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    不同濃度含硒水溶肥對黑木耳富硒效果的影響

    2024-01-01 00:00:00崔暢尤海丹閆玉
    西北園藝·蔬菜 2024年6期
    關(guān)鍵詞:富硒黑木耳

    摘" "要" "在拌料中加入不同濃度含硒水溶肥培育黑木耳,利用高效液相色譜—電感耦合等離子體質(zhì)譜(HPLC-ICP-MS)聯(lián)用技術(shù)測定黑木耳中的甲基硒代半胱氨酸SeMeCyS、硒代蛋氨酸SeMet、亞硒酸根SeO32-以及硒酸根SeO42-,在1~100 μg/L范圍內(nèi),線性關(guān)系良好,均大于0.999 3, 4種硒形態(tài)達(dá)到完全分離。方法檢出限分別為甲基硒代半胱氨酸4.6 μg/L,硒代蛋氨酸3.5 μg/L,亞硒酸2.6 μg/L,硒酸3.6 μg/L,不同硒含量水溶肥的添加,對木耳中硒的形態(tài)轉(zhuǎn)化具有不同程度影響,采用700倍稀釋液,木耳中SeMeCyS和SeMet含量最高。

    關(guān)鍵詞" "富硒;黑木耳;形態(tài)分析

    硒是人體所必需的微量元素,是谷胱甘肽過氧化酶的必要組分,若無硒則此酶沒有活力。硒也是一種特殊的營養(yǎng)元素,有研究表明,缺乏硒會引起克山病和大骨節(jié)病,硒還有抗腫瘤、提高免疫機(jī)能、抗氧化、延緩衰老等作用。但食用量過高會引起硒中毒,出現(xiàn)惡心、嘔吐,頭發(fā)脫落、指甲變形、煩躁、疲乏等癥狀。我國食品營養(yǎng)學(xué)會提出了成人補(bǔ)硒標(biāo)準(zhǔn)50~200 μg/d。

    黑木耳是一種營養(yǎng)價值非常高的膠質(zhì)菌類,具有食用和藥用價值。木耳具有很強(qiáng)的富集硒的能力,可以通過菌絲細(xì)胞將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化并富集于子實體中,而人體所能吸收、利用的硒元素主要是有機(jī)硒的形態(tài)。本研究通過在木耳培養(yǎng)基拌料中加入不同濃度的水溶肥培育木耳,采用高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法對所培植木耳中的硒形態(tài)進(jìn)行分析,探討賦肥的濃度對硒不同形態(tài)的轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的影響。

    1" "材料與方法

    1.1" "試驗材料" "黑木耳菌株;培養(yǎng)基原材料(木屑、鋸末、麥麩、豆粕、石灰);微量元素水溶肥,硒含量gt;6 g/L。

    1.2" "試驗設(shè)計" "木屑培養(yǎng)基(雜木屑+鋸末85%,麥麩+豆粕14%,石灰1%)拌料按配方稱取,含水量60%,攪拌均勻后裝袋,水溶肥分別稀釋500、600、700、800、1 000倍添加在拌料中。每組制作菌棒200袋,標(biāo)注序號為1-1、1-2、1-3、1-4、1-5。以基質(zhì)不添加水溶肥的菌棒200袋作為空白對照。

    1.3" "試劑" "亞硒酸根溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW10032,以亞硒酸根計SeO32-:68.9 μg/g,擴(kuò)展不確定度1.4 μg/g)、硒酸根溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW10033,以硒酸根SeO42-計:75.1 μg/g,擴(kuò)展不確定度2.4 μg/g)、硒代蛋氨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW10034,以硒代蛋氨酸計C5H11NO2Se:97.9 μg/g,擴(kuò)展不確定度2.5 μg/g)、甲基硒代半胱氨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW10088,以甲基-硒代半胱氨酸計C4H9NO2Se·HCl:96.6 μg/g,擴(kuò)展不確定度2.6 μg/g),以上試劑均為中國計量科學(xué)研究院生產(chǎn);硒元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 mg/L,國家有色金屬研究院);蛋白酶XIV[默克化工技術(shù)(上海)有限公司];乙酸銨(上海達(dá)瑞精細(xì)化學(xué)品有限公司);四丁基氫氧化銨(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);甲醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);超純水Milli-Q(電阻率18.0 MΩ·cm)。

    1.4" "主要儀器與設(shè)備" "ICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀Agilent7700X(美國安捷倫公司),配有MassHunter色譜-質(zhì)譜聯(lián)用工作站,PRP-X100陰離子色譜柱和預(yù)處理柱(瑞士哈美頓公司),DCS-250H多功能數(shù)字超聲水浴儀(輔光儀器有限公司),MS105DU電子天平(梅特勒公司),MIlli-Q超純水機(jī)(美國默克公司)。

    1.5" "試驗方法

    1.5.1" "試樣提取" "將試驗用菌棒出耳后,摘下,烘干后粉碎機(jī)粉碎,過篩0.4 mm。

    稱取試樣1 g于50 mL離心管中,加入10 mL緩沖液,室溫下在超聲水浴超聲30 min。取出加入25 mg蛋白酶,混勻,置于恒溫振蕩器中37 ℃,震蕩酶解20 h,取出,5 000 r/min下離心10 min,吸取2 mL上清液至10 mL容量瓶,加入流動相定容,過0.22 m濾膜,待測。

    1.5.2" "儀器條件

    1)液相色譜條件。C18色譜柱,4.6×150 mm,5 μm;流動相:15 mmol/L乙酸銨、0.4 mmol/L氫氧化四丁基銨,5%甲醇,pH5.5;流速:1.5 mL/min;洗脫程序:等度洗脫;洗針液:10%甲醇水溶液;進(jìn)樣量:" 100 μL。

    2)電感耦合等離子體質(zhì)譜條件。等離子氣: 9 L/min;輔助氣:1.1 L/min;載氣:0.7 L/min;采樣深度:5 mm;碰撞氣:He,6 mL/min;霧室溫度:5 ℃。

    2" "結(jié)果與討論

    2.1" "應(yīng)用液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測Se形態(tài)" "基于液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用對目標(biāo)木耳中硒形態(tài)進(jìn)行基本形態(tài)分離以及檢測,可以將硒形態(tài)中SeMeCyS、SeMet、SeO32-以及SeO42-,在12 min中達(dá)到很好的分離。色譜圖見圖1。

    2.2" "測試方法的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)及檢出限" "以各個形態(tài)硒濃度的峰面積與對應(yīng)質(zhì)量濃度(表1)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜(圖2),可以看出,在1~100 μg/L范圍內(nèi),各種形態(tài)硒的線性范圍良好,相關(guān)系數(shù)≥0.999 3。

    按照相同儀器條件,以試劑空白為基準(zhǔn),連續(xù)測量11次,求出空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差,DL=3 SD/K(K為校正曲線斜率),計算出硒元素各形態(tài)檢出限為:硒代蛋氨酸3.5 μg/L,甲基硒代半胱氨酸4.6 μg/L,亞硒酸2.6 μg/L,硒酸3.6 μg/L。

    2.3" "木耳樣品的測定及分析" "從測量結(jié)果可以看出(表2),木耳樣品中均含有SeMeCyS,其中1-3號樣品中甲基硒代半胱氨酸形態(tài)含量最高,部分樣品中含有SeMet形態(tài),同樣是1-3號硒代蛋氨酸形態(tài)含量最高,木耳樣品中SeO32-、SeO42-形態(tài)硒含量均低于檢出限。

    另外從部分樣品的圖譜(圖3)中發(fā)現(xiàn)除目標(biāo)4種形態(tài)硒之外,還有其他的峰存在,可能存在其他形態(tài)硒,還要通過進(jìn)一步試驗證明。

    3" "結(jié)論

    將不同濃度含硒水溶肥添加到木耳拌料中,采用蛋白酶提取法,結(jié)合液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法聯(lián)用技術(shù)測量目標(biāo)木耳樣品中的SeMeCyS、SeMet、SeO32-、SeO42-的4種硒形態(tài)。分析發(fā)現(xiàn),木耳中硒的形態(tài)甲基硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸可以被檢出,通過提高賦肥濃度的配比,對木耳中有機(jī)硒的形態(tài)轉(zhuǎn)化有一定的影響。在木耳拌料中添加含硒水溶肥按照1 : 700比例稀釋,SeMeCyS含量和SeMet形態(tài)含量最高。

    參考文獻(xiàn)

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    【基金項目】:遼寧省自然科學(xué)基金項目(2021-MS-074)。

    崔暢,尤海丹,遼寧省重要技術(shù)創(chuàng)新與研發(fā)基地建設(shè)工程中心/遼寧省分析科學(xué)研究院,郵編110015(沈陽);閆玉,遼寧省食品檢驗檢測院。

    收稿日期:2024-06-13

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