葉面噴施乙烯利對(duì)銀杏葉生物量、生理及品質(zhì)的影響

摘 要：【目的】探討不同外源乙烯利濃度對(duì)銀杏葉生物量、生理及品質(zhì)的影響，為提高銀杏葉片藥用有效成分提供理論指導(dǎo)?！痉椒ā恳?年生銀杏實(shí)生苗為材料，噴施4種濃度的乙烯利（200、400、600、800 mg·L-1），30 d后采樣。測(cè)定葉生物量、可溶性糖、可溶性蛋白、內(nèi)源激素及萜內(nèi)酯類化合物含量等，并進(jìn)行相關(guān)性分析，篩選有利于銀杏葉生物量積累、生理代謝和品質(zhì)提高的外源乙烯利濃度?！窘Y(jié)果】除800 mg·L-1的處理組外，其余處理組葉生物量均高于對(duì)照但未達(dá)到顯著差異水平。外源乙烯利濃度不同程度地提高了銀杏葉總?cè)~綠素、可溶性糖、可溶性蛋白的含量。800 mg·L-1的乙烯利處理顯著提高了銀杏葉片中萜內(nèi)酯類化合物的含量，與對(duì)照組相比提高了13.41%。此濃度下，赤霉素（GA3）和脫落酸（ABA）含量顯著增加。高濃度乙烯利（>500 mg·L-1）處理組銀杏內(nèi)酯A（GA）含量顯著高于對(duì)照，除600 mg·L-1的處理組外，其他濃度處理組的銀杏內(nèi)酯B（GB）含量均顯著高于對(duì)照組，不同濃度乙烯利處理均顯著降低了白果內(nèi)酯（BB）含量，而對(duì)銀杏內(nèi)酯C（GC）含量無顯著影響。相關(guān)性分析表明，GA含量與葉綠素a、總?cè)~綠素呈顯著負(fù)相關(guān)，與類胡蘿卜素呈極顯著負(fù)相關(guān)。GB含量與ABA呈顯著正相關(guān)，與生長(zhǎng)素（IAA）、GA3、玉米素（ZR）呈顯著正相關(guān)。GC、BB含量與ZR呈顯著正相關(guān)。基于主成分分析得出各乙烯利噴施濃度的綜合得分由高到低依次為800、600、400、200、0 mg·L-1?！窘Y(jié)論】噴施適宜濃度的乙烯利能有效促進(jìn)銀杏葉生物量的積累，增強(qiáng)初生代謝，提高銀杏葉中萜內(nèi)酯化合物的含量，適宜的乙烯利噴施濃度為800 mg·L-1。

關(guān)鍵詞：乙烯利；葉生物量；生理；品質(zhì)

中圖分類號(hào)：S792.95 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-923X（2024）06-0112-08

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31971689）。

Effects of ethephon application on biomass， physiology and quality of Ginkgo biloba leaves

HOU Huifenga，b， ZHANG Jingjinga，b， LUO Yixuana，b， WANG Guibina，b

（a. Southern Modern Forestry Collaborative Innovation Center； b. College of Forestry and Grass， Nanjing Forestry University， Nanjing 210037， Jiangsu， China）

Abstract：【Objective】To investigate the effects of different concentrations of exogenous ethephon on the biomass， physiology and quality of Ginkgo biloba leaves， and to provide theoretical guidance for improving the medicinal active components of G. biloba leaves.【Method】The three-year-old G. biloba seedlings were sprayed with 4 concentrations of ethephon （200， 400， 600， 800 mg·L-1） and sampled 30 days later. Leaf biomass， soluble sugars， soluble proteins， endogenous hormones and terpene lactones were measured， and the correlation analysis was carried out.【Result】Except for the 800 mg·L-1 treatment group， the leaf biomass of the other treatment groups was higher than that of the control group but did not reach a significant difference level. The contents of total chlorophyll， soluble sugar and soluble protein in G. biloba leaves were increased by exogenous ethephon concentration. The contents of terpene lactones in ginkgo leaves were significantly increased by 800 mg·L-1 ethephon treatment， which was 13.41% higher than that in control group. At this concentration， the contents of gibberellin （GA3） and abscisic acid （ABA） increased significantly. Ginkgolide A （GA） in high concentration ethephon （>500 mg·L-1） treatment group was significantly higher than that in control group， except for 600 mg·L-1 treatment group， the content of ginkgolide B （GB） in other concentration treatment groups was significantly higher than that in control group， and the content of ginkgolide （BB） was significantly reduced under different concentrations. The content of ginkgolide C （GC） was not significantly affected. Correlation analysis showed that GA content was negatively correlated with chlorophyll a and total chlorophyll， and was negatively correlated with carotenoids. The content of GB was positively correlated with ABA， auxin （IAA）， GA3 and zeatin （ZR）. The contents of GC and BB were positively correlated with ZR. Based on principal component analysis， the comprehensive scores of ethephon spray concentration were 800， 600， 400， 200， 0 mg·L-1 from high to low.【Conclusion】Application of appropriate concentration of ethephon can effectively promote the accumulation of biomass in G. biloba leaves， enhance primary metabolism， and increase the content of terpene lactone compounds in G. biloba leaves. The appropriate concentration of ethephon is 800 mg·L-1.

Keywords： ethephon； leaf biomass； physiology； quality

銀杏Ginkgo biloba屬裸子植物門Gymnospermae銀杏科Ginkgoaceae銀杏屬Ginkgo，是原產(chǎn)中國(guó)的重要經(jīng)濟(jì)樹種[1]。銀杏葉中含有多種重要次生代謝產(chǎn)物，如類黃酮、萜內(nèi)酯類化合物、聚戊烯醇、有機(jī)酸、多糖等，均具有一定的藥用價(jià)值[2]。銀杏萜內(nèi)酯為銀杏獨(dú)有的活性成分，是評(píng)價(jià)銀杏葉品質(zhì)的重要指標(biāo)。銀杏萜內(nèi)酯分為二萜內(nèi)酯和倍半萜內(nèi)酯，二萜內(nèi)酯有銀杏內(nèi)酯A、B、C、J、K、L、M、N、P、Q等10種；倍半萜內(nèi)酯僅有白果內(nèi)酯（Bilobalide，BB）一種[3]。銀杏萜內(nèi)酯具有抗炎、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)及心腦血管等廣泛的藥理作用，還對(duì)包括膀胱癌、結(jié)腸癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤的治療有積極作用[4-5]。隨著銀杏葉片提取物（GBE）的藥用價(jià)值被不斷認(rèn)識(shí)和開發(fā)，市場(chǎng)需求也在不斷地?cái)U(kuò)大[6]。萜內(nèi)酯作為GBE的重要組分，人工合成仍無法滿足商業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的需要，從葉中提取、分離仍是最直接有效的方式[7]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界平均每天消耗600萬種銀杏葉提取物產(chǎn)品，而藥用銀杏葉提取物的消耗高達(dá)15萬 kg。我國(guó)每年干銀杏葉需求量約3萬t，而市場(chǎng)只能供給約1萬 t[8]。中國(guó)作為土地資源珍貴的農(nóng)業(yè)大國(guó)，銀杏葉用林栽培面積有限，如何在已有種植規(guī)模下，提高單位面積的銀杏葉產(chǎn)量和有效成分含量是當(dāng)前亟待解決的問題。

目前，已經(jīng)證明矮壯素[9]、水楊酸[10]、茉莉酸甲酯[11]等多種激素施用對(duì)提高銀杏中萜內(nèi)酯類化合物含量有重要作用。2-氯乙基磷酸又名乙烯利（Ethephon， ETH），是乙烯的緩釋劑。在多種植物的植株、細(xì)胞培養(yǎng)體系和毛狀根培養(yǎng)體系中，都已證明乙烯對(duì)于促進(jìn)次生代謝物合成具有重要作用。乙烯對(duì)次生代謝的促進(jìn)作用主要受AP2/ ERF家族轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，該家族轉(zhuǎn)錄因子通過結(jié)合下游啟動(dòng)子區(qū)域含GCC-box的基因來編碼乙烯信號(hào)途徑末端效應(yīng)蛋白，最終作用于次生代謝物的合成[12]。相關(guān)研究也表明，乙烯可以誘導(dǎo)GbHMGR2和GbHMGR3等甲羥戊酸代謝途徑中關(guān)鍵基因的表達(dá)，直接參與萜內(nèi)酯的生物合成[13]。

前人研究表明適宜濃度的乙烯利噴施可顯著提高銀杏萜內(nèi)酯含量，200 mg·L-1時(shí)達(dá)到最大值，為對(duì)照的2.11倍[14]。10 mmol·L-1的乙烯利也被證明可促進(jìn)銀杏萜內(nèi)酯的積累，在噴施第8天時(shí)，與對(duì)照組相比提高了10.20%[15]。以往研究均為盆栽試驗(yàn)，且未深入探討萜內(nèi)酯各組分變化。有關(guān)較高濃度乙烯利處理銀杏的研究也鮮有報(bào)道，為此筆者對(duì)銀杏大田實(shí)生苗進(jìn)行乙烯利濃度梯度噴施處理，分析銀杏葉生物量、生理指標(biāo)對(duì)不同外源乙烯利濃度的響應(yīng)以及不同濃度乙烯利處理下葉萜內(nèi)酯含量的變化，研究外源乙烯利濃度對(duì)銀杏葉生物量、生理及品質(zhì)的影響及作用機(jī)制，以期為葉用銀杏林高產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)概況

研究區(qū)位于江蘇省徐州市邳州市四戶鎮(zhèn)（117°55′E，34°37′N）。該鎮(zhèn)位于邳州市北部邊緣，蘇魯交界處，屬黃淮沖積平原，地勢(shì)平坦，平均海拔31 m。屬暖濕帶濕潤(rùn)半濕潤(rùn)季風(fēng)氣候區(qū)，四季分明，日照充足，冬干冷，夏溫?zé)?，年平均氣?4 ℃，年平均降水量868 mm。

試驗(yàn)地為優(yōu)質(zhì)葉用銀杏林，土壤肥力適中，排水良好。銀杏均為3年生實(shí)生苗，平均苗高1.8 m，平均地徑21 mm，株行距1.2 m，株間距0.5 m。試驗(yàn)地管理栽培措施到位，銀杏苗生長(zhǎng)健壯且無病蟲害。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2022年8月初在研究區(qū)進(jìn)行區(qū)組劃分，采用完全隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每種濃度設(shè)置3次重復(fù)。每個(gè)小區(qū)劃分面積為6 m2，選擇其中3株銀杏苗進(jìn)行處理，共15個(gè)小區(qū)。各小區(qū)間設(shè)置兩列作為保護(hù)行。乙烯利處理設(shè)置4個(gè)濃度梯度，共計(jì)5個(gè)處理（表1）。乙烯利（40%的水劑）由四川國(guó)光農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)采用葉面噴施，使用前稀釋至相應(yīng)濃度。其中吐溫80（0.1%，V/V）作為一種非離子型表面活性劑，有助于乙烯利更好地被植株吸收。噴施時(shí)間選在晴天無風(fēng)的上午進(jìn)行。噴施時(shí)以葉片正反面均布滿液滴為標(biāo)準(zhǔn)，每株苗噴施量約100 mL。

黃小花等[16]研究發(fā)現(xiàn)銀杏各萜內(nèi)酯含量最大值的出現(xiàn)時(shí)間集中在9月；戚向陽等[17]對(duì)來自不同產(chǎn)地、不同季節(jié)的銀杏葉樣品進(jìn)行檢測(cè)分析，得出銀杏葉的最佳采收季節(jié)為9—10月。根據(jù)謝寶東等[14]的研究，3年生銀杏實(shí)生苗對(duì)乙烯利的響應(yīng)時(shí)間約30 d。因此試驗(yàn)設(shè)計(jì)于2022年8月7日（葉色轉(zhuǎn)黃初期）噴施一次，30 d后采樣。

1.3 樣品采集與處理

每個(gè)小區(qū)的3株苗記錄葉生物量并混樣。每個(gè)小區(qū)的樣品隨機(jī)分為2份：一份迅速放入自封袋置于干冰中，帶回試驗(yàn)室-80 ℃下儲(chǔ)存，用于測(cè)定葉綠素、初生代謝物及內(nèi)源激素等生理指標(biāo)。另一份置于冰盒中，帶回實(shí)驗(yàn)室后放入信封于105 ℃殺青10 min后，60 ℃烘至恒質(zhì)量、粉碎，干燥器貯存。每個(gè)處理（3個(gè)重復(fù)）精準(zhǔn)稱取1 g干燥粉末后用9 cm雙圈定性濾紙包好，供測(cè)定萜內(nèi)酯。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 葉生理指標(biāo)

葉綠素含量的測(cè)定采用無水乙醇浸提法；可溶性糖含量采用蒽酮比色法測(cè)定；可溶性蛋白含量測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法；均參照王學(xué)奎等[18]主編的植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)。

1.4.2 葉內(nèi)源激素含量

將冰箱中的葉片取出，用液氮研磨至粉碎。后用千分之一的天平精準(zhǔn)稱取0.5 g置于離心管中，每個(gè)處理重復(fù)3次。采用酶聯(lián)免疫法[19]測(cè)定銀杏葉片中赤霉素（GA3）、脫落酸（ABA）、生長(zhǎng)素（IAA）和玉米素（ZR）4種激素的含量。

1.4.3 葉萜內(nèi)酯含量

參照中國(guó)藥典[20]測(cè)定銀杏內(nèi)酯A、B、C及白果內(nèi)酯的含量。采用高效液相色譜法（HPLC），參數(shù)設(shè)置參照文獻(xiàn)[21]，以甲醇和純水（31∶69）為流動(dòng)相，柱溫35 ℃，流速1 mL·min-1，漂移管溫度90 ℃，霧化氣體壓力42.5 psi，上樣體積20 μL。

測(cè)定方法：設(shè)置5個(gè)梯度濃度的混標(biāo)溶液，與樣品上樣量相同，測(cè)定后根據(jù)峰面積和濃度建立線性回歸方程，分別計(jì)算銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C和白果內(nèi)酯BB的含量，銀杏總萜內(nèi)酯含量=銀杏內(nèi)酯A+銀杏內(nèi)酯B+銀杏內(nèi)酯C+白果內(nèi)酯。

1.5 數(shù)據(jù)處理和分析

采用Excel 2016和SPSS 26.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析和Duncan多重比較對(duì)不同濃度處理間進(jìn)行顯著差異檢驗(yàn)（P=0.05），對(duì)萜內(nèi)酯各組分和相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行斯皮爾曼相關(guān)性分析，主成分分析及綜合評(píng)價(jià)方法參照文獻(xiàn)[22-23]。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙烯利對(duì)銀杏葉生物量的影響

不同濃度乙烯利處理對(duì)銀杏葉生物量的影響見表2。隨著乙烯利濃度的升高，銀杏葉生物量呈先升高后降低的趨勢(shì)，在400 mg·L-1乙烯利處理下達(dá)到最大值，比對(duì)照組高63.65 g，說明該濃度的乙烯利處理對(duì)銀杏葉生物量的積累有一定促進(jìn)作用。800 mg·L-1的乙烯利處理組葉生物量低于對(duì)照組但未達(dá)到顯著影響（P>0.05），說明高濃度的乙烯利處理對(duì)3年生銀杏大田實(shí)生苗葉片的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。

2.2 乙烯利對(duì)銀杏葉葉綠素含量的影響

不同濃度乙烯利處理后，銀杏葉葉綠素含量及多重比較結(jié)果見表3。隨著乙烯利濃度提高，葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素及總?cè)~綠素含量均呈先升高后降低的趨勢(shì)，400 mg·L-1處理組均達(dá)到最大值，分別為5.70、2.83、1.66和8.53 mg·g-1。800 mg·L-1處理組葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素含量及總?cè)~綠素含量均高于對(duì)照組，但未達(dá)到顯著差異水平（P>0.05）。

2.3 乙烯利對(duì)銀杏葉初生代謝物的影響

不同濃度乙烯利處理后，銀杏葉可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量及多重比較結(jié)果見表4?？傮w上，外源乙烯利對(duì)可溶性糖及蛋白含量無顯著影響（P>0.05），但均高于對(duì)照組。200 mg·L-1乙烯利處理組可溶性糖和可溶性蛋白的含量最高，分別為6.96和1.35 mg·g-1。隨著乙烯利濃度的升高，可溶性糖和可溶性蛋白含量呈降低趨勢(shì)，在800 mg·L-1處理組又分別升高至6.76和1.31 mg·g-1。

2.4 乙烯利對(duì)銀杏葉內(nèi)源激素的影響

不同濃度乙烯利處理后，銀杏葉內(nèi)源激素含量及多重比較結(jié)果見表5。乙烯利處理不同程度地影響了GA3、ABA、IAA和ZR的含量。除600 mg·L-1處理組外，其余處理組GA3含量均顯著高于對(duì)照（P<0.05），分別是對(duì)照組的1.10、1.50和1.14倍。600和800 mg·L-1處理組ABA含量均顯著高于對(duì)照（P<0.05），分別提高了18.50%和11.82%。IAA和ZR的含量隨乙烯利濃度的提高未呈現(xiàn)規(guī)律性變化。

2.5 乙烯利對(duì)銀杏葉萜內(nèi)酯各組分含量的影響

不同濃度乙烯利處理后，銀杏葉GA、GB、GC、BB及總萜內(nèi)酯的含量及多重比較結(jié)果見表6。800 mg·L-1的乙烯利處理顯著提高了銀杏葉中總萜內(nèi)酯的含量（P<0.05），與對(duì)照組相比提高了13.43%；低濃度乙烯利（<500 mg·L-1）處理對(duì)GA影響不顯著（P>0.05），600、800 mg·L-1的乙烯利處理下GA含量分別為1.95±0.17、2.26±0.02 mg·g-1，是對(duì)照組的1.10倍和1.28倍。除600 mg·L-1處理組外，其他濃度處理組的GB含量均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），尤其是400 mg·L-1的乙烯利處理后，GB含量提高了84.13%。乙烯利處理對(duì)GC含量的影響均不顯著（P>0.05），但顯著降低了BB的含量（P<0.05）。

2.6 萜內(nèi)酯各組分與生理指標(biāo)的相關(guān)性分析

不同濃度乙烯利處理后，銀杏葉萜內(nèi)酯與部分生理指標(biāo)的相關(guān)性（r值）分析結(jié)果見表7。噴施乙烯利后GA含量與葉綠素a、總?cè)~綠素顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05），與類胡蘿卜素呈極顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01）。GB含量與ABA顯著正相關(guān)（P<0.05），與IAA、GA3、ZR顯著正相關(guān)（P<0.05）。GC、BB含量與ZR顯著正相關(guān)（P<0.05）。

2.7 綜合評(píng)價(jià)

3 結(jié)論與討論

3.1 討 論

萜類化合物是以異戊二烯為結(jié)構(gòu)單元組成的化合物的統(tǒng)稱，半數(shù)以上存在于高等植物中，如銀杏、紅豆杉和人參等[24]。由于廣泛的藥理活性，萜類化合物具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。乙烯利作為一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，能夠正向調(diào)控多種植物萜內(nèi)酯化合物的合成與積累，如5%乙烯利噴施處理藥用植物絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum，可顯著增加除莖以外各器官中總皂苷的含量[25]；對(duì)長(zhǎng)春花Catharanthus roseus噴施0.1 mmol·L-1的乙烯利，72 h后葉片中長(zhǎng)春堿的含量提高了91%[26]；紅豆杉Taxus cuspidata細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)，隨著乙烯利濃度的提高，細(xì)胞的生長(zhǎng)量和紫杉醇的總產(chǎn)量也逐漸增大[27]。本研究與前人研究結(jié)果一致，乙烯利處理顯著提高了銀杏葉總萜內(nèi)酯含量。相關(guān)研究結(jié)果表明，噴施乙烯利后銀杏中GbDXS、GbGGPPS、GbLPS和GbMVD等萜內(nèi)酯合成途徑關(guān)鍵酶基因均響應(yīng)，這說明乙烯利通過上調(diào)部分關(guān)鍵酶基因表達(dá)水平進(jìn)而影響萜類化合物的合成[15，28]。

植物初生代謝物是植物生長(zhǎng)發(fā)育及生命維持不可或缺的，包括糖類、脂類、蛋白質(zhì)等。次生代謝物是植物為了抵御環(huán)境脅迫而產(chǎn)生的一大類小分子物質(zhì)，由初級(jí)代謝產(chǎn)物衍生而來[29]。本研究中，不同濃度的乙烯利處理均提高了可溶性糖和蛋白含量，這說明適宜濃度的乙烯利處理能夠促進(jìn)其積累，為次生代謝提供更豐富的底物。但隨著乙烯利濃度的升高，可溶性糖和可溶性蛋白未呈現(xiàn)有規(guī)律的變化，這可能與濃度梯度設(shè)置過大有關(guān)。外源激素對(duì)植物次生代謝的影響往往不是單獨(dú)起作用，而是與其他激素協(xié)同交互共同作用于次生代謝物的積累[24]。本研究中，800 mg·L-1乙烯利的噴施有利于內(nèi)源GA3和ABA含量的增加，這與許鋒等[30]研究發(fā)現(xiàn)一年中銀杏總萜內(nèi)酯含量與GA3、ABA含量變化相一致，說明乙烯利是通過調(diào)節(jié)內(nèi)源激素來影響次生代謝。此外，在本研究中IAA、ZR隨乙烯利濃度的增加未呈現(xiàn)有規(guī)律的變化，可能與復(fù)雜的激素作用機(jī)制相關(guān)。

總體而言，乙烯利處理均提高了銀杏葉片中GA、GB的含量，但不同程度地降低了BB含量，這可能是由于白果內(nèi)酯和銀杏二萜內(nèi)酯有著不同的合成路徑[31]。王鼎豪[19]的研究也發(fā)現(xiàn)不同激素處理對(duì)銀杏萜內(nèi)酯各組分含量影響各不相同。相關(guān)性分析結(jié)果表明，銀杏萜內(nèi)酯各組分含量與各生理指標(biāo)呈現(xiàn)不同程度的變化，為了更好地分析各生理指標(biāo)的綜合效益，采用主成分分析法提取了2個(gè)主成分，進(jìn)行綜合排名，結(jié)果表明外源乙烯利濃度為800 mg·L-1時(shí)處理的綜合得分排名最高，該處理能夠有效增加銀杏葉生物量，促進(jìn)銀杏葉片中初生代謝物的積累，有效調(diào)節(jié)各激素的含量，提高銀杏萜內(nèi)酯及各組分的含量。由于乙烯利在氣溫高于20 ℃、pH值>4.1的條件下才能更好地釋放乙烯，因此植株生長(zhǎng)狀態(tài)、藥劑濃度、噴施劑量及施用時(shí)間的不同均會(huì)影響乙烯利的施用效果。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中需要根據(jù)情況確定最佳的噴施濃度，為葉用銀杏林創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

本研究重點(diǎn)關(guān)注銀杏大田實(shí)生苗銀杏葉生物量、生理及品質(zhì)對(duì)外源乙烯利的響應(yīng)，得出了有利于銀杏萜內(nèi)酯含量積累的適宜外源激素施用濃度，為葉用銀杏林中乙烯利的施用提供了參考。目前，噴施外源乙烯利以促進(jìn)次生代謝的相關(guān)研究還比較少，乙烯利對(duì)銀杏萜內(nèi)酯含量影響的分子機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。

3.2 結(jié) 論

不同濃度乙烯利處理下，銀杏葉生物量增加（800 mg·L-1處理組除外），葉綠素含量、可溶性蛋白和可溶性糖含量不同程度增加。800 mg·L-1乙烯利處理組銀杏總萜內(nèi)酯含量顯著增加，GA3和ABA含量顯著增加。銀杏對(duì)不同乙烯利濃度的響應(yīng)存在差異，通過主成分分析并結(jié)合綜合評(píng)價(jià)，4種乙烯利濃度處理對(duì)調(diào)控銀杏葉生物量、生理和品質(zhì)的綜合排名由大到小依次為800>600>400>200>0 mg·L-1。

參考文獻(xiàn)：

[1] 曹福亮.中國(guó)銀杏志[M].北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2007. CAO F L. Journal of Ginkgo biloba in China[M]. Beijing： China Forestry Publishing House，2007.

[2] 毛欣雨.不同樹齡銀杏葉片藥用有效成分積累規(guī)律及多組學(xué)分析[D].揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2021. MAO X Y. Medicinal active components and multi-omics analysis in Ginkgo biloba leaves of different age trees[D]. Yangzhou： Yangzhou University，2021.

[3] 杜金法，李萍，陸續(xù).銀杏內(nèi)酯生物合成與代謝調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)中藥雜志，2021，46（13）：3288-3297. DU J F， LI P， LU X. Advance in biosynthesis and metabolic regulation of ginkgolides[J]. China Journal of Chinese Meteria Medica， 2021，46（13）：3288-3297.

[4] 李從文，譚文莉， 魏云林.銀杏內(nèi)酯的研究進(jìn)展[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2020，39（5）：2216-2221. LI C W， TAN W L， WEI Y L. Research progress of ginkgolide[J]. Genomics and Applied Biology，2020，39（5）：2216-2221.

[5] 李艷萍，張立虎，吳紅雁，等.銀杏葉功效群組分及其功效的研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2020，41（15）：182-187. LI Y P， ZHANG L H， WU H Y， et al. Progress in the study of functional groups and health care efficacy of Ginkgo biloba leaves[J]. Food Research and Development，2020，41（15）：182-187.

[6] 花蕊，郁萬文，李婷婷，等.硝銨配比對(duì)銀杏苗生長(zhǎng)和葉品質(zhì)及產(chǎn)量的影響[J].經(jīng)濟(jì)林研究，2021，39（3）：1-9. HUA R， YU W W， LI T T， et al. Effect of ammonium nitrate ratios on the growth and leaf quality and yield of Ginkgo biloba seedlings[J]. Non-wood Forest Research，2021，39（3）：1-9.

[7] SABATER-JARA A B， SOULIMAN-YOUSSEF S， NOVOUZAL E， et al. Biotechnological approaches to enhance the biosynthesis of ginkgolides and bilobalide in Ginkgo biloba[J]. Phytochemistry Reviews，2013，12（1）：191-205.

[8] 肖顆星.我國(guó)銀杏產(chǎn)業(yè)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力戰(zhàn)略研究[D].南京：南京林業(yè)大學(xué)，2018. XIAO K X. Study on international competitiveness of ginkgo industry in China[D]. Nanjing： Nanjing Forestry University，2018.

[9] 許鋒，張威威，孫楠楠，等.矮壯素對(duì)銀杏葉片光合代謝與萜內(nèi)酯生物合成的影響[J].園藝學(xué)報(bào)，2011，38（12）：2253-2260. XU F， ZHANG W W， SUN N N， et al. Effects of chlorocholine chloride on photosynthesis metabolism and terpene trilactones biosynthesis in the leaf of Ginkgo biloba[J]. Acta Horticulturae Sinica，2011，38（12）：2253-2260.

[10] YE J， MAO D， CHENG S， et al. Comparative transcriptome analysis reveals the potential stimulatory mechanism of terpene trilactone biosynthesis by exogenous salicylic acid in Ginkgo biloba[J]. Industrial Crops and Products，2020，145（6）：112104.

[11] HORBOWICZ M， WICZKOWSKI W， GORAJ-KONIARSKA J， et al. Effect of methyl jasmonate on the terpene trilactones， flavonoids， and phenolic acids in Ginkgo biloba L. leaves： relevance to leaf senescence[J]. Molecules，2021，26（15）：4682.

[12] 方榮俊，趙華，廖永輝，等.乙烯對(duì)植物次生代謝產(chǎn)物合成的雙重調(diào)控效應(yīng)[J].植物學(xué)報(bào)，2014，49（5）：626-639. FANG R J， ZHAO H， LIAO Y H， et al. Dual regulatory effects of ethylene on the synthesis of plant secondary metabolites[J]. Chinese Bulletin of Botany，2014，49（5）：626-639.

[13] RAO S， MENG X， LIAO Y， et al. Characterization and functional analysis of two novel 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase genes （GbHMGR2 and GbHMGR3） from Ginkgo biloba[J]. Scientific Reports，2019，9（1）：14109.

[14] 謝寶東，王華田，吳國(guó)意，等.乙烯利對(duì)銀杏葉黃酮和內(nèi)酯含量的影響[J].山東林業(yè)科技，2002（3）：1-3. XIE B D， WANG H T， WU G Y， et al. The influence of ethrel on contents of flavone- lactone in Gingko leaves[J]. Journal of Shandong Forestry Science and Technology，2002（3）：1-3.

[15] ZHENG J R， ZHANG X， FU M Y， et al. Effects of different stress treatments on the total terpene trilactone content and expression levels of key genes in Ginkgo biloba leaves[J]. Plant Molecular Biology Reporter，2020，38（4）：521-530.

[16] 黃小花，廖詠玲，許鋒，等.銀杏不同類型枝條葉片萜內(nèi)酯含量年周期變化規(guī)律[J].經(jīng)濟(jì)林研究，2013，31（1）：48-52. HUANG X H， LIAO Y L， XU F， et al. Annual cycle law of terpene lactones contents in leaves from different typesof branches in Ginkgo biloba[J].Non-wood Forest Research，2013，31（1）： 48-52.

[17] 戚向陽，陳維軍，謝筆鈞.銀杏葉中萜內(nèi)酯含量的動(dòng)態(tài)變化的研究[J].中成藥，2003，25（6）：15-18. QI X Y， CHEN W J， XIE B J. Study on the development variation of the content of terpene lactones of Ginkgo biloba leaves[J]. Chinese Traditional Patent Medicine，2003，25（6）：15-18.

[18] 王學(xué)奎，黃見良.植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù)[M].3版.北京：高等教育出版社，2015. WANG X K， HUANG J L. Principles and techniques of plant physiology and biochemistry experiments[M]. 3rd ed. Beijing： Higher Education Press，2015.

[19] 王鼎豪.NAA和多效唑?qū)︺y杏葉黃酮和萜內(nèi)酯合成與積累的影響[D].南京：南京林業(yè)大學(xué)，2021. WANG D H. Effects of naphthylacetic acid and paclobutrazol on the synthesis and accumulation of flavonoids and terpenoids in Ginkgo biloba L. leaves[D]. Nanjing： Nanjing Forestry University，2021.

[20] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China[M]. Beijing： China Medical Science and Technology Press，2020.

[21] SU E， YANG M， CAO J， et al. Deep eutectic solvents as green media for efficient extraction of terpene trilactones from Ginkgo biloba leaves[J]. Journal of Liquid Chromatography Related Technologies，2017，40（8）：385-391.

[22] 曹棟，馮凱，陳穎，等.微生物菌肥配施對(duì)截干銀杏林有效成分積累及葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊慬J].經(jīng)濟(jì)林研究，2023，41（2）： 129-136. CAO D， FENG K， CHEN Y， et al. Effects of combined application of microbial fertilizer on effective constituent and chlorophyll fluorescence of Ginkgo biloba trunk-cutting seedlings[J]. Non-wood Forest Research，2023，41（2）：129-136.

[23] 王瑞，何之龍，張震，等.基于主成分分析及隸屬函數(shù)法評(píng)價(jià)氮素形態(tài)對(duì)油茶苗木的影響[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2023， 43（10）：11-19. WANG R， HE Z L， ZHANG Z， et al. Evaluation of the effect of nitrogen forms on the growth of Camellia oleifera seedling based on principal components analysis and membership function method[J]. Journal of Central South University of Forestry Technology，2023，43（10）：11-19.

[24] 代紅洋，柏旭，李曉崗，等.植物激素在三萜類化合物生物合成中的作用及調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J].中草藥，2021，52（20）： 6391-6402. DAI H Y， BO X， LI X G， et al. Research progress on roles of phytohormone in biosynthesis of triterpenoids and their regulatory mechanisms[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs， 2021，52（20）：6391-6402.

[25] 王婷，張世鑫，潘鳳溜，等.乙烯對(duì)絞股藍(lán)皂苷生物合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)和皂苷含量的影響[J].廣西植物，2021，41（6）：1014-1020. WANG T， ZHANG S X， PAN F L， et al. Effects of ethylene on gypenoside biosynthesis-related key enzyme gene expression and gypenoside content in Gynostemma pentaphyllum[J]. Guihaia， 2021，41（6）：1014-1020.

[26] PAN Q， CHEN Y， WANG Q， et al. Effect of plant growth regulators on the biosynthesis of vinblastine， vindoline and catharanthine in Catharanthus roseus[J]. Plant Growth Regulation， 2010，60（2）：133-141.

[27] 白賀.東北紅豆杉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)與紫杉醇提取分離技術(shù)研究[D].吉林：吉林大學(xué)，2020. BAI H. Study on cell suspension culture and extraction and separation of taxol from Taxus cuspidate[D]. Jilin： Jilin University， 2020.

[28] LIAO Y， XU F， HUANG X， et al. Characterization and transcriptional profiling of Ginkgo biloba mevalonate diphosphate decarboxylase gene （GbMVD） promoter towards light and exogenous hormone treatments[J]. Plant Molecular Biology Reporter，2016，34（3）：566-581.

[29] 潘瑞熾.植物生理學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2004. PAN R C. Plant physiology[M]. Beijing： Higher Education Press，2004.

[30] 朱俊，許鋒，程水源.銀杏葉萜內(nèi)酯含量與內(nèi)源激素含量相關(guān)性研究[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，49（11）：2807-2810. ZHU J， XU F， CHENG S Y. A study on the correlation of terpene lactone and endogenous hormones in Ginkgo biloba leaves[J]. Hubei Agricultural Sciences，2010，49（11）：2807-2810.

[31] PEUELAS J， MUNNé-BOSCH S. Isoprenoids： an evolutionary pool for photoprotection[J]. Trends in Plant Science，2005，10（4）： 166-169.

[本文編校：吳 彬]