小白菊內(nèi)酯抗腫瘤的作用機(jī)制研究

劉昕峰

(濱州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,山東 濱州 256600)

小白菊內(nèi)酯是一種化合物,主要用作于化工生物制藥等領(lǐng)域。小白菊內(nèi)酯的英語學(xué)名叫做Parthenolide,在CAS(國際化學(xué)文摘雜志)里編號是20554-84-1,小白菊內(nèi)酯常見分子式(化學(xué)式)是C15H20O3,分子量為248.32,熔點(diǎn)通常為mp 115-116°C,它是由C 72.55%, H 8.12%, O 19.33%組成的化合物。本文研究了小白菊內(nèi)酯抗腫瘤的作用機(jī)制,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞系及培養(yǎng)

購買人肝癌BEL-7402細(xì)胞株,在37℃ 5%CO2孵箱中用含15%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng),在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用對數(shù)生長期的細(xì)胞。

1.2 藥品與主要試劑及儀器

購買小白菊內(nèi)酯,用三蒸水將10 μg/μL儲存液配制出來;購買中國科學(xué)院血液病研究所提供的胎牛血清,環(huán)磷酰胺,GIBCO公司生產(chǎn)的RPMI 1640培養(yǎng)基,胰蛋白酶。Nikon ECLIPSE TE 300倒置式生物顯微鏡,Thermo Forma MODEL 3111 S/N 301099—4785 5%CO2培養(yǎng)箱,LS—N50L立式壓力蒸汽滅菌器,LDZ5-2低速自動平衡離心機(jī),DG202—3電熱干燥箱。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

運(yùn)用MTT比色法對細(xì)胞增殖抑制率進(jìn)行測定,倒置顯微鏡下對EBL-7402細(xì)胞形態(tài)受到0.0 μg/mL、5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯的影響進(jìn)行觀察,Giemsa染色,運(yùn)用DNA瓊脂糖凝膠電泳方法對細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測,運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法對P53蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測,并檢測增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)法對NF-kB活性進(jìn)行檢測。

1.4 免疫組化檢測結(jié)果

P53或PCNA蛋白表達(dá)陽性均為細(xì)胞核呈棕紅染色,伴或不伴胞漿染色。分細(xì)胞陽性染色程度為4級,即陰性(-)、弱陽性(+)、中陽性(++)、強(qiáng)陽性(++),依據(jù)陽性細(xì)胞比例分為4級,陽性細(xì)胞數(shù)在0～5%、5%～20%、21%～60%、61%～100%分別為-、+、++、+++,通常情況下陽性細(xì)胞分別為單個、分散存在、呈小巢狀或局灶性、塊狀及片狀分布[1-3]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 小白菊內(nèi)酯對細(xì)胞生長的影響

5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的OD值均低于0.0 μg/mL(P<0.05),5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的OD值逐漸降低(P<0.05),生長抑制率逐漸升高(P<0.05),20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的OD值均高于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL(P<0.05),生長抑制率均低于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL(P<0.05),80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的OD值均高于15.0 μg/mL(P<0.05),生長抑制率均低于15.0 μg/mL(P<0.05)。見表1。

表1 不同濃度小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的生長抑制作用

2.2 P53蛋白表達(dá)結(jié)果

空白對照、陽性對照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞P53陽性表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。見表2。

表2 免疫組化檢測BEL-7402細(xì)胞P53表達(dá)強(qiáng)度[n(%)]

2.3 增殖細(xì)胞核蛋白PCNA表達(dá)結(jié)果

空白對照、陽性對照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞PCNA陽性表達(dá)逐漸減弱(P<0.05)。見表3。

表3 免疫組化檢測BEL-7402細(xì)胞PCNA表達(dá)強(qiáng)度[n(%)]

2.4 核因子-kB表達(dá)結(jié)果

空白對照、陽性對照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞BF-kB陽性表達(dá)逐漸減弱(P<0.05)。見表4。

表4 免疫組化檢測BEL-7402細(xì)胞BF-kB表達(dá)強(qiáng)度[n(%)]

3 討論

本研究結(jié)果表明,5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的OD值均低于0.0 μg/mL,5.0 μg/mL、7.5 μg/mL、10.0 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的OD值逐漸降低,生長抑制率逐漸升高,20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞的OD值均高于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL,生長抑制率均低于15.0 μg/mL、80.0 μg/mL、100.0 μg/mL?？瞻讓φ铡㈥栃詫φ?、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞P53陽性表達(dá)逐漸增強(qiáng)?？瞻讓φ?、陽性對照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞PCNA陽性表達(dá)逐漸減弱?？瞻讓φ?、陽性對照、7.5 μg/mL、15.0 μg/mL小白菊內(nèi)酯對BEL-7402細(xì)胞BF-kB陽性表達(dá)逐漸減弱,說明小白菊內(nèi)酯抗腫瘤的作用機(jī)制可能為對人肝癌BEL-7402細(xì)胞增殖進(jìn)行抑制,并通過將P53蛋白表達(dá)增強(qiáng)并對PCNA蛋白表達(dá)進(jìn)行抑制對其凋亡進(jìn)行誘導(dǎo),NF-kB參與其信號轉(zhuǎn)導(dǎo),從而對人肝癌細(xì)胞生長進(jìn)行抑制,和相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致[4-6]。