面膜類化妝品微生物污染檢測分析及監(jiān)管建議

卜紅宇 呂玲英 王昆鵬*

1 內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗(yàn)研究院 （內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

2 呼和浩特市檢驗(yàn)檢測中心 （內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

內(nèi)容提要： 目的：發(fā)現(xiàn)內(nèi)蒙古市場面膜類產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量問題，提出質(zhì)量控制解決方案及建議。方法：依托2022年化妝品國家監(jiān)督抽檢，隨機(jī)抽取內(nèi)蒙古市售面膜類化妝品30批次，依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2015年版）對面膜產(chǎn)品進(jìn)行微生物指標(biāo)檢測，分析面膜類產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量情況。結(jié)果：研究表明，17個廠家30批次面膜中有27批次面膜產(chǎn)品菌落總數(shù)均為＜10CFU/g，其余3批次面膜產(chǎn)品菌落總數(shù)為30～85CFU/g；霉菌和酵母菌總數(shù)均為＜10CFU/g；耐熱大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌均未檢出，30批次面膜產(chǎn)品微生物指標(biāo)均符合規(guī)定。但不同廠家面膜產(chǎn)品菌落總數(shù)差異大，存在微生物污染的風(fēng)險，采用MALDI-TOF MS對菌落總數(shù)計數(shù)平板上生長微生物進(jìn)行鑒定主要為芽孢桿菌屬微生物。結(jié)論：生產(chǎn)廠家需要強(qiáng)化生產(chǎn)程序標(biāo)準(zhǔn)化管理，監(jiān)督部門應(yīng)對面膜類產(chǎn)品的生產(chǎn)銷售加強(qiáng)監(jiān)督管理。

隨著人們對化妝品的需求日益增長，化妝品的安全性也成為政府監(jiān)管部門及公眾關(guān)注的焦點(diǎn)。國家監(jiān)管部門扎實(shí)推進(jìn)國家化妝品監(jiān)督抽檢工作，旨在監(jiān)督、發(fā)現(xiàn)化妝品質(zhì)量安全問題，并有針對性地提出質(zhì)量控制方案建議，以提高化妝品質(zhì)量。本文對2016年～2020年國家藥品監(jiān)督管理局及我國各省市自治區(qū)藥監(jiān)部門公布的不合格化妝品信息進(jìn)行統(tǒng)計分析，不合格化妝品主要是燙（染）發(fā)類、防曬類、美白/祛斑類、面膜類、祛痘/抗粉刺類等5大類，其中面膜類的主要問題是檢出糖皮質(zhì)激素及微生物超標(biāo)[1-3]。化妝品營養(yǎng)豐富，在生產(chǎn)加工、貯存運(yùn)輸?shù)雀鳝h(huán)節(jié)均有可能受到微生物污染，從而導(dǎo)致化妝品腐敗變質(zhì)，嚴(yán)重影響化妝品的衛(wèi)生質(zhì)量與使用的安全性，對人們的健康造成危害[4,5]。所以微生物指標(biāo)的控制是化妝品安全使用的重要保障。本試驗(yàn)依托2022年化妝品國家監(jiān)督抽檢，隨機(jī)抽檢內(nèi)蒙古市售面膜類化妝品30批次，依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2015年版）對面膜產(chǎn)品微生物指標(biāo)進(jìn)行檢測，以期發(fā)現(xiàn)內(nèi)蒙古市場面膜類產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量問題，提出質(zhì)量控制解決方案及建議。

1.材料與方法

1.1 一般材料

試驗(yàn)起止時間：2022年7月～2022年10月。

試劑：卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂（青島海博）、虎紅培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱）、雙倍乳糖膽鹽（含中和劑）培養(yǎng)基（上海諾狄）、伊紅美藍(lán)瓊脂（青島海博）、SCDLP液體培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱）、十六烷三甲基溴化銨瓊脂（廣東環(huán)凱）、Baird Parker培養(yǎng)基（青島海博）、血瓊脂平板（廣東環(huán)凱）。

菌種：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]、大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10104]（中國食品藥品檢定研究院）。

樣品：隨機(jī)抽取內(nèi)蒙古市場面膜類化妝品30批次，來自17個生產(chǎn)廠家，其中A廠家4批次，B廠家2批次，C廠家1批次，D廠家2批次，E廠家1批次，F(xiàn)廠家1批次，G廠家3批次，H廠家1批次，I廠家4批次，J廠家1批次，K廠家1批次，L廠家1批次，M廠家1批次，N廠家1批次，O廠家2批次，P廠家3批次，Q廠家1批次。

儀器設(shè)備：Autof ms 2000全自動微生物質(zhì)譜檢測系統(tǒng)（安圖生物），AC2-4SI型生物安全柜（Esco集團(tuán)），PL602-S型電子天平（梅特勒托利多集團(tuán)），MIR-554型培養(yǎng)箱（日本三洋公司），高壓蒸汽滅菌柜（德國潔定有限公司），超低溫保存箱（海爾集團(tuán)），Easy MIX型均質(zhì)器（生物梅里埃法國公司），移液器（德國艾本德科學(xué)公司）。

1.2 方法

依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2015年版）對面膜產(chǎn)品微生物指標(biāo)進(jìn)行檢測和判定[6]。取樣品10g，加90mL滅菌生理鹽水，制成1:10檢液。

1.2.1 菌落總數(shù)檢查實(shí)驗(yàn)操作。取1:10檢液2mL分別注入滅菌平皿中，每皿1mL，傾注卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，連續(xù)3個稀釋級，每個稀釋級平行制備2個平皿，置36°C培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果并計數(shù)。

1.2.2 霉菌和酵母菌總數(shù)檢查實(shí)驗(yàn)操作。取1:10檢液2mL分別注入滅菌平皿中，每皿1mL，傾注虎紅瓊脂培養(yǎng)基，連續(xù)2個稀釋級，每個稀釋級平行制備2個平皿，置28°C培養(yǎng)5d，觀察結(jié)果并計數(shù)。

1.2.3 耐熱大腸菌群檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作。取1:10樣品稀釋液10mL，加入10mL雙倍乳糖膽鹽（含中和劑）液體培養(yǎng)基，置44°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，48h后觀察結(jié)果，若發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則取培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板，置36°C培養(yǎng)24h，觀察菌落形態(tài)或有無生長。

1.2.4 銅綠假單胞菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作。取1:10樣品稀釋液10mL，加入SCDLP液體培養(yǎng)基90mL，置36°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，24h后用10μL接種環(huán)取培養(yǎng)物劃線于十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板，置36°C培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，24h后觀察菌落形態(tài)或有無生長。

1.2.5 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作。取1:10 樣品稀釋液10mL，加入SCDLP 90mL，置36°C培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，24h后用10μL接種環(huán)取培養(yǎng)物分別劃線于BairdParker培養(yǎng)基平板和血平板，置36°C培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，48h后觀察菌落形態(tài)或有無生長。

1.2.6 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。菌落總數(shù)應(yīng)＜1000CFU/g，霉菌和酵母菌總數(shù)應(yīng)＜100CFU/g，耐熱大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌應(yīng)不得檢出。

1.3 MALDI-TOF MS鑒定

1.3.1 分離、純化。卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂上有菌落生長的，在菌落計數(shù)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對生長菌落進(jìn)行深入研究，對其進(jìn)行微生物鑒定。挑取單個菌落分純在血瓊脂平板和胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，必要時進(jìn)行二次純化，置36°C培養(yǎng)24h。挑取分純菌落，進(jìn)行MALDI-TOF MS鑒定。

1.3.2 采用提取法鑒定。按照生產(chǎn)商提取試劑盒說明書（安圖生物）進(jìn)行操作，將待測微生物裂解后，上樣于樣品靶，放入質(zhì)譜儀樣品倉，進(jìn)行MALDI-TOF MS鑒定。

2.結(jié)果

2.1 面膜類化妝品微生物污染檢測結(jié)果

從表1可看出，17個廠家30批次面膜中有27批次面膜產(chǎn)品菌落總數(shù)均為＜10CFU/g，其余3批次面膜產(chǎn)品菌落總數(shù)為30～85CFU/g；霉菌和酵母菌總數(shù)均為＜10CFU/g；耐熱大腸菌群、銅綠假單胞菌及金黃色葡萄球菌均未檢出，依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2015年版）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定進(jìn)行判定，30批次面膜微生物指標(biāo)均符合規(guī)定。然而不同廠家的菌落總數(shù)差異顯著，其中A廠家2批次（A-2、A-4）和N廠家1批次面膜產(chǎn)品菌落總數(shù)分別為30CFU/g、45CFU/g及85CFU/g，其余廠家面膜類產(chǎn)品菌落總數(shù)均＜10CFU/g。這說明A廠家和N廠家產(chǎn)品存在微生物污染的情況，這提示該廠家生產(chǎn)環(huán)節(jié)中存在微生物污染風(fēng)險點(diǎn)，需要強(qiáng)化生產(chǎn)程序標(biāo)準(zhǔn)化管理。

表1. 面膜微生物指標(biāo)檢測結(jié)果

2.2 計數(shù)平板生長菌落MALDI-TOF MS鑒定結(jié)果

MALDI-TOF MS是應(yīng)用于微生物全細(xì)胞快速檢測的技術(shù)，主要依據(jù)微生物特征蛋白指紋圖譜分析，完成微生物的鑒定和分類。本試驗(yàn)采用MALDI-TOF MS對卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂上生長的部分菌落進(jìn)行分離純化鑒定。從表2中可以看出，6株菌鑒定結(jié)果得分均＞9分（9.000～10.000分為種水平可信），其中有5株為芽孢桿菌，1株為海征微桿菌，芽孢桿菌占比83.3%。芽孢桿菌屬（Bacillus），廣泛分布在土壤、水、空氣以及動物腸道等處，對外界有害因子抵抗力強(qiáng)，在有氧和無氧條件下都能存活。芽孢含水量低，含有耐熱的小分子酶類及大量吡啶-2,6-二羧酸，且具有厚而致密的芽孢壁，所以芽孢屬于高抗性微生物，對高溫、紫外線、干燥、電離輻射和很多有毒的化學(xué)物質(zhì)都有很強(qiáng)的抗性，是制藥工業(yè)、食品加工業(yè)等行業(yè)常遇到頑固性微生物之一[7]。所以控制芽孢數(shù)量對控制生產(chǎn)車間環(huán)境污染有著重大意義。面膜類化妝品中芽孢桿菌的檢出表明生產(chǎn)環(huán)節(jié)中存在芽孢污染，這可能是由于生產(chǎn)企業(yè)長期使用低效消毒劑；消毒劑使用比較單一，沒有考慮消毒劑的輪換及消毒劑抑菌活性成分的異同；或者消毒計劃里無殺芽孢的消毒劑。傳統(tǒng)方式較難徹底殺滅芽孢，建議生產(chǎn)企業(yè)優(yōu)化消毒方案，正確的選擇能夠殺滅芽孢的消毒劑，制定清潔和滅菌的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并定期進(jìn)行驗(yàn)證，以確定清潔和滅菌的有效性。

表2. 菌落總數(shù)計數(shù)平板生長菌落MALDI-TOF MS鑒定結(jié)果

3.討論

微生物指標(biāo)是評價化妝品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)。微生物污染反映了企業(yè)生產(chǎn)過程中存在質(zhì)量控制風(fēng)險點(diǎn)，包括原輔料的微生物控制、環(huán)境設(shè)備、操作人員的衛(wèi)生情況、生產(chǎn)滅菌工藝及儲存運(yùn)輸環(huán)境等生產(chǎn)各要素，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格遵循《化妝品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》和《化妝品良好生產(chǎn)規(guī)范》，加強(qiáng)生產(chǎn)中微生物污染的監(jiān)控。建議生產(chǎn)企業(yè)建立過程管理控制程序，在整個生產(chǎn)過程及儲存過程中監(jiān)測控制微生物的污染。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)原料的驗(yàn)收管理和質(zhì)量控制；加強(qiáng)庫房、生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)施設(shè)備的清潔消毒工作；工作人員要嚴(yán)格遵守衛(wèi)生管理?xiàng)l例；生產(chǎn)過程關(guān)鍵控制點(diǎn)應(yīng)增加消毒監(jiān)測頻次，并且關(guān)注芽孢的殺滅及控制，使微生物負(fù)載降至最低。另外，在化妝品標(biāo)準(zhǔn)方面，化妝品原料標(biāo)準(zhǔn)、產(chǎn)品安全性評價標(biāo)準(zhǔn)及產(chǎn)品有效性評價標(biāo)準(zhǔn)存在缺失、滯后等問題，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)體系建設(shè)，完善提升我國化妝品標(biāo)準(zhǔn)體系，促進(jìn)化妝品質(zhì)量提升。國家化妝品監(jiān)管部門應(yīng)進(jìn)一步研究化妝品存在的安全風(fēng)險問題，對風(fēng)險較高的化妝品品類的生產(chǎn)及銷售加強(qiáng)監(jiān)督。