六種不同配方人工馴化栽培白囊耙齒菌比較試驗

李健劉義勇胡志強杜忠偉王旭王鑫

(1.延邊朝鮮族自治州農業(yè)科學院/國家食用菌產業(yè)技術體系延吉綜合試驗站，吉林 龍井 133400；2.梨樹縣森林病蟲害防治中心，吉林 四平 136500)

白囊耙齒菌(Irpexlacteus)又稱白耙齒菌、白囊孔菌，分類學上隸屬于擔子菌亞門(Basid-iomycetes)層菌綱(Hymenomycetes)非褶菌目(A-phyllophorales)多孔菌科(Polyporaceae)耙齒菌屬(Irpex Fr.)[1]。白囊耙齒菌在我國吉林、黑龍江、河北、江西、山西、四川、云南、西藏等地均有分布[2]。白囊耙齒菌是一種常見的木腐真菌，主要生長在枯枝立木、闊葉樹倒木上，子實體上有密集的絨毛，形態(tài)有時平伏至反卷，有時覆瓦狀疊生邊緣翻卷形成屋檐狀的菌蓋，新鮮時乳白色至微黃色，有韌性軟革質，具有獨特的淡香味，干時變?yōu)闇\黃色至淺咖色，收縮硬革質，香味消失[3]。

白囊耙齒菌作為一種藥用真菌，其多糖已經被開發(fā)成藥品，用于治療腎小球腎炎所致的各種癥狀[4]。近年來，有學者對白囊耙齒菌菌絲生長的條件進行了研究，除了固體培養(yǎng)外[5]，還有液體發(fā)酵培養(yǎng)[6]，也有學者嘗試了白囊耙齒菌的栽培[7]。白囊耙齒菌除了作為藥用真菌外，在工農業(yè)方面和治理環(huán)境污染方面也有很好的應用前景。白囊耙齒菌可用來降解園林綠化樹木枝條[8]，生物預處理玉米桿[9]，可以更好地被牛羊等牲畜消化吸收[10]。白囊耙齒菌可以用來處理廢水[11]，處理含有色素廢水時具有很好的脫色和解毒效果[12]，也可以分解土壤中不能被迅速降解的有機物[13]。本試驗通過對白囊耙齒菌人工馴化栽培，篩選最佳培養(yǎng)基配方，解決野生資源不斷減少，供不應求的問題，以期提高白囊耙齒菌人工栽培的產量與質量，為今后工廠化栽培白囊耙齒菌奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株子實體采自汪清縣仲坪鄉(xiāng)，將子實體在無菌條件下進行組織分離，經PDA培養(yǎng)基純化后獲得白囊耙齒菌菌株，保藏在延邊朝鮮族自治州農業(yè)科學院食用菌研究所實驗室。

1.2 制作母種

改良PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，瓊脂粉20g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g、水1000mL。

稱取馬鈴薯200g，去皮切塊，將馬鈴薯切塊在鍋中用水1000mL煮爛，用紗布過濾，留取過濾液，棄去馬鈴薯塊，濾液在鍋中繼續(xù)加熱，加入瓊脂粉20g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g，攪拌均勻，待瓊脂粉融化后加水定容至1000mL即可將培養(yǎng)液灌裝到20mm×200mm玻璃試管中，灌裝至試管高度1/4即可塞上棉塞，在高溫高壓滅菌鍋中121℃滅菌30min后擺放斜面，待培養(yǎng)基凝固冷卻后在潔凈工作臺中接入白囊耙齒菌菌種，將接種后的母種置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃避光培養(yǎng)，觀察菌絲復活情況及長勢。

1.3 制作原種

原種培養(yǎng)基：二級菌專用枝條90%，雜木屑7.8%，麥麩2%，白糖0.1%，石膏粉0.1%。

將二級菌專用枝條用水泡透后按照比例與雜木屑、麥麩、白糖、石膏粉加水攪拌均勻，使其含水量在60%左右即可裝入二級菌袋中，在袋底裝入一層雜木屑、麥麩、白糖和石膏粉混合的輔料，裝入二級菌專用枝條，枝條要豎直緊密裝入，在袋口再裝入1層輔料后蓋上無棉蓋體，在高溫高壓滅菌鍋中121℃滅菌120min，待培養(yǎng)基冷卻后在潔凈工作臺中接入白囊耙齒菌母種，將接種后的原種置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃避光培養(yǎng)，觀察菌絲長勢。

1.4 制作栽培種

培養(yǎng)基1：雜木屑54%，玉米芯29%，麥麩10%，黃豆粉5%，石膏1%，白糖1%。培養(yǎng)基2：棉籽殼78%，玉米芯10%，麥麩10%，玉米粉1%，生石灰0.5%，白糖0.5%。培養(yǎng)基3：雜木屑70%，麥麩15%，玉米芯14%，石膏1%。培養(yǎng)基4：玉米芯88%，麥麩10%，生石灰1%，白糖0.5%，玉米粉0.5%。培養(yǎng)基5：雜木屑54%，玉米秸稈29%，麥麩10%，黃豆粉5%，石膏1%，白糖1%。培養(yǎng)基6：雜木屑86.5%，麥麩10%，豆粉2%，石膏粉1%，石灰粉0.5%。

將上述6種配方栽培種培養(yǎng)基分別加水充分攪拌均勻，使其含水量在60%左右，用手緊握培養(yǎng)料有水滴落為宜。用裝袋機裝入17cm×36cm×0.004cm聚乙烯栽培袋中，每袋裝干料0.75kg，每個配方100袋，在高溫高壓滅菌鍋中121℃滅菌120min，待培養(yǎng)基冷卻后在潔凈工作臺中接入白囊耙齒菌原種，將接種后的栽培種置于培養(yǎng)室中，發(fā)菌初期溫度28～30℃，避光培養(yǎng)，空氣濕度65%以下，勤通風。初期6～8d，檢驗菌袋的污染情況，隔離污染的菌袋，對培養(yǎng)室進行潔凈化管理，8d后保持溫度在25～30℃，直至菌絲長滿菌袋，并記錄6種配方白囊耙齒菌菌絲滿袋時間。

1.5 栽培方法

1.5.1 場地消毒

在白囊耙齒菌栽培袋進入場地前，將溫室封閉進行噴霧消毒和熏蒸消毒。用高濃度(0.1%～1%)克霉靈對溫室四壁、地面和網格架噴霧進行重點消殺，用低濃度(0.02%～0.05%)克霉靈噴霧進行空間殺菌降塵。將菇寶點燃產生煙霧進行熏蒸，能夠有效殺死栽培環(huán)境中的雜菌和害蟲、害螨，凈化栽培環(huán)境，不僅能收到事半功倍的效果，而且可以在整個出菇期不用或少用農藥，生產安全的食用菌。

1.5.2 開口方式

白囊耙齒菌人工馴化栽培選用溫室網格架式臥袋栽培，待栽培袋下地5d后菌絲恢復潔白選擇打開接種口，敞口方式出菇，在原基形成前將敞開的栽培袋用橡皮筋系上，保證透氣即可，防止雜菌污染。并記錄6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌原基形成時間和子實體形成時間。

1.5.3 出菇管理

待開口3d后開口處菌絲恢復潔白開始澆水，保持環(huán)境濕度在65%左右，溫度保持在22～26℃，勤通風。出現(xiàn)原基后去掉橡皮筋，將栽培袋接種口敞開，加大澆水量，將溫度保持在22～26℃，空氣濕度保持在85%左右，CO2濃度保持在400ppm以下，光照保持在800lx左右，并勤通風。白囊耙齒菌屬好氧菌，子實體生長期間通風不良易造成子實體團狀，影響產品質量。白囊耙齒菌整個生產過程應保持環(huán)境清潔，出菇期應防止高溫高濕，避免雜菌污染。

1.5.4 采收分析

待6種配方白囊耙齒菌菌袋開口處長出約2～3cm的白色突起，且白色突起上長出絨毛狀子實層時可以采收，采收后稱量子實體鮮重，放在晾曬架晾干后再次稱量子實體干重，并計算干濕比、生物學轉化率等，之后放在通風陰涼處保存。采用Excel 2017進行數據整理，SPSS 25采用鄧肯分析法進行方差和差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 白囊耙齒菌栽培記錄

通過對6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌各個階段進行記錄，從表1可以看出，6種配方在接種后滿袋時間相差較多，培養(yǎng)基1和培養(yǎng)基4相差最多為16d，白囊耙齒菌菌絲在培養(yǎng)基4上生長最快。6種配方在開口后形成原基時間相差較少，培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基4相差最多為8d，培養(yǎng)基4雖然菌絲生長最快，但形成原基最慢，培養(yǎng)基2菌絲生長緩慢，但形成原基最快。6種配方在開口后形成子實體時間相差較少，培養(yǎng)基4和培養(yǎng)基6相差最多為8d，培養(yǎng)基6最先形成子實體。

表1 白囊耙齒菌栽培記錄

2.2 白囊耙齒菌原基

從圖1可以看出，6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌均形成原基，菌袋開口處培養(yǎng)基表面灰白色小突起為白囊耙齒菌原基。培養(yǎng)基2形成原基最早，形成的原基顏色更白，為乳白色，原基也更密集。培養(yǎng)基1和培養(yǎng)基5在形成原基時間上相差很少，原基顏色很接近，為灰白色。培養(yǎng)基3和培養(yǎng)基6在形成原基時間上相差很少，原基顏色也很接近，為黃白色。培養(yǎng)基4形成原基最慢，原基顏色為灰白色。

圖1 白囊耙齒菌原基

2.3 白囊耙齒菌子實體

從圖2可以看出，6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌均形成子實體，菌袋開口處培養(yǎng)基表面褐色2cm左右突起為白囊耙齒菌子實體層。培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基5在形成子實體時間上相差很少，但培養(yǎng)基5子實體層最厚，且子實體大小較大。培養(yǎng)基3和培養(yǎng)基6在形成子實體時間上相差很少，且子實體層厚度和子實體大小相差不大。培養(yǎng)基6最先形成子實體，子實體大小最大，培養(yǎng)基4最后形成子實體，子實體層最薄，子實體大小最小。

2.4 白囊耙齒菌產量

對6種不同配方培養(yǎng)基栽培白囊耙齒菌進行2次采摘測產，從表2可以看出，配方1、配方2和配方3白囊耙齒菌子實體每袋平均產量、干濕比和生物學轉化率均相差不大。配方4白囊耙齒菌子實體每袋平均鮮重為85.83g，每袋平均干重為25.89g，生物學轉化率為11.44%，均為最低。配方5和配方6白囊耙齒菌子實體每袋平均產量、干濕比和生物學轉化率相差不大，但配方6白囊耙齒菌子實體每袋平均鮮重最重為109.89g，生物學轉化率最高為14.65%。

3 結論

本試驗利用對6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌進行比較試驗，結果6種配方人工馴化栽培白囊耙齒菌均能形成原基，形成子實體，但在接種后滿袋時間、開口后形成原基、子實體時間和平均產量有所差異。培養(yǎng)基1和培養(yǎng)基5在滿袋、形成原基和子實體時間上相差很少，培養(yǎng)基5平均產量略高于培養(yǎng)基1。培養(yǎng)基3和培養(yǎng)基6在滿袋、形成原基和子實體時間上相差很少，培養(yǎng)基6平均產量略高于培養(yǎng)基3。培養(yǎng)基2形成原基最早，且形成的原基顏色更白，更密集，表明白囊耙齒菌菌絲對棉籽殼利用率較高。培養(yǎng)基4在接種后最先長滿菌袋，但形成原基最慢，最后形成子實體，平均產量最低，表明白囊耙齒菌菌絲對玉米芯利用率較低，也可能是玉米芯顆粒較大，含水量較低，導致原基形成緩慢。培養(yǎng)基6最先形成子實體，平均產量最高，表明白囊耙齒菌菌絲對木屑利用率較高，菌絲體能夠更好地利用木質素維持生長發(fā)育，符合白囊耙齒菌為木腐菌的特性，與于萍等[5]研究結果一致。綜合各種因素，在日后白囊耙齒菌栽培中可選用培養(yǎng)基3，玉米芯資源豐富，可以部分替代雜木屑，保護環(huán)境，降低生產成本，且培養(yǎng)基3在滿袋、形成原基和子實體時間上，平均產量上均屬于較高水平。白囊耙齒菌人工栽培使用培養(yǎng)基3時由于配方含有玉米芯，在栽培種裝袋時要提前用水泡透玉米芯，在滅菌時要延長時間滅菌透徹，否則玉米芯易受雜菌污染，在出菇管理階段要注意開口大容易在澆水時積水，要少澆勤澆，高溫高濕易導致雜菌污染率高，要勤通風降溫，出菇后期易有蟲害，要及時采摘，掛黃板除蟲，才能保證白囊耙齒菌人工栽培的產量和質量。