銅脅迫對蘋果幼苗生長及生理特性的影響

王佳樂 步凡 何佳麗 呂德國

摘要：通過研究不同供銅（Cu）水平對蘋果幼苗生長、光合作用、Cu富集情況和氧化應激反應的影響，探究蘋果苗Cu脅迫閾值，旨在為蘋果抗逆栽培提供理論指導。以寒富蘋果為試材，設置不同濃度（60、180、300、600、900 mg/kg）Cu處理，處理后60 d取樣，測定幼苗各組織生物量、根系形態(tài)、光合特性、各器官Cu含量以及總Cu含量、活性氧、抗氧化物含量和抗氧化物酶活性。結(jié)果表明，當Cu脅迫濃度超過300 mg/kg時，幼苗各器官生物量顯著降低，根系形態(tài)指標（總根長、根總表面積、根總體積）、葉片凈光合速率、氣孔導度、PSⅡ最大光化學效率、光合性能指數(shù)均呈下降趨勢。各組織Cu含量為根＞葉＞莖。隨著Cu濃度提高，幼苗各組織中活性氧物質(zhì)積累，總硫醇、可溶性酚、抗壞血酸等物質(zhì)含量及超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等酶活性以300 mg/kg為臨界點，呈先增高后降低趨勢。

關鍵詞：銅；蘋果；脅迫；幼苗生長；生理響應

中圖分類號：S661.101文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）16-0105-08

收稿日期：2022-05-15

基金項目：遼寧省興遼英才計劃-青年拔尖人才項目（編號：XLYC1907105）；遼寧省教育廳科學研究經(jīng)費項目（編號：LSNQN201916）；國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系建設專項（編號：CARS-28）。

作者簡介：王佳樂（1998—），男，甘肅平?jīng)鋈?，碩士研究生，主要從事果樹栽培與生理生態(tài)研究。E-mail：wjl1655294867@163.com。

通信作者：何佳麗，博士，副教授，主要從事果樹栽培與生理生態(tài)研究。E-mail：hejiali1017@163.com。

近年來由于工業(yè)廢料排放，化肥、農(nóng)藥的過量施用導致果園銅（Cu）污染問題日益嚴重。相關研究表明，我國環(huán)渤海灣優(yōu)勢蘋果產(chǎn)區(qū)因臨近工礦業(yè)，且存在嚴重的盲目施用化肥、農(nóng)藥現(xiàn)象，導致土壤中Cu過量積累^［1］。單正軍等對江蘇徐州大沙園30處蘋果園及山東即墨12處蘋果園的銅含量進行測定，發(fā)現(xiàn)分別有6.7%和8.3%的土壤Cu含量遠超果園土壤Cu含量的二級標準^［2］。因此，果園土壤Cu污染已成為果樹生產(chǎn)中亟需解決的重要問題。

Cu是自然界中廣泛存在的重金屬元素，是植物體內(nèi)的微量營養(yǎng)元素之一，參與光合電子傳遞作用、碳同化和氮代謝等多種生理反應^［3］。但土壤Cu含量超標會影響植物根系正常發(fā)育、抑制光合呼吸作用、減少葉片色素含量，進而導致植株生長受損^［4-5］。過量Cu還能導致活性氧（ROS）的產(chǎn)生，使細胞膜脂過氧化，從而破壞細胞膜結(jié)構與功能。為了緩解Cu脅迫引起的氧化損傷，植物會通過激活抗氧化防御系統(tǒng)來抵御毒害。其中游離脯氨酸、可溶性酚、抗壞血酸等抗氧化物質(zhì)與超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等酶類物質(zhì)，在ROS清除過程中發(fā)揮重要作用^［6-7］。目前，關于Cu脅迫對植物生長發(fā)育及生理特性的影響已在許多農(nóng)作物如小麥、玉米、辣椒上開展^［8-10］，但Cu脅迫對蘋果影響的研究較少，其耐Cu脅迫閾值尚不明確。鑒于此，本研究以東北冷涼氣候區(qū)廣泛栽植的寒富蘋果幼苗為試材，通過設置不同濃度Cu處理，來探索Cu脅迫對蘋果幼苗生長發(fā)育及生理特性的影響。旨在為明確寒富幼苗的耐Cu閾值提供理論基礎，為農(nóng)戶合理施用含Cu肥料及相關制劑提供科學指導。

1 材料與方法

1.1 試材及取樣

本試驗于沈陽農(nóng)業(yè)大學果樹科研基地（123°341′E，41°491′N）進行。以一年生寒富蘋果（Malus domestica Borkh.）枝條為接穗，山定子（Malus baccata Borkh.）為砧木，于2018年4月采用芽接的方式進行嫁接。培養(yǎng)期間每天澆Hoagland營養(yǎng)液（Cu濃度為0.5 μmol/L）50 mL^［11］，以滿足試材的正常生長需要，待其長到15～20 cm時進行Cu處理。選取長勢一致的幼苗，移栽至20 cm×20 cm 的營養(yǎng)缽內(nèi)進行沙培，每個營養(yǎng)缽裝有4 kg沙子［Cu濃度背景值為（1.03±0.2） mg/kg］。以Hoagland營養(yǎng)液中的基礎Cu濃度為對照（CK），額外添加不同濃度的CuSO₄溶液為處理，分別為T1，60 mg/kg；T2，180 mg/kg；T3，300 mg/kg；T4，600 mg/kg；T5，900 mg/kg。共計6個處理，每個處理設6次重復，培養(yǎng)60 d后收獲試材，用于指標測定。試材收獲前，用蒸餾水沖洗各株幼苗，除去根系表面的Cu²⁺及植株上的雜質(zhì)。然后將各組織分別收取，記錄鮮質(zhì)量。取好的樣品放入液氮中，于超低溫冰箱保存，以便進行后續(xù)試驗。

1.2 測定項目

1.2.1 生物量、根系構型 稱取100 mg左右的各組織鮮樣于60 ℃下烘干，測定其干質(zhì)量、干濕比與生物量。將幼苗根洗凈后，利用WinRHIZO根系掃描系統(tǒng)（WinRHIZO 2012，Regent Instruments Canada INC.，Montreal，Canada）測定各個植株的根系構型。

1.2.2 光合參數(shù)及熒光參數(shù)的測定 在試材收獲之前對幼苗成熟葉（LPI=7～9）進行測定，利用CIRAS-2光合儀測定葉片的凈光合速率、氣孔導度、蒸騰速率及胞間CO₂濃度。利用Handy-PEA連續(xù)激發(fā)式熒光儀測定葉片的PSⅡ最大化學效率及光合性能指數(shù)。

1.2.3 Cu含量、總Cu量、富集系數(shù)及轉(zhuǎn)運系數(shù)的測定 稱取各組織鮮樣（根取0.5 g左右，莖和葉各取0.7 g左右）進行消煮（溫度100 ℃，穩(wěn)定于 200 ℃），利用火焰原子吸收分光光度計（Hitachi 180-80，HitachiLtd，Tokyo，Japan）測定各組織Cu含量和總Cu量^［12］。根據(jù)各組分的Cu含量與土壤中Cu含量的比值，來計算富集系數(shù)（BCF）。用幼苗地上部分Cu含量與根系部分Cu含量的比值，計算樣品的轉(zhuǎn)運系數(shù)（T_f）。

1.2.4 O^-₂·、H₂O₂和MDA含量測定 超氧陰離子（O^-₂·）、過氧化氫（H₂O₂）的測定分別參照Zhou等^［13］、He等^［14］的方法。丙二醛（MDA）含量測定采用硫代巴比妥酸法，取上清液利用分光光度計測定待測溶液450、532、600 nm處的吸光度。

1.2.5 抗氧化物的測定 總硫醇（T-SH）含量的測定參照Zhou等的方法^［11］，可溶性酚、谷胱甘肽（TG）、還原型谷胱甘肽（GSH）及氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量的測定參照He等的方法^［12］?？偪箟难幔═A）、抗壞血酸（ASC）和脫氫抗壞血酸（DHA）含量的測定分別使用抗壞血酸含量測定試劑盒（微板法）和脫氫抗壞血酸含量測定試劑盒（微板法）2種試劑盒（蘇州格銳思生物科技有限公司）測定。超氧化物歧化酶（SOD）、抗壞血酸過氧化物酶（APX）、谷胱甘肽還原酶（GR）、過氧化物酶（POD）及過氧化氫酶（CAT）的活性測量方法參照Wang等的方法^［15］。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS Statistics軟件對本試驗中所得的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計與分析。所有數(shù)據(jù)在統(tǒng)計與分析前會進行正態(tài)分布檢測。方差分析F檢驗當P<0.05時認為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 Cu脅迫對蘋果幼苗生長的影響

由圖1所示，當Cu濃度超過300 mg/kg，幼苗表現(xiàn)出明顯的Cu脅迫現(xiàn)象。表現(xiàn)為株高降低，根系整體褐色加深、主根變短、側(cè)根與白根數(shù)量減少，并且出現(xiàn)葉片變小且葉片邊緣發(fā)生卷曲現(xiàn)象。

由表1可知，當Cu脅迫濃度為60、180 mg/kg時，幼苗生物量和根構型相關參數(shù)與對照相比無顯著差異。但當Cu脅迫濃度超過300 mg/kg，植株生物量、根構型均有顯著降低趨勢，并且這種不利影響隨Cu脅迫濃度的增加而增大。最高濃度處理（T5）與對照相比，根質(zhì)量、莖質(zhì)量以及葉質(zhì)量分別降低了40.23%、42.46%和33.29%；總根長、根總表面積和根總體積分別降低了31.26%、12.04%和33.53%，這與試材生長狀況表現(xiàn)一致。

由表2可知，蘋果幼苗的凈光合速率與氣孔導度在Cu處理濃度超過300 mg/kg后呈顯著下降趨勢，最高處理（T5）與對照相比，分別下降57.81%和65.12%。胞間CO₂濃度在Cu脅迫濃度為 180 mg/kg后逐漸下降。PSⅡ最大化學效率和光合性能指數(shù)在Cu濃度≥300 mg/kg后顯著下降。最高濃度下葉片的PSⅡ最大化學效率和光合性能指數(shù)與對照相比分別下降了13.01%和78.32%。

2.2 Cu脅迫對蘋果幼苗中Cu含量的影響

由圖2可知，蘋果幼苗各組織Cu含量為根＞砧木莖>葉＞莖，其中地下部（根）的Cu含量遠大于地上部。各組織的Cu含量隨著Cu處理濃度的增加而逐漸增大，當Cu處理濃度超過300 mg/kg后，根中的Cu含量大幅提高。

由圖3-a可知，根中總Cu量整體最多，其次是砧木莖，接穗莖、葉組織相對較少。各組織的總Cu量隨著Cu處理濃度的增加而逐漸增大，當Cu濃度高于300 mg/kg，根系中總Cu量急劇增加。BCF以180 mg/kg的Cu處理濃度為臨界點，表現(xiàn)出先降低后升高的趨勢（圖3-b）。無論在多少濃度的環(huán)境下，幼苗地上部分的T_f都是砧木莖＞葉＞莖，且隨著Cu濃度提高，砧木莖和葉的Tf呈下降趨勢（圖3-c）。

2.3 Cu脅迫對蘋果幼苗O^-₂·、H₂O₂和MDA含量的影響

如圖4所示，隨著Cu濃度提高，寒富蘋果幼苗根、莖和葉中O^-₂·含量逐漸增加，并在Cu脅迫濃度為900 mg/kg時達到最大值。與對照相比，各組織的H₂O₂含量在低濃度（60、180 mg/kg）Cu脅迫下有小幅增加，但當Cu濃度超過300 mg/kg時，其含量顯著增加（圖4-b）。MDA含量的變化趨勢與O^-₂·和H₂O₂含量類似（圖4-c）。

2.4 Cu脅迫對蘋果幼苗抗氧化系統(tǒng)的影響

由圖5可知，Cu脅迫誘導了幼苗各組織中游離脯氨酸的積累。當Cu濃度超過300 mg/kg，根和葉中游離脯氨酸的含量急劇增加（圖5-a1～圖5-a3）。最高濃度Cu處理與對照相比，根、莖、葉中游離脯氨酸的含量分別提高了77.94%、34.11%和71.57%。與對照相比，根中總硫醇含量隨著Cu濃度的提高顯著下降，其中根系下降幅度最大，最高濃度處理時較CK下降了43.29%，而莖則以 300 mg/kg 的Cu濃度為臨界點呈先上升后下降的趨勢（圖5-b1～圖5-b3）。由圖5-c1～圖5-c3可知，隨著Cu濃度提高，根系可溶性酚含量逐漸降低。莖中的可溶性酚含量以300 mg/kg Cu處理濃度為臨界點，表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。而各組織中GSH含量以300 mg/kg的Cu濃度為臨界點，呈先增多后減少的趨勢（圖5-d1～圖5-d3）。

由圖6可知，隨著Cu濃度提高，幼苗各組織中SOD活性變化各不相同，其中根和莖部分以 300 mg/kg 的Cu濃度為臨界點，隨Cu濃度提高，呈先上升后下降的變化趨勢。葉片部分則隨著Cu濃度的升高，SOD活性顯著下降，并且葉片中SOD活性明顯低于莖和根（圖6-a1～圖6-a3）中。與對照相比，除莖中T5濃度以外，根與莖中CAT活性均隨著Cu濃度提高而顯著降低，葉片部分則是以 300 mg/kg 的Cu濃度為臨界點表現(xiàn)出先升高后降低的趨勢（圖6-b1～圖6-b3）。對于APX活性而言，與對照相比，根系和葉片部分的APX活性均以300 mg/kg為臨界點表現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，而莖中則逐漸下降，其中根系部分APX活性最高（圖6-c1～圖6-c3）。各組織中的POD活性變化與SOD活性變化趨勢一致，莖中POD活性最高，葉片中POD活性遠低于根、莖（圖6-d1～圖6-d3）。對于GR活性來說，與對照相比，當Cu濃度低于300 mg/kg時幼苗根系的GR活性顯著提高，高于這個濃度之后呈顯著降低的趨勢。而莖和葉部分的GR活性隨著Cu濃度的提高表現(xiàn)出下降趨勢（圖6-e1～圖6-e3）。

3 討論

Cu在植物生理代謝過程中發(fā)揮重要作用，一般認為植物組織中Cu含量以5～30 mg/kg為宜^［16-17］。當植物中的Cu濃度超過臨界限值時會對植物細胞產(chǎn)生毒性，抑制植物生長^［18-19］。黎建玲等發(fā)現(xiàn)當Cu濃度大于50 mg/L 時，南瓜種子萌發(fā)和幼苗根系的生長會被顯著抑制^［20］；韓承華等在五月慢油菜上發(fā)現(xiàn)當Cu濃度大于90 mg/L 時，試材根系發(fā)育受損，植株會有死亡現(xiàn)象發(fā)生^［21］。本研究表明，蘋果幼苗對Cu的耐受濃度為300 mg/kg，當Cu濃度過高，幼苗總根長、根總表面積和根總體積均顯著下降。這可能與高Cu濃度引起氣孔導度下降、CO₂供應受阻，致使凈光合速率降低、光合底物減少有關。對葉綠素熒光參數(shù)的分析可知，高濃度Cu處理下，葉片PSⅡ最大化學效率和PIabs均呈下降趨勢，進一步說明Cu脅迫會顯著抑制幼苗葉片的光合作用，影響根系生長，降低幼苗生物量。

植物通過將重金屬滯留在根中來減弱其毒害作用。本研究通過對各組織中Cu含量和總Cu量進行測定，表明蘋果幼苗可以將大部分的Cu滯留在根中，從而抑制Cu向地上部分轉(zhuǎn)運，生物富集系數(shù)也明確了這一現(xiàn)象，這與前人研究結(jié)果^［22］類似。在本試驗中，蘋果幼苗的Cu轉(zhuǎn)運系數(shù)以180 mg/kg為臨界點，呈先升高再降低的變化趨勢，這可能是因為當Cu濃度達到300 mg/kg時，其根系受損，導致向地上部分的轉(zhuǎn)運能力降低。

Cu脅迫會誘導ROS產(chǎn)生與MDA的積累，對植物造成氧化脅迫，從而對植物生長產(chǎn)生抑制，嚴重時甚至引起細胞死亡^［23］。這一現(xiàn)象在甘蔗、粉葛、菠菜等植物中已經(jīng)被證實^［24-26］。雖然低濃度的ROS可作為信號分子參與調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育和逆境脅迫響應^［27］，但當濃度高于細胞所能承受的限度時，會以極強的氧化性造成細胞膜脂過氧化，影響蛋白質(zhì)、脂質(zhì)甚至核酸的功能，最終導致細胞損傷乃至死亡^［28］。本試驗表明，隨著Cu濃度提高，幼苗各組織中O^-₂·與 H₂O₂含量均有增加趨勢。當Cu濃度超過300 mg/kg時，各組織中的MDA含量顯著增加，這可能是活性氧的積累促進MDA的產(chǎn)生，膜透性增加受損^［29］。進一步說明隨著Cu濃度增大，蘋果幼苗細胞膜受到的傷害越嚴重。由此可以判斷此時幼苗已經(jīng)開始受到Cu脅迫傷害，且隨著細胞膜脂過氧化程度加深，幼苗生理代謝受到影響，最終表現(xiàn)為生長受到抑制。

為了免受ROS侵害，植物進化出一系列復雜的防御機制來避免或減少氧化損傷^［30-32］，游離脯氨酸為其中重要的物質(zhì)之一。在植物組織中廣泛積累的游離脯氨酸一方面能協(xié)調(diào)原生質(zhì)體內(nèi)外的滲透平衡，提高植物的抗氧化能力^［33］；另一方面可與總硫醇、可溶性酚共同作為非酶類抗氧化劑參與活性氧清除。蔣英等研究指出，Cu脅迫條件下，絲瓜中游離脯氨酸含量呈顯著上升趨勢，且隨Cu 濃度的提高而提高^［34］。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，當Cu濃度超過300 mg/kg，各組織中脯氨酸含量急劇上升，而總硫醇和可溶性酚含量并未隨著Cu濃度提高而逐漸增加，這可能說明總硫醇和可溶性酚不是蘋果幼苗抵抗Cu脅迫的關鍵ROS清除物質(zhì)。

谷胱甘肽-抗壞血酸循環(huán)是保護植物細胞免受氧化脅迫的重要途徑^［35］。GSH的提高有助于清除活性氧。闞世紅等研究發(fā)現(xiàn)，外源硫酸鈉可以通過維持高水平的GSH來降低膜脂過氧化程度，緩解Cu脅迫對生菜幼苗生長的抑制^［36］。本試驗中，當Cu濃度低于300 mg/kg時，幼苗根中GSH的含量呈上升趨勢，這使GSH被積累，有利于清除由Cu脅迫導致的過量ROS。此外，植物體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)也在遭受氧化脅迫時發(fā)揮關鍵作用。本研究表明，當蘋果幼苗受到Cu脅迫時，根中的SOD、APX、POD、GR，莖中SOD、POD以及葉中CAT、APX的活性均顯著升高。但當Cu濃度高于300 mg/kg，這些酶的活性均出現(xiàn)下降趨勢，這可能是由于此時的Cu濃度已超過了植物的調(diào)節(jié)能力范圍，導致酶活性降低^［37］，這與李曉梅等的研究結(jié)果^［38-39］一致。

綜上，本研究分析比較了不同供Cu水平下幼苗生長發(fā)育情況及對活性氧和抗氧化物的影響，表明300 mg/kg的Cu濃度是寒富幼苗能忍耐的最高限度，有助于探明蘋果對Cu脅迫的抵御機制，為明確寒富幼苗受Cu毒害的閾值提供理論基礎。

4 結(jié)論

供Cu量過高（超過300 mg/kg）會抑制蘋果幼苗的正常生長，降低葉片光合作用，抑制根系發(fā)育。過量的Cu主要在根系中積累。Cu脅迫會導致ROS與MDA過量積累，造成氧化脅迫。雖然蘋果幼苗可通過提高抗氧化物含量及抗氧化酶活性來抵御Cu毒害，但當Cu濃度超過300 mg/kg時抗氧化系統(tǒng)受到顯著抑制，這說明蘋果幼苗能忍耐的最高環(huán)境Cu濃度為300 mg/kg。

參考文獻：

［1］許延娜. 膠東半島蘋果園重金屬污染評價［J］. 中國果樹，2009，51（2）：40-44.

［2］單正軍，王連生，蔡道基，等. 果園土壤銅污染狀況及其對作物生長的影響［J］. 農(nóng)業(yè)環(huán)境保護，2002，22（2）：119-121.

［3］Zeng Q Y，Ling Q P，Wu J Y，et al. Excess copper-induced changes in antioxidative enzyme activity，mineral nutrient uptake and translocation in sugarcane seedlings［J］. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology，2019，103（6）：834-840.

［4］Chaoui A，Jarrar B，F(xiàn)erjani E E. Effects of cadmium and copper on peroxidase，NADH oxidase and IAA oxidase activities in cell wall，soluble and microsomal membrane fractions of pea roots［J］. Journal of Plant Physiology，2004，161（11）：1225-1234.

［5］Morse N，Walter M T，Osmond D，et al. Roadside soils show low plant available zinc and copper concentrations［J］. Environmental Pollution，2016，209：30-37.

［6］Lange B，Ent A V D，Baker A J M，et al. Copper and cobalt accumulation in plants：a critical assessment of the current state of knowledge［J］. New Phytologist，2017，213（2）：537-551.

［7］Nair P M G，Chung I M. Study on the correlation between copper oxide nanoparticles induced growth suppression and enhanced lignification in Indian mustard （Brassica juncea L.）［J］. Ecotoxicology and Environmental Safety，2015，113（4）：302-313.

［8］林 泮，那日蘇，徐妍妍，等. 銅脅迫對小麥種子萌發(fā)的影響［J］. 天津農(nóng)業(yè)科學，2015，21（11）：123-125.

［9］劉 帥，高永光. 銅脅迫下玉米葉綠素質(zhì)量比與光譜反射率關系［J］. 遼寧工程技術大學學報（自然科學版），2008，30（1）：125-128.

［10］盛積貴，李曉梅，竇三豐. 銅脅迫對辣椒種子發(fā)芽及其幼苗生長的影響［J］. 北方園藝，2013（7）：22-24.

［11］Zhou J T，Wan H X，He J L，et al. Integration of cadmium accumulation，subcellular distribution，and physiological responses to understand cadmium tolerance in apple rootstocks［J］. Frontiers in Plant Science，2017，8：966.

［12］He J L，Ma C F，Ma Y L，et al. Cadmium tolerance in six poplar species［J］. Environmental Science and Pollution Research，2013，20（1）：163-174.

［13］Zhou J T，Wan H X，Qin S J，et al. Net cadmium flux and gene expression in relation to differences in cadmium accumulation and translocation in four apple rootstocks［J］. Environmental and Experimental Botany，2016，130：95-105.

［14］He J L，Li H，Ma C F，et al. Overexpression of bacterial gamma-glutamylcysteine synthetase mediates changes in cadmium influx，allocation and detoxification in poplar［J］. New Phytologist，2015，205（1）：240-254.

［15］Wang P，Sun X，Li C，et al. Long-term exogenous application of melatonin delays drought-induced leaf senescence in apple［J］. Journal of Pineal Research，2013，54（3）：292-302.

［16］Adrees M，Ali S，Rizwan M，et al. The effect of excess copper on growth and physiology of important food crops：a review［J］. Environmental Science and Pollution Research，2015，22（11）：8148-8162.

［17］Sharma A，Kapoor D，Wang J，et al. Chromium bioaccumulation and its impacts on plants：an overview［J］. Plants，2020，10（9）：1-17.

［18］Liu J J，Wei Z，Li J H. Effects of copper on leaf membrane structure and root activity of maize seedling［J］. Botanical Studies，2014，55（1）：1-6.

［19］Zhang J，Zeng L，Sun H，et al. Adversity stress-related responses at physiological attributes，transcriptional and enzymatic levels after exposure to Cu in Lycopersicum esculentm seedlings［J］. Scientia Horticulturae，2017，222：213-220.

［20］黎建玲，梁慧靈，黃肇宇. Cu²⁺脅迫對南瓜種子萌發(fā)和幼苗初期生長的影響［J］. 玉林師范學院學報，2017，38（2）：63-69.

［21］韓承華，潘瑞瑞，劉 野，等. Cu、Zn對水蕹菜生長的影響及Se的緩解作用［J］. 生態(tài)學雜志，2016，35（2）：470-477.

［22］Hippler F W R，Cipriano D O，Boaretto R M，et al. Citrus rootstocks regulate the nutritional status and antioxidant system of trees under copper stress［J］. Environmental and Experimental Botany，2016，130：42-52.

［23］Chen F，Wang F，Wu F B，et al. Modulation of exogenous glutathione in antioxidant defense system against Cd stress in the two barley genotypes differing in Cd tolerance［J］. Plant Physiology and Biochemistry，2010，48（8）：663-672.

［24］曾巧英，凌秋平，楊湛端，等. 銅脅迫對甘蔗生長及抗氧化酶活性的影響［J］. 廣西植物，2019，39（7）：951-958.

［25］高 昆，冀中英. 銅脅迫對粉葛幼苗生長及生理指標的影響［J］. 陜西農(nóng)業(yè)科學，2021，67（10）：1-8.

［26］公 勤，車 勇，王 玲，等. 銅處理對菠菜幼苗體內(nèi)氧化應激反應和礦質(zhì)元素吸收的影響［J］.新疆農(nóng)業(yè)科學，2021，43（11）：2111-2121.

［27］Bailey-Serres J，Mittler R. The roles of reactive oxygen species in plant cells［J］. Plant Physiology，2006，141（2）：311.

［28］Li L，Zhang K N，Gill R A，et al. Ecotoxicological and interactive effects of copper and chromium on physiochemical，ultrastructural，and molecular profiling in Brassica napus L.［J］. Biomed Research International，2018，130：1-17.

［29］劉 歡，田曉璇，宋 紅. 銅脅迫對玉蟬花幼苗生長及生理指標的影響［J］. 北方園藝，2021（10）：71-79.

［30］Borisova M M，Kozuleva M A，Rudenko N N，et al. Photosynthetic electron flow to oxygen and diffusion of hydrogen peroxide through the chloroplast envelope via aquaporins［J］. Biochimica et Biophysica Acta-Bioenergetics，2012，1817（8）：1314-1321.

［31］Azooz M M，Abou-Elhamd M F，Al-Fredan M A. Biphasic effect ofcopperongrowth，proline，lipidperoxidationandantioxidant enzyme activities of wheat （Triticum aestivum cv. Hasaawi） at early growing stage［J］. Australian Journal of Crop Science，2012，6（4）：688-694.

［32］Hamed S M，Selim S，Kloeck G，et al. Sensitivity of two green microalgae to copper stress：growth，oxidative and antioxidants analyses［J］. Ecotoxicology and Environmental Safety，2017，144：19-25.

［33］Vijendra P D，Huchappa K M，Lingappa R，et al. Physiological and biochemical changes in moth bean （Vigna aconitifolia L.） under cadmium stress［J］. Journal of Botany，2016（2）：1-13.

［34］蔣 英，郭紅偉. 銅脅迫對絲瓜幼苗色素含量、光合特性及滲透調(diào)節(jié)系統(tǒng)的影響［J］. 天津農(nóng)業(yè)科學，2021，27 （7）：9-12.

［35］Foyer，H C，Noctor G. Ascorbate and glutathione：the heart of the redox hub［J］. Plant Physiology，2011，155（1）：2-18.

［36］闞世紅，劉春香，楊 超，等. 硫酸鈉對銅脅迫下生菜幼苗谷胱甘肽及代謝相關酶的影響［J］. 北方園藝，2020（8）：44-49.

［37］Sgherri C，Quartacci M F，Navari-Izzo F. Early production of activated oxygen species in root apoplast of wheat following copper excess［J］. Journal of Plant Physiology，2007，164（9）：1152-1160.

［38］李曉梅. 銅脅迫對花生種子萌發(fā)、幼苗生長和生理特性的影響［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2010，38（4）：80-82.

［39］周娜娜，武耀廷，高華援，等. 銅脅迫對花生幼苗生長及生理代謝的影響［J］. 東北農(nóng)業(yè)科學，2019，44（6）：6-9.