間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽在大菱鲆模擬?；钸\(yùn)輸中的作用效果

曹 杰，謝 晶,2,3,*

（1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306；2.食品科學(xué)與工程國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心(上海海洋大學(xué))，上海 201306；3.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心（上海海洋大學(xué)），上海 201306）

我國漁業(yè)資源豐富，種類多樣。2019年我國水產(chǎn)品總產(chǎn)量為6 480萬 t[1]。為保障水產(chǎn)品的流通和滿足人們對于鮮活水產(chǎn)品的需求，?；钸\(yùn)輸技術(shù)起到了重要作用。目前國內(nèi)外開發(fā)出的?；罘椒òㄔ鲅醣；?、低溫?；?、麻醉?；?、冰溫?zé)o水保活等[2]。麻醉?；钔ㄟ^抑制魚類神經(jīng)系統(tǒng)的敏感性，減少魚體對運(yùn)輸環(huán)境的應(yīng)激反應(yīng)，降低魚體代謝速率和呼吸頻率，從而減少魚體的運(yùn)輸損傷、提高運(yùn)輸存活率[3]。許多國家（如美國、巴西、日本等）已廣泛使用麻醉劑進(jìn)行活魚運(yùn)輸，并對麻醉劑種類和劑量有著嚴(yán)格要求。而我國漁用麻醉劑仍處于研究階段，國內(nèi)目前尚未建立水產(chǎn)品運(yùn)輸中使用漁用麻醉劑的限量標(biāo)準(zhǔn)或法律法規(guī)[4]。近年來，漁用麻醉劑種類劇增，應(yīng)用于魚類運(yùn)輸?shù)木陀?0多種，其中使用較多的有間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（3-aminobenzoic acid ethyl ester methanesulfonate，MS-222）、丁香油和二氧化碳等。MS-222有較好的麻醉效果，且沒有富集作用，在肌肉中的殘留量少、安全高效，缺點(diǎn)是價格貴、使用成本高[5]。丁香油價格低廉，在水產(chǎn)品中消除速度快，缺點(diǎn)是有揮發(fā)性，在長距離運(yùn)輸過程中麻醉效果逐漸減弱[6]。二氧化碳與其他麻醉劑相比優(yōu)點(diǎn)在于不需要休藥期[7]，但是其麻醉劑量難以控制，麻醉效果不穩(wěn)定且只對部分魚起作用，在?；钸\(yùn)輸中的應(yīng)用受到限制。目前國內(nèi)已有研究使用MS-222進(jìn)行黃顙魚[8]、鳊魚[9]、草魚[10]等的麻醉運(yùn)輸，但使用MS-222進(jìn)行大菱鲆等海水魚的麻醉運(yùn)輸研究卻少有報道。

大菱鲆（Scophthalmus maximus）隸屬鰈形目、鲆科、菱鲆屬，原產(chǎn)于歐洲，1992年引進(jìn)山東沿海地區(qū)，經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展，已成為我國北方沿海地區(qū)主要的海水魚養(yǎng)殖品種，年產(chǎn)量達(dá)8.5萬 t，銷售價值超過40億 元人民幣[11]。在實(shí)際生活中，將大菱鲆銷至內(nèi)陸，常常需要長距離或長時間運(yùn)輸。劉偉東[12]對大菱鲆在靜水且不考慮運(yùn)輸振動的情況下的低溫有水?；钸M(jìn)行了初步研究，研究表明，在3 ℃、魚水質(zhì)量比（簡稱魚水比）1∶5的條件下，大菱鲆可以存活72 h，在該條件下，大菱鲆呼吸頻率降低、活動量減少，保持靜止，從而保證大菱鲆較長的存活時間；但在運(yùn)輸條件下，魚體受振動、溫度、氨氮脅迫影響產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，會使存活率大大降低，然而，目前有關(guān)提高大菱鲆?；钸\(yùn)輸存活率的研究還較少。國際上已普遍使用麻醉劑來進(jìn)行大規(guī)模的活魚運(yùn)輸，漁用麻醉劑在國內(nèi)水產(chǎn)品流通中的應(yīng)用也是越來越多。本實(shí)驗(yàn)研究MS-222在靜水及模擬運(yùn)輸條件下對大菱鲆的麻醉效果，通過檢測運(yùn)輸水中氨氮和溶解氧水平變化，測定大菱鲆生理生化指標(biāo)，篩選出大菱鲆麻醉保活運(yùn)輸?shù)淖顑?yōu)條件，以期為大菱鲆及其他海水魚麻醉?；钸\(yùn)輸?shù)膽?yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大菱鲆購于上海市浦東新區(qū)蘆潮港海鮮市場，體長30～35 cm，平均體質(zhì)量500～600 g。

谷草轉(zhuǎn)氨酶、葡萄糖、尿素、乳酸脫氫酶、肌酐、乳酸、糖原試劑盒 南京建成生物工程研究所；魚類Cortisol酶聯(lián)免疫分析試劑盒 上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司；MS-222 上海麥克林生化科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LX-100VTR模擬運(yùn)輸振動臺 上海魯軒儀器設(shè)備廠；Multiskan FC型酶標(biāo)儀 賽默飛世爾（上海）儀器有限公司；N4S型紫外-可見分光光度計、JPSJ-605F溶解氧測定儀 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；LP-20水族箱三合一曝氣機(jī) 深圳市興日生實(shí)業(yè)有限公司；F2640型多點(diǎn)溫度采集儀 美國Fluke公司；GL-200氨氮檢測儀 山東格林凱瑞精密儀器有限公司；5810R高速冷凍離心機(jī) 上海艾測電子科技有限公司；CK-201海鮮魚缸制冷機(jī) 廣州誠科電子科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 大菱鲆的麻醉處理

用CK-201海鮮魚缸制冷機(jī)使水溫維持在13 ℃，分別取10 條暫養(yǎng)24 h的大菱鲆從暫養(yǎng)池中放入盛有不同質(zhì)量濃度MS-222（20、40、60、80、100、120 mg/L）海水的水槽中，觀察大菱鲆行動變化，記錄其進(jìn)入不同麻醉階段的時間、復(fù)蘇時間、呼吸頻率（測定呼吸頻率時以不添加MS-222海水中的大菱鲆為對照）。按下式計算存活率；呼吸頻率以1 min內(nèi)大菱鲆鰓蓋張合次數(shù)來計算。

在MS-222的作用下，大菱鲆在麻醉和復(fù)蘇階段表現(xiàn)出一系列不同的行為變化，參考Cooke[13]和劉長琳[14]等的分期標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合大菱鲆麻醉和復(fù)蘇階段的行為特征，將其麻醉過程分為6個時期（表1），復(fù)蘇過程分為4個時期（表2）。

表1 麻醉程度分期及魚類行為特征Table 1 Behavior characteristics of fish at various anesthetic stages

表2 魚體復(fù)蘇過程分期及行為特征Table 2 Behavior characteristics of fish at various recovery stages

1.3.2 大菱鲆臨界溫度的測定

采用梯度降溫的方式，以13 ℃為暫養(yǎng)溫度，當(dāng)水溫為10～20 ℃時，降溫速度為2 ℃/h；水溫低于10 ℃時，降溫速度為1 ℃/h，觀察不同溫度下魚體呼吸規(guī)律，將魚體出現(xiàn)咧鰓現(xiàn)象（未死亡狀態(tài)）的水溫作為其臨界溫度。

1.3.3 模擬運(yùn)輸處理的條件

設(shè)定運(yùn)輸振動臺的轉(zhuǎn)速100 r/min，模擬車速25～40 km/h，運(yùn)輸0、6、12、18、24 h。運(yùn)輸后觀察大菱鲆的存活率，測定生理生化指標(biāo)。對照組為相同條件下不加麻醉劑運(yùn)輸?shù)聂~。

1.3.3.1 MS-222質(zhì)量濃度的影響

選取40 條呼吸頻率一致的大菱鲆，在13 ℃、魚水比1∶3條件下，置于MS-222質(zhì)量濃度20、40、60、80 mg/L海水中進(jìn)行模擬運(yùn)輸，記錄第6、12、18、24小時的存活率。

1.3.3.2 水溫的影響

選取40 條呼吸頻率一致的大菱鲆，在魚水比1∶3，溫度2、8、13、20 ℃條件下進(jìn)行模擬運(yùn)輸（使用不添加MS-222的海水），記錄第6、12、18、24小時的存活率。

1.3.3.3 魚水比的影響

在13 ℃和MS-222質(zhì)量濃度40 mg/L的條件下，分別選擇魚水比為2∶1、1∶1、1∶3、1∶5進(jìn)行模擬運(yùn)輸，記錄大菱鲆存活率保持100%的時間，即大菱鲆的?；顣r間。

1.3.4 模擬運(yùn)輸過程中各指標(biāo)的測定

根據(jù)1.3.3節(jié)結(jié)果最適溫度、MS-222質(zhì)量濃度和魚水比的條件下進(jìn)行后續(xù)模擬運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)。

1.3.4.1 水體指標(biāo)的測定

在模擬運(yùn)輸?shù)牡?、12、18、24小時，從運(yùn)輸箱中取50 mL水，使用JPSJ-605F溶解氧測定儀測定水中溶解氧的質(zhì)量濃度；使用GL-200氨氮檢測儀測定水體氨氮質(zhì)量濃度。

1.3.4.2 魚體生理生化指標(biāo)的測定

在模擬運(yùn)輸過程中的第6、12、18、24小時對麻醉組和對照組的魚隨機(jī)取3 條魚，測定理化指標(biāo)。

大菱鲆肌肉中乳酸、糖原含量的測定：取魚背部和腹部的肌肉攪碎勻漿，參考試劑盒說明書測定大菱鲆肌肉中乳酸、糖原含量。

魚肉pH值的測定：準(zhǔn)確稱量2 g魚肉于燒杯中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.85%生理鹽水18 mL，均質(zhì)后5 000 r/min離心2 min，取上清液并用pH計測定魚肉pH值。

血清生化指標(biāo)的測定：從尾靜脈取血，全血不加抗凝劑，于4 ℃靜置2 h，血液明顯分層后以3 000 r/min離心20 min，分別收集每尾魚的血清于2 mL的離心管中[15]。魚血清皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度采用魚類Cortisol酶聯(lián)免疫分析試劑盒測定；血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、葡萄糖、尿素、乳酸脫氫酶和肌酐水平分別參考試劑盒說明書進(jìn)行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用Excel 2007軟件和SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。采用Duncan多重比較進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05表示差異顯著。采用Excel 2007軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同質(zhì)量濃度MS-222對大菱鲆的麻醉效果

由表3、4可知，大菱鲆進(jìn)入同一麻醉階段的時間隨MS-222質(zhì)量濃度的提高而縮短，大菱鲆的復(fù)蘇時間則隨麻醉劑質(zhì)量濃度的增加而延長。大菱鲆在20、40 mg/L的MS-222麻醉液中最終處于深度鎮(zhèn)靜期。當(dāng)MS-222質(zhì)量濃度為60 mg/L和80 mg/L時，大菱鲆分別能達(dá)到麻醉第IV期和V期，時間分別約為671 s和618 s，不能進(jìn)入第VI期；當(dāng)MS-222質(zhì)量濃度為100 mg/L和120 mg/L時，魚體復(fù)蘇至第IV期的時間較長，這可能是由于魚已進(jìn)入深度麻醉期，需要較長時間恢復(fù)，且復(fù)蘇后魚體狀態(tài)差，復(fù)蘇24 h后存活率分別為70%和40%。

表3 不同質(zhì)量濃度MS-222對大菱鲆的麻醉效果Table 3 Anesthetic effect of MS-222 at different concentrations in turbot

表4 大菱鲆經(jīng)不同質(zhì)量濃度MS-222麻醉后的復(fù)蘇情況Table 4 Resuscitation status of turbot anesthetized with MS-222 at different concentrations

2.2 不同質(zhì)量濃度MS-222對大菱鲆呼吸頻率的影響

圖1反映出大菱鲆在不同質(zhì)量濃度的MS-222麻醉液中呼吸頻率的變化。除了在前1 min內(nèi)呼吸頻率略微上升外，隨著MS-222質(zhì)量濃度的增加，呼吸頻率呈下降趨勢，這與郭豐紅等[16]所得研究結(jié)果相近。在質(zhì)量濃度為40～60 mg/L的麻醉液中，大菱鲆未出現(xiàn)咧鰓現(xiàn)象，隨著時間的延長其呼吸頻率不斷下降；麻醉液質(zhì)量提高至100、120 mg/L時，在7 min內(nèi)大菱鲆呼吸頻率分別從57、56 次/min快速降至23、17 次/min。

圖1 在MS-222麻醉液中大菱鲆呼吸頻率的變化Fig. 1 Changes in respiratory rate of turbot exposed to MS-222 solutions

2.3 大菱鲆保活的臨界溫度

當(dāng)水溫在15～20 ℃時，大菱鲆游動正常，呼吸頻率穩(wěn)定。水溫降低，其呼吸頻率逐漸下降，當(dāng)水溫降到8 ℃時，大菱鲆基本停止游動，水溫降至2 ℃時出現(xiàn)鰓蓋張開現(xiàn)象，呼吸無規(guī)律，接近死亡，可以認(rèn)為大菱鲆保活的臨界溫度為2 ℃。

2.4 不同質(zhì)量濃度MS-222對大菱鲆模擬運(yùn)輸存活率的影響

麻醉劑質(zhì)量濃度對大菱鲆運(yùn)輸存活率的影響如圖2所示。隨著運(yùn)輸時間延長，大菱鲆存活率逐漸降低，運(yùn)輸超過12 h后，20 mg/L MS-222處理組的大菱鲆出現(xiàn)死亡，模擬運(yùn)輸24 h后大菱鲆存活率降至60%，40 mg/L質(zhì)量濃度下大菱鲆運(yùn)輸24 h后存活率仍為100%；60 mg/L質(zhì)量濃度下大菱鲆存活率18 h前無變化，運(yùn)輸24 h后存活率降至80%，80 mg/L MS-222中大菱鲆于6 h時就出現(xiàn)死亡，24 h后存活率降至40%。因此選擇40 mg/L MS-222進(jìn)行?；钸\(yùn)輸更可行。

圖2 MS-222質(zhì)量濃度對大菱鲆運(yùn)輸存活率的影響Fig. 2 Effect of MS-222 concentration on the survival rate of turbot during live transportation

2.5 不同溫度對大菱鲆?；钸\(yùn)輸存活率的影響

圖3反映出溫度對大菱鲆模擬運(yùn)輸過程中存活率的影響，20 ℃時大菱鲆運(yùn)輸12 h后存活率即降至70%，24 h后均全部死亡；13 ℃時大菱鲆運(yùn)輸12 h后的存活率為100%，24 h的存活率降至80%，在8 ℃時大菱鲆保活運(yùn)輸24 h后存活率仍為100%，2 ℃下大菱鲆運(yùn)輸6 h后存活率就降至80%，18 h后全部死亡。

圖3 不同溫度對大菱鲆運(yùn)輸存活率的影響Fig. 3 Effect of different water temperatures on the survival rate of turbot during transportation

2.6 不同魚水比對大菱鲆保活時間的影響

在模擬運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)中，大菱鲆的存活時間隨魚水比的減小而延長。在8 ℃和MS-222質(zhì)量濃度40 mg/L條件下探究不同魚水比對大菱鲆?；顣r間的影響。如圖4所示，魚水比從2∶1降至1∶1時，?；顣r間延長了9.5 h，自1∶3降至1∶5后，保活時間可延長至32 h。考慮到經(jīng)濟(jì)成本和實(shí)際運(yùn)輸時間，選擇魚水比1∶3進(jìn)行?；钸\(yùn)輸更可行。

圖4 不同魚水比對大菱鲆?；顣r間的影響Fig. 4 Effect of different fish to water ratios on the survival rate of turbot during transportation

綜上，水溫為8 ℃、MS-222質(zhì)量濃度為40 mg/L、魚水比為1∶3時，大菱鲆?；钸\(yùn)輸時間長、成本低，選擇此條件進(jìn)行后續(xù)模擬運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)。

2.7 大菱鲆模擬運(yùn)輸過程中氨氮、溶解氧質(zhì)量濃度的變化

2.7.1 氨氮質(zhì)量濃度的變化

如圖5所示，模擬運(yùn)輸開始前，?；钸\(yùn)輸箱的水經(jīng)充分曝氣24 h后，氨氮質(zhì)量濃度幾乎為0，運(yùn)輸開始后，水中氨氮質(zhì)量濃度先快速上升，而后緩慢增長，其中對照組中運(yùn)輸24 h后水中氨氮質(zhì)量濃度升至4.17 mg/L，麻醉組運(yùn)輸24 h后水中氨氮質(zhì)量濃度升至2.82 mg/L。

圖5 大菱鲆模擬運(yùn)輸過程中水中氨氮質(zhì)量濃度的變化Fig. 5 Changes in ammonia nitrogen concentration in water during simulated transportation of turbot

2.7.2 溶解氧質(zhì)量濃度的變化

如圖6所示，模擬運(yùn)輸開始前，水中溶解氧質(zhì)量濃度均為6.80 mg/L，運(yùn)輸開始后，水中溶解氧水平呈下降趨勢，12 h后麻醉組水體中溶解氧水平降至4.02 mg/L，對照組水體中溶解氧水平降至2.12 mg/L，繼續(xù)運(yùn)輸，對照組中大菱鲆出現(xiàn)死亡，而麻醉組大菱鲆存活率仍為100%。運(yùn)輸24 h后麻醉組水體中溶解氧水平降至2.65 mg/L，對照組水體中溶解氧水平降至1.18 mg/L。

圖6 大菱鲆模擬運(yùn)輸過程中水中溶解氧的變化Fig. 6 Changes in dissolved oxygen in water during simulated transportation of turbot

2.8 大菱鲆模擬運(yùn)輸過程中乳酸含量、糖原含量和pH值的變化

如圖7所示，在模擬運(yùn)輸過程中，魚體肌肉中糖原和乳酸含量變化呈負(fù)相關(guān)趨勢。隨運(yùn)輸時間的延長，魚體肌肉中糖原含量下降，運(yùn)輸24 h后麻醉組大菱鲆肌肉中糖原含量降低了17.9%；隨著運(yùn)輸時間的增長，魚體肌肉中乳酸含量上升，運(yùn)輸24 h后麻醉組大菱鲆肌肉中乳酸含量上升了120.1%。隨著運(yùn)輸時間的延長，麻醉組和對照組的大菱鲆肌肉pH值呈下降趨勢，運(yùn)輸24 h后，麻醉組大菱鲆肌肉pH值降低0.36，且總體下降趨勢與對照組相比更緩和。

圖7 大菱鲆模擬運(yùn)輸過程中肌肉乳酸含量（A）、糖原含量（B）、pH值（C）的變化Fig. 7 Changes in muscle lactate content (A), glycogen content (B), and pH (C) during simulated transport of turbot

2.9 大菱鲆模擬運(yùn)輸過程中血清生化指標(biāo)的變化

如表5所示，模擬運(yùn)輸至6 h時，麻醉組魚體血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶活力變化不顯著，運(yùn)輸至12 h時，麻醉組魚體血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活力中與6 h時相比變化不顯著，隨著運(yùn)輸時間進(jìn)一步延長，谷草轉(zhuǎn)氨酶活力快速上升。大菱鲆被麻醉后，與對照組相比，其血清皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度顯著升高，運(yùn)輸12 h內(nèi)，麻醉組大菱鲆血清皮質(zhì)醇的質(zhì)量濃度變化不顯著，而對照組魚體血清皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度變化顯著。模擬運(yùn)輸12 h后，麻醉組和對照組魚體血清乳酸脫氫酶活力分別上升至831.33、1 142.00 U/L。運(yùn)輸12 h后，麻醉組魚體血清尿素濃度與對照組相差不顯著，隨著運(yùn)輸時間的延長，兩組的血清UR濃度均顯著增加增長顯著。在運(yùn)輸過程中，麻醉組魚體血清葡萄糖濃度上升趨勢明顯小于對照組。

表5 大菱鲆模擬運(yùn)輸后血清生化指標(biāo)的變化Table 5 Changes in serum biochemical indexes of turbot during simulated transportation

3 討 論

3.1 MS-222質(zhì)量濃度、水溫及魚水比對大菱鲆運(yùn)輸存活率的影響

MS-222質(zhì)量濃度大于100 mg/L時，大菱鲆復(fù)蘇存活率降低。這可能是麻醉劑濃度過高，使魚呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)中樞深度麻痹，致使魚體死亡[17]。大菱鲆呼吸頻率隨MS-222麻醉液質(zhì)量濃度的升高而降低，MS-22質(zhì)量濃度越高，下降速率加快。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MS-222質(zhì)量濃度為20～40 mg/L時，大菱鲆產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)較小，當(dāng)MS-222質(zhì)量濃度為100～120mg/L時，大菱鲆在短時間出現(xiàn)鰓蓋外翻、掙扎現(xiàn)象，表明魚體對高質(zhì)量濃度麻醉液產(chǎn)生了強(qiáng)烈的應(yīng)激反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)得出MS-222麻醉大菱鲆的有效麻醉質(zhì)量濃度為40～60 mg/L，這與MS-222麻醉牙鲆[18]（60 mg/L）、大黑口鱸幼魚[19]（70 mg/L）所得研究結(jié)果相近，與加州鱸魚[20]（20 mg/L）所得研究結(jié)果差別較大。這可能是因?yàn)椴煌N類的魚有不同的代謝速率，因此MS-222對不同的魚種的麻醉效果有一定的差異[21]。處于深度鎮(zhèn)靜期的魚對外界刺激的應(yīng)激反應(yīng)小，代謝率低，仍然能夠維持魚體平衡，此狀態(tài)下，最適合保活運(yùn)輸[22]。綜合考慮質(zhì)量濃度為40 mg/L的MS-222麻醉液更適于大菱鲆的麻醉運(yùn)輸。

水溫的變化對魚類的生理反應(yīng)起決定性作用，在水溫較高的條件下，魚體代謝速率、呼吸頻率提升，導(dǎo)致水中溶解氧降低，隨著運(yùn)輸時間延長，魚因缺氧而死亡[23]；而水溫降低可以減緩魚的代謝速率，減少氧氣消耗，從而減少氨的產(chǎn)生和毒性，減少溶解氧的消耗，從而提高運(yùn)輸存活率；當(dāng)水溫低于臨界溫度條件（2 ℃）時，魚體呼吸幾乎停止，無法滿足魚體用氧而致其死亡，表明臨界溫度附近不適于大菱鲆的?；钸\(yùn)輸。

降低魚水比是?；钸\(yùn)輸需要考慮的重點(diǎn)經(jīng)濟(jì)，本研究結(jié)果表明，麻醉處理對大菱鲆運(yùn)輸降低魚水比有積極影響，選擇魚水比1∶3麻醉?xiàng)l件進(jìn)行保活運(yùn)輸，符合保活運(yùn)輸經(jīng)濟(jì)利益最大化。

3.2 模擬運(yùn)輸過程中水體指標(biāo)變化對大菱鲆存活率的影響

氨氮是一種神經(jīng)毒性物質(zhì)，水中氨氮含量過高時，魚體血液中的氨排出量就會減少，導(dǎo)致魚體血液中氨含量升高，引起毒性反應(yīng)[24]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氨氮質(zhì)量濃度影響大菱鲆的?；钸\(yùn)輸時間，麻醉操作能夠降低大菱鲆代謝活動，減少魚體氨的排出，提高大菱鲆的運(yùn)輸存活率。

水中溶解氧水平通過影響魚類的鰓部運(yùn)動和呼吸而造成魚體麻醉效果的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著運(yùn)輸時間延長，水中溶解氧水平持續(xù)減少，魚為滿足代謝需求而提高呼吸頻率，導(dǎo)致水體加速惡化，運(yùn)輸后死亡的魚大多是因?yàn)槿毖鹾退|(zhì)敗壞[22]。麻醉減少了大菱鲆對溶解氧的消耗，延長了保活運(yùn)輸時間。

3.3 MS-222麻醉?；钸\(yùn)輸對大菱鲆肌肉及血清生化指標(biāo)的影響

大菱鲆經(jīng)停食暫養(yǎng)一段時間后再進(jìn)行運(yùn)輸時，魚體處于饑餓狀態(tài)下，血液中的葡萄糖不能夠滿足魚體的消耗，魚體進(jìn)行無氧代謝，分解肌糖原，糖原分解產(chǎn)生乳酸，乳酸在肌肉中積累導(dǎo)致肌肉pH值降低[24-25]。魚體內(nèi)肌肉、血液和肝臟3 種組織中乳酸、糖原和葡萄糖的含量水平有著相應(yīng)的關(guān)系[26]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，模擬運(yùn)輸過程中，麻醉組大菱鲆肌肉中糖原的下降速率和乳酸上升速率均小于對照組，這是因?yàn)轸~被麻醉后，代謝速率降低，肌肉組織中乳酸積累少，故麻醉組大菱鲆魚體糖原與pH值下降幅度低于對照組的下降幅度[27]。

魚體血液中的皮質(zhì)醇水平可以體現(xiàn)魚體的應(yīng)激程度，常被用作魚體應(yīng)激指標(biāo)。當(dāng)魚體受到刺激時，其皮質(zhì)醇水平會顯著升高[28]。與對照組相比，麻醉后大菱鲆血清皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度升高，這可能是魚體被麻醉時產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)。但在運(yùn)輸過程中，與對照組相比，麻醉組魚體的血清皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度變化不明顯，麻醉劑減少了魚體對外界的應(yīng)激反應(yīng)，從而保持皮質(zhì)醇水平穩(wěn)定。

乳酸脫氫酶是糖代謝中催化丙酮酸轉(zhuǎn)化成乳酸的酶，肝臟和肌肉損傷都會導(dǎo)致乳酸脫氫酶活力升高，模擬運(yùn)輸12 h后，麻醉組和對照組魚體血清乳酸脫氫酶活力變化顯著，隨著運(yùn)輸時間的延長，水中溶解氧水平持續(xù)減少，魚體進(jìn)行無氧呼吸導(dǎo)致肝臟、心肌受損，乳酸脫氫酶活力上升，這也是魚體在長距離運(yùn)輸過程中死亡的重要原因。運(yùn)輸過程中的各時間段，麻醉組大菱鲆乳酸脫氫酶活力的增長幅度低于對照組大菱鲆乳酸脫氫酶活力的增長幅度，表明麻醉組在模擬運(yùn)輸過程中肝臟所受損傷要小于對照組。

谷草轉(zhuǎn)氨酶是肝臟連接糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)代謝的重要酶，其活力是反映魚體應(yīng)激程度的重要指標(biāo)。一般狀態(tài)下，血液中谷草轉(zhuǎn)氨酶的活力較低且穩(wěn)定，當(dāng)魚體受到刺激時，谷草轉(zhuǎn)氨酶活力升高，也表示組織受到一定程度的損傷[29]。運(yùn)輸過程的前12 h內(nèi)，麻醉組大菱鲆的谷草轉(zhuǎn)氨酶活力變化不顯著，運(yùn)輸18 h后，其活力顯著升高，這可能是因?yàn)榇罅怫夜┠懿蛔悖枰纸馓?、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)或肝臟受到了一定損傷，這也是運(yùn)輸過程中魚死亡的原因之一。

魚體血液中的葡萄糖濃度會在應(yīng)激反應(yīng)下升高，可作為相應(yīng)的應(yīng)激指標(biāo)[30]。麻醉組的魚體血清葡萄糖濃度增加幅度遠(yuǎn)低于對照組，這可能是麻醉操作降低了魚在運(yùn)輸過程中的代謝活動，減緩了糖原的分解。

血液尿素、肌酐濃度的變化能夠反映出魚體腎臟的代謝情況，是反映魚腎功能的指標(biāo)。腎臟受損時，尿素和肌酐濃度升高[31]。運(yùn)輸過程中，麻醉組和對照組大菱鲆血清尿素和肌酐濃度變化顯著，說明大菱鲆在模擬運(yùn)輸過程中腎功能收到一定程度的損傷，這也是魚體在運(yùn)輸過程中出現(xiàn)死亡的重要原因。但麻醉組大菱鲆血清尿素、肌酐濃度的增幅均低于對照組，表明麻醉能在一定程度上減少在運(yùn)輸過程中魚腎功能的損傷。

綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)水溫為8 ℃、MS-222質(zhì)量濃度為40 mg/L、魚水比為1∶3時，運(yùn)輸時間長，大菱鲆存活率高。隨運(yùn)輸時間的延長，水體中氨氮質(zhì)量濃度上升，溶解氧水平則下降，水質(zhì)逐漸惡化，這是導(dǎo)致大菱鲆?；钸\(yùn)輸時間縮短和存活率降低的外部原因；隨著運(yùn)輸時間的延長，大菱鲆肌肉中糖原含量、pH值下降，乳酸含量上升，血清生化指標(biāo)中乳酸脫氫酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素、肌酐水平均有顯著變化，皮質(zhì)醇水平在前12 h保持穩(wěn)定，說明振動運(yùn)輸影響了大菱鲆的生理機(jī)能。麻醉組相應(yīng)指標(biāo)的變化幅度均小于對照組，說明使用MS-222對大菱鲆進(jìn)行麻醉運(yùn)輸能夠降低其在運(yùn)輸過程中產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，減少在運(yùn)輸過程中魚體所受的損傷，延長?；钸\(yùn)輸時間，提高運(yùn)輸存活率。