日立7600檢測血清淀粉樣蛋白A的實驗室性能驗證

何一梟 吳前星 熊燏 蔡群芳 李秀文 赫娜*

1 海南醫(yī)學院熱帶醫(yī)學院 （海南 ?？?571199）

2 海南省腫瘤醫(yī)院 （海南 ?？?570312）

3 昆明醫(yī)科大學海源學院 （云南 昆明 650000）

內(nèi)容提要： 目的：日立7600型全自動生化分析儀檢測血清淀粉樣蛋白A的性能驗證。方法：參照CLSI及CNAS有關檢測系統(tǒng)性能驗證文件方法通過實驗對血清淀粉樣蛋白A的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍、參考區(qū)間進行評價。結(jié)果：批間精密度變異系數(shù)分別為5.38%，2.29%，小于規(guī)定聲稱值10%；批內(nèi)精密度變異系數(shù)分別為4.87%、1.82%，均小于規(guī)定聲稱值8%。正確度偏倚為-2.1%，＜10%；臨床可報告范圍上限為3072mg/L；廠家說明書的線性范圍、參考范圍符合要求。結(jié)論：日立7600全自動生化分析儀搭載重慶中元生物技術有限公司血清淀粉樣蛋白A試劑盒檢測血清淀粉樣蛋白A符合質(zhì)量要求，能夠為臨床提供可靠的依據(jù)。

血清淀粉樣蛋白A（Serum Amyloid A，SAA）是一種多基因編碼的非特異性急性正向時相反應蛋白，人類編碼該蛋白的基因序列集中在十一號染色體短臂上，長短為150kb，目前臨床上檢測的SAA均為SAA1和SAA2基因編碼的急性期SAA（A-SAA）[1,2]。SAA半衰期短，當人體遭遇病毒感染、炎癥刺激時，SAA比C反應蛋白和降鈣素原更敏感，可在3～6h內(nèi)升高100～1000倍，因而在感染性疾病的診斷和鑒別方面，SAA更受臨床醫(yī)生的青睞，在臨床中的使用日益廣泛[3-5]。有研究表明，SAA可以誘導基質(zhì)金屬蛋白酶表達、調(diào)節(jié)血管生成，在腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中起重要作用[6]。SAA在預示疾病加重及呼吸困難加重或痰液性狀改變等程度變化優(yōu)于C反應蛋白，對鑒別有呼吸衰竭危險的住院患者有幫助[7,8]。SAA還可以指導胃潰瘍患者臨床用藥、在早期胃癌的診斷、鑒別診斷以及分期中具有重要作用，對評估胃癌患者的預后情況有重要應用價值[9]。此外，SAA在心血管疾病、2型糖尿病、銀屑病、移植排斥反應等多種疾病的臨床檢測中亦發(fā)揮重要作用。

依據(jù)《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》和ISO15189文件要求，臨床實驗室應對實驗室內(nèi)檢測系統(tǒng)的檢測性能進行驗證[10-14]。因此，本研究為保證臨床實驗室檢測SAA能夠獲得準確可靠的結(jié)果，遵照CNAS指南有關檢測系統(tǒng)性能驗證文件要求對本科室使用的日立7600全自動生化分析儀搭載重慶中元生物技術有限公司SAA試劑盒檢測SAA的分析性能進行驗證。

1.資料與方法

1.1 一般資料

樣本來源：海南省腫瘤醫(yī)院體檢中心體檢者的新鮮血清標本。樣本處理1：分別混合、離心高濃度樣本和低濃度樣本，得到本實驗所需的低值（Low，L）和高值（High，H）標本。按照以下配方配制混合標本：L，0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H，H，每份混合標本體積至少滿足3次測定。樣本處理2：用原廠技術資料文件注明的稀釋液按照2、4、8、16倍稀釋。樣本處理3：排除糖尿病、心臟病、腎功能衰竭、血脂異常、更年期綜合征人群，經(jīng)臨床診斷確認為健康成年人的血清樣本。剔除脂血和溶血等不合格標本后，確?？捎脴吮驹诟髂挲g段均有分布，隨機抽取體檢標本20例。

1.2 方法

1.2.1 對應參數(shù)信息

對應參數(shù)信息見表1。

表1. 對應參數(shù)信息（SAA中元）

1.2.2 精密度驗證

參照EP15-A2文件測量樣本，濃度水平參考線性范圍和醫(yī)學決定水平，標本量均保證在1mL以上。每個水平樣本共完成15次測試量，分5d進行測量，測量3次/d，記錄結(jié)果數(shù)據(jù)。計算批內(nèi)精密度SD值、變異系數(shù)值；總精密度SD值、變異系數(shù)值。

1.2.3 正確度驗證

參照EP9文件，選擇廠家自帶質(zhì)控品，按實驗室常規(guī)操作程序，進行SAA項目定標，然后測定廠家自帶質(zhì)控品3～5次，記錄結(jié)果數(shù)據(jù)。計算均值，根據(jù)均值與靶值計算其偏倚，偏倚=（均值-靶值）/均值×100%。

1.2.4 線性范圍驗證

參照EP6A文件，選擇接近線性范圍下限和上限值的新鮮血清標本，經(jīng)過混合處理后，在日立7600型全自動生化分析儀上按照常規(guī)操作步驟進行測量，按照濃度由低到高的順序，每個濃度重復測定3次，全部實驗和數(shù)據(jù)采集在同1個工作日完成。多項式回歸分析將測定數(shù)據(jù)擬合為一次多項式模型，計算線性相關系數(shù)，根據(jù)R2≥0.975，0.97≥a≤1.03判斷線性/非線性。

1.2.5 臨床可報告范圍驗證

參照EP6A文件，選擇分析測量范圍內(nèi)的高濃度標本。在日立7600上按照常規(guī)操作步驟進行測定，記錄結(jié)果數(shù)據(jù)。將檢測結(jié)果與標本稀釋后的理論值對照，計算稀釋回收率。偏倚=（均值-理論值）/均值×100%。

1.2.6 參考區(qū)間驗證

參照EPC28文件，在日立7600上進行測定，要求0.5h內(nèi)完成測定，記錄結(jié)果數(shù)據(jù)。按照統(tǒng)計學區(qū)間計算法計算R值。R值=在參考區(qū)間內(nèi)的測定值數(shù)量/參考區(qū)間驗證人總數(shù)×100%。R值≥90%，則該參考范圍區(qū)間可以直接使用。

2.結(jié)果與分析

2.1 精密度驗證

日立7600檢測SAA的精密度驗證結(jié)果見表2。批內(nèi)精密度均小于說明書中批內(nèi)精密度規(guī)定聲稱值8%。批間精密度均小于說明書中總精密度最大限聲稱值10%。

表2. 日立7600檢測SAA L水平樣品精密度驗證結(jié)果

2.2 正確度驗證

日立7600檢測SAA的正確度驗證結(jié)果見表3。正確度測定樣本偏倚在-2.1%，測定值符合廠家說明書中提供的靶值之間的偏倚≤10%，正確度驗證結(jié)果良好。

表3. 日立7600檢測SAA正確度驗證結(jié)果

2.3 線性范圍驗證

日立7600 檢測SAA 的線性范圍驗證結(jié)果見表4，R2=0.9986。在2～240mg/L濃度范圍內(nèi)，R2＞0.975，線性良好。

表4. 日立7600檢測SAA線性范圍驗證結(jié)果

2.4 臨床可報告范圍驗證l

日立7600 檢測SAA 的臨床可報告范圍驗證結(jié)果見表5。SAA 試劑盒最大稀釋倍數(shù)為16 倍，故重慶中元生物技術有限公司生產(chǎn)的SAA 試劑盒可報告范圍上限為192.01×16=3072mg/L。

表5. 日立7600檢測SAA可報告范圍驗證結(jié)果

2.5 參考區(qū)間驗證

日立7600檢測SAA的參考區(qū)間驗證測試20次，結(jié)果分別為1.57、0.79、2.48、2.26、7.16、0.73、6.25、1.79、0.98、5.97、0.83、4.07、2.75、1.57、3.91、4.25、0.94、1.13、6.19、2.34。參考區(qū)間檢測最大值7.16mg/L，最小值0.73mg/L，R值≥90%，符合標準，該參考范圍區(qū)間可以使用。

3.討論

在臨床檢驗實驗室中檢測儀器和檢測試劑都可能對系統(tǒng)的分析性能造成影響，檢驗結(jié)果是否準確直接影響到臨床醫(yī)生對患者的診斷、采用的治療手段以及對預后情況的判斷，因此定期地對系統(tǒng)進行性能驗證及評價，以保證其能夠滿足臨床實驗室的要求[12-14]。ISO15189的相關文件明確要求，為確保檢測系統(tǒng)能切合臨床檢測的需求，實驗室必須驗證其分析性能。故本研究依據(jù)醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則要求，對7600生化分析儀搭載重慶中元生物技術公司SAA試劑盒檢測SAA的分析性能進行評價。

現(xiàn)今SAA的檢測方法主要包括膠乳增強免疫比濁法、酶聯(lián)免疫吸附試驗和膠體金法。經(jīng)過對比發(fā)現(xiàn)，與酶聯(lián)免疫吸附試驗法和膠體金法相比，膠乳增強免疫比濁法不僅自動化程度高、更加簡便快捷，而且靈敏度更高、線性范圍更廣，更適合應用于臨床診斷，因此該方法在臨床中廣泛采用。本研究中所采用的重慶中元生物技術有限公司SAA試劑盒的檢測方法即為膠乳增強免疫比濁法?，F(xiàn)在市面上已有各種SAA檢測試劑盒，解決了前幾年只有西門子一家能夠通過中國食品藥品監(jiān)督管理局審批的情況，可以滿足市場需求。同時，也有很多學者自發(fā)研究了SAA的新檢測方法和試劑，有望推動SAA檢測的進一步發(fā)展。

日立7600是本科室所主要使用的生化分析儀，作者計劃搭載重慶中元生物技術有限公司的SAA檢測試劑盒，需對其檢測分析性能進行驗證。實驗數(shù)據(jù)表明，本科室的日立7600搭載重慶中元生物技術有限公司SAA試劑檢測的批內(nèi)精密度均＜8%，批間精密度均＜10%滿足要求。對試劑盒所配套的質(zhì)控品進行測定，測定值與靶值之間的偏倚＜10%，符合要求。線性范圍測試采用高值標本，用低值血清分別對其進行5/5、4/5、3/5、2/5、1/5、0濃度稀釋。以理論值為X軸，測定值為Y軸，繪制X-Y線性圖。由線性圖可以看出，SAA的線性良好，R2=0.9986。

在實際臨床檢驗工作中，經(jīng)常會對一些檢測結(jié)果超過儀器線性的高值標本進行稀釋。為了保證稀釋之后的檢測結(jié)果的準確性和可靠性，本研究對線性范圍內(nèi)的高值標本進行2、4、8、16倍稀釋驗證，稀釋回收率均在偏差＜10%的標準范圍之內(nèi)。稀釋后的檢測數(shù)據(jù)準確可靠，符合臨床要求。參考區(qū)間是臨床分析檢驗結(jié)果的重要依據(jù)，對臨床上對檢測結(jié)果的解釋十分重要。本研究測定了本院20名健康體檢者的血清SAA，90%以上的檢測結(jié)果在參考區(qū)間之內(nèi)，表明重慶中元生物技術有限公司的SAA試劑盒所提供的參考區(qū)間符合臨床要求。

綜上所述，本研究以重慶中元生物技術公司SAA試劑盒及臨床標本為檢測樣本，為降低成本的同時提高可操作性，本研究設計采用簡潔的方案，以現(xiàn)今學術科研認可的方法分析結(jié)果數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，日本Hitachi公司7600型全自動生化分析儀搭載重慶中元SAA試劑檢測性能良好，能夠應用于臨床檢測。通過本研究，重慶中元SAA試劑盒可以在臨床檢驗中推廣使用，對臨床疾病的診斷及鑒別診斷具有重要意義。