指紋圖譜進(jìn)行對比，主要原因如下：2005 版《中國藥典》中蜂膠的含量測定為白楊素（268 nm）、高良姜素（268 nm）［24］，2020版《中國藥典》為白楊素（270 nm）、高良姜素（270 nm），增加了喬松素（289 nm）、咖啡酸苯乙酯（329 nm）含量的測定［1］。行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中蜂膠多種成分含量測定或指紋圖譜的波長為280、360 nm［25-27］。知網(wǎng)文獻(xiàn)中蜂膠多種成分含量測定或指紋圖譜的波長為270、280、290、310 nm［5-9］。即黃酮成分的檢測波長傾向270、280 nm，酚酸成分的檢測波長傾向310、360 nm。表明前期蜂膠成分研究更側(cè)重于黃酮成分，且270 nm 檢測波長下蜂膠指紋圖譜的色譜峰信息較為全面，可作為與多波長融合指紋圖譜分析的對比圖譜。

2.2.2 共有色譜峰的對比蜂膠270 nm 單波長指紋圖譜研究中，15批樣品有33個(gè)共有色譜峰，其中峰面積大于500 的色譜峰19 個(gè)，大于400 的25 個(gè)，大于300 的29 個(gè)，大于200 的32個(gè)，選擇峰面積大于200 的32 個(gè)色譜峰為特征峰。蜂膠270 nm 單波長對照指紋圖譜含有32 個(gè)特征峰（表3），其中12 個(gè)特征峰可定性（見圖2A），特征峰的信息見表3。由表3 可知，特征峰保留時(shí)間的RSD 均小于1.00%，峰面積的RSD 為14.33%～113.62%，平均值為35.24%。

表3 蜂膠單波長對照指紋圖譜（270 nm）的特征峰信息Table 3 Characteristic peak information of propolis single wavelength reference fingerprint （270 nm）

蜂膠多波長融合指紋圖譜研究中，15批樣品共有的色譜峰有44個(gè)，其中峰面積大于500的色譜峰22個(gè)，大于400的26個(gè)，大于300的27個(gè)，大于200的33個(gè)，選擇峰面積大于200的33個(gè)色譜峰為特征峰。這些特征峰中有14 個(gè)可定性（見圖2B、2C）。相比于270 nm 單波長，可定性的特征峰中增加了咖啡酸和阿魏酸特征峰。蜂膠多波長融合對照指紋圖譜的特征峰信息見表4，特征峰保留時(shí)間的RSD均小于1.00%，保留時(shí)間的差異較小，即建立的蜂膠融合指紋圖譜作為質(zhì)量控制方法具有科學(xué)性。特征峰峰面積的RSD 為14.39%～112.02%，平均值為37.94%，峰面積之間差異較大，說明不同廠家蜂膠之間的黃酮、酚酸等成分種類較相似，但含量存在差異。

表4 蜂膠多波長融合對照指紋圖譜的特征峰信息Table 4 Characteristic peak information of propolis multi-wavelength fusion reference fingerprint

2.2.3 相似度評價(jià)的對比對15批蜂膠的270 nm 單波長指紋圖譜和多波長融合指紋圖譜分別進(jìn)行相似度分析，結(jié)果見表5。15 批樣品單波長指紋圖譜的相似度較高，為0.928～0.997，其中S14、S15 的相似度相對較低。各融合指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度為0.902～0.994，與單波長相比，多個(gè)樣品的相似度均明顯下降，說明多波長融合指紋圖譜更能全面分析各批次之間的差異性。但各批次的相似度仍然較高，表明不同批次的蜂膠乙醇提取物表現(xiàn)出了良好的相似度，即浙江不同廠家產(chǎn)品的整體質(zhì)量較為穩(wěn)定，所含成分種類較為一致。

表5 蜂膠指紋圖譜的相似度評價(jià)結(jié)果Table 5 Similarity evaluation results of propolis fingerprint

2.2.4 主成分分析的對比以15批蜂膠270 nm單波長指紋圖譜中32個(gè)特征峰的峰面積為變量，輸入SIMCA 13.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行模型分析，將主成分?jǐn)?shù)量設(shè)置為3 時(shí)，模型的R2X=0.901，Q2=0.757，即前3個(gè)成分的累積貢獻(xiàn)率達(dá)90.1%，模型擬合良好。進(jìn)一步進(jìn)行主成分分析（PCA），可將所峰膠樣品分為3 類（圖3A），一類是S4～S10，即廠家2 和廠家3；一類是S11～S13，即廠家4；一類是S1～S3 和S14～S15，即廠家1 和廠家5。同一類樣品的特征峰峰面積大小較接近。同一廠家不同批次的樣品基本穩(wěn)定，聚為一類；廠家2和廠家3的樣品較一致，無法區(qū)分。

圖3 單波長（A）與多波長（B）蜂膠指紋圖譜的主成分分析Fig.3 Principal component analysis of single wavelength（A） and multi-wavelength（B） propolis fingerprint

（續(xù)表3）

以15批蜂膠融合指紋圖譜中33個(gè)特征峰的峰面積為變量進(jìn)行模型分析，主成分?jǐn)?shù)量設(shè)置為3，模型的R2X=0.923，Q2=0.790，前3 個(gè)成分的累積貢獻(xiàn)率達(dá)92.3%，模型擬合良好。主成分分析結(jié)果見圖3B，樣品可被分為4 類，一類是S4～S10，即廠家2 和廠家3；一類是S11～S13，即廠家4；一類是S1～S3，即廠家1；一類是S14～S15，即廠家5。相比單波長的主成分分析更有區(qū)別性，能將廠家1和廠家5的樣品進(jìn)行區(qū)分。

其中270 nm 單波長主成分1 中各色譜峰的載荷情況見圖4A。峰5、7、9、10、11、12、17、18、21、23、24、25 的值大于0.2，對主成分1的貢獻(xiàn)較大。多波長融合主成分1中各色譜峰的載荷情況見圖4B。峰1、7、10、11、13、19、21、24、28 的值大于0.2，對主成分1 的貢獻(xiàn)較大。同蜂膠270 nm單波長圖譜的分析結(jié)果相比，蜂膠融合指紋圖譜中0～20 min 保留時(shí)間的色譜峰加強(qiáng)，增加了酚酸類成分的特征峰，如咖啡酸、阿魏酸，并且平衡了某些峰面積較大成分對差異性評價(jià)的影響（如白楊素）。

圖4 單波長（A）與多波長（B）主成分1中各色譜峰的載荷圖Fig.4 Load graph of each chromatographic peak in single wavelength（A） and multi-wavelength（B） principal component 1

2.2.5 聚類分析的對比在3 個(gè)主成分的基礎(chǔ)上，采用Ward 法計(jì)算距離，以平方歐氏距離為分類依據(jù)，進(jìn)行聚類分析（HCA），繪制15 批蜂膠270 nm 單波長指紋圖譜的聚類分析圖，見圖5A。當(dāng)距離為50時(shí)，可將樣品分為3類，一類是S4～S10、一類是S11～S13、一類是S1～S3和S14～S15，同主成分分析的結(jié)果吻合。

圖5 單波長（A）與多波長（B）蜂膠指紋圖譜的聚類分析Fig.5 Cluster analysis of single wavelength（A） and multi-wavelength（B） propolis fingerprint

采用同樣方法與參數(shù)繪制15批蜂膠融合指紋圖譜的聚類分析圖，見圖5B。當(dāng)距離為100時(shí)，可將樣品分為3 類，分類結(jié)果與單波長指紋圖譜分類結(jié)果一致。當(dāng)距離為50 時(shí)，可將樣品分為4 類。一類是S4～S10，即廠家2、廠家3；一類是S11～S13，即廠家4；一類是S1～S3，即廠家1；一類是S14～S15，即廠家5，同主成分分析的結(jié)果基本吻合。當(dāng)距離繼續(xù)減小時(shí)，S4～S10 也能進(jìn)行劃分，除批次S6，其他均能正確分類。表明在主成分分析、聚類分析處理上，多波長融合指紋圖譜的分類更加準(zhǔn)確，提高了對色譜指紋圖譜差異性的評價(jià)能力。

3 結(jié) 論

本研究簡化了多波長融合指紋圖譜數(shù)據(jù)的自動(dòng)融合處理過程，拓展了開源軟件“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)”的功能，可對多波長數(shù)據(jù)進(jìn)行快速、自動(dòng)融合處理，減少了人工對繁瑣數(shù)據(jù)的匯總、篩選、對應(yīng)、加和與圖像生成等處理。多個(gè)單波長的指紋圖譜在遵循同一處理規(guī)則下自動(dòng)融合生成一個(gè)新的多波長融合指紋圖譜，每個(gè)色譜峰即為不同波長下同一保留時(shí)間色譜峰的加和平均值。該數(shù)據(jù)融合處理策略雖屬于低級數(shù)據(jù)融合技術(shù)，但簡單快速，最大化地準(zhǔn)確保留了各色譜峰的信息，利于融合指紋圖譜的應(yīng)用與普及。建立的蜂膠多波長融合對照指紋圖譜含有33個(gè)特征峰，其中14個(gè)特征峰可定性，7 個(gè)為黃酮成分，7 個(gè)為酚酸成分，15 批蜂膠融合指紋圖譜的相似度為0.902～0.994，主成分分析、聚類分析可將樣品分為4 類。將多波長自動(dòng)融合指紋圖譜策略應(yīng)用于蜂膠質(zhì)量評價(jià)中，可豐富黃酮、酚酸類物質(zhì)在不同波長下的色譜信息，降低高峰面積成分對整體評價(jià)的影響，提高指紋圖譜差異評價(jià)的準(zhǔn)確性，為蜂膠質(zhì)量控制提供參考與借鑒。但本研究中，蜂膠乙醇提取物樣品的收集范圍較小，樣品均來源于浙江廠家，所建立的多波長融合指紋圖譜僅適用于不同廠家蜂膠提取物的區(qū)分。后續(xù)將進(jìn)一步對不同省份、不同季節(jié)、不同提取工藝、不同種屬的蜂膠進(jìn)行深入分析，提高多波長融合指紋圖譜在蜂膠質(zhì)量評價(jià)中的應(yīng)用范圍。