四川西部地區(qū)表觀健康藏族成年人群血清同型半胱氨酸參考區(qū)間的建立

姜靈路，茍?zhí)鹛穑ㄍㄓ冕t(yī)療三六三醫(yī)院檢驗科，成都 610041）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是蛋氨酸和半胱氨酸代謝的重要中間產(chǎn)物，隨著我國經(jīng)濟發(fā)展，人民生活質(zhì)量改善，各類代謝性疾病增多，導致Hcy無法降解而在體內(nèi)聚集，這引起了臨床對Hcy水平的關注[1]。Hcy水平受某些藥物[2]、維生素及葉酸水平、飲食、性別年齡等因素影響[3]，導致不同人群的Hcy水平不同。目前我國各實驗室多以廠家提供的試劑說明書為參考區(qū)間，尚無統(tǒng)一標準[4]，雖然已有部分地區(qū)建立了適合當?shù)氐腍cy參考區(qū)間，但缺乏針對四川西部地區(qū)藏族人群Hcy參考區(qū)間的研究。該地區(qū)由于地理環(huán)境特殊，居民生活、飲食習慣與現(xiàn)有的研究對象存在差異，這些差異是否會影響該地區(qū)Hcy水平未見報道，故本研究旨在通過分析該地區(qū)健康藏族人群的Hcy水平，探討其與性別、年齡的關系，建立適合該人群的參考區(qū)間，為臨床相關疾病的診斷及預后提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，選取2022年1～12月在三六三醫(yī)院體檢的表觀健康藏族成年人2 668例為研究對象。其中男性1 326例，女性1 342例，年齡18～90歲。納入標準：①四川西部地區(qū)居住時間≥1年；②年齡≥18歲；③藏族；④體檢篩查合格的健康者。排除標準：①有明確惡性腫瘤及心腦血管疾病、嚴重肝腎疾病及靜脈血栓疾病、全身炎癥性疾病、糖尿病和高血壓病史者；②妊娠或哺乳期女性；③半年內(nèi)有過維生素B6，葉酸等影響Hcy代謝的藥物使用史；④半年內(nèi)有手術史或輸血史；⑤腹部彩超等影像學異常者。

1.2 儀器與試劑 貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀，浙江夸克Hcy試劑盒（酶循環(huán)法），使用配套校準品。

1.3 方法 采集受試者空腹肘前靜脈血3ml，3 000r/min離心7min，去掉脂血、嚴重黃疸和溶血標本，在室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評在控的前提下，3h內(nèi)完成Hcy的檢測。因Hcy低濃度結(jié)果無明確臨床意義，故以P95作為單側(cè)95%CI計算參考范圍，按照美國臨床和實驗室標準協(xié)會（clinical and laboratory standards institute，CLSI）頒布的EP28-A3c文件要求，以D/R法去除離群值后，計算不同年齡段的參考區(qū)間。

1.4 統(tǒng)計學分析 使用SPSS24.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。選擇Kolmogorov-Smirnov檢驗進行正態(tài)性檢驗，正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗進行兩組間比較，單因素方差分析進行多組間比較。非正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)(M)和四分位距(IQR)表示，采用Mann-WhitneyU檢驗進行兩組間比較，Kruskal-WallisH檢驗進行多組間比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性檢驗及不同性別間Hcy水平比較 見表1。經(jīng)正態(tài)性檢驗可知，Hcy數(shù)據(jù)呈正偏態(tài)分布(S=0.946，K=1.55)，各個年齡段成年男性Hcy水平均高于女性（U=3 759.00～32 576.00），且差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。

表1 不同性別間Hcy水平比較 [M（IQR）μmol/L]

2.2 不同年齡組間Hcy水平比較 見表2，圖1。男性Hcy水平在60～70歲和＞70歲組之間，差異有統(tǒng)計學意義（F＝5.571，P＜0.05），其他年齡組間差異無統(tǒng)計學意義（F=2.180,P=0.284）。女性Hcy水平在30～40歲，40～50歲間比較，差異無統(tǒng)計學意義（F=13.116,P=0.171），其他年齡組之間，差異有統(tǒng)計學意義（F＝26.388，P＜0.05）。無論男性還是女性，Hcy水平在50歲以后升高比較明顯。

圖1 Hcy水平隨年齡變化趨勢

表2 不同年齡段Hcy參考區(qū)間比較

2.3 Hcy參考區(qū)間建立及驗證 將差異無統(tǒng)計學意義的年齡組數(shù)據(jù)合并后，得到不同性別及不同年齡組間的參考區(qū)間見表3。根據(jù)我國2012年發(fā)布的行業(yè)標準要求進行參考區(qū)間驗證[5]，選擇2023年1～3月在四川大學華西醫(yī)院西藏成辦分院體檢的表觀健康藏族男性60例（18～60，60～70和＞70歲年齡組各20例)，女性100例（18～30，30～50，50～60，60～70和＞70歲年齡組各20例）進行Hcy的檢測。各年齡組檢測結(jié)果超出參考區(qū)間的均少于2名，通過驗證。

表3 四川西部地區(qū)表觀健康藏族成年人群Hcy參考區(qū)間[M（IQR），μmol/L]

3 討論

同型半胱氨酸（Hcy）是蛋白質(zhì)代謝過程中的降解產(chǎn)物，游離狀態(tài)很少，大部分與蛋白質(zhì)以結(jié)合物形式存在，統(tǒng)稱為總Hcy[6]。一般來說，人體內(nèi)的Hcy含量很低，當機體新陳代謝出現(xiàn)障礙時，Hcy因無法降解而在體內(nèi)聚集，造成血液中Hcy含量增加。高Hcy會損傷血管壁，造成動脈粥樣硬化，導致頸動脈狹窄及斑塊形成，與高血壓和心腦血管疾病有密切關系[1,7]。目前尚無Hcy參考區(qū)間的統(tǒng)一標準，且其水平易受性別、年齡、飲食、營養(yǎng)、環(huán)境及遺傳基因的影響，具有區(qū)域性差異，因此，各實驗室應建立適宜本地區(qū)的Hcy參考值范圍。

我們研究發(fā)現(xiàn)，各個年齡段的成年男性Hcy水平均高于女性（表1，圖1）。這與其他地區(qū)[8-14]的研究結(jié)果一致，這可能與Hcy代謝路徑有關。正常情況下，Hcy在酶、維生素B和葉酸的作用下參與硫基和甲基的轉(zhuǎn)化，并降解為半胱氨酸，轉(zhuǎn)變?yōu)椴糠值鞍踪|(zhì)[15]。當葉酸和維生素B缺乏時，Hcy合成甲硫氨酸受阻，其在體內(nèi)的水平升高，Hcy濃度與葉酸、維生素B的濃度呈負相關[16]。有研究表明，健康成年女性葉酸及維生素濃度高于男性，且部分男性吸煙、喝酒等不良生活習慣可能影響Hcy代謝，這可能導致同一年齡段男性Hcy水平高于女性[17]。

本研究顯示，四川西部地區(qū)藏族成人無論男女，Hcy水平總體隨著年齡的增加而升高，且在50歲以后升高較明顯（表2，圖1），這與其他地區(qū)[8-14]的研究結(jié)果一致。這可能是因為隨著年齡增長，肝腎功能逐漸下降，蛋氨酸循環(huán)異常，Hcy代謝酶活性下降，Hcy降解減少所致。同時，中老年人腸道吸收功能不佳，食欲降低造成營養(yǎng)缺乏，使體內(nèi)葉酸及維生素B含量下降，從而導致Hcy濃度增加[18]。因此，有必要建立不同年齡段的Hcy參考區(qū)間。本研究還顯示，四川西部地區(qū)表觀健康藏族成年人群Hcy參考區(qū)間較四川德陽[11]地區(qū)偏低，這可能與四川西部地區(qū)高海拔和藏族人群高蛋白飲食為主有關，較新的Meta分析研究顯示，高海拔地區(qū)人群Hcy水平較低海拔地區(qū)低[19]，且富含維生素C、高纖維、高蛋白飲食習慣人群Hcy水平通常較低[20]。

本研究使用的試劑說明書提供的Hcy參考區(qū)間是0～15μmol/L，但本研究結(jié)果顯示男性參考區(qū)間均高于15μmol/L，女性除70歲以上人群，其他年齡組均低于15μmol/L，且所得結(jié)果均通過驗證，由此可知不應完全根據(jù)試劑說明書建立參考區(qū)間。但本研究還存在一些局限性：①本研究暫未能覆蓋兒童等特殊人群，因此未建立四川西部地區(qū)藏族兒童的Hcy參考區(qū)間；②本研究暫未納入四川西部地區(qū)漢族人群，因此未將四川西部藏族人群與漢族人群水平進行比較。后續(xù)我們將擴大樣本量和年齡范圍，區(qū)分研究對象的民族，深度分析四川不同地區(qū)、不同民族人群的Hcy水平。

總之，四川西部地區(qū)表觀健康藏族成年人群Hcy水平受性別、年齡和地域等因素影響，本研究建立了適宜該人群的Hcy參考區(qū)間，以期為心腦血管疾病的輔助診斷、預后評估等提供更為精準的實驗室數(shù)據(jù)。