• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    膀胱癌患者的血清miR-1305和miR-145表達(dá)水平及其臨床意義▲

    2023-11-07 12:13:00王鐳播岑壯頂
    廣西醫(yī)學(xué) 2023年16期
    關(guān)鍵詞:賦值膀胱癌分化

    何 偉 胥 豐 王鐳播 岑壯頂

    (北京積水潭醫(yī)院貴州醫(yī)院外科,貴州省貴陽市 550014)

    膀胱癌是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,2020年全球約有57萬例膀胱癌新發(fā)病例,死亡病例約21萬例[1]。目前膀胱癌的治療手段包括膀胱腫瘤電切術(shù)或根治術(shù)、化療、放療等,但是該病復(fù)發(fā)率高,容易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及局部浸潤[2]。膀胱癌患者的病情發(fā)展比較隱匿,雖然早期可表現(xiàn)出血尿等臨床癥狀,但疾病的早期診斷水平總體較低[3]。因此,探索膀胱癌的新型生物標(biāo)志物及有效治療靶點至關(guān)重要。miRNA已被證實與多種人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。miRNA在血清或血漿中具有較高的穩(wěn)定性,是診斷腫瘤的潛在新型標(biāo)志物。miR-1305在調(diào)節(jié)干細(xì)胞增殖、分化和遷移中發(fā)揮重要作用[5]。研究表明,過表達(dá)miR-1305可抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡[6]。miR-145是近年來研究較多的與腫瘤相關(guān)的miRNA,其在多種腫瘤中具有抑制癌細(xì)胞生長的作用,可作為抑癌基因參與癌癥發(fā)生、發(fā)展的過程[7]。但是否可以通過血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平來預(yù)測膀胱癌的發(fā)生及判斷預(yù)后,目前的相關(guān)研究較少。因此,本研究主要分析膀胱癌患者的血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平及其與患者臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系,以及其在膀胱癌診斷中的應(yīng)用價值。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選取2017年1月至2019年1月在我院住院治療的83例膀胱癌患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)后病理檢查結(jié)果符合膀胱癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[8];(2)首次確診;(3)術(shù)前未接受手術(shù)、化療、放療;(4)患者及家屬對本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并尿路感染、尿路結(jié)石等泌尿系統(tǒng)疾病者;(2)伴有免疫性疾病或血液系統(tǒng)疾病者;(3)拒絕隨訪者;(4)伴有心、肝、腎功能嚴(yán)重?fù)p傷者;(5)一般資料不完整者。83例膀胱癌患者中,男性52例、女性31例;年齡38~80(62.41±6.23)歲,其中<60歲者42例,≥60歲者41例;腫瘤類型為肌層浸潤型32例,非肌層浸潤型51例;腫瘤位置位于膀胱體28例,膀胱底35例,三角區(qū)20例;腫瘤直徑≤3 cm者46例,>3 cm者37例;腫瘤浸潤未侵及漿膜層(淺層)38例,侵及漿膜層(深層)45例;腫瘤分期為Ⅰ+Ⅱ期38例,Ⅲ+Ⅳ期45例;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例,未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例;腫瘤高/中分化程度46例,腫瘤低分化程度37例。選取同期于本院進(jìn)行體檢的83例健康志愿者作為對照組,其中男性51例、女性32例,年齡38~80(62.61±6.33)歲。兩組研究對象的性別分布及年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

    1.2 血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平的檢測 于患者入院后第2天清晨、健康志愿者體檢當(dāng)天,采集其空腹靜脈血3 mL,經(jīng)4 ℃、3 000 r/min離心10 min后分離血清,于-80 ℃保存。按照RNA提取試劑盒(北京盒子生工科技有限公司,貨號:AKNA001-1)操作說明書,采用TRIzol法提取血清總RNA。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(QIAGEN公司,貨號:205311)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA后,以U6為內(nèi)參基因,采用實時熒光定量PCR儀(Applied Biosystems公司,型號:ABI 7500)進(jìn)行擴增。反應(yīng)體系共20 μL,包括2×SYBR qPCR Green Master Mix(北京索萊寶科技有限公司,貨號:SR1110)10 μL、PCR上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL、cDNA(50 ng/μL)2 μL,加ddH2O至20 μL。PCR反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性 30 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共40個循環(huán);72 ℃再延伸10 min。U6上游引物為5′-GCTGGACTCTAGGGTGCAAG-3′,下游引物為5′-GAGCATACCAGGTGGTAGTAG-3′;miR-1305上游引物為5′-ACAGGCCGGGACAAGTGCAATA-3′,下游引物為5′-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG-3′;miR-145上游引物為5′-GTCCAGTTTTCCCAGG-3′,下游引物為5′-GAGCAGGCTGGAGAA-3′。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。采用2-ΔΔCt法計算miR-1305、miR-145的相對表達(dá)水平。

    1.3 隨訪 術(shù)后對所有患者進(jìn)行隨訪,每月至少進(jìn)行1次電話或微信隨訪,半年至少進(jìn)行兩次門診隨訪,隨訪時間為3年。隨訪截止時間為2022年1月30日或患者出現(xiàn)因膀胱癌死亡時。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示,組間比較采用χ2檢驗;計量資料以(x±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗;采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線分析血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平診斷膀胱癌的臨床價值,采用Z檢驗比較不同指標(biāo)之間的曲線下面積(area under the curve,AUC);采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析,采有l(wèi)og-rank檢驗比較生存曲線之間的差異;采用多因素COX回歸模型分析膀胱癌患者預(yù)后的影響因素。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 兩組研究對象血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平的比較 膀胱癌組的血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平低于對照組(P<0.05),見表1。

    表1 兩組研究對象血清miR-1305和miR-145相對表達(dá)水平的比較(x±s)

    2.2 膀胱癌患者血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平與其臨床病理特征的關(guān)系 根據(jù)膀胱癌患者血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平的中位值(分別為0.45、0.50),將其分為高表達(dá)患者(n=41)和低表達(dá)患者(n=42)。TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化的膀胱癌患者血清miR-1305、miR-145高表達(dá)的比例均分別低于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ 期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中/高分化者,且腫瘤直徑>3cm的膀胱癌患者血清miR-1305高表達(dá)的比例低于腫瘤直徑≤3cm者(P<0.05),見表2。

    2.3 血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平與膀胱癌患者預(yù)后的關(guān)系 血清miR-1305高表達(dá)、低表達(dá)患者的3年生存率分別為87.80%、69.05%,血清miR-145高表達(dá)、低表達(dá)患者的3年生存率分別為90.24%、66.67%,血清miR-1305、miR-145高表達(dá)患者的3年生存率分別高于血清miR-1305、miR-145低表達(dá)患者(χ2=4.628,P=0.031;χ2=6.675,P=0.010),見圖1、圖2。

    圖1 不同血清miR-1305表達(dá)水平膀胱癌患者的生存曲線圖

    圖2 不同血清miR-145表達(dá)水平膀胱癌患者的生存曲線圖

    2.4 膀胱癌患者預(yù)后影響因素的多因素COX回歸分析 以膀胱癌患者術(shù)后3年內(nèi)的預(yù)后為因變量(死亡=1,生存=0),以TNM分期(“Ⅰ+Ⅱ期”賦值“0”,“Ⅲ+Ⅳ期”賦值“1”)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(“否”賦值“0”,“是”賦值“1”)、腫瘤分化程度(“中/高分化”賦值“0”,“低分化”賦值“1”)、血清miR-1305表達(dá)水平(“miR-1305低表達(dá)”賦值“0”,“miR-1305高表達(dá)”賦值“1”)、血清miR-145表達(dá)水平(“miR-145低表達(dá)”賦值“0”,“miR-145高表達(dá)”賦值“1”)為自變量,進(jìn)行多因素COX回歸分析。結(jié)果顯示,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是膀胱癌患者死亡的危險因素,血清miR-1305高表達(dá)、miR-145高表達(dá)是其保護因素(P<0.05),見表3。

    表3 多因素COX回歸分析結(jié)果

    2.5 血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平對膀胱癌的診斷價值 血清miR-1305表達(dá)水平診斷膀胱癌的AUC為0.779,敏感度為93.98%,特異度為60.24%,最佳截斷值為0.61;血清miR-145表達(dá)水平診斷膀胱癌的AUC為0.783,敏感度為68.67%,特異度為79.52%,最佳截斷值為0.63;二者聯(lián)合診斷(并聯(lián))的AUC為0.874,敏感度為90.36%,特異度為74.70%。二者聯(lián)合診斷的AUC大于血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平單獨診斷(Z=2.810,P=0.005;Z=2.686,P=0.007),見圖3。

    圖3 血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平單獨和聯(lián)合診斷膀胱癌的ROC曲線圖

    3 討 論

    膀胱癌的主要類型為肌層浸潤型膀胱癌和非肌層浸潤型膀胱癌,其中非肌層浸潤型膀胱癌患者容易出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,預(yù)后往往不佳[9]。隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步,目前治療膀胱癌的手段可在一定程度上延長患者的生存時間,但是由于膀胱癌的臨床癥狀較為隱匿,早期診斷的難度較大。診斷膀胱癌的“金標(biāo)準(zhǔn)”為膀胱鏡檢聯(lián)合病理檢查,但是其侵入性給患者帶來極大的痛苦與不適[10]。實驗室尿檢具有較高的特異度,但是其靈敏度極低,容易出現(xiàn)漏診[11]。因此,尋找較高效能的血清標(biāo)志物對膀胱癌的早期診斷及預(yù)后改善具有重要意義。

    miRNA是一類保守非編碼RNA,其通過調(diào)控下游靶基因廣泛參與多種生物過程,包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育及應(yīng)激反應(yīng)等[12]。研究表明,miRNA可作為腫瘤抑制因子或促癌因子在調(diào)控癌癥進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[13]。例如,有學(xué)者指出,miR-1305在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)下調(diào),miR-1305表達(dá)降低與患者預(yù)后不良顯著相關(guān),其通過靶向鼠雙微體2基因來抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖[6]。He等[14]報告,宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中miR-1305水平降低,其通過抑制淋巴特異性解旋酶抗體來抑制宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。Su等[15]發(fā)現(xiàn),環(huán)狀RNA circRIP2可對miR-1305發(fā)揮海綿作用,從而使膀胱癌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)化生長因子β2水平升高,并激活磷酸化Smad3,進(jìn)而加速膀胱癌進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示,膀胱癌患者的血清miR-1305表達(dá)水平低于健康志愿者(P<0.05),這可能是因為miR-1305表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長因子的表達(dá),使Smad3信號通路被激活,從而發(fā)揮促癌作用[15]。本研究結(jié)果還顯示,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化、腫瘤直徑>3 cm的膀胱癌患者血清miR-1305高表達(dá)的比例分別低于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中/高分化、腫瘤直徑≤3 cm者,且血清miR-1305高表達(dá)的膀胱癌患者3年生存率高于血清miR-1305低表達(dá)患者,血清miR-1305高表達(dá)是膀胱癌患者死亡的保護因素(P<0.05)。以上結(jié)果提示miR-1305在膀胱癌患者體內(nèi)發(fā)揮抑癌作用,其表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)癌癥進(jìn)展,導(dǎo)致患者預(yù)后不良。

    Michael等[16]首次報告miR-145在結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)水平下調(diào),參與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展。隨后,不斷有學(xué)者報告miR-145與其他癌癥的關(guān)系。例如,Su等[17]發(fā)現(xiàn),miR-145在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)水平下調(diào),其通過靶向RAR相關(guān)孤兒受體抑制食管癌細(xì)胞的增殖與遷移。王敬等[18]發(fā)現(xiàn),miR-145可通過靶向葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1來調(diào)節(jié)蛋白激酶B信號通路,從而抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移與增殖。本研究結(jié)果顯示,膀胱癌患者的血清miR-145表達(dá)水平低于健康志愿者(P<0.05),這可能是因為miR-145可通過靶向作用下游基因來調(diào)控相關(guān)信號通路,從而抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移。本研究結(jié)果還顯示,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為低分化的膀胱癌患者血清miR-145高表達(dá)的比例分別低于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中/高分化者,且血清miR-145高表達(dá)的膀胱癌患者3年生存率高于血清miR-145低表達(dá)患者,血清miR-145高表達(dá)是膀胱癌患者死亡的保護因素(P<0.05)。以上結(jié)果說明miR-145也在膀胱癌患者體內(nèi)發(fā)揮抑癌作用,且與患者的預(yù)后密切相關(guān)。

    此外,本研究進(jìn)一步分析了血清miR-1305、miR-145表達(dá)水平對膀胱癌的診斷價值,結(jié)果顯示二者對膀胱癌均有一定的診斷價值,且二者聯(lián)合診斷的效能優(yōu)于二者單獨診斷。由此可見,miR-1305、miR-145有望成為診斷膀胱癌的血清學(xué)標(biāo)志物。

    綜上所述,膀胱癌患者血清中的miR-1305、miR-145表達(dá)水平下調(diào),與患者臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系密切,二者聯(lián)合檢測對膀胱癌具有較高的診斷價值,有望成為診斷膀胱癌的新型血清學(xué)標(biāo)志物。但二者具體的作用機制及相互之間存在的聯(lián)系有待進(jìn)一步研究。此外,本研究未分析治療方案對患者預(yù)后造成的影響,在后續(xù)研究中可將其納入研究內(nèi)容以進(jìn)一步驗證本研究結(jié)論。

    猜你喜歡
    賦值膀胱癌分化
    關(guān)于1 1/2 … 1/n的一類初等對稱函數(shù)的2-adic賦值
    L-代數(shù)上的賦值
    VI-RADS評分對膀胱癌精準(zhǔn)治療的價值
    兩次中美貨幣政策分化的比較及啟示
    分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
    Analysis of compatibility rules and mechanisms of traditional Chinese medicine for preventing and treating postoperative recurrence of bladder cancer
    強賦值幺半群上的加權(quán)Mealy機與加權(quán)Moore機的關(guān)系*
    利用賦值法解決抽象函數(shù)相關(guān)問題オ
    膀胱癌患者手術(shù)后癥狀簇的聚類分析
    miRNA-148a在膀胱癌組織中的表達(dá)及生物信息學(xué)分析
    三级国产精品欧美在线观看| 中国三级夫妇交换| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 在线观看三级黄色| 国精品久久久久久国模美| 老司机亚洲免费影院| 国产一级毛片在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久热精品热| 久久久久视频综合| 精品国产国语对白av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 涩涩av久久男人的天堂| 女人久久www免费人成看片| 美女大奶头黄色视频| av福利片在线| 色视频在线一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 飞空精品影院首页| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品视频女| 桃花免费在线播放| 久久 成人 亚洲| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 91国产中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 国产探花极品一区二区| 尾随美女入室| 99久久人妻综合| a级毛片黄视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 男女边摸边吃奶| 边亲边吃奶的免费视频| 国产高清不卡午夜福利| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产男女超爽视频在线观看| 波野结衣二区三区在线| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久国产精品大桥未久av| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品一区二区在线观看99| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 欧美精品一区二区免费开放| 男女边吃奶边做爰视频| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩电影二区| 久久99一区二区三区| 国产成人91sexporn| 久久午夜综合久久蜜桃| 蜜桃国产av成人99| 水蜜桃什么品种好| 如何舔出高潮| www.av在线官网国产| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 性色avwww在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 欧美+日韩+精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲av福利一区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 97在线人人人人妻| 国产精品久久久久久久电影| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 超碰97精品在线观看| kizo精华| 欧美精品一区二区免费开放| 日日摸夜夜添夜夜爱| 在线观看www视频免费| 午夜视频国产福利| 2022亚洲国产成人精品| 综合色丁香网| 99热这里只有精品一区| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲综合色惰| 午夜老司机福利剧场| 欧美成人午夜免费资源| 99视频精品全部免费 在线| 免费大片黄手机在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久久久人妻| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲成人一二三区av| 免费观看性生交大片5| 久久综合国产亚洲精品| 欧美另类一区| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 91国产中文字幕| 日韩人妻高清精品专区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 99国产精品免费福利视频| 亚洲经典国产精华液单| 大话2 男鬼变身卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲无线观看免费| 日本免费在线观看一区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲国产av影院在线观看| 精品久久国产蜜桃| 久久97久久精品| 欧美日韩av久久| 欧美日韩视频精品一区| 少妇高潮的动态图| 国产av码专区亚洲av| 满18在线观看网站| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产男人的电影天堂91| 亚洲精品av麻豆狂野| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 少妇熟女欧美另类| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲人成77777在线视频| 在线天堂最新版资源| 久久99精品国语久久久| 七月丁香在线播放| 久久午夜综合久久蜜桃| 99久国产av精品国产电影| 欧美亚洲日本最大视频资源| 男人添女人高潮全过程视频| 免费大片黄手机在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲国产av影院在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲四区av| 免费人成在线观看视频色| 成人毛片60女人毛片免费| 久久人人爽人人爽人人片va| 日韩 亚洲 欧美在线| 两个人免费观看高清视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美性感艳星| 久久久久久人妻| 免费高清在线观看日韩| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 日韩大片免费观看网站| 日韩不卡一区二区三区视频在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 女人精品久久久久毛片| 有码 亚洲区| 精品久久蜜臀av无| 久久久久视频综合| 欧美日韩在线观看h| 26uuu在线亚洲综合色| 蜜臀久久99精品久久宅男| 视频在线观看一区二区三区| 国产一区二区在线观看日韩| 制服诱惑二区| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲av中文av极速乱| www.色视频.com| tube8黄色片| h视频一区二区三区| 久久婷婷青草| 精品人妻在线不人妻| 免费av不卡在线播放| 日本免费在线观看一区| 视频在线观看一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 尾随美女入室| 男女边摸边吃奶| 国产男人的电影天堂91| 精品久久久精品久久久| 婷婷成人精品国产| 午夜视频国产福利| 欧美三级亚洲精品| 国产国语露脸激情在线看| 青青草视频在线视频观看| 在线 av 中文字幕| 国产探花极品一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 99久国产av精品国产电影| 蜜桃在线观看..| 国产永久视频网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产片特级美女逼逼视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲综合色惰| 亚洲av综合色区一区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品欧美亚洲77777| 欧美丝袜亚洲另类| 国产av码专区亚洲av| 制服人妻中文乱码| 精品一区二区三卡| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 51国产日韩欧美| 麻豆成人av视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 精品人妻熟女av久视频| 黄色配什么色好看| 亚洲综合色网址| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲成人av在线免费| 高清av免费在线| 美女视频免费永久观看网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日韩大片免费观看网站| 欧美亚洲日本最大视频资源| av.在线天堂| 中文字幕最新亚洲高清| 在线观看一区二区三区激情| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 观看美女的网站| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲av成人精品一二三区| 国产片内射在线| 亚洲成人一二三区av| av.在线天堂| 青青草视频在线视频观看| 丝袜喷水一区| 日本午夜av视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 夫妻性生交免费视频一级片| 制服人妻中文乱码| 国产高清三级在线| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 卡戴珊不雅视频在线播放| 成人综合一区亚洲| 成人黄色视频免费在线看| 一区二区三区免费毛片| 少妇的逼水好多| 美女主播在线视频| 五月天丁香电影| 亚洲,欧美,日韩| 成人国产av品久久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久97久久精品| 青春草视频在线免费观看| 久久99蜜桃精品久久| 丝袜美足系列| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 777米奇影视久久| 国产69精品久久久久777片| 国产成人精品在线电影| 九色成人免费人妻av| 在线观看www视频免费| 插逼视频在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 一区二区av电影网| 性色av一级| 黑丝袜美女国产一区| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 日本av免费视频播放| 能在线免费看毛片的网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 极品人妻少妇av视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| .国产精品久久| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲国产色片| 少妇高潮的动态图| 校园人妻丝袜中文字幕| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 久久久久人妻精品一区果冻| 国产色婷婷99| 精品久久久久久久久亚洲| a级毛片黄视频| 久久久国产精品麻豆| 制服人妻中文乱码| 成人午夜精彩视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av播播在线观看一区| 成年人午夜在线观看视频| av有码第一页| 97在线视频观看| 97在线人人人人妻| 一区在线观看完整版| 黄色视频在线播放观看不卡| av.在线天堂| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲性久久影院| 日韩av免费高清视频| 亚洲国产精品国产精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产免费一级a男人的天堂| 大片免费播放器 马上看| 国产精品人妻久久久久久| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久热精品热| 热99国产精品久久久久久7| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 男女国产视频网站| 日韩电影二区| 午夜激情久久久久久久| 免费少妇av软件| 亚洲天堂av无毛| 国产视频内射| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产 精品1| 国产av精品麻豆| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产不卡av网站在线观看| 国产成人精品婷婷| 久久久久久久亚洲中文字幕| 桃花免费在线播放| 飞空精品影院首页| 69精品国产乱码久久久| 欧美丝袜亚洲另类| 成人手机av| 亚洲人与动物交配视频| 视频在线观看一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 天堂中文最新版在线下载| 一区二区三区免费毛片| .国产精品久久| av国产精品久久久久影院| 成人午夜精彩视频在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久99精品国语久久久| 国产精品99久久99久久久不卡 | 女人精品久久久久毛片| 18禁观看日本| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 国产综合精华液| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产日韩欧美视频二区| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品熟女久久久久浪| 日本黄色日本黄色录像| av一本久久久久| av在线老鸭窝| www.色视频.com| 国产精品蜜桃在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 精品一区二区三区视频在线| 大话2 男鬼变身卡| 日本欧美国产在线视频| 欧美三级亚洲精品| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲成色77777| 天堂8中文在线网| 另类亚洲欧美激情| 久久久精品94久久精品| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久久精品区二区三区| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲第一区二区三区不卡| 好男人视频免费观看在线| 日本黄色日本黄色录像| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久久精品免费免费高清| 成人国产av品久久久| 日本黄色片子视频| 18在线观看网站| 女性被躁到高潮视频| 熟女电影av网| 亚洲精品国产av成人精品| 国产成人精品福利久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 熟女av电影| 一级a做视频免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 日韩大片免费观看网站| 久久久a久久爽久久v久久| 极品人妻少妇av视频| 国产深夜福利视频在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 中文字幕制服av| 久久99蜜桃精品久久| 午夜激情福利司机影院| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产亚洲一区二区精品| 中文欧美无线码| 少妇熟女欧美另类| 国产精品无大码| 亚洲av综合色区一区| 在线观看免费日韩欧美大片 | 18在线观看网站| 亚洲人与动物交配视频| 美女大奶头黄色视频| 成年人午夜在线观看视频| 天堂中文最新版在线下载| 热99国产精品久久久久久7| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 免费观看的影片在线观看| 亚洲久久久国产精品| 亚洲伊人久久精品综合| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产一级毛片在线| 我的老师免费观看完整版| 亚洲国产最新在线播放| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美少妇被猛烈插入视频| 日韩电影二区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲精品国产av蜜桃| 日本黄大片高清| 日韩强制内射视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 日韩伦理黄色片| 国产片特级美女逼逼视频| 在线看a的网站| av国产精品久久久久影院| tube8黄色片| 日韩制服骚丝袜av| 最近的中文字幕免费完整| 日韩在线高清观看一区二区三区| 少妇人妻久久综合中文| 日本91视频免费播放| 亚洲美女黄色视频免费看| 婷婷色av中文字幕| 视频在线观看一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 午夜日本视频在线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| a级毛片在线看网站| 丰满乱子伦码专区| 99国产精品免费福利视频| 亚洲av福利一区| 另类亚洲欧美激情| 有码 亚洲区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲无线观看免费| 久久ye,这里只有精品| 伦精品一区二区三区| 国产精品免费大片| 亚洲少妇的诱惑av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 乱人伦中国视频| 亚洲综合色网址| 精品亚洲成国产av| 老司机影院毛片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲欧美色中文字幕在线| a级毛片免费高清观看在线播放| 丝袜喷水一区| 97在线视频观看| 国产成人精品一,二区| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久久国产网址| 一本久久精品| 国产av精品麻豆| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲经典国产精华液单| 成年人午夜在线观看视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久精品夜色国产| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 丝袜在线中文字幕| 国产 一区精品| 国产深夜福利视频在线观看| av免费观看日本| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产一区二区在线观看日韩| 在线观看www视频免费| 极品人妻少妇av视频| 少妇 在线观看| 一区在线观看完整版| 久久精品国产亚洲网站| 国产一区二区在线观看日韩| 婷婷成人精品国产| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产高清三级在线| 国产精品女同一区二区软件| 国产精品一区二区在线观看99| 91精品伊人久久大香线蕉| 日本-黄色视频高清免费观看| 最近的中文字幕免费完整| 日本黄大片高清| 欧美丝袜亚洲另类| 成人国语在线视频| 亚洲不卡免费看| 精品午夜福利在线看| 97超碰精品成人国产| 伦理电影免费视频| 伦理电影大哥的女人| 日韩强制内射视频| 老司机影院毛片| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 人妻 亚洲 视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲国产精品成人久久小说| 日本-黄色视频高清免费观看| 一级毛片 在线播放| 亚洲不卡免费看| 国产免费福利视频在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 蜜桃国产av成人99| 欧美日韩成人在线一区二区| 91在线精品国自产拍蜜月| 97超碰精品成人国产| 成人国语在线视频| 丝袜喷水一区| 亚洲精品乱久久久久久| 国产毛片在线视频| 视频中文字幕在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲国产精品国产精品| 桃花免费在线播放| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 久久影院123| 老女人水多毛片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 97精品久久久久久久久久精品| 视频区图区小说| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲伊人久久精品综合| 美女视频免费永久观看网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 尾随美女入室| 97超视频在线观看视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 18禁在线播放成人免费| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产精品久久久久久久久免| 观看av在线不卡| 成年女人在线观看亚洲视频| 久久久精品94久久精品| 国产av精品麻豆| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 色5月婷婷丁香| 午夜福利影视在线免费观看| 熟女电影av网| 婷婷色av中文字幕| 国产永久视频网站| 久久精品久久久久久久性| 国产成人免费观看mmmm| 免费黄频网站在线观看国产| 一区在线观看完整版| 国产淫语在线视频| av免费在线看不卡| 亚洲成人一二三区av| 大香蕉久久成人网| 热re99久久精品国产66热6| 超色免费av| 亚洲av成人精品一区久久| 在线观看三级黄色| 五月开心婷婷网| 亚洲情色 制服丝袜| 中文字幕人妻丝袜制服| 一本大道久久a久久精品| 日本色播在线视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 有码 亚洲区| 免费少妇av软件| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 高清欧美精品videossex| 99re6热这里在线精品视频| 曰老女人黄片| 国产精品久久久久久久电影| 如何舔出高潮| 视频在线观看一区二区三区| 国产色爽女视频免费观看| av在线播放精品| 久久久国产精品麻豆| 国产精品一二三区在线看| 观看av在线不卡| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产精品一区三区| 久久99一区二区三区| 水蜜桃什么品种好| www.色视频.com| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 中文字幕av电影在线播放| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 香蕉精品网在线| 日本vs欧美在线观看视频| 色5月婷婷丁香| 国产高清有码在线观看视频| 伊人亚洲综合成人网| 最后的刺客免费高清国语| 免费观看a级毛片全部| av专区在线播放| 9色porny在线观看| 五月开心婷婷网| 日本爱情动作片www.在线观看| 麻豆成人av视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 少妇人妻精品综合一区二区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 一区二区三区四区激情视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 欧美日韩av久久|