金匱溫經(jīng)湯藥材不同炮制方法抗炎作用研究*

張秀萍 孫達(dá)辰 梁?jiǎn)⒊?佟 雷 韓 犇 張文宇

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,金匱溫經(jīng)湯具有一定的抗炎功效,主要通過(guò)減輕機(jī)體的微炎癥反應(yīng)程度,有效治療虛寒證原發(fā)性痛經(jīng)[1],通過(guò)減少炎細(xì)胞浸潤(rùn)、減輕組織水腫而抑制炎性反應(yīng)的發(fā)生[2],顯著降低腹腔液中致炎因子IL-1β,TNF-α,TGF-β1含量[3],降低EMs 模型小鼠異位內(nèi)膜炎癥因子水平,改善炎癥反應(yīng)[4]。但以上研究或者通過(guò)改變方中藥材劑量,或者通過(guò)藥物加減來(lái)達(dá)到相應(yīng)的療效,筆者通過(guò)改變方中藥材炮制方法,與原方進(jìn)行比較,觀察其抗炎作用,以期從中藥炮制角度初步探討溫經(jīng)湯炮制前后抗炎作用,為臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 中藥飲片吳茱萸、當(dāng)歸、阿膠、甘草、炙甘草、蜜炙桂枝、川芎、白芍、生半夏、桂枝、去心麥冬、蒲黃炒阿膠、人參、去心牡丹皮、生姜、購(gòu)自哈爾濱市三棵樹中藥材市場(chǎng);不去心牡丹皮、網(wǎng)購(gòu)于大別山特產(chǎn);酒炙吳茱萸、炒白芍、姜半夏、酒炙當(dāng)歸、酒炙川芎、煨姜、紅參,購(gòu)自御桂圓;不去心麥門冬,網(wǎng)購(gòu)于火神派中藥材。所購(gòu)藥品均符合醫(yī)院規(guī)定。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠共50只,體質(zhì)量(16±20)g,雄性;SD大鼠共50只,體質(zhì)量150～180 g,雌雄各半。均購(gòu)自北京維通利華,生產(chǎn)許可證號(hào)(SCXK-2016-0011)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 金匱溫經(jīng)湯各炮制組制備方法將溫經(jīng)湯原方[吳茱萸,當(dāng)歸,川芎,白芍藥,半夏,麥門冬(去心),人參,牡丹皮(去心),桂枝,阿膠,生姜,甘草]、全方炮制品[吳茱萸(酒炙),當(dāng)歸(酒炙),川芎(酒炙),紅參,桂枝(蜜炙),白芍藥(炒),姜半夏,阿膠(蒲黃炒),牡丹皮(不去心),煨姜,炙甘草,麥冬(不去心)]、君藥炮制品[吳茱萸(酒炙),當(dāng)歸,川芎,人參,桂枝(蜜炙),白芍藥,半夏,阿膠,牡丹皮(去心),生姜,甘草,麥冬]、臣藥炮制品[吳茱萸,當(dāng)歸(酒炙),川芎(酒炙),紅參,桂枝,白芍藥,半夏,阿膠,牡丹皮(不去心),生姜,甘草,麥冬(去心) ](除阿膠、蒲黃炒阿膠需烊化外)制備成濃度為1 g/ml的溶液。放涼后置于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 金匱溫經(jīng)湯炮制前后對(duì)小鼠耳腫脹的影響按課題前期研究[5-7],將ICR小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組,每組10只,即金匱溫經(jīng)湯原方組,金匱溫經(jīng)湯全方炮制組,金匱溫經(jīng)湯君藥炮制品組,金匱溫經(jīng)湯臣藥炮制品組及空白模型對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱原方組,全方炮制組,君藥炮制組、臣藥炮制組及空白對(duì)照組),各給藥組按13 g/kg進(jìn)行灌胃給藥,空白對(duì)照組給予相同體積的蒸餾水,每日灌胃給藥1次,連續(xù)灌胃給藥4 d,采用小鼠耳腫脹法[8]于末次給藥后用移液槍于左耳涂二甲苯0.02 ml,2 h后將小鼠麻醉致死,剪下雙側(cè)耳片,用9 mm打孔器分別打下左右耳相同部位的耳片立即用分析天平稱重,左耳片重量減去右耳片重量作為腫脹度,并計(jì)算其腫脹抑制率[(腫脹抑制率模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度-模型組平均腫脹度)×100%]進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,比較金匱溫經(jīng)湯炮制前后各組對(duì)小鼠耳腫脹的影響。

1.3.3 金匱溫經(jīng)湯炮制前后對(duì)蛋清所致大鼠足爪腫脹的影響將SD大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組,每組10只,即原方組,全方炮制組,君藥炮制組及臣藥炮制組及空白對(duì)照組,各給藥組按7.8 g/kg進(jìn)行灌胃給藥,空白對(duì)照組給同體積的蒸餾水,每日灌胃給藥1次,連續(xù)灌胃給藥4 d,采用大鼠足爪腫脹法[8],用記號(hào)筆于大鼠左側(cè)后爪踝關(guān)節(jié)上端腿毛盡處劃一橫線,排水銀法測(cè)定鼠爪的體積作為給藥前的正常足爪體積。末次給藥30 min后,每只鼠其左后足注射10%的蛋清0.1 ml,觀察各組對(duì)大鼠爪腫脹程度的影響,并計(jì)算鼠爪腫脹百分率[大鼠腫脹百分率=(致炎后鼠爪體積-致炎前鼠爪體積)×100%]進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 金匱溫經(jīng)湯炮制前后對(duì)小鼠耳腫脹的影響與空白對(duì)照組比較,各給藥組均能明顯抑制小鼠耳腫脹(P<0.05),與原方組比較,其他各給藥組給藥后鼠耳腫脹度明顯高于原方組(P<0.05)。君藥炮制組耳腫脹抑制率達(dá)15.5%,臣藥炮制組抑制率達(dá)17.27%,全方炮制組抑制率達(dá)18.58%,而原方組抑制率達(dá)29.21%,由此可見(jiàn),原方組對(duì)小鼠耳腫脹抑制率療效最好,其次是全方炮制組、臣藥炮制組和君藥炮制組。見(jiàn)表1。

表1 金匱溫經(jīng)湯炮制前后對(duì)小鼠耳腫脹的影響 (只,

2.2 金匱溫經(jīng)湯炮制前后對(duì)蛋清所致大鼠足爪腫脹的影響與空白對(duì)照組比較,給藥后30 min開(kāi)始,各給藥組開(kāi)始起效,給藥60 min開(kāi)始,君藥炮制組對(duì)大鼠足足趾腫脹率作用達(dá)高峰,持續(xù)到240 min仍為高峰;臣藥組給藥后120 min達(dá)高峰,240 min時(shí)療效降低;全方炮制組給藥180 min達(dá)高峰,240 min時(shí)療效降低;原方組給藥120 min達(dá)高峰,持續(xù)到 240 min 仍為高峰。與原方組比較,君藥炮制組及臣藥炮制組與原方組各時(shí)間段療效比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;全方炮制組效果較原方組差(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 金匱溫經(jīng)湯炮制前后對(duì)大鼠足腫脹的影響 (只,

3 討論

金匱溫經(jīng)湯由當(dāng)歸、吳茱萸、白芍、川芎、桂枝、人參、阿膠、牡丹皮、生姜、甘草、生半夏、麥冬組成,此課題通過(guò)對(duì)上述藥材(酒炙吳茱萸、酒炙當(dāng)歸、酒炙川芎、炒芍藥、紅參、蜜制桂枝、蒲黃炒阿膠、牡丹皮不去心、炙甘草、去心麥門冬、煨姜及姜半夏)進(jìn)行炮制后進(jìn)行組方?，F(xiàn)代藥理研究表明,吳茱萸、桂枝、人參、生姜、甘草、川芎、牡丹皮、白芍、炒白芍、生半夏、姜半夏、麥冬、當(dāng)歸[9-19]都具有抗炎作用,其中,白芍與炒白芍抗炎效果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,當(dāng)歸抗炎效果優(yōu)于酒炙當(dāng)歸,生半夏與姜半夏未進(jìn)行對(duì)比。本研究發(fā)現(xiàn),各給藥組均有抗炎作用,對(duì)小鼠耳腫脹抑制率以原方組療效最好;對(duì)蛋清所致大鼠足爪腫脹給藥不同時(shí)間的作用以君藥炮制組及原方組療效持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng),全方炮制組療效最差,與前人對(duì)單味藥抗炎研究趨勢(shì)一致,都有抗炎的作用,但金匱溫經(jīng)湯炮制前后抗炎療效差異產(chǎn)生的機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。