弓形蟲病的免疫學(xué)診斷方法

阿斯喀·夏熱甫漢，葉爾保勒，王振寶，達(dá)·達(dá)布西力圖

（伊寧海關(guān)技術(shù)中心 835000）

弓形蟲病是一種人畜共患病，其傳播會嚴(yán)重影響動物的生長繁育，甚至造成大規(guī)模死亡，給畜牧業(yè)造成巨大的損失，而且也會造成人類感染，對人類的健康造成巨大威脅[1]。當(dāng)前針對此疾病尚未形成有效的治療方案，對此加強弓形蟲病的診斷非常必要。相關(guān)研究表明，弓形蟲病臨床癥狀多變，并且缺乏特異性[2]，加之常規(guī)的病原學(xué)檢測方法準(zhǔn)確率不高，耗時較長，讓此疾病的診斷愈加困難。而免疫學(xué)診斷不僅具有較高的診斷準(zhǔn)確率，而且操作便捷，能夠快速呈現(xiàn)檢測結(jié)果，成為弓形蟲病主要的診斷方式，當(dāng)前免疫學(xué)診斷方法較多，如間接血細(xì)胞凝集試驗 （IHA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等已在我國得到廣泛的推廣應(yīng)用。對此筆者查閱有關(guān)弓形蟲病免疫學(xué)診斷方法的研究文獻(xiàn)，對各種弓形蟲免疫學(xué)診斷方法的研究進展進行綜述，為弓形蟲病的有效防治提供借鑒。

1 染色試驗（DT）在弓形蟲病診斷中的研究與應(yīng)用

DT 法是弓形蟲所獨有的一種免疫學(xué)診斷方法，具有較高的靈敏性和特異性，被認(rèn)為是弓形蟲診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法。其原理是通過特異性的抗體和補體的協(xié)同作用使弓形蟲蟲體發(fā)生變性，不能被堿性美藍(lán)染色，從而實現(xiàn)弓形蟲的檢測。但由于此方法檢測過程中必須使用活的滋養(yǎng)體，檢測過程中伴有一定程度的生物安全風(fēng)險，從而限制該方法的使用，難以實現(xiàn)大范圍的推廣應(yīng)用[3]。

2 間接血細(xì)胞凝集試驗（IHA）在弓形蟲病診斷中的應(yīng)用

IHA 法檢測的原理是利用弓形蟲可溶性抗原致敏于紅細(xì)胞表面，在與特異性抗體進行結(jié)合后會出現(xiàn)明顯的凝集現(xiàn)象而實現(xiàn)對弓形蟲的檢測。此檢測方法檢測成本較低，操作較為方便，檢測時間較短，被廣泛應(yīng)用于弓形蟲病的大規(guī)模篩選當(dāng)中。全敏秀[4]在對湖南省弓形蟲感染情況調(diào)查研究中使用IHA 法進行弓形蟲病的診斷，其研究表明湖南省弓形蟲總抗體陽性率為33.6%（457/1360）。張克傳[5]選取弓形蟲感染的家兔作為研究對象，分析IHA 法的檢測效果，研究指出此檢測方法檢測總符合率為86.6%，特異性為93.3%，敏感性為47.6%。向忠菊等[6]對安徽部分地區(qū)豬弓形蟲病的血清學(xué)進行調(diào)查研究，并對IHA 檢測效果進行分析，其研究指出此方法存在致敏紅細(xì)胞穩(wěn)定性較差，易與血清產(chǎn)生交叉反應(yīng)等不足，導(dǎo)致易出現(xiàn)非特凝集情況，影響檢測的穩(wěn)定性，從而造成此檢測方法所用檢測試劑難以標(biāo)準(zhǔn)化，限制此方法的推廣應(yīng)用。

3 改良凝集試驗（MAT）在弓形蟲病診斷中的研究與應(yīng)用

MAT 法在弓形蟲檢測方面具有較高的準(zhǔn)確性以及特異性，在國際上公認(rèn)為弓形蟲檢測“金標(biāo)準(zhǔn)”。佐思[7]自主研制了改良的MAT 試劑盒，并對其性能進行分析，其研究指出自主研究的試劑盒在檢出率方面顯著優(yōu)于ELISA 試劑盒，準(zhǔn)確率方面與進口的MAT 試劑盒相一致，此試劑盒檢測結(jié)果具有良好的特異性和靈敏性，并且檢測結(jié)果重復(fù)性較好。楊娜等人[8]利用3789 份來源于遼寧省各個地區(qū)多種動物的血清樣品對MAT與IHA 兩種弓形蟲檢測方法的檢測性能進行對比，其研究結(jié)果表明，與IHA 相比，MAT 法用于弓形蟲檢測不僅具有更高的準(zhǔn)確率，而且具有更好的靈敏性和特異性。王仁通[9]利用弓形蟲感染的豬血清作為實驗對象，對比分析MAT 與IHA 兩種弓形蟲檢測方法的檢測性能，并且將檢測結(jié)果與PCR 檢測結(jié)果進行對比，研究表明MAT 檢測結(jié)果明顯優(yōu)于IHA 法，與PCR 檢測結(jié)果較為一致，并指出IHA 法在弓形蟲檢測中具有較高的漏檢率和假陽性率。Fernandes 等[10]對89 只家貓進行弓形蟲檢測，其中應(yīng)用MAT 與IHA 兩種弓形蟲檢測方法，研究指出MAT 法的陽性檢出率為26 %，高于IHA法的18%，并且雖然IHA 法在弓形蟲檢測中的相對特異性為100%，但相對敏感性只有70%。

4 間接熒光抗體試驗（IFAT）在弓形蟲病診斷中的研究與應(yīng)用

IFAT 方法在國外已經(jīng)生產(chǎn)出商業(yè)化的試劑盒，并且取得較好的應(yīng)用效果，但我國對此檢測方法的應(yīng)用較少，沒有市場基礎(chǔ)，為此商業(yè)化程度明顯低于國外一些發(fā)達(dá)國家[11]。我國也有研究者進行弓形蟲IFAT 法試劑盒的研發(fā)工作，但相應(yīng)報道較少，其中盧致民等人[12]研發(fā)了針對弓形蟲檢測的IIFA 試劑盒，其在研究中將此試劑盒的檢測性能與德國Viro-Immun 的試劑盒Youden 進行了對比，兩種試劑盒具有較為一致的敏感性和特異性，而且盧致民等人研發(fā)的試劑盒在4℃條件下保存期能夠達(dá)到6 個月。雖然我國對于IFAT 法的應(yīng)用和研究略顯不足，但此檢測方法操作較為方便，制片染色后就能夠利用顯微鏡進行檢測結(jié)果的判定，具有較為廣闊的應(yīng)用前景。

5 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）在弓形蟲病診斷中的研究與應(yīng)用

ELISA 法是當(dāng)前弓形蟲檢測中使用最多最為廣泛的一種診斷方法。羅才慶等人[13]對ELISA 法在弓形蟲抗體檢測中的應(yīng)用效果進行調(diào)查分析，調(diào)查結(jié)果表明此檢測方法具有較高的符合率，能夠有效應(yīng)用于豬弓形蟲病的診斷。張靜[14]對32 份豬血清利用自主構(gòu)建的弓形蟲阻斷ELISA 檢測方法進行檢測，其中檢測方法中應(yīng)用的抗體為弓形蟲單克隆抗體B6G，檢測結(jié)果表明此檢測方法的陽性符合率為87.5 %，與MAT 法結(jié)果相一致。李祎等人[15]對ELISA 檢測方法進行改良，構(gòu)建循環(huán)抗原雙抗體夾心ELISA 法，研究表明此檢測方法與nPCR 法的檢測結(jié)果對比無顯著差異，并且此檢測方法可以對血清中最低1.5 ng/mLGRA1 抗原進行檢測，明顯優(yōu)于商品化的試劑盒檢測結(jié)果。Liyanage 等人[16]對4 個數(shù)據(jù)庫當(dāng)中的57 篇弓形蟲ELISA 法檢測相關(guān)文獻(xiàn)進行分析，其調(diào)查結(jié)果表明，當(dāng)前間接ELISA 和自制ELISA 是弓形蟲檢測最為常用的ELISA 法。當(dāng)前國內(nèi)生產(chǎn)的診斷試劑盒在質(zhì)量方面仍與一些發(fā)達(dá)國家進口的試劑盒存在差異，但也具有較好的診斷準(zhǔn)確率，能夠滿足國內(nèi)的應(yīng)用需求。其中黃翠琴等人[17]對國內(nèi)三種不同企業(yè)生產(chǎn)的弓形蟲抗體檢測試劑盒的檢測穩(wěn)定性進行分析，研究指出國內(nèi)生產(chǎn)的弓形蟲IgG 抗體檢測試劑盒具有較為穩(wěn)定的檢測性能，能夠滿足我國豬場的弓形蟲日常檢測需求。

6 膠體金快速診斷技術(shù)在弓形蟲病診斷中的研究與應(yīng)用

膠體金快速診斷技術(shù)是膠體金標(biāo)記、免疫檢測與層析分析三種不同技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，檢測過程中不會產(chǎn)生污染，而且操作方便，能夠呈現(xiàn)直觀的結(jié)果，從而應(yīng)用較為廣泛。盧愛桃等[18]人利用254 只犬貓作為實驗對象，對膠體金免疫層析法（GICA）在弓形蟲抗體檢測中的檢測性能與ELISA 法進行對比，研究結(jié)果顯示兩種檢測方法的檢測結(jié)果無顯著差異。與ELISA 相比，GICA 法不僅具有較為一致的靈敏性，而且操作更為簡單，且無需專業(yè)設(shè)備，更適合進行推廣應(yīng)用。張寧[19]以289 份血清作為樣本，對自主研制的弓形蟲抗體膠體金試紙進行檢測分析，其中自制膠體金試紙使用GRA6-GRA2 蛋白作為標(biāo)記抗原，其研究表明自制膠體金試紙陽性檢出率為2.42%，高于市售間接血凝試劑盒的2.07%，并且兩種檢測方法符合率達(dá)到99.5%。卓國榮[20]應(yīng)用280 份犬血清作為實驗樣本對膠體金快速診斷技術(shù)的檢測效果進行分析，其研究表明此檢測方法的檢測陽性率與IHA 法較為一致，并且此檢測方法所用的測試試紙制作更加簡便，而且檢測更加靈活快捷，比IHA 法更適合進行弓形蟲的快速診斷。

7 小結(jié)

本文對當(dāng)前弓形蟲病免疫學(xué)診斷方法的相關(guān)研究進行綜述，發(fā)現(xiàn)當(dāng)前應(yīng)用于弓形蟲病診斷的免疫學(xué)方法較多，并且一些成果已經(jīng)得到廣泛的推廣應(yīng)用，在防控弓形蟲病傳播中發(fā)揮積極作用。但當(dāng)前弓形蟲病診斷中使用的免疫學(xué)檢測方法并不統(tǒng)一，各種檢測方法均有各自的優(yōu)缺點，很多研究方法仍只局限于試驗階段，并未有大量的應(yīng)用實踐，一些研究方法雖然經(jīng)過試驗驗證，但選取的研究對象較少，無法確保適應(yīng)于實際檢驗。對此，弓形蟲病免疫學(xué)診斷方法仍需繼續(xù)進行深化研究，其后研究方向應(yīng)重點放在：一是可進行市場推廣應(yīng)用的弓形蟲病免疫學(xué)診斷試劑盒研究；二是多種檢測方法結(jié)合提升弓形蟲病免疫學(xué)診斷的敏感性和特異性；三是借鑒國外經(jīng)驗，優(yōu)化我國當(dāng)前的弓形蟲病免疫學(xué)診斷方法。