重慶高梁炭疽病病原菌鑒定及防治藥劑篩選

關(guān)鍵詞高粱；炭疽??；病原鑒定；多基因聯(lián)合分析；藥劑篩選

高梁炭疽病作為世界范圍內(nèi)重要的高梁病害，發(fā)生嚴(yán)重的地區(qū)具有溫暖潮濕的氣候特點(diǎn)，尤其在熱帶和亞熱帶地區(qū)較為普遍。高梁炭疽病在高梁各個(gè)生育時(shí)期均可發(fā)生，主要危害高梁植株葉片、葉鞘、莖稈、穗枝梗和籽粒。葉片感染是最普遍和最具破壞性的，病原菌通過(guò)形成病斑覆蓋葉面干擾光合作用，通常是感染其他組織的起始階段，發(fā)生嚴(yán)重時(shí)感病品種籽粒和莖稈產(chǎn)量損失巨大，極大制約了高梁產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。西南地區(qū)是我國(guó)釀酒高梁優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)，具有高溫、高濕的氣候特點(diǎn)，加之傳統(tǒng)種植模式以及高度集約化的生產(chǎn)方式導(dǎo)致的連作障礙，使得高梁炭疽病成為西南地區(qū)高梁生產(chǎn)上的主要病害。重慶6月－7月氣溫高、日照時(shí)數(shù)長(zhǎng)、濕度大，為高梁炭疽病的發(fā)生和流行提供了有利條件。

高梁炭疽病菌早期被認(rèn)為是禾生炭疽菌Colle-tot7richUTYl grarninicola，然而，近期Baroncelli等和Buiate等利用全基因組測(cè)序及基因組學(xué)方法證明，高梁炭疽病的致病菌為Colletotrichurnsublineola。我國(guó)近幾年對(duì)高梁炭疽病病原菌的分類鑒定開(kāi)展了大量研究．王軼夫等通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察和多基因序列分析，證明四川省11個(gè)高梁主產(chǎn)區(qū)及省外6個(gè)地區(qū)高梁炭疽病菌為高梁刺盤孢C．sublineola。徐婧等我國(guó)8省13市的高梁產(chǎn)區(qū)炭疽病發(fā)生情況開(kāi)展了系統(tǒng)調(diào)查，表明我國(guó)不同高梁產(chǎn)區(qū)的高梁炭疽病病原菌均為C．sublineola。楊霞等通過(guò)形態(tài)學(xué)和rDNA ITS序列分析發(fā)現(xiàn)，C．subLineola是黑龍江省高梁炭疽病的致病真菌。目前，重慶地區(qū)高梁炭疽病致病菌鑒定缺乏系統(tǒng)性研究，僅有部分文獻(xiàn)涉及永川、忠縣的少數(shù)病原菌樣品，重慶主產(chǎn)區(qū)高梁炭疽病病原菌整體分布情況尚不明確，導(dǎo)致田間防治用藥缺乏針對(duì)性，防治效率低。因此，探明重慶地區(qū)高梁炭疽病的病原菌種類，是指導(dǎo)炭疽病科學(xué)防治的前提。

目前炭疽病的防治措施主要包括農(nóng)業(yè)防治、生物防治和化學(xué)防治，其中種植抗性品種是最重要、穩(wěn)定和有效的控制手段。但因高梁炭疽病菌菌株存在高度變異的生理小種，而且在某些種內(nèi)存在數(shù)個(gè)致病型和單倍體型，一方面增加了抗性資源篩選與抗病品種選育的難度，另一方面難以通過(guò)提高寄主抗性的方法來(lái)控制該病害。國(guó)內(nèi)關(guān)于高梁抗炭疽病品種選育的研究仍停留在抗性資源篩選評(píng)估階段，對(duì)高梁炭疽病具有穩(wěn)定抗性的品種鮮有報(bào)道，生產(chǎn)上應(yīng)用的高梁品種抗性水平低，病害加重流行。同時(shí)，生物防治措施尚不成熟，對(duì)病害僅有一定緩解作用，難以廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中。因此，高梁生產(chǎn)上炭疽病的有效控制手段仍以化學(xué)藥劑防治為主。相關(guān)研究表明，25%戊唑醇EW對(duì)高梁‘湘兩優(yōu)糯粱1號(hào)’炭疽病藥后30d的防效為67.7%；64%噁霜·錳鋅WP、80%代森錳鋅WP對(duì)分生孢子萌發(fā)具有較好的抑制作用；75%肟菌·戊唑醇WG和300g/L苯甲·丙環(huán)唑EC對(duì)四川長(zhǎng)寧縣高梁炭疽病的防效分別為70.26%和63.76%菌；250g/L吡唑醚菌酯EC、50%多菌靈WP、250g/L嘧菌酯SC對(duì)高梁炭疽菌的室內(nèi)抑菌效果和田間防效均較好。國(guó)外學(xué)者Acharya等的研究顯示，吡唑醚菌酯和吡唑醚菌酯加氟唑菌酰胺減少了高梁炭疽病的發(fā)生，且與單次施用相比，3次施用可顯著減輕病害，提高產(chǎn)量。但由于不同區(qū)域病原菌的遺傳多樣性，致病菌對(duì)藥劑的敏感性存在差異，再加上各地高梁生產(chǎn)上用藥背景的不同，因此非常有必要針對(duì)重慶地區(qū)篩選高梁炭疽病的有效放治藥劑。

本研究通過(guò)對(duì)重慶永川區(qū)、梁平區(qū)和江津區(qū)等8個(gè)地區(qū)的高梁炭疽病菌菌株進(jìn)行分離和形態(tài)鑒定，并通過(guò)多基因聯(lián)合分析構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹鑒定致病菌；采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定10種殺菌劑對(duì)高梁炭疽病病原菌的菌絲生長(zhǎng)抑制效果，并選取5種藥劑開(kāi)展田間藥效試驗(yàn)，最終篩選出高梁炭疽病的高效防治藥劑，以期為重慶地區(qū)高梁炭疽病的田間防治提供科學(xué)指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1材料

供試病樣：2021年-2022年，在重慶市主要高梁種植區(qū)包括永川區(qū)、梁平區(qū)、江津區(qū)、大足區(qū)、墊江縣、云陽(yáng)縣、忠縣、潼南區(qū)等地采集具有高梁炭疽病典型癥狀的高梁葉片樣品。

培養(yǎng)基：水瓊脂培養(yǎng)基（WA）：瓊脂20g，蒸餾水定容至1 L121℃滅菌30min。用于病原菌株的分離。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂17g，蒸餾水定容至1L，121℃滅菌30min。用于菌株的培養(yǎng)、保存以及藥劑毒力測(cè)定。

供試藥劑：97%咪鮮胺原藥，江蘇瑞邦農(nóng)化股份有限公司；95%氟菌唑原藥，湖北巨勝科技有限公司；95%甲基硫菌靈原藥，98%異菌脲原藥，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑，拜耳作物科學(xué)（中國(guó)）有限公司；95%溴菌腈原藥，湖北磷城科技有限公司；80%代森錳鋅可濕性粉劑，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司；98%嘧霉胺原藥，南京德廣化工有限公司；98%吡唑醚菌酯原藥，安道麥安邦（江蘇）有限公司；98%多菌靈原藥，安徽廣信農(nóng)化股份有限公司。用丙酮（或HCI）溶解各原藥，配成質(zhì)量濃度為1．0×104ug/mL母液，置于4℃保存?zhèn)溆谩Ｓ糜谑覂?nèi)生物測(cè)定。

30%氟菌唑可濕性粉劑，日本曹達(dá)株式會(huì)社；75%肟菌·戊唑醇水分散粒劑；70%甲基硫菌靈可濕性粉劑，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；250g/L吡唑醚菌酯乳油，巴斯夫植物保護(hù)（江蘇）有限公司；50%多菌靈可濕性粉劑，四川潤(rùn)爾科技有限公司，用于田間藥效試驗(yàn)。

1.2方法

1.2.1高梁炭疽病病原菌的分離與純化

采用組織分離法進(jìn)行病原菌分離：取葉片病健交界處組織（5mm大?。?5%乙醇中表面消毒30s后放入5%次氯酸鈉溶滾中90～120s，在無(wú)菌水中漂洗3次后吸干水分，置于WA培養(yǎng)基上。25℃黑暗培養(yǎng)1～2d，待出現(xiàn)疑似菌落時(shí)，將菌落邊緣菌絲轉(zhuǎn)到含利福平的PDA培養(yǎng)基中培養(yǎng)，進(jìn)行轉(zhuǎn)接純化，經(jīng)單孢分離培養(yǎng)獲得病原菌的純化菌株。將分離到的菌株于PDA培養(yǎng)基中25℃培養(yǎng)7d后，用打孔器取菌落邊緣的菌絲體，將菌絲面朝下貼于離體高梁葉片劃傷處進(jìn)行回接，對(duì)照葉片上接種WA培養(yǎng)基塊，重復(fù)3次，保濕5d。觀察葉片發(fā)病是否具有高梁炭疽病典型癥狀。最后將進(jìn)行回接驗(yàn)證后的菌株轉(zhuǎn)接在PDA斜面上，置于4℃冰箱中保存。

1.2.2高梁炭疽病病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

將純化驗(yàn)證后的菌株于PDA培養(yǎng)基中25℃、12h光／暗交替培養(yǎng)10d，觀察菌落形態(tài)特征；利用光學(xué)顯微鏡觀測(cè)其分生孢子、附著胞形態(tài)，并拍照記錄。

1.2.3高梁炭疽病病原菌基因組DNA提取

經(jīng)回接驗(yàn)證的菌株分別接種于PDA平板上的玻璃紙上，25℃黑暗培養(yǎng)7d，用移液槍頭刮取適量菌絲體，在滅菌濾紙上吸干水分后備用。稱取菌絲0.5g放入含有鋼珠的2mL離心管中，液氮處理后，利用組織研磨儀研磨，采用植物基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技有限公司，北京，DP305-02）提取病原菌DNA，測(cè)定濃度與質(zhì)量后于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4PCR擴(kuò)增、測(cè)序及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

參考王軼夫等的研究方法，選取核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因（GAP-DH）、肌動(dòng)蛋白基因（ACT）及編碼轉(zhuǎn)錄延伸因子幾丁質(zhì)合成酶基因（CHS）作為靶標(biāo)序列，對(duì)不同地區(qū)高梁炭疽病菌基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增（表1）。

測(cè)序結(jié)果分析：依據(jù)ITS-GAPDH-ACT-CHS的順序?qū)γ總€(gè)菌株的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行首尾拼接，并與NCBI中已知的高梁炭疽病菌菌株及其近緣種菌株的相關(guān)序列進(jìn)行序列比對(duì)，應(yīng)用MEGA7.0軟件中的鄰接法（neighbor-joining，NJ）進(jìn)行聚類分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，對(duì)采樣菌株進(jìn)行親緣關(guān)系分析。

1.2.5室內(nèi)藥劑毒力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法。為確定每種藥劑使用濃度范圍，采取逐級(jí)稀釋的方法，將每種母液用丙酮（或HCI）稀釋成7個(gè)質(zhì)量濃度梯度，在培養(yǎng)皿中加入1ml配好的藥液和9ml。冷卻到50℃左右的PDA培養(yǎng)基，混勻，制成一系列濃度的PDA平板，其中代森錳鋅的系列濃度為0.5、1、2、4、8、1 6、32ug/mL，咪鮮胺的系列濃度為50、100、200、300、400、500、600ug/mL，氟菌唑、甲基硫菌靈和肟菌·戊唑醇的系列濃度為0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2ug/mL，溴菌腈、異菌脲和嘧霉胺系列濃度為0.78125、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50ug/mL，吡唑醚菌酯和多菌靈的系列濃度為0.015625，0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1ug/mL。代森錳鋅和肟菌·戊唑醇的溶劑為水，多菌靈的溶劑為0.1mol/L HCI，其余藥劑的溶劑為丙酮。將高梁炭疽菌菌株在PDA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)5d后，用打孔器在菌落邊緣打取直徑6mm的菌餅，菌絲面朝下接種到含有不同濃度藥劑的PDA培養(yǎng)基上，以不含藥劑PDA平板為對(duì)照，每處理重復(fù)3次。25℃培養(yǎng)6d后用十字交叉法測(cè)量各處理菌落直徑，根據(jù)下列公式計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制百分率，并求出各藥劑對(duì)供試菌株的毒力回歸方程和抑制中濃度（EC50）。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=[1-（處理菌落直徑一菌餅直徑）／（對(duì)照菌落直徑一菌餅直徑）]×100%

1.2.6田間藥效試驗(yàn)

根據(jù)室內(nèi)藥劑毒力測(cè)定結(jié)果，以篩選出的抑菌效果較好的5種殺菌劑進(jìn)行田間試驗(yàn)。試驗(yàn)地點(diǎn)位于重慶市永川區(qū)五間鎮(zhèn)（29°17'N，105°50'E，海拔265.96m），該區(qū)屬典型的亞熱帶季風(fēng)性濕潤(rùn)氣候，年平均氣溫17.7℃，年平均降雨量1015.0mm，平均日照1218.7h，無(wú)霜期317d。試驗(yàn)地土質(zhì)為黏土，耕層土壤pH為5.44，有機(jī)質(zhì)11.79g/kg，全氮0.45g/kg，有效磷10.43mg/kg．速效鉀98.23mg/kg。選擇地勢(shì)平坦且利于排灌的地塊，肥水管理一致，使植株長(zhǎng)勢(shì)均勻。此地常年種植高梁，高梁炭疽病發(fā)生較為嚴(yán)重。

供試高梁品種為重慶地區(qū)主推品種‘晉渝糯3號(hào)’，由重慶市農(nóng)業(yè)科學(xué)院特色作物研究所提供。試驗(yàn)小區(qū)采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，共設(shè)5個(gè)處理，分別是：30%氟菌唑WP135g/hm2（有效成分用量，下同），75%肟菌·戊唑醇WG225g/hm2，70%甲基硫菌靈WP1050g/hm2，250g/L吡唑醚菌酯EC187.5mL/hm2，50%多菌靈WP 750g/hm2。施用等量清水（CK）作為對(duì)照，每個(gè)處理3次重復(fù)，共18個(gè)小區(qū)，小區(qū)面積4.6m×6m=27.6m2，小區(qū)四周留隔離帶、保護(hù)行。在高梁炭疽病拔節(jié)后期到孕穗期開(kāi)始施藥，噴液量為675L/hm2，對(duì)照噴等量清水。用背負(fù)式手動(dòng)噴霧器在高梁葉片正反面均勻噴藥，藥液量以葉面藥液剛形成下滴水珠為宜，共進(jìn)行3次藥劑防治，每隔10d施藥一次，時(shí)間為2021年6月5日、15日和25日，水肥等田間管理按常規(guī)進(jìn)行。

第1次施藥前和每次施藥后第10天調(diào)查病害發(fā)生情況，采用對(duì)角線五點(diǎn)調(diào)查法，每點(diǎn)調(diào)查5穴，共調(diào)查50株。根據(jù)病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：1級(jí)，葉片無(wú)明顯癥狀，代表值0；2級(jí)，病斑面積占葉面積的1%～10%，代表值1；3級(jí)，病斑面積占葉面積的11%～25%，且無(wú)分生孢子盤產(chǎn)生，代表值2;4級(jí)，病斑面積占葉面積的26%～50%，產(chǎn)生分生孢子盤，代表值3；5級(jí)，病斑面積占葉面積的50%以上，產(chǎn)生分生孢子盤，代表值4。

病情指數(shù)=∑（各級(jí)病葉數(shù)×各級(jí)代表值）／（調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級(jí)代表值）×100；

防治效果=（空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)一處理區(qū)病情指數(shù)）／空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)×100%。

2結(jié)果與分析

2.1重慶高梁炭疽病病原菌的分離、鑒定

經(jīng)過(guò)對(duì)重慶8個(gè)區(qū)縣高梁炭疽病樣品的分離、純化培養(yǎng)和回接驗(yàn)證，共獲得13株菌株（表2），依次編號(hào)用于后續(xù)鑒定。

形態(tài)學(xué)鑒定：分離到的病原菌菌株在PDA培養(yǎng)基上的菌落全緣，絨毛狀氣生菌絲，白色、灰白色或深褐色，致密（圖１a～b）。部分菌株培養(yǎng)基內(nèi)黃色分泌物較多，背面顏色較深。分生孢子呈鐮刀形的單孢，表面光滑，透明，無(wú)柄，大小為（圖1d）。

分子鑒定：通過(guò)構(gòu)建ITS-GAPDH-ACT-CHS多基因系統(tǒng)發(fā)育樹，對(duì)分離自重慶不同地區(qū)的13株高梁炭疽病菌株進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，結(jié)果表明，13株高梁炭疽病菌株與C sublineola聚在同一分支上（圖2），表明重慶地區(qū)高梁炭疽病病原菌為C sublineola。

2.2高梁炭疽病防治藥劑篩選

10種殺菌劑對(duì)高梁炭疽病菌的毒力測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表3，除咪鮮胺外，其余9種藥劑對(duì)高梁炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，EC50介于0.0180～30.9431ug/mL。其中多菌靈、吡唑醚菌酯，肟菌·戊唑醇、氟菌唑、甲基硫菌靈等5種殺菌劑EC50分別為0.0180、0.0202、0.045 8、0.105 0、0.109 7ug/mL，均小于1.0000u/g/mL，抑制效果較好。代森錳鋅、溴菌腈、異菌脲對(duì)高梁炭疽菌的EC50分別為3.4846、5.3309、2.2862ug/mL，具有一定的抑制效果。嘧霉胺的EC50為30.9431ug/mL，抑菌效果相對(duì)較差。

2.3高梁炭疽病防治田間藥效試驗(yàn)

選取氟菌唑、肟菌·戊唑醇、甲基硫菌靈、吡唑醚菌酯和多菌靈等5種室內(nèi)毒力測(cè)定效果較好的殺菌劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4。第3次施藥前，75%肟菌·戊唑醇WG效果最好，防效達(dá)到72.67%，顯著高于其余幾種藥劑。其次是250g/L吡唑醚菌酯EC，防效為66.46%。50%多菌靈WP防治效果32.29%，防效最低。

第3次施藥后10d，75%肟菌·戊唑醇WG防效最高，顯著高于其他處理，達(dá)61.86%。其次為70%甲基硫菌靈WP和250g/L吡唑醚菌酯EC，防治效果均大于54.00%，二者不存在顯著性差異，且均顯著高于30%氟菌唑WP和50%多菌靈WP。

3結(jié)論與討論

炭疽菌屬Colletotrichu-rn植物病原菌是世界十大植物病原真菌之一，包括多個(gè)致病種，且部分種致病性極強(qiáng)，寄主范圍廣泛，造成農(nóng)業(yè)生產(chǎn)損失巨大。目前炭疽病菌的鑒定一般是基于形態(tài)學(xué)特征，重要的鑒定依據(jù)包括炭疽菌分生孢子的形態(tài)和大小。然而，形態(tài)學(xué)特征在鑒定一些近似炭疽菌種時(shí)難以準(zhǔn)確區(qū)分，因此，常需要借助分子生物學(xué)手段進(jìn)行鑒定。而分子生物學(xué)鑒定中進(jìn)行ITS等的單一序列對(duì)比也存在錯(cuò)誤鑒定風(fēng)險(xiǎn)。多基因聯(lián)合分析能夠有效提高鑒定的準(zhǔn)確率，成為炭疽菌分子鑒定的有效手段，一系列基因被開(kāi)發(fā)出來(lái)用作炭疽病菌菌株的多基因聯(lián)合分析。本研究中參考前人成熟的高梁炭疽病菌鑒定體系，采用ITS、GAPDH、ACT和CHS多基因聯(lián)合鑒定的方法對(duì)重慶地區(qū)高梁炭疽病病原菌進(jìn)行鑒定。通過(guò)對(duì)重慶不同區(qū)縣的高梁炭疽病菌進(jìn)行分離、純化，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征，采用多基因序列、系統(tǒng)進(jìn)化樹分析均證明本研究所采集的重慶地區(qū)病原菌為C．subLineola，與王軼夫等對(duì)重慶部分地區(qū)高梁炭疽病菌的鑒定結(jié)果一致，明確了重慶主要高梁產(chǎn)區(qū)的高梁炭疽病致病菌為C．sublineoLa。

生產(chǎn)上炭疽病常使用甲氧基丙烯酸酯類、脫甲基化酶抑制劑類、苯并咪唑類等藥劑進(jìn)行防控。目前國(guó)內(nèi)尚未有登記用于高梁炭疽病防治的殺菌劑。本研究選取的10種殺菌劑涵蓋了8種類型，藥劑毒力測(cè)定結(jié)果顯示，氟菌唑、肟菌·戊唑醇、甲基硫菌靈、吡唑醚菌酯和多菌靈等5種殺菌劑的EC50均小于1.0000ug/mL，其菌絲生長(zhǎng)抑制效果較好。其中，苯并咪唑類殺菌劑甲基硫菌靈和多菌靈主要作用于有絲分裂中紡錘體的形成來(lái)影響細(xì)胞分裂，用于多種真菌病害防治。甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑吡唑醚菌酯和肟菌酯為呼吸抑制劑，通過(guò)抑制細(xì)胞色素b與c1之間的電子傳遞來(lái)阻止細(xì)胞ATP合成，抑制其線粒體呼吸而發(fā)揮抑菌作用，對(duì)植物感染子囊菌和擔(dān)子菌等具有良好的保護(hù)和治療作用，均有登記用于炭疽病防治。本研究中，對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制效果最好的藥劑為多菌靈和吡唑醚菌酯，與曹尚等的研究結(jié)果一致。蔡茜的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果也表明，吡唑醚菌酯對(duì)高梁炭疽病菌的抑制效果最好。由此可見(jiàn)，本研究選取的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑包括吡唑醚菌酯和復(fù)合型殺菌劑肟菌·戊唑醇以及苯并咪唑類殺菌劑包括甲基硫菌靈和多菌靈對(duì)高梁炭疽菌的菌絲生長(zhǎng)具有較好抑制作用。

田間藥效試驗(yàn)中，第2次與第3次施藥時(shí)間正處于高梁開(kāi)花期到灌漿期，期間日平均氣溫在22～28℃、相對(duì)濕度gt;80%，是高梁炭疽病的指數(shù)增長(zhǎng)期到邏輯斯蒂增長(zhǎng)期，此時(shí)化學(xué)藥劑的施用可以保護(hù)高梁上層冠層，其為發(fā)育中的籽粒提供大部分光合產(chǎn)物。結(jié)果顯示，第3次藥后10d，75%肟菌·戊唑醇WG、70%甲基硫菌靈WP和250g/L吡唑醚菌酯EC仍對(duì)高梁炭疽病具有較好的防效，防效大于54%。其中，甲氧基丙烯酸酯類肟菌酯與三唑類戊唑醇復(fù)配的肟菌·戊唑醇對(duì)高梁炭疽病防治效果最好，其次是甲基硫菌靈和吡唑醚菌酯，3種藥劑田間防效分別達(dá)到61.86%、56.09%、54.80%。本研究表明，肟菌·戊唑醇、甲基硫菌靈和吡唑醚菌酯均對(duì)高梁炭疽病菌菌絲具有較強(qiáng)的抑制能力，且在田間能起到較好的防治效果。此結(jié)果與曹尚等的研究結(jié)果中250g/L吡唑醚菌酯EC、50%多菌靈WP，250g/L嘧菌酯SC可應(yīng)用于田間防治高梁炭疽病的結(jié)論有一致的地方，與Acharya等的研究結(jié)果相似。但已有研究表明，由于甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的作用位點(diǎn)單一，炭疽菌對(duì)其自發(fā)突變頻率較高，且與同類型的藥劑間存在正交互抗性，在多次重復(fù)、多劑量的藥劑高選擇壓下易形成抗藥性群體。另有報(bào)道，大多數(shù)炭疽菌易對(duì)甲基硫菌靈產(chǎn)生抗藥性。因此，為避免或推遲因這兩類藥劑使用而導(dǎo)致抗性種群的產(chǎn)生，高梁生產(chǎn)上建議不連續(xù)使用同一種藥劑，肟菌·戊唑醇、甲基硫菌靈和吡唑醚菌酯等3種藥劑應(yīng)交替使用，以延緩抗藥性的產(chǎn)生，延長(zhǎng)藥劑的使用壽命，同時(shí)還能擴(kuò)大藥劑的防治譜。

通過(guò)對(duì)重慶地區(qū)高梁炭疽病菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定和多基因聯(lián)合分析，將重慶高梁炭疽病病原菌鑒定為C．sublineola，明確了重慶高梁炭疽病原種類，同時(shí)通過(guò)室內(nèi)毒力和田間藥效試驗(yàn)篩選出肟菌·戊唑醇、甲基硫菌靈和吡唑醚菌酯等3種防治效果良好的殺菌劑，可為重慶地區(qū)高梁炭疽病抗病育種工作及該地區(qū)高梁炭疽病防治策略制定提供科學(xué)依據(jù)。