設(shè)施蔬菜灰霉病菌的抗藥性檢測及綠色防控技術(shù)分析

郝 鵬，胡 珍

（單縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東 菏澤 274000）

現(xiàn)階段，對于設(shè)施蔬菜灰霉病菌的防治以化學(xué)藥劑防治為主，但灰霉病菌的繁殖速度極快，大量用藥后，灰霉病菌對多種藥劑產(chǎn)生了抗藥性，甚至還存在多重抗藥性。

最常見的防治灰霉病菌藥劑為腐霉利和嘧霉胺，隨著這兩種藥劑的長時間使用，防治效果逐步下降。灰霉病菌抗藥性檢測能夠?yàn)楹罄m(xù)病害防治工作開展提供指導(dǎo)，降低設(shè)施蔬菜種植人員的經(jīng)濟(jì)損失。

1 我國灰霉病常見化學(xué)藥劑抗藥性發(fā)展

灰霉病防治藥劑已經(jīng)在我國使用很多年，這使得灰霉病菌對于各種藥劑的抗藥性大幅提升，并演變出很多新的多重抗性菌株。例如，在山東省，番茄灰霉病對于腐霉利的中抗菌株占比為33.33%，對于嘧霉胺的高抗菌株高達(dá)99.39%。山興盛蔬菜灰霉菌對嘧霉胺抗性頻率高達(dá)50.29%，針對乙霉威抗性頻率在50%左右［1］。

2 材料與方法

為了更好地檢測設(shè)施蔬菜灰霉病菌抗藥性，以山東省菏澤市設(shè)施蔬菜種植情況為研究對象，具體試驗(yàn)材料和方法如下。

2.1 試驗(yàn)材料

2.1.1 供試菌株

相關(guān)人員需開展菌株采集與分離操作。試驗(yàn)開展階段，工作人員從菏澤市牡丹區(qū)、曹縣、單縣、東明縣等6 個地區(qū)開展設(shè)施蔬菜采集工作，經(jīng)過分離純化之后，得到的灰霉病菌株46 個，依靠PDA 斜面培養(yǎng)基保存，將其放置在冰箱中。試驗(yàn)所用的敏感菌株為黃瓜灰霉病菌，來源為山東省化工研究院。

2.1.2 供試藥劑與培養(yǎng)基

在供試藥劑制作方面，主要材料包括50%霉菌利可濕性粉劑、40%嘧霉胺懸浮劑。

培養(yǎng)基以PDA 培養(yǎng)基為主，主要是應(yīng)用在菌株分離培養(yǎng)以及腐霉利抗藥性測定過程中，常見材料包括葡萄糖、瓊脂以及MgSO4·7H2O 等，當(dāng)加入所有材料后再加入水1 000 mL。

2.2 試驗(yàn)方法

灰霉病菌抗藥性測定過程中最為常見的方式是菌落直徑法，也被稱為菌絲生長速率法。具體測定時，試驗(yàn)人員可利用抑制菌絲生長50%時的殺菌劑，對質(zhì)量濃度進(jìn)行有效抑制。當(dāng)上述工作完成之后，相關(guān)工作人員可分別測定敏感菌以及各地菌株的EC50情況。為了確保最終試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，相關(guān)人員可將各個菌株放置到PDA 平板上，執(zhí)行活化培養(yǎng)操作，具體培養(yǎng)時間約5 d，之后選取同一圓周的菌絲塊，將其轉(zhuǎn)移到含系列質(zhì)量濃度的培養(yǎng)基平板中央，菌絲塊直徑為0.5 cm。然后取同樣直徑的菌絲塊放置到培養(yǎng)基平板中間，整體轉(zhuǎn)移到恒溫箱內(nèi)，恒溫箱內(nèi)部溫度應(yīng)保持在25 ℃，培養(yǎng)3 d 后工作人員可以測量菌落直徑，得到最終菌落直徑的平均值，為后續(xù)菌絲生長抑制率計算提供前提條件。應(yīng)用DPS 軟件，能夠得到濃度對數(shù)值（x）以及抑制率幾率值（y）的線性回歸關(guān)系，列出毒力回歸方程以及有效抑制中濃度的具體數(shù)值。通過各地菌株EC50數(shù)值以及敏感菌EC50數(shù)值進(jìn)行抗性水平判斷，如果測試菌株EC50數(shù)值低于敏感菌株的5 倍，工作人員可將其視為敏感（S）；處于5～10 倍區(qū)間內(nèi)，可將其稱之為抵抗（LR）；10～40 倍，可稱之為中抗（MR）；超過40 倍的為高抗（HR）。相關(guān)工作人員可根據(jù)最終的分析結(jié)果，了解各地菌株抗性頻率以及抗性表型比例，明確兩種藥劑產(chǎn)生抗性之后的雙重抗性頻率，抗性頻率可通過公式：抗性菌株數(shù)量/總菌株數(shù)量×100%計算?？剐员硇捅壤赏ㄟ^公式：各抗性表型菌株數(shù)/總菌株數(shù)×100%計算。雙重抗性頻率可利用公式：雙重抗性菌株數(shù)/決菌株數(shù)×100%來獲取［2］。

3 結(jié)果與分析

3.1 灰霉病菌對腐霉利以及嘧霉胺的抗性頻率

從實(shí)際研究結(jié)果可知，設(shè)施蔬菜灰霉病菌已經(jīng)對腐霉利以及嘧霉胺產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，其中，對于腐霉利的抗性已經(jīng)達(dá)到嚴(yán)重程度，具體抗性頻率在50%以上。而對嘧霉胺的抗性頻率比例值相對較低，除了曹縣的菌株處于60%外，其余各地的抗性頻率均未超過40%。根據(jù)不同地區(qū)所呈現(xiàn)出的菌株抗性頻率特點(diǎn)，曹縣灰霉病菌株所表現(xiàn)出的殺菌劑抗性頻率較高。另外，菌株對于嘧霉胺的抗性頻率數(shù)值最低，占比為16.67%。

3.2 灰霉病菌對腐霉利和嘧霉胺的抗性水平

通過具體研究和分析發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)的灰霉病菌對于腐霉利所展示出的抗性較高，其中高抗頻率均處于10%以上，高抗頻率最高的當(dāng)屬鎮(zhèn)海，對應(yīng)的比例數(shù)值為40%，其次是奉化菌株，對應(yīng)的高抗頻率為28.6%。相比之下，菏澤市設(shè)施蔬菜灰霉病菌對于嘧霉胺的整體抗性水平并不高。除了曹縣菌株存在高抗菌株外，其他各地均未檢測出高抗菌株，敏感頻率均超過60%。此外，本次研究區(qū)域內(nèi)的灰霉菌株，抗性水平最低的當(dāng)屬牡丹區(qū)菌株，在具體檢測過程中沒有出現(xiàn)高抗菌株，敏感菌株占比最高，能夠達(dá)到83.3%［3］。

3.3 討論與結(jié)論

在開展菏澤市設(shè)施蔬菜灰霉病菌對常規(guī)防治藥劑的抗藥性研究過程中，相關(guān)人員主要應(yīng)用的方式為菌絲生長速率法，研究結(jié)果顯示，所測定的灰霉病菌對腐霉利以及嘧霉胺均產(chǎn)生了抗性，其中，抗性更為明顯的是對腐霉利，平均抗性頻率達(dá)到80.43%，高抗菌株頻率為22.84%。相比之下，嘧霉胺的抗性要更弱一些，其整體抗性頻率為34.78%，其中高抗菌株頻率為1.67%。根據(jù)不同地區(qū)的研究結(jié)果，菌株對于這兩種藥劑具備雙重抗性，且雙重抗性頻率比例在32%左右。更為重要的是，不同地區(qū)灰霉病菌抗藥性差異十分明顯，例如，曹縣菌株所表現(xiàn)出的抗藥性最強(qiáng)，對應(yīng)的抗性頻率較高。

長期以來，腐霉利和嘧霉胺對于蔬菜灰霉病防治起到了重要作用，在實(shí)際生產(chǎn)過程中的應(yīng)用時間較長，尤其是在設(shè)施蔬菜灰霉病高發(fā)階段，兩種藥劑被頻繁、大量應(yīng)用，為灰霉病菌抗藥性培養(yǎng)提供了充分條件。從以往研究數(shù)據(jù)能夠了解到，當(dāng)高抗菌株頻率超過20%，證明藥劑的應(yīng)用價值很低。本次試驗(yàn)所得到的腐霉利高抗菌株比例為22.84%，證明該藥劑無法在菏澤市設(shè)施蔬菜灰霉病防治過程中繼續(xù)應(yīng)用［4］。

4 設(shè)施蔬菜灰霉病菌的發(fā)生特點(diǎn)

4.1 寄主范圍廣

灰霉病菌寄主范圍具有明顯的廣泛性。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計，灰霉病菌能夠侵染1 400 多種植物，如番茄、辣椒、黃瓜等，其中還包括一部分農(nóng)田雜草?；颐共【踔聊軌蛟诳菟澜斩捇蛘呤潜粴⑺赖碾s草中生長，并出現(xiàn)很多分生孢子。如果設(shè)施蔬菜生長環(huán)境溫暖且潮濕，空氣中便極有可能含有一些灰霉病菌分生孢子，最終導(dǎo)致設(shè)施蔬菜大面積感染。

4.2 發(fā)生季節(jié)多在早春

設(shè)施蔬菜灰霉病的出現(xiàn)，不同年份的發(fā)生趨勢存在明顯差異。例如，在番茄灰霉病發(fā)生過程中，其葉片會在3 月上旬開始腐壞，到3 月下旬或4 月初會蔓延到莖稈及花朵，4 月上旬便能為害果實(shí)。花朵和莖稈發(fā)病的高峰期在5 月，果實(shí)發(fā)病高峰期出現(xiàn)在5 月下旬。葉片發(fā)病率不高，很難對其發(fā)病高峰期進(jìn)行判斷?；颐共儆诘蜏馗邼裥筒『?，當(dāng)溫度條件適宜時，灰霉病菌會隨著濕度的增加提升致病力，一旦設(shè)施蔬菜被感染，將會在短期內(nèi)大面積流行，導(dǎo)致設(shè)施蔬菜產(chǎn)量大幅下滑。因此，在設(shè)施蔬菜灰霉病菌預(yù)防上，可從3 月上旬開展預(yù)防操作，并在5 月重點(diǎn)預(yù)防。

4.3 容易產(chǎn)生殺菌劑抗性

現(xiàn)階段，針對灰霉病菌抗藥性研究屬于農(nóng)業(yè)發(fā)展領(lǐng)域中的重要內(nèi)容之一，相關(guān)人員應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，對灰霉病防治策略進(jìn)行合理有效地設(shè)計和積極調(diào)整，通過應(yīng)用合適的殺菌劑，降低灰霉病菌的發(fā)生概率，積極研究新的藥劑，大力提升灰霉病菌的防治效率。

5 設(shè)施蔬菜灰霉病菌的綠色防控技術(shù)

5.1 農(nóng)業(yè)防治

設(shè)施蔬菜種植前，應(yīng)重點(diǎn)選擇抗病能力強(qiáng)的品種，并在后續(xù)采取輪作換茬、合理施肥澆水等措施。例如，在番茄種植階段，可選擇紅色硬果，并與不易感染灰霉病的作物進(jìn)行輪作，具體輪作換茬時間應(yīng)保持在3 年以上。

在澆水灌溉方面，可應(yīng)用地膜暗灌或者是滴灌策略，選擇在天氣晴朗的上午進(jìn)行，不能大水漫灌。當(dāng)澆水工作完成后，種植戶還要做好通風(fēng)降濕操作，并合理密植，避免由于植株密度過大影響整體通風(fēng)效果。當(dāng)植株生長到一定階段后，還要整枝打杈，去除老葉、病花、病果等，并進(jìn)行深埋處理，避免再次感染其他植株［5］。

5.2 物理防治

在設(shè)施蔬菜灰霉病菌物理防治過程中，可引入高溫悶棚土壤消毒方式，拉秧后將剩余的病殘體全部消除。如果是夏季高溫天氣，可將雞糞、土雜肥等一起送入土壤內(nèi)，灌滿水后蓋好地膜壓實(shí)，保持棚室密閉性，具體密閉時間約為30 d。夏季設(shè)施蔬菜的石灰氮使用數(shù)量約為1 050 kg/hm2，使用時需要保證石灰氮與表層土壤處于均勻混合狀態(tài)，后續(xù)進(jìn)行澆水灌溉，保證土壤內(nèi)部含水量不低于70%，如果存在大量畦面，相關(guān)人員可使用透明薄膜將其覆蓋，并做好膜的壓實(shí)工作，通過密閉大棚的方式，提升棚內(nèi)溫度，15～20 d 后便可揭膜。對于設(shè)施蔬菜的種植，想要保證灰霉病菌的預(yù)防效果，應(yīng)有效控制棚內(nèi)溫度和濕度。冬季可選擇在晴朗的上午通風(fēng)30 min，棚內(nèi)濕度降到75%以下后將棚室緊閉，待棚內(nèi)溫度回升至30 ℃后繼續(xù)通風(fēng)，保證設(shè)施蔬菜棚內(nèi)溫度始終保持在30 ℃左右。

5.3 生物防治

在設(shè)施蔬菜灰霉病發(fā)病初期，可以加入抗菌素可濕性粉劑2 250 g/hm2，或使用1%申嗪霉素懸浮劑1 500 g/hm2，加入450 kg/hm2水噴霧防治。

5.4 化學(xué)防治

設(shè)施蔬菜灰霉病菌綠色防治過程中，最常見的防治手段是化學(xué)防治，主要有以下幾種。

5.4.1 煙霧法

設(shè)施蔬菜灰霉病發(fā)病初期，種植人員可利用45%百菌清煙劑2 250 g/hm2或20%腐霉·百菌清煙劑3 000 g/hm2，在具體實(shí)施階段，可將其放置于棚內(nèi)4～5 處，于傍晚階段將發(fā)煙堆點(diǎn)燃，閉棚熏整晚，第2 天進(jìn)行通風(fēng)，如果設(shè)施蔬菜灰霉病較為嚴(yán)重，工作人員可間隔7 d 再執(zhí)行1 次煙熏操作。

5.4.2 噴霧法

發(fā)病初期，種植戶可以使用25%腐霉·雙懸浮劑2 250 g/hm2、50%異菌脲懸浮劑1 500 g/hm2、20%嘧霉胺懸浮劑2 250 g/hm2噴霧防治。當(dāng)噴藥工作完成后，應(yīng)及時通風(fēng)降溫，避免由于藥劑施加，導(dǎo)致設(shè)施蔬菜周圍濕度大幅提升。在用藥階段，種植戶要輪換交替用藥，降低灰霉病菌產(chǎn)生抗藥性的概率。

5.4.3 蘸花防治

蘸花防治是設(shè)施蔬菜灰霉病預(yù)防中的常見措施之一，當(dāng)果穗開花后，相關(guān)工作人員可在蘸花液中加入50%腐霉利可濕性粉劑，或者加入0.1%乙烯菌核利可濕性粉劑蘸花。如果遇到陰雨天氣，可以利用煙霧劑或者粉塵劑，提升灰霉病菌的治療效果。需要注意的是，設(shè)施蔬菜單個生育期之內(nèi)，各種類型的殺菌劑使用次數(shù)不能超過2 次，用藥階段應(yīng)盡可能集中在發(fā)病初期，用藥前還要將老葉、病葉等去除。

在預(yù)防階段，種植者應(yīng)重點(diǎn)防治中心病株、植株下方以及葉片背部，選擇殺菌劑類型時，應(yīng)做到不重復(fù)使用，避免設(shè)施蔬菜灰霉病菌出現(xiàn)較強(qiáng)的抗藥性。

6 結(jié)束語

設(shè)施蔬菜灰霉病屬于是低溫潮濕型病害。常見的預(yù)防和治療方式包括通風(fēng)透氣、地膜覆蓋以及膜下滴灌等。后續(xù)栽培管理階段，應(yīng)重點(diǎn)加大病殘體的無害化處理技術(shù)應(yīng)用力度，突出整個灰霉病防治過程的綠色環(huán)保特點(diǎn)?，F(xiàn)階段，對于灰霉病的預(yù)防，我國已經(jīng)研究出很多新型技術(shù)，尤其是在生態(tài)防控技術(shù)幫助下，設(shè)施蔬菜病害防治效果能夠得到進(jìn)一步提升。