低強度超聲和不同輻照時間組合激勵微泡空化對裸鼠腎癌移植瘤血流灌注的影響

摘要：目的 探討不同輻照時長下低強度超聲激勵微泡空化對裸鼠腎癌移植瘤血流灌注的影響。方法 選用雄性BALB/c裸鼠30只，于腋下建立786-O人腎透明細胞癌腫瘤模型，根據(jù)空化治療時間（T）隨機分為3組，分別為A 組（T=20 min）、B 組（T=10 min）、C 組（T=5 min），每組10只。于治療前和治療后即刻、4 h、6 h分別進行造影檢查（CEUS）及微血流顯像（MFI）；組織學染色檢測空化治療結束后腫瘤微血管狀態(tài)。結果 與治療前相比，A組治療后即刻腫瘤內血流灌注增加，PI、AUC 的值分別增長7.4%（Plt;0.05）、10.6%（Plt;0.05）；治療后4 h、6 h腫瘤血流灌注比治療后即刻顯著降低（均 Plt;0.05）。B組結果顯示，與治療前相比，治療后即刻、治療后4 h與治療后6 h的PI數(shù)值分別增長了8.1%、15.1%和3.1%，且相應的AUC數(shù)值增長率為18.7%、31.2%和9.3%。方差分析結果顯示各組PI、AUC值存在顯著差異（均Plt;0.01），且組間兩兩比較 PI、AUC 差異均有統(tǒng)計學意義（均Plt;0.01）；C組結果顯示，治療后即刻、治療后4 h、6 h腫瘤內血流灌注與治療前比較均降低。腫瘤內血流灌注PI、AUC 值均顯著減小，與治療前相比差異有統(tǒng)計學意義（均Plt;0.05）。MFI顯像各組視覺評分差異分析結果與造影分析結論一致。病理圖顯示：B組可見較明顯的血管擴張，而C組可見管腔受壓變窄、出血，微血管密度減低（Plt;0.01）。結論 低強度超聲激勵微泡空化治療時間影響腫瘤血流灌注，在本研究中治療時間為10 min時產生的血流增強效應最優(yōu)。

關鍵詞：超聲；微氣泡；786-O人腎透明細胞癌；微血流成像；血管組織

中圖分類號：中圖分類號R730.59文獻標志碼：A文獻標識碼

Effects of low intensity ultrasound combined irradiation time to stimulate

microbubble cavitation on renal carcinoma perfusion in nude mice

WANG" Juan1，LUO" Tingting2，YAO" Lei2，MA" Yulin1，ZHANG" Fan1，WANG" Wengang1，WANG" Yueheng3，JU" Hongjuan1*

（1 Department of Abdominal Ultrasound， The Second Hospital of Hebei Medical University， Hebei，Shijiazhuang 050000，

China; 2 Department of Ultrasound， the Second Affiliated Hespital of Army Medical University， Chongqing 400037， China;

3 Department of Cardiac Ultrasound， The Second Hospital of Hebei Medical University， Hebei，Shijiazhuang 050000，

China）

Abstract：" Objective To explore the effect of low-intensity ultrasound-induced microbubble cavitation on blood perfusion of renal carcinoma in nude mice under different irradiation durations. Methods Thirty male BALB/c nude mice were selected to establish a 786-O tumor model in the armpit. They were randomly divided into 3 groups according to the cavitation treatment time （T）， namely group A （T=20 min） and group B （T=10 min）， group C （T=5 min）， 10 animals in each group. Contrast imaging （CEUS） and microflow imaging （MFI） were performed pre-treatment and immediately， 4 h， and 6 h after treatment; histological staining was performed to detect the microvascular status of the tumor after treatment. Results Compared with before treatment， the intratumoral blood perfusion in Group A increased immediately after treatment， and the PI and AUC values increased by 7.4% （Plt;0.05） and 10.6% （Plt;0.05） respectively; Tumor blood perfusion was significantly lower at 4 h and 6 h comparing to immediately after treatment （all Plt;0.05）. The results of Group B showed that compared with pre-treatment， the PI values immediately， 4 hours and 6 hours after treatment increased by 8.1%， 15.1% and 3.1% respectively， and the corresponding AUC value growth rates were 18.7% and 31.2%. and 9.3%. The results of analysis of variance showed that there were significant differences in the PI and AUC values of each group （both Plt;0.01）， and the differences in PI and AUC between the groups were statistically significant （both Plt;0.01）; the results of group C showed that immediately after treatment， the blood perfusion in the tumor decreased 4 h and 6 h after treatment compared with pre-treatment. The intratumoral blood perfusion PI and AUC values were significantly reduced， and the differences were statistically significant compared with those before treatment （both Plt;0.05）. The results of the difference analysis of visual scores among each group under MFI imaging were consistent with the conclusions of the contrast analysis. The pathological pictures showed that obvious blood vessel dilation was seen in group B， while in group C， the lumen was narrowed due to pressure， hemorrhage， and the density of microvessels was reduced （Plt;0.01）. Conclusion The treatment time of low-intensity ultrasound-excited microbubble cavitation affects tumor blood perfusion. In this study， the blood flow enhancement effect was optimal when the treatment time was 10 minutes.

Key words： ultrasound;microbubble;786-O renal clear cell carcinoma;microflow imaging;vascular tissue

透明細胞腎細胞癌（ccRCC）高表達血管內皮生長因子A （VEGF-A）［1］，而VEGF-A高表達不僅引發(fā)腫瘤新生血管形成，還將加重腫瘤脈管網絡結構和功能的異常，從而導致腫瘤血流灌注不足并限制氧氣的運輸效率［2-3］。因此，組織缺氧是ccRCC的一個重要特征，這使得大部分病例對放療或者化療不敏感［4］ 。目前針對VEGF信號通路的抗血管生成治療是ccRCC的主流療法［5］。然而，隨著使用時間推移，抗藥性也逐漸產生。臨床試驗發(fā)現(xiàn)，在抗血管生成治療的同時增加腫瘤灌注/氧合，改善腫瘤缺氧微環(huán)境可以增強腫瘤對抗血管生成藥物的敏感性，延長生存期［6］。目前，在改善腫瘤血流灌注的方法中的藥物治療存在的問題是可控性欠佳，而熱療又便捷性不足［7-8］。因此，尋求一種可控性好且便捷的方法來暫時性增強ccRCC腫瘤血流灌注、緩解腫瘤缺氧成為必要。

前期研究發(fā)現(xiàn)，低壓振幅（lt;1MPa）超聲激勵微泡空化可暫時性將腫瘤灌注不足區(qū)域轉變?yōu)檠┫鄬ωS富的區(qū)域，有助于改善腫瘤乏氧、乏血供狀態(tài)［9-11］。然而，空化存在閾值，空化作用過強時有可能使腫瘤微血管內皮細胞破裂，產生不可逆的機械性損傷，從而使得腫瘤灌注減少。已有研究發(fā)現(xiàn)，超聲輻照治療時間是影響空化作用強度的重要因素之一，并提出了空化劑量的概念，將超聲強度和治療持續(xù)時間合并在一起作為空化的一個單獨參數(shù)來進行衡量［12-13］。而課題組前期研究僅關注了不同機械指數(shù)、脈沖重復頻率和占空比等對血流灌注的影響，未對輻照時間進行分層，且治療參數(shù)與輻照時間組合對血流灌注影響尚待研究。因此，本實驗擬通過建立786-O人腎透明細胞癌裸鼠腫瘤模型，在機械指數(shù)和脈沖重復頻率等參數(shù)固定的情況下，著重研究不同空化治療時間對腫瘤灌注的影響，旨在確定更有效的、能夠產生穩(wěn)定腫瘤血流增強效應的空化劑量。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及材料

1.1.1 實驗動物

選用6～8周齡18～22g雄性BALB/c裸鼠30只。實驗動物購自中國醫(yī)學科學院（中國北京），所有裸鼠都在無特定病原體的條件下飼養(yǎng)和維持。本研究中的動物模型方案經河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院倫理委員會批準。實驗動物福利倫理審查委員會批準文號為 2022-AE264。

1.1.2 實驗材料

超聲造影和空化治療用4mL無菌生理鹽水復溶全氟丁烷微泡（Sonazoid，GE Healthcare， Oslo， Norway）。充分振蕩搖勻后，微泡平均直徑為2.1μm，濃度為 6×108 /mL?？笴D31（1∶200，GB113151，Servicebio），Cy3標記的山羊抗兔IgG（1∶300，GB21303，Servicebio）。

1.1.3 儀器

應用飛依諾 VINNO 70 型彩色多普勒超聲診斷儀（蘇州飛依諾科技有限公司）， X4-12L高頻線陣探頭（頻率 4～12MHz）。采用Vflash空化調控功能，可通過調節(jié)中心頻率、機械指數(shù)、脈沖長度、脈沖重復頻率和脈沖/間隔時間等參數(shù)產生不同的空化效應。該儀器配備自適應可變焦域技術，通過電子相控陣聚焦，在超聲發(fā)射平面形成 1～5 cm 的感興趣區(qū)（Region of interest，ROI），使治療超聲在 ROI內形成弱聚焦。飛利浦EPIQ7超聲儀器（EPIQ7，Philips Medical Systems，USA），配備eL18-4線陣探頭（頻率 4～18MHz）及微血流成像技術（MFI）軟件，采用MFI模式進行腫瘤內微血流顯像。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、造模

6～8周齡18～22g雄性BALB/c裸鼠30只，基于空化治療時間將裸鼠隨機分為A、B、C 3組，每組10只。其中，A、B、C 3組的治療時間分別為20、10、5min。

建立786-O人腎透明細胞癌裸鼠腫瘤模型：786-O 人腎透明細胞癌細胞（購于上海中科院細胞庫）在含有10% 胎牛血清和 1% 青霉素/鏈霉素（10 000 U·mL-1）的 RPMI 1640 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度 37℃，5% CO2。調整786-O細胞懸液濃度為1×107細胞·mL-1，然后將0.15mL細胞懸液緩慢注入裸鼠腋下。拔針時左手拇、食指捏住進針部位片刻，防止細胞液漏出。建立模型約9 d時間，腫瘤體積為 150～200 mm3時進行治療。

1.2.2 超聲治療

用1.2% 三溴乙醇0.02 mL·g-1腹腔注射麻醉裸鼠，使之仰臥固定于操作臺上，建立尾靜脈通道。將全氟丁烷微球（Sonazoid，GE公司）用4mL無菌生理鹽水復溶配制成微球溶液，振勻后微球的平均粒徑為2.1μm，濃度為6×108/mL。首先應用二維超聲測量腫瘤大小，將探頭固定于最大切面，進行微血流顯像。接著對腫瘤進行空化治療前造影，經尾靜脈團注0.02mL配制好的微球溶液，隨即跟注0.2mL無菌生理鹽水沖管，以確保管內殘留微球溶液進入血管，并存儲 60s 動態(tài)造影圖像。待造影劑基本廓清后，切換至 Vflash 空化治療模式，Vflash空化治療過程：超聲換能器置于距腫瘤表面1cm處，同時抽吸0.02mL配置好的Sonazoid溶液用無菌生理鹽水稀釋至0.5mL作為空化核，在不同輻照時間內經尾靜脈緩慢勻速注入0.3mL。并在空化治療結束后即刻、4h、6 h分別再次進行超聲造影及微血流顯像，并存儲60s動態(tài)造影圖像。前期研究發(fā)現(xiàn)機械指數(shù)低于0.3的低強度診斷超聲聯(lián)合微泡治療可暫時性增加腫瘤局部血流灌注，可能改善腫瘤乏血供狀態(tài)，緩解微環(huán)境缺氧，并在此基礎上不斷探索優(yōu)化聲學參數(shù)以達到更強更穩(wěn)定的血流增強效應［14-16］。本研究中我們固定的治療參數(shù)有：中心頻率4MHz，每個脈沖長度18個周期，機械指數(shù)0.27 （峰值負壓約0.54MPa），脈沖重復頻率1.0kHz，脈沖/間歇時間1.0s/1.0s，需要調控的參數(shù)為空化治療時間。

1.2.3 超聲造影定量分析

定量分析采用VINNO 70自帶的超聲造影分析軟件，分別于治療前及治療后即刻、4h、6h相同腫瘤切面造影圖像上，沿腫瘤邊界勾畫整個腫瘤為感興趣區(qū)，生成時間-強度曲線并獲得峰值強度（peak intensity，PI）及曲線下面積（areaunder curve，AUC）。

1.2.4 治療前后腫瘤內微血流顯像視覺評分

采用飛利浦EPIQ7超聲儀器（EPIQ7，Philips Medical Systems，USA）配備eL18-4線陣探頭（4～18MHz）及微血流成像技術（MFI）軟件。分別于治療前及治療后即刻、4h、6 h相同腫瘤切面造影圖像上對腫瘤進行微血流成像（MicroFlow Imaging，MFI），并由兩名超聲科醫(yī)師對超聲造影圖像進行視覺評分，不一致時以工作經驗較長者的評分為最終評分。具體評分標準：0 分，與每個樣本治療前微血流顯像圖相比，治療后隨時間推移腫瘤區(qū)域內微血流充填面積、亮度減少；1分，腫瘤區(qū)域內微血流充填面積、亮度無明顯變化。2分，腫瘤區(qū)域內微血流充填面積、亮度明顯增加。

1.2.5 組織病理檢查

治療結束后，每組隨機選取6只荷瘤裸鼠，過量麻醉處死后完整剝離皮下腫瘤組織。經磷酸鹽緩沖液沖洗后用4%多聚甲醛固定，脫水，石蠟包埋，切片，進行HE染色和CD31（Servicebio，貨號GB113151）免疫熒光染色。在光學顯微鏡（Olympus，Japan）下觀察腫瘤組織微結構，在共聚焦激光掃描顯微鏡（Nikon Eclipse C1，Japan）觀察CD31標記的腫瘤微血管，并計數(shù)微血管密度（MicroVessel-Density，MVD）。

1.2.6 統(tǒng)計學方法

采用R統(tǒng)計軟件與GraphPad Prism 8.0軟件分析數(shù)據(jù)，以均數(shù)±標準差（χ±S）表示滿足正態(tài)分布的計量資料。采用多因素重復測量方差分析，判斷不同治療時間組在不同時間點對腫瘤的血流灌注的影響；若存在交互作用，采用 Bonferroni 法進行兩兩比較；各組腫瘤微血流顯像視覺評分比較采用Kruskal-Wallis H檢驗，組間兩兩比較采用Bonferroni 法校正P值。以P ＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 超聲造影參數(shù)統(tǒng)計分析

雙因素可重復方差分析結果顯示，在分組和時間的交互作用下，腫瘤血流灌注PI、AUC值的差異有統(tǒng)計學意義（PI：F=36.62，Plt;0.001；AUC：F=39.18，Plt;0.001）。

A組結果顯示，與治療前相比，治療后即刻腫瘤內血流灌注增加（圖1），PI、AUC 的值分別增長7.4%（Plt;0.05）、10.6%（Plt;0.05，表1，表2，圖2）；治療后4h、6h腫瘤血流灌注比治療后即刻顯著降低（均 Plt;0.05，圖1，圖2，表1，表2），但與治療前相比無統(tǒng)計學差異（均Pgt;0.05）；治療后4h的 PI 、AUC 值與治療后6h對應值相比，差異均無統(tǒng)計學意義（均Pgt;0.05，圖1，圖2，表1，表2）。

A～C：A組治療后即刻造影較治療前血流灌注增強，治療后4 h、6 h血流增強不明顯。B組治療后即刻、治療后4 h較治療前血流灌注持續(xù)增強，治療后6 h比治療后即刻灌注有所降低，但仍較治療前增強。

C組治療后即刻、4 h、6 h血流灌注均較治療前減低。

與同組治療前比較，aPlt;0.05，bPlt;0.01；與同組治療后即刻比較，cPlt;0.05，dPlt;0.01；與同組治療后4 h相比，ePlt;0.01。

B組結果顯示，與治療前相比，治療后即刻、治療后4h與治療后6h的PI數(shù)值分別增長了8.1%、15.1%和3.1%（表1，表2），且相應的AUC數(shù)值增長率為18.7%、31.2%和9.3%（表1，表2）。方差分析結果顯示各組PI、AUC值存在顯著差異（均Plt;0.01），且組間兩兩比較 PI、AUC 差異均有統(tǒng)計學意義（均Plt;0.01）。在血流灌注變化上呈現(xiàn)出灌注持續(xù)增強至4h，但未持續(xù)增強至6h（圖1，圖2）；進一步比較B組與A組在不同時間的PI、AUC值發(fā)現(xiàn)，B組在治療后即刻、4h、6 h時的PI、AUC值均比A組增大，且差異有統(tǒng)計學意義（表1，表2）。

C組結果顯示，治療后即刻、治療后4h、6 h腫瘤內血流灌注與治療前比較均降低（圖1）。腫瘤內血流灌注PI、AUC 值均顯著減小，與治療前相比的差異有統(tǒng)計學意義（均Plt;0.05，表1，表2）。而治療后各時點兩兩比較，腫瘤血流灌注PI、AUC 值差異無統(tǒng)計學意義（P gt;0.05，圖1，圖2，表1，表2）。

2.2 各組微血流顯像及視覺評分統(tǒng)計分析

采用MFI技術更直觀地展示治療前及治療后隨時間推移腫瘤內微血流狀態(tài)（圖3），并進行視覺評分（表3）。進一步，對評分結果開展組內各時點與組間同時點的差異比較。A組MFI顯示，治療后即刻腫瘤內微血流增多，而治療后4h、6 h微血流又較治療后即刻減少（圖3）。Kruskal-Wallis H檢驗結果顯示，A組在治療后即刻、治療后4h和6 h的微血流視覺評分差異有統(tǒng)計學意義（表4，P=0.005）；B組MFI顯示與治療前相比，治療后即刻腫瘤內微"" 血流顯著增多，并在治療后4h更加豐富。治療后6h微血流顯像較4h減少，但仍比治療前增多。檢驗結果表明，各時點微血流評分差異有統(tǒng)計學意義（P=0.046，表4）；C組MFI顯示與治療前相比，治療后即刻微血流明顯減少，并且在治療后4h、6 h時微血流仍未見明顯恢復。同時，C組在治療后即刻、治療后4h和6 h微血流視覺評分差異沒有統(tǒng)計學意義（P=0.793，表4）。以上各組間在同時點的評分差異有統(tǒng)計學意義（均Plt;0.001，表4）。

A組治療后即刻較治療前MFI顯像微血流增多，4 h后血流增強不明顯；

B組治療后即刻、治療后4 h較治療前

MFI顯像微血流持續(xù)增多，6 h后比治療后即刻有所減少，但仍較治療前增多；C組治療后即刻、4 h、6 h MFI顯像微血流較治療前減少。

2.3 腫瘤組織病理表現(xiàn)

光鏡下觀察腫瘤組織主要由腎透明細胞癌細胞和結締組織構成，內可見血管穿行。其中，A組腫瘤微血管未見明顯擴張，而B組腫瘤微血管明顯擴張（如圖4箭頭所示）。C組腫瘤部分微血管管腔變窄，且部分微血管破壞伴出血（如圖4 箭頭所示）。用CD31標記腫瘤微血管，計數(shù)MVD結果顯示，A、B組的MVD值無顯著差異（P＞0.05），而C組MVD值較前兩組顯著減少（均P＜0.01，圖5）。

3 討論

ccRCC是一種免疫原性與促血管生成類型的癌癥。由于腫瘤細胞的增殖速度快于血管生成，因此血液循環(huán)供氧不足，導致了腫瘤微環(huán)境缺氧。而結構和功能異常的未成熟血管又進一步限制了腫瘤灌注/氧合，同時也降低了藥物向腫瘤的輸送效率。組織乏氧使得ccRCC對放療和化療不敏感，除手術外，目前主要采用抗血管生成治療作為其一線療法［4］。通過改善腫瘤缺氧微環(huán)境來促進靶向血管治療及免疫治療是目前的主要研究方向［17］?；诖耍瑸楦纳芻cRCC腫瘤灌注/氧合、提高抗血管生成治療反應率而發(fā)展的新技術也成為該領域的研究重點。研究顯示，應用低強度診斷超聲通過調控機械指數(shù)、脈沖重復頻率、占空比等參數(shù)激勵微泡可產生穩(wěn)態(tài)空化，暫時性增加腫瘤局部血流灌注，改善腫瘤乏血供狀態(tài)。但若空化作用過強，也有可能導致腫瘤微血管內皮細胞破裂而產生不可逆的機械性損傷，使得腫瘤灌注減少［12-13］?，F(xiàn)有研究未對空化治療時間進行分層，治療參數(shù)與治療時間組合對血流灌注影響有待深入討論。本研究建立786-O人腎透明細胞癌裸鼠腫瘤模型，對空化治療時間進行分層，并應用CEUS及MFI對治療前后腫瘤微血流進行多模態(tài)顯像，追蹤了不同時間點各組腫瘤經空化治療后產生的血流效應及其持續(xù)時間。

實驗結果顯示，空化治療后各組腫瘤產生了不同的血流效應，A、B組均可產生血流增強效應，但只有B組血流增強效應可持續(xù)長達6h以上。與B組相比，A組血流灌注增強效應較輕微且持續(xù)時間短，而C組空化治療后血流灌注顯著減少，并且持續(xù)6h未恢復。即與治療前相比，治療后即刻A、B組腫瘤血流灌注均顯著增加，而C組腫瘤血流灌注顯著減少。這表明在本實驗選取的聲學參數(shù)下經過20 min、10 min的空化治療均可引起腫瘤血流增強效應。而C組治療后可能造成了血管損傷，導致血流灌注減少。在治療后4h，僅B組腫瘤血流灌注持續(xù)增強，A組腫瘤的血流灌注較治療后即刻減少，這表明空化治療時間增加，發(fā)射治療脈沖過程中微泡灌注數(shù)量可能相對不足，導致空化效應減弱，此時作用于血管壁的機械作用及剪切力產生的生物學效應只誘發(fā)了微血管暫時性輕微擴張，不能有效改善腫瘤血流灌注。

由于造影過程中可能存在人為因素及造影劑殘留等造成的誤差，本實驗對腫瘤微血流進行了多模態(tài)顯像，更加準確地評價空化治療效果。MFI視覺評分結果顯示，B組MFI視覺評分在各時點均高于其他組，說明B組腫瘤血流灌注得到持續(xù)顯著改善，這與超聲造影定量分析結果一致。

腫瘤內部新生血管血管壁結構脆弱，容易受到超聲空化作用的影響。在超聲介導下微泡膨脹、縮小甚至破裂進而產生一系列生物學效應。造成血管內皮損傷并誘導無菌炎性反應，增加剪切依賴性ATP產生，激活內皮一氧化氮合酶并增加內皮源性一氧化氮、前列腺素的產生和釋放，發(fā)揮擴張血管、增加血流灌注的作用［18］?；谏鲜鰴C制，我們推測本實驗中B組的治療參數(shù)與空化時間的組合可以對血管內皮細胞產生足夠的生物學效應，引發(fā)血管持續(xù)擴張，血流灌注可持續(xù)增加6h以上，病理結果也驗證了這一結論，具體表現(xiàn)為腫瘤微血管明顯擴張。A組腫瘤由于治療時間過長，微泡空化對血管壁的機械作用及剪切力改變“累積效應”不足，未能產生足夠引起生物學效應的擴血管因子，因此只誘導了短暫輕微的血流增強效應。有研究表明［19］，空化核密度增加導致空化閾值降低，低能量超聲作用也可引起強烈的慣性空化效應。慣性空化時微泡內徑非線性增加，增大到一定程度后迅速破裂，形成微流、噴射流及超聲沖擊波，對血管內皮產生牽拉和擴張等機械應力和剪切應力，導致細胞崩裂溶解。本實驗中C組腫瘤空化治療時間最短，發(fā)射治療脈沖過程中血管腔內被高濃度微泡灌注，空化閾值可能降低，故推測部分微泡可能發(fā)生了慣性空化，加大了微血管壁損傷甚至損毀出血，因此產生了部分血流阻斷效應。組織學也顯示部分血管腔變窄或伴有出血。本研究的空化治療參數(shù)目前僅在786-O人腎透明細胞癌裸鼠腫瘤模型中進行了觀察研究，對于其它實驗動物不同類型腫瘤的治療空化治療參數(shù)可能會存在一定的差異。

本研究存在一些局限性：1、僅對空化治療時間行了分層研究，未進一步研究其他聲學參數(shù)與時間組合對血流效應的影響；2、本研究主要證實了優(yōu)化了的空化治療參數(shù)可誘導持續(xù)增強的血流效應，未進一步研究腫瘤缺氧微環(huán)境的改善情況；3、后續(xù)應進一步驗證低強度診斷超聲聯(lián)合微泡治療提高ccRCC抗血管生成治療效果的可行性。

綜上所述，本研究證實空化治療時間影響血流效應，為進一步優(yōu)化腫瘤灌注提供了相關參數(shù)依據(jù)。本實驗聲學參數(shù)下，治療10 min產生的血流增強效應最強，并持續(xù)6h以上，這可能有助于改善腫瘤微環(huán)境缺氧，有望提高ccRCC患者抗血管生成療效。相比目前改善腫瘤血流灌注的方式，如血管正?；幬镏委?、熱療等， 超聲激勵微泡空化治療具有簡單便捷、安全性好、可實時監(jiān)測治療過程的優(yōu)點，具有巨大的臨床轉化潛力。

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