基于氣相/液相-三重四極桿質(zhì)譜法的20種生物農(nóng)藥中化學(xué)農(nóng)藥成分篩查

吳 霜，陳 磊，羅云米，褚能明,2，余 鷹

[1.重慶市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，重慶 401329；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室（重慶），重慶 401329]

隨著中國經(jīng)濟的快速發(fā)展，人民生活水平不斷提高，人們對美好生活的向往更加強烈，對生態(tài)環(huán)境、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全等問題高度關(guān)注。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中長期大量使用化學(xué)農(nóng)藥帶來的負(fù)面影響日益凸顯，迫使科研工作者積極研究和開發(fā)各種新型生物農(nóng)藥。生物農(nóng)藥是以自然界生物來源物質(zhì)作為有效成分的有害生物防治產(chǎn)品，如微生物源、植物源和動物源農(nóng)藥等，具有高效、安全、對環(huán)境友好等特點。近年來，生物農(nóng)藥的研發(fā)與應(yīng)用得到了各方大力支持，但與此同時，許多生產(chǎn)者為了提高藥效，爭奪市場，在產(chǎn)品上弄虛作假，生物農(nóng)藥產(chǎn)品的質(zhì)量問題也被頻頻報道，包括有效成分含量不足或缺失、違規(guī)添加隱性成分等。其中，在生物農(nóng)藥中添加隱性成分的情況尤為突出[1-4]。因此，抓好生物農(nóng)藥檢測檢驗是保障農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要基礎(chǔ)。

目前，化學(xué)農(nóng)藥的定性定量檢測方法主要有比色法、液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。基于被測樣品理化性質(zhì)的不同，樣品處理方法也有所差異[5-9]。本研究采用前期建立的QuEChERS 凈化法和氣相/液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法[10-14]，對20 個市售生物農(nóng)藥進(jìn)行了化學(xué)農(nóng)藥成分篩查，以期為生物農(nóng)藥產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

三重四極桿型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GCMSTQ8050 NX（日本島津公司）；Waters Xevo-TQ-XS 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國Waters 公司）；WH-600超聲波清洗機（濟寧萬和超聲電子設(shè)備有限公司）；臺式高速冷凍離心機H1850R（湖南湘儀離心機儀器有限公司）；Elix5 超純水系統(tǒng)（美國Millipore 公司）；T18-B-S25 勻漿儀（德國IKA 公司）；SK-1 快速混勻器（浙江省金壇市科析儀器有限公司）；TTL-DCII 型多功能氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司）；TP-402 天平（美國Denver 公司）；微量加樣器（德國Eppendorf公司）。

72 種化學(xué)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氯氰菊酯、甲氰菊酯、五氯硝基苯、腐霉利、氟胺氰菊酯、醚菊酯、甲拌磷、甲拌磷亞砜、甲拌磷砜、氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚、氰戊菊酯、聯(lián)苯菊酯、氟氰戊菊酯、三唑酮、乙烯菌核利、氯氟氰菊酯、三氯殺螨醇、溴氰菊酯、氯菊酯、異菌脲、百菌清、二甲戊靈、氟氯氰菊酯、水胺硫磷、三唑磷、馬拉硫磷、甲霜靈、對硫磷、甲基異柳磷、氧樂果、殺螟硫磷、二嗪磷、嘧霉胺、毒死蜱、敵敵畏、丙溴磷、伏殺硫磷、溴蟲腈、氟甲腈、涕滅威、涕滅威亞砜、涕滅威砜、辛硫磷、霜霉威、蟲酰肼、甲萘威、吡蟲啉、阿維菌素、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、噻蟲嗪、氯吡脲、除蟲脲、啶蟲脒、氟啶脲、嘧菌酯、多效唑、吡唑醚菌酯、克百威、3-羥基克百威、滅多威、滅幼脲、噠螨靈、多菌靈、烯酰嗎啉、氯蟲苯甲酰胺、咪酰胺等農(nóng)藥標(biāo)樣購自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心（天津），濃度為1 000 mg·L-1。

乙腈、甲醇：色譜純；水：超純水；氯化鈉：分析純；針式過濾器（含150 mg MgSO4和50 mg PSA），天津阿爾塔科技有限公司。

樣品均為市售生物農(nóng)藥。

1.2 測定方法

市售生物農(nóng)藥中72 種化學(xué)農(nóng)藥的檢測參照NY/T 761—2008[15]、GB/T 20769—2008[16]、GB 23200.113—2018[17]，以及實驗室前期建立的方法[10-14]進(jìn)行樣品前處理及儀器分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測方法的驗證

加標(biāo)回收試驗結(jié)果顯示，72 種化學(xué)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的平均回收率為70%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在20%以內(nèi)，定量限在0.01～0.05 mg·kg-1之間，符合農(nóng)藥殘留檢測要求[18]。

2.2 質(zhì)譜檢測條件的確定

通過對檢測條件的優(yōu)化，確定72種化學(xué)農(nóng)藥的質(zhì)譜檢測參數(shù)（45 種化學(xué)農(nóng)藥的GC-MS/MS 檢測參數(shù)，27 種化學(xué)農(nóng)藥的UPLC-MS/MS 檢測參數(shù)），各化學(xué)農(nóng)藥的保留時間、定量離子對等參數(shù)詳見表1、表2。

表2 27種化學(xué)農(nóng)藥的UPLC-MS/MS檢測參數(shù)

2.3 實際樣品的檢測

選取市售植物源和微生物源殺蟲殺菌劑共20個樣品，對其化學(xué)農(nóng)藥成分分別進(jìn)行GC-MS/MS 和UPLCMS/MS 檢測。結(jié)果顯示，市售生物農(nóng)藥中未檢出靶標(biāo)化學(xué)農(nóng)藥的有蘇云金桿菌、小檗堿、大蒜油、乙蒜素、桉油精、金龜子綠僵菌1#、金龜子綠僵菌2#、枯草芽孢桿菌1#、枯草芽孢桿菌2#、短穩(wěn)桿菌和春雷霉素。檢出化學(xué)農(nóng)藥成分的生物農(nóng)藥產(chǎn)品占比為45%，各產(chǎn)品含化學(xué)農(nóng)藥成分種類數(shù)量分別為苦參堿9 種、蛇床子素3種、香芹酚1種、球孢白僵菌4種、多殺霉素4種、多抗霉素2種、中生菌素4種、多粘類芽孢桿菌6 種、D-檸檬烯1 種。并且，其中檢測出克百威、氰戊菊酯等禁限用化學(xué)農(nóng)藥，各成分含量見表3。

表3 20個生物農(nóng)藥中化學(xué)農(nóng)藥成分檢測結(jié)果

3 結(jié)論

本研究綜合運用QuEChERS 凈化法和氣相/液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法，對20個市售生物農(nóng)藥樣品進(jìn)行了化學(xué)農(nóng)藥成分篩查，結(jié)果表明，購買的20個生物農(nóng)藥樣品中共檢出21種化學(xué)農(nóng)藥成分，檢出化學(xué)農(nóng)藥成分的生物農(nóng)藥產(chǎn)品占比為45%。這不僅驗證了前期建立的72種禁限用和高頻檢出化學(xué)農(nóng)藥質(zhì)譜檢測方法的可行性，而且為農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)境安全評價、農(nóng)產(chǎn)品安全認(rèn)證等級劃分、農(nóng)作物農(nóng)藥藥害分析鑒定、病蟲害抗藥性分析，以及為進(jìn)一步規(guī)范生物農(nóng)藥生產(chǎn)和生物農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗提供參考。