• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蘇木精的應(yīng)用及測(cè)定方法綜述

    2023-10-30 01:43:34劉里何美玲
    安徽化工 2023年5期
    關(guān)鍵詞:蘇木伏安硫化物

    劉里,何美玲

    (曲靖師范學(xué)院化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,云南 曲靖 655011)

    蘇木精又稱蘇木素,是從一種原產(chǎn)于中美洲和南美洲熱帶雨林的樹(shù)種心材中提取的具有生物活性的黃酮類化合物[1-2],是一種廣泛分布于各種植物中重要的生物分子[3]。從蘇木精的結(jié)構(gòu)(圖1)可知,其是一種具有生物活性的三環(huán)類黃酮分子[4],是兒茶酚的衍生物,又稱雙兒茶酚。

    圖1 蘇木精的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of hematoxylin

    由于蘇木精是組織學(xué)和組織病理學(xué)診斷中最常用的染色劑之一,所以全球內(nèi)對(duì)蘇木精的需求是驚人的:僅在組織學(xué)準(zhǔn)備中,每天就生產(chǎn)250~300 萬(wàn)張外科載玻片,僅1年就消耗了大約7萬(wàn)噸蘇木精染色液。由于人口的增長(zhǎng)和衛(wèi)生保健的普及,以及對(duì)組織細(xì)胞技術(shù)方法的顯微診斷研究和外科手術(shù)需求的增加,世界每年對(duì)蘇木精的需求日益增強(qiáng)。自十九世紀(jì)中期蘇木精被發(fā)現(xiàn)以來(lái),已經(jīng)有超過(guò)50 種不同的蘇木精配方被開(kāi)發(fā)出來(lái)并用于組織技術(shù)。蘇木精相關(guān)產(chǎn)品已經(jīng)申請(qǐng)了約900項(xiàng)專利[1]。通過(guò)查閱近34年來(lái)國(guó)內(nèi)外發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn),我們發(fā)現(xiàn)目前蘇木素的應(yīng)用主要是作為一種生物著色劑,因在醫(yī)藥生產(chǎn)中起著至關(guān)重要的作用,使其成為史上最常用和最有價(jià)值的天然化合物。令人惋惜的是,蘇木精在癌組織病理學(xué)診斷中應(yīng)用得較少,用于各類生物分析的也不多,總之,蘇木精的應(yīng)用還需進(jìn)一步拓展。相關(guān)蘇木精含量的測(cè)定方法更是很少報(bào)道,這也限制了其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。本文從蘇木精的應(yīng)用和含量測(cè)定方法兩方面進(jìn)行綜述,一是引起研究學(xué)者的更多關(guān)注;二是為其進(jìn)一步發(fā)展提供參考;三是促進(jìn)蘇木素研究領(lǐng)域的蓬勃發(fā)展,使其在農(nóng)業(yè)、食品和環(huán)境等更多的領(lǐng)域大放光彩,為人類健康和美好生活提供有利保障。

    1 蘇木精的應(yīng)用

    1.1 蘇木精作為染色劑用于組織化學(xué)

    蘇木精是最古老、使用最廣泛的生物染色劑之一,它也是組織化學(xué)中最重要的天然染色劑[5]。蘇木精最早的組織學(xué)應(yīng)用是在十九世紀(jì)60年代,由德國(guó)解剖學(xué)家Wilhelm Waldeyer 提出的[6]。Wilhelm Waldeyer 使用一種蘇木的粗水提取物,試圖鑒定神經(jīng)元軸突,但結(jié)果并不令人滿意[5-6]。Franz Bohmer第一次成功地使用了蘇木精,他在1865年認(rèn)識(shí)到,蘇木精需要一種媒染劑才能使顏色持久,這使它從一種染料變成一種染色劑。Franz Bohmer試了幾種金屬鹽作為媒染劑,最后選定了明礬(硫酸鋁鉀)。金屬鹽能將蘇木精氧化成蘇木紅(與微粒血色素?zé)o關(guān)),這種化學(xué)物質(zhì)會(huì)永久性地染色組織[5]。生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室模擬廢水的光催化脫色與氧化,以蘇木精為模型染料,使其成為世界上應(yīng)用最廣泛的組織切片常規(guī)染色的復(fù)染劑[7]。蘇木精是一種堿性染料,它可以染色細(xì)胞的酸性成分,包括核酸、糖胺聚糖和酸性糖蛋白,使它們呈現(xiàn)藍(lán)紫色[8]。

    蘇木精[IUPAC 名稱:7,11b-Dihydroindeno[2,1-c]chromene-3,4,6a,9,10(6H)-pentol,HX]是鄰苯二酚的衍生物,被稱為雙鄰苯二酚,此外,蘇木精還具有3,4-環(huán)烷基熔融苯并吡喃單元。由于這種活性成分HX具有抗炎活性,能抑制晶狀體醛糖還原酶,降低血糖水平。此外,HX中的活性雙鄰苯二酚部分(非鄰接苯環(huán)上的兩對(duì)鄰接羥基)對(duì)HIV-I的整合具有合理的抑制作用。

    1.2 蘇木精在病理學(xué)診斷和治療中的應(yīng)用

    世界范圍內(nèi)幾乎全部的病理診斷和需要顯微鏡分析的常規(guī)外科評(píng)估都依賴于蘇木精核染料[1]。這種具有150年歷史的分子不僅來(lái)源有限,而且市場(chǎng)動(dòng)態(tài)也不穩(wěn)定。目前為止,對(duì)于這個(gè)行業(yè)來(lái)說(shuō),還沒(méi)有比這種分子更好、更方便的替代品。核染色改變了組織技術(shù)診斷在醫(yī)學(xué)上的常規(guī)應(yīng)用。該分子高度復(fù)雜,但能顯示染色切片的細(xì)節(jié)。蘇木精是一種較好的核著色劑,本質(zhì)上是堿性的,能染色組織、細(xì)胞核、線粒體等的酸性成分[4]。由于蘇木精含有活性成分,其具有抗炎活性,抑制晶狀體醛糖還原酶,降低血糖水平[4,9]。此外,蘇木精中活躍的雙兒茶酚片斷即非相鄰苯環(huán)上的兩對(duì)相鄰羥基對(duì)HIVI 整合酶有一定的抑制作用[4]。從蘇木中提取的蘇木精是Aβ42 纖維形成的有力抑制劑。它是一種潛在的抗Aβ 纖維生成和細(xì)胞毒性的藥物,這就表明蘇木精是一種潛在的治療阿爾茨海默病的化合物[10]。

    蘇木精也可用于前列腺癌組織病理學(xué)診斷[11-12]。蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制劑是一種新興的腫瘤化療藥物。在Lin 等的研究中,蘇木素通過(guò)采用基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)的自動(dòng)高通量篩選(HTS)策略,在正交化合物混合文庫(kù)(32 200個(gè)化合物)中被鑒定為有效的c-Src抑制劑之一[13]。在體外其是一種具有ATP競(jìng)爭(zhēng)性的廣譜PTK抑制劑,在酶和細(xì)胞水平上是c-Src 的有效抑制劑和廣譜PTK抑制劑。蘇木精具有抑制多種類型PTK和阻斷下游信號(hào)分子的能力,也是PTK抑制劑研究中有用的探針。皮膚病理的染色也常用蘇木精,它可揭示豐富的結(jié)構(gòu)信息,從形態(tài)結(jié)構(gòu)揭示病癥,如炎癥[14]。采用蘇木精對(duì)膜性腎病大鼠進(jìn)行血、尿試驗(yàn)均有改善趨勢(shì),大鼠臨床表現(xiàn)的改善,揭示蘇木精對(duì)膜性腎病大鼠有明顯的治療作用[15]。

    1.3 蘇木精修飾電極作為傳感器

    由于蘇木精結(jié)構(gòu)中的羥基可以與各種金屬離子形成絡(luò)合物[2],利用其電化學(xué)行為用作檢測(cè)還原性煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)和肼的電化學(xué)標(biāo)簽[16]。此外,已有蘇木精修飾玻碳電極的制備及其在肼電催化氧化及某些生物化合物測(cè)定中的應(yīng)用[12]。Harisha K. V.等用蘇木精修飾碳糊電極(CPE)用于差分伏安脈沖法(DPV)同時(shí)測(cè)定去甲腎上腺素和對(duì)乙酰氨基酚[4]。蘇木精在含氧溶液中的光氧化以及蘇木精與不同金屬離子的相互作用的研究也已發(fā)表[12]。Nasirizadeh和他的同事在2011 年發(fā)表的一項(xiàng)研究中,首次將其用作DNA 電化學(xué)生物傳感器的電活性標(biāo)簽[16]。利用蘇木精作為絲網(wǎng)印刷金電極上的敏感電化學(xué)標(biāo)簽,得到了一個(gè)簡(jiǎn)單用硫代化探針修飾的穩(wěn)定、靈敏的平臺(tái)。雖然結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,但是大大降低了最終價(jià)格,生物傳感裝置顯示出對(duì)目標(biāo)DNA檢測(cè)的高度敏感性和選擇性。

    1.3.1 NADH檢測(cè)

    NADH 是一種存在于所有活細(xì)胞中的重要生物分子,是脫氫酶在體內(nèi)產(chǎn)生的重要輔酶[16-18]。蘇木精修飾碳糊電極(HMCPE)對(duì)NADH氧化具有良好的電催化活性。將蘇木精電沉積固定在玻碳電極表面的多壁碳納米管(MWCNT)上,可用于同時(shí)或單獨(dú)測(cè)定腎上腺素、抗壞血酸和尿酸[17]。2011 年Didem Giray Dilgin 等[19]通過(guò)在玻碳電極(GCE)上電聚合蘇木精,得到了一種用于測(cè)定NADH 的光電催化氧化修飾電極。圖2 是蘇木精電聚合機(jī)理的圖解。文章優(yōu)化了負(fù)載電解質(zhì)、單體濃度、循環(huán)次數(shù)、陽(yáng)極上電位極限等電聚合條件。在流動(dòng)注射分析(FIA)體系中,采用一種新型的自制流動(dòng)單元,通過(guò)透明窗口照射電極表面,進(jìn)行了NADH 的光電催化測(cè)定。在含0.1 M NaNO3的磷酸鹽緩沖溶液(pH 7.0)中,在-0.5 至+2.0 V vs. Ag/AgCl 的電位范圍內(nèi),在GCE 表面連續(xù)記錄0.3 mM 蘇木精的循環(huán)伏安圖,成功制備了穩(wěn)定的聚蘇木精(poly-HT)電活性薄膜。聚蘇木精修飾電極在pH 值為7.0 的磷酸鹽緩沖溶液中對(duì)NADH 的氧化具有良好的電催化活性,與未修飾電極相比,其過(guò)電位顯著降低了320 mV 以上。在最佳條件下,在FIA 系統(tǒng)中分別用安培和光電安培進(jìn)行NADH 的光電催化測(cè)定,電流與NADH 濃度呈良好的線性關(guān)系,線性范圍分別為1.0×10-7~1.5×10-4M 和1.0×10-7~2.5×10-4M。光電安培法測(cè)定NADH的檢出限為3.0×10-8M。

    圖2 蘇木精電聚合機(jī)理的圖解Fig.2 The illustration of electropolymerization mechanism of hematoxylin

    1.3.2 硫化物檢測(cè)

    眾所周知,硫化物污染是所有水源面臨的最重要的問(wèn)題,其對(duì)許多生物都能產(chǎn)生危害[20]。硫化物可以通過(guò)厭氧降解含硫的蛋白質(zhì)、氨基酸或其他類型的有機(jī)成分釋放到水環(huán)境中。硫化物常用于工業(yè)廢水中,以減少汞和鉛等有毒金屬通過(guò)沉淀反應(yīng)進(jìn)入環(huán)境的可能性[21]。低濃度的硫化物會(huì)使人痛苦,而高濃度的硫化物會(huì)導(dǎo)致意識(shí)喪失、永久性腦損傷甚至死亡。現(xiàn)已經(jīng)發(fā)展了幾種測(cè)定天然水中和廢水中硫化物的技術(shù),如滴定法、光譜法和色譜法等。然而,這些方法需要特定的昂貴設(shè)備且非常耗時(shí),因而需要一種快速、靈敏和廉價(jià)的方法來(lái)檢測(cè)硫化物,用傳感器代替分析方法,有望實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)[22]。2012 年Yusuf Dilgin 等[21]介紹了一種用蘇木精修飾的鉛筆石墨電極(PGE/HMT)研究硫化物電催化氧化的新方法。它用良好的氧化還原介質(zhì)蘇木精(HMT)修飾的電極(PGE)對(duì)硫化物進(jìn)行電催化測(cè)定。HMT 的電化學(xué)氧化和硫化物在PGE/HMT 上的電催化氧化機(jī)理如圖3 所示。采用吸附法制備修飾電極,PGE/HMT 對(duì)硫化物氧化具有明顯的電催化活性,電催化電流與硫化物濃度呈線性關(guān)系,線性范圍為1~200 μM,檢出限為0.4 μM。該方法成功地應(yīng)用于廢水中硫化物的測(cè)定。

    2013 年Dai 等[22]研究了一種用蘇木精多壁碳納米管修飾碳糊電極(HM-MWCNTs/CPE)測(cè)定硫化物的新方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HM-MWCNTs/CPE 對(duì)硫化物氧化具有顯著的電催化活性。在最佳條件下的電流與硫化物濃度呈線性相關(guān),校準(zhǔn)曲線方程為Ip(μA)=0.102 6×c(10-6mol·L-1)+0.756 9,相關(guān)系數(shù)R2=0.999,線性范圍在0.5×10-6~150×10-6mol·L-1,安培法檢出限為0.2×10-6mol·L-1。這種HM-MWCNTs/CPE 電化學(xué)傳感器非常靈敏、簡(jiǎn)單,可以再生,易于制備和儲(chǔ)存。在室溫下儲(chǔ)存60 天后,5 μM 硫化物濃度下的硫化物的安培反應(yīng)與新鮮硫化物的安培反應(yīng)差異不大,表明HM-MWCNTs/CPE 易于保存,重現(xiàn)性好,穩(wěn)定性高。該方法已成功地應(yīng)用于捷克共和國(guó)帕杜比斯市的河流水樣。

    1.3.3 肼檢測(cè)

    肼及其衍生物在化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,包括高能推進(jìn)劑、燃料電池、除氧劑、照相顯影劑、除草劑、農(nóng)藥等。然而,因?yàn)樗母叨拘院痛碳ば?,肼也被認(rèn)為是一種環(huán)境污染物。此外,肼作為一種致癌和致突變物質(zhì),對(duì)人體健康有不良影響,特別是對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)。因此,準(zhǔn)確、靈敏地檢測(cè)肼是非常重要的[23]。肼是一種優(yōu)良的還原劑,由于其工業(yè)和藥理意義,需要一種高靈敏度的方法才能可靠地測(cè)定其含量。電化學(xué)測(cè)量技術(shù)已被證明其為許多化合物的檢測(cè)提供了一種靈敏和選擇性的方法。雖然金屬如鉑、金和銀在肼的陽(yáng)極氧化中非?;钴S,但它們的實(shí)際應(yīng)用成本太高,而且令人遺憾地是,在普通碳電極上具有較大氧化性過(guò)電位的肼不適合通過(guò)傳統(tǒng)的電化學(xué)方法進(jìn)行定量[24]。

    2007年Hamid R. Zare 等[24]報(bào)道了蘇木精多壁碳納米管(HMWCNT)修飾玻碳電極(GCE)的制備及其在肼電催化氧化中的應(yīng)用。采用多壁碳納米管修飾的GCE表面固定化蘇木精,制備了一種新型肼傳感器。HMWCNT 修飾GCE 的制備方法是將MWCNT 修飾的GCE 浸泡在1.0 mM蘇木精溶液中,在100 mVs-1下進(jìn)行-100~500 mV 的8 次電位掃描,制備了HMWCNT 修飾的GCE。在多壁碳納米管表面形成蘇木精膜后,用水沖洗修飾電極并浸入緩沖溶液中測(cè)試其電化學(xué)行為。研究表明,蘇木精薄膜在MWCNT 修飾的GCE 上的吸附表現(xiàn)出一對(duì)特征峰。HMWCNT 改性GCE 對(duì)肼的電化學(xué)氧化具有較高的催化活性。MWCNT 與活化改性GCE 表面相比,HMWCNT 修飾GCE 表面的肼峰電位分別向負(fù)值移動(dòng)了約167 mV 和255 mV。此外,HMWCNT 修飾電極表面顯著提高了肼測(cè)定的靈敏度,肼的線性響應(yīng)范圍為2.0~122.8 μM,檢測(cè)限為0.68 μM,靈敏度為0.020 8 μA μM-1。最后,測(cè)定肼的安培反應(yīng)是可重復(fù)、快速和非常穩(wěn)定的,在連續(xù)的400 s 操作中靈敏度沒(méi)有損失。

    1.3.4 去甲腎上腺素和對(duì)乙酰氨基酚檢測(cè)

    電化學(xué)測(cè)定生物分子是近二十年來(lái)研究的熱點(diǎn)。去甲腎上腺素(NA)是哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種非常重要的兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)。許多疾病都與NA 濃度的變化有關(guān)。因此,測(cè)定其在生物系統(tǒng)中的濃度能提供有用的信息[25]。此外,對(duì)乙酰氨基酚(AC)是一種廣泛使用的鎮(zhèn)痛解熱藥物,其作用類似于阿司匹林,對(duì)阿司匹林敏感且在治療劑量下安全的患者,它是合適的替代品。2009 年Navid Nasirizadeh 等[25]以蘇木精為電極,在GCE 玻碳電極上制備了高效NA 生物傳感器。使用了蘇木素生物傳感器進(jìn)行NA電催化氧化,并同時(shí)測(cè)定生理pH值下的NA和AC。在生理pH值下,蘇木素生物傳感器表面NA 和AC 氧化的微分脈沖伏安法(DPV)的峰出現(xiàn)明顯分離。因此,可以在蘇木精生物傳感器上同時(shí)測(cè)定樣品中的NA 和AC。圖4 是蘇木精生物傳感器在含有不同濃度NA 在0.15 mol·L-1磷酸鹽緩沖溶液(pH 7.0)中的微分脈沖伏安圖。1~30 的數(shù)字對(duì)應(yīng)于5.0×10-1至65.40 μmol·L-1的NA。插圖:(A)蘇木精生物傳感器在含有65.40~274.20 μmol·L-1NA 的溶液中的DPV;(B)和(C)分別顯示了在NA 的5.0×10-1~65.40 μmol·L-1和65.40~274.20 μmol·L-1范圍內(nèi)作為NA濃度函數(shù)的電催化峰值電流圖。對(duì)于5.0×10-1~65.40 μmol·L-1和65.40~274.20 μmol·L-1的NA,以及12.00~59.10 μmol·L-1和59.10~261.70 μmol·L-1的AC,獲得線性校準(zhǔn)曲線。在不存在和存在AC的情況下,生物傳感器對(duì)NA的敏感性幾乎相同,這表明NA的電催化氧化過(guò)程與AC無(wú)關(guān),因此,可以在沒(méi)有任何干擾的情況下同時(shí)或獨(dú)立測(cè)量?jī)煞N分析物(NA和AC)。結(jié)果表明,蘇木精生物傳感器具有穩(wěn)定性好、表面電荷轉(zhuǎn)移速率常數(shù)高、NA檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)。用DPV 研究了該傳感器在AC 存在下對(duì)NA的定量分析性能。

    圖4 蘇木精生物傳感器在含有不同濃度NA 的0.15 mol·L-1磷酸鹽緩沖溶液(pH 7.0)中的微分脈沖伏安圖[25]Fig.4 Differential pulse voltammograms of the hematoxylin biosensor in a 0.15 mol L-1 phosphate buffer solution(pH 7.0)containing different concentrations of NA[25]

    1.3.5 抗壞血酸、腎上腺素和尿酸檢測(cè)

    抗壞血酸(AA)、腎上腺素(AD)和尿酸(UA)是在各種生物過(guò)程中起重要作用的生化物質(zhì)。抗壞血酸(AA)又稱維生素C,具有多種生理和藥理功能,如膠原蛋白合成、腸道鐵吸收、藥物代謝等。腎上腺素(AD)是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)和激素,它以有機(jī)陽(yáng)離子的形式存在于神經(jīng)組織和生物體液中,許多疾病與它在體液中濃度的變化有關(guān)。此外,許多現(xiàn)象與血液和尿液中AD的濃度有關(guān)。UA 是嘌呤在人體內(nèi)代謝的最終產(chǎn)物,它是監(jiān)測(cè)尿液和血液的主要參數(shù)之一。尿酸濃度的變化與嘌呤代謝的改變有關(guān),嘌呤代謝與許多疾病和生理障礙有關(guān)。因此,在痛風(fēng)、高尿酸血癥、重型肝炎、Lesch-Nyhan綜合征等疾病的診斷和治療中,在生理體液中測(cè)定其含量是必要的[3]。2010年Hamid R. Zare等[3]研究了蘇木精多壁碳納米管修飾玻碳電極(HMWCNT-GCE)同時(shí)測(cè)定抗壞血酸、腎上腺素和尿酸。在該研究中,在玻碳電極(GCE)表面固定的多壁碳納米管上電沉積蘇木精,與單獨(dú)的GCE相比,MWCNT修飾的GCE顯著改善了蘇木精的可逆性。HMWCNT-GCE不僅對(duì)AD的氧化有很強(qiáng)的催化活性,而且還將AA、AD和UA化合物的伏安響應(yīng)分解為單個(gè)信號(hào)。HMWCNT-GCE 具有穩(wěn)定性好和重現(xiàn)性佳、線性濃度范圍寬、工藝簡(jiǎn)單、表面電荷轉(zhuǎn)移速率常數(shù)高、對(duì)AD 的檢出限低等顯著優(yōu)點(diǎn),并且修飾電極具有優(yōu)良的同時(shí)測(cè)定實(shí)際樣本中AA、AD 和UA 的能力。

    2 蘇木精的測(cè)定方法

    有關(guān)測(cè)定蘇木精含量的方法相關(guān)文獻(xiàn)較少,主要包括電化學(xué)分析法[4,12,26]、高效液相色譜法(HPLC)[27]和薄層層析光密度法[28],現(xiàn)將不同方法檢測(cè)蘇木精的對(duì)比匯總于表1中。

    表1 檢測(cè)蘇木精的不同方法比較Tab.1 Comparison of different methods for hematoxylin detection

    2.1 電化學(xué)分析法

    2.1.1 循環(huán)伏安法

    2011年Hamid R. Zare 等[12]對(duì)蘇木精在水溶液中的電化學(xué)行為進(jìn)行研究,考慮了pH、蘇木精濃度、選擇的電化學(xué)方法的時(shí)間窗等不同參數(shù)的影響,以了解蘇木精的氧化機(jī)理。蘇木精的結(jié)構(gòu)和蘇木精的電化學(xué)氧化機(jī)理如圖5所示。利用循環(huán)伏安法研究蘇木精作為重要生物分子的電化學(xué)氧化過(guò)程。在pH 7.0使用0.1 M磷酸鹽緩沖溶液作為電解質(zhì),在玻碳電極上構(gòu)建了檢測(cè)蘇木精的循環(huán)伏安法,其檢測(cè)的線性范圍是0.020~0.385 mM。

    圖5 (a)蘇木精的結(jié)構(gòu);(b)蘇木精的電化學(xué)氧化機(jī)理[12]Fig.5 (a)Structure of hematoxylin;(b)Proposed electrochemical oxidation mechanism for hematoxylin[12]

    2018年K. V. Harisha等[4]用循環(huán)伏安法研究了聚丙氨酸修飾碳糊電極上蘇木精的電化學(xué)氧化行為。在pH 7.4將0.2 M PBS緩沖溶液(0.2 M NaH2PO4·H2O和0.2 M Na2HPO4儲(chǔ)備溶液混合得到磷酸鹽緩沖液)作為電解質(zhì),采用循環(huán)伏安法研究了具有生物活性的雙兒茶酚分子蘇木精在聚丙氨酸修飾碳糊電極(CPE)上的電化學(xué)氧化,并對(duì)其電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了表征。聚丙氨酸改性CPE對(duì)蘇木精的氧化反應(yīng)具有較高的敏感性,掃描速率的影響受吸附控制。圖6展示了DL-丙氨酸在碳糊電極表面可能的電聚合機(jī)理。從自由基機(jī)理觀察到蘇木精分子(苯甲酸形式)失去電子和質(zhì)子后形成活性基團(tuán)(I),可以寫(xiě)成共振結(jié)構(gòu)。在自由基I重排后的第二氧化步驟中形成蘇木紅(醌形式),這是穩(wěn)定的蘇木精氧化形式,其結(jié)構(gòu)多一個(gè)共軛雙鍵。圖7A 是聚丙氨酸修飾的CPE,在0.2 M PBS(pH 7.4)中以50 mVs-1掃描速率,不同蘇木精濃度的循環(huán)伏安圖;圖7B是陽(yáng)極峰值電流與蘇木精濃度的關(guān)系圖。該方法的線性范圍為20~160 μM,檢測(cè)限(3S/M)為0.102 μM,定量限(10S/M)為0.34 μM。由于制備的聚丙氨酸改性CPE具有較高的靈敏度,可以作為一種很有前途的電化學(xué)傳感器用于蘇木精的測(cè)定。

    圖6 DL-丙氨酸在碳糊電極表面可能的電聚合機(jī)理圖[4]Fig.6 Probable electropolymerisation mechanism of DL-alanine on the surface of carbon paste electrode[4]

    圖7 (A)不同濃度蘇木精在聚(丙氨酸)MCPE中在0.2 M PBS(pH 7.4)中掃描速度為50 mVs-1時(shí)20~160 μM 線性范圍內(nèi)的循環(huán)伏安圖;(B)陽(yáng)極峰值電流與蘇木精濃度的關(guān)系圖[4]Fig.7(A)Cyclic voltammograms of different concentration of hematoxylin at poly(alanine)MCPE in 0.2 M PBS(pH 7.4)in the linear range of 20~160 μM at scan rates 50 mVs-1;(B)Plot of anodic peak current versus concentration of hematoxylin[4]

    2.1.2 線性掃描伏安法

    2012年仇小飛等[26]使用pH 5.0的B-R 緩沖溶液作為電解質(zhì),采用線性掃描伏安法研究了蘇木精在玻碳電極上的電化學(xué)行為。對(duì)不同濃度蘇木精標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行線性掃描伏安測(cè)定,蘇木精溶液濃度在2.24×10-6~1.05×10-4mol·L-1范圍內(nèi)與峰電流呈線性關(guān)系,線性回歸方程為ip= 5.281×10-7+0.287c,相關(guān)系數(shù)為0.998 0,其中檢出限(3S/N)為7.4×10-7mol·L-1。采用標(biāo)準(zhǔn)加入法得出回收試驗(yàn)結(jié)果,回收率在95.2%~104.0%之間。應(yīng)用線性掃描伏安法用于蘇木提取液中蘇木精的測(cè)定。取少量蘇木心材的水提液加入到pH 5.0 的B-R緩沖溶液中,按照試驗(yàn)方法通過(guò)線性掃描伏安法測(cè)得響應(yīng)峰電流,再根據(jù)所得的工作曲線換算成樣品量。此法測(cè)定結(jié)果與高效液相色譜法測(cè)定值之間的相對(duì)偏差在-3.6%~3.2%之間。采用線性掃描伏安法用于蘇木中蘇木精的測(cè)定具有時(shí)間短、快速、準(zhǔn)確和靈敏的特點(diǎn)。

    2.2 高效液相色譜法(HPLC)

    2014年王睿等[27]利用HPLC對(duì)國(guó)產(chǎn)和國(guó)外產(chǎn)蘇木藥材中蘇木精含量進(jìn)行檢測(cè)。采用HPLC法的色譜條件:Hypersil ODS2 色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(體積比為20∶80);柱溫:25℃;檢測(cè)波長(zhǎng):296 nm;流速:1 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。以蘇木精作為對(duì)照品,用HPLC法測(cè)定蘇木精含量的結(jié)果表明,國(guó)外蘇木藥材中蘇木精的含量高,均值達(dá)3.67%;國(guó)內(nèi)蘇木藥才蘇木精含量?jī)H為0.33%。蘇木精的線性回歸方程Y=696 275.34X-20 637.23,R2=0.999 9(n=6),蘇木精在0.200~2.000 μg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,同時(shí)進(jìn)行了穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性、加樣回收率試驗(yàn),各項(xiàng)結(jié)果均良好,符合含量分析的測(cè)試要求,操作簡(jiǎn)便易行。

    2.3 薄層層析光密度法

    1986 年曾紀(jì)琰等[28]采用薄層層析光密度法測(cè)定洋蘇木中的蘇木精。圖8 是洋蘇木提取液的TLC 圖。測(cè)定使用氧化鋁-硅膠H 薄層,并將液樣點(diǎn)成條狀,以氯仿-甲醇-甲酸(85∶13∶2)作展開(kāi)劑,直立上行展開(kāi),蘇木精與其他成分分離良好,斑點(diǎn)集中。蘇木精重量在1.6~4.0 μg 內(nèi)可以得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線,線性范圍為1.6~4.0 μg/mL。薄層層析光密度法標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)分別為±0.009 1%和±2.3%,精密度良好。

    圖8 洋蘇木提取液的TLC圖Fig.8 TLC diagram of haematoxylon extract

    3 結(jié)論

    本文綜述了1986-2020 年報(bào)道的蘇木精在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用及分析方法。通過(guò)調(diào)研文獻(xiàn),我們發(fā)現(xiàn)蘇木精除了傳統(tǒng)的應(yīng)用以外,只局限在前列腺癌組織病理學(xué)診斷和生物分子的檢測(cè),其應(yīng)用范圍有待進(jìn)一步擴(kuò)展。測(cè)定蘇木精含量的分析方法較少,最新并用得最多的是電化學(xué)方法。因?yàn)殡娀瘜W(xué)方法檢測(cè)蘇木精具有簡(jiǎn)便、分析響應(yīng)快、操作簡(jiǎn)單、檢出限低、選擇性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。除此之外,還有高效液相色譜法和薄層層析光密度法。HPLC 法雖然準(zhǔn)確,但無(wú)市售的標(biāo)準(zhǔn)品,薄層色譜法繁瑣。由于蘇木精的分析方法單一,且各有局限性,有必要開(kāi)發(fā)其他方法,發(fā)展起來(lái)的新方法應(yīng)該更環(huán)保、更小型化和自動(dòng)化,并具備現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定的能力。為了進(jìn)一步提高方法的準(zhǔn)確性、可靠性和檢測(cè)速度,可加入有效的化學(xué)計(jì)量學(xué)算法。此外,不同技術(shù)的組合也可以很好地克服單一技術(shù)的缺點(diǎn)。隨著現(xiàn)代軟件和硬件技術(shù)的高速發(fā)展,應(yīng)努力開(kāi)發(fā)更高分辨率和穩(wěn)定性、使用簡(jiǎn)單和低成本的儀器。

    猜你喜歡
    蘇木伏安硫化物
    用伏安法測(cè)電阻
    淺談蘇木山精神與共產(chǎn)黨人的初心使命
    活力(2019年17期)2019-11-26 00:41:32
    基于LABVIEW的光電池伏安特性研究
    電子制作(2016年23期)2016-05-17 03:53:41
    蒙藥蘇木-6治療股骨頭壞死97例臨床療效觀察
    通過(guò)伏安特性理解半導(dǎo)體器件的開(kāi)關(guān)特性
    大洋多金屬硫化物自然氧化行為研究
    連續(xù)流動(dòng)法測(cè)定沉積物中的酸揮發(fā)性硫化物
    Li2S-P2S5及Li2S-SiS2基硫化物固體電解質(zhì)研究進(jìn)展
    鎢酸錳催化氧化脫除模擬油硫化物
    站在蘇木拜河邊
    西部(2013年21期)2013-11-15 10:32:52
    中文字幕最新亚洲高清| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品永久免费网站| 国产成+人综合+亚洲专区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| x7x7x7水蜜桃| 黄色毛片三级朝国网站| 91字幕亚洲| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 在线观看午夜福利视频| 久久久国产一区二区| 亚洲av片天天在线观看| 老熟女久久久| 深夜精品福利| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久精品免费免费高清| 老司机影院毛片| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品一区二区免费欧美| 女同久久另类99精品国产91| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产av又大| svipshipincom国产片| 欧美乱色亚洲激情| 村上凉子中文字幕在线| 午夜亚洲福利在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美黄色淫秽网站| 一本综合久久免费| 日韩成人在线观看一区二区三区| 男女之事视频高清在线观看| 91麻豆av在线| 国产精品久久久久成人av| 极品少妇高潮喷水抽搐| 天天添夜夜摸| 人妻久久中文字幕网| 一本大道久久a久久精品| 好男人电影高清在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 男人的好看免费观看在线视频 | 超碰成人久久| 成年动漫av网址| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 老司机影院毛片| 人人妻人人澡人人看| 国产精品电影一区二区三区 | 极品人妻少妇av视频| 99国产精品99久久久久| 99久久人妻综合| 精品久久久久久久毛片微露脸| 操出白浆在线播放| 成人永久免费在线观看视频| 精品一区二区三卡| 国产成人精品无人区| 婷婷丁香在线五月| 精品福利观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 成人亚洲精品一区在线观看| x7x7x7水蜜桃| 亚洲自偷自拍图片 自拍| videos熟女内射| 大陆偷拍与自拍| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| xxxhd国产人妻xxx| 免费看a级黄色片| 成在线人永久免费视频| 久久久国产一区二区| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品免费一区二区三区在线 | 97人妻天天添夜夜摸| 啦啦啦在线免费观看视频4| 女同久久另类99精品国产91| 天堂动漫精品| 女警被强在线播放| 99久久99久久久精品蜜桃| 精品亚洲成a人片在线观看| 99国产综合亚洲精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久亚洲精品不卡| 成年人黄色毛片网站| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久久久久人人人人人| 视频区欧美日本亚洲| 免费不卡黄色视频| 99国产精品一区二区三区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| av超薄肉色丝袜交足视频| 中文字幕最新亚洲高清| 三上悠亚av全集在线观看| 成人免费观看视频高清| 欧美一级毛片孕妇| 手机成人av网站| 国产av一区二区精品久久| 免费看十八禁软件| 热re99久久国产66热| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品福利观看| 五月开心婷婷网| av片东京热男人的天堂| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 久久狼人影院| 香蕉国产在线看| 欧美最黄视频在线播放免费 | 日本欧美视频一区| 麻豆av在线久日| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产成人精品无人区| 在线播放国产精品三级| 丝瓜视频免费看黄片| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲九九香蕉| 久久九九热精品免费| 精品国内亚洲2022精品成人 | 男人操女人黄网站| 国产在视频线精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| tocl精华| 美女福利国产在线| 国产一区有黄有色的免费视频| a级毛片在线看网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 色在线成人网| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美久久黑人一区二区| 无限看片的www在线观看| 午夜影院日韩av| 久久久久久久久久久久大奶| xxxhd国产人妻xxx| 国产在线观看jvid| 一区在线观看完整版| 精品高清国产在线一区| 黄色女人牲交| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 九色亚洲精品在线播放| 女人久久www免费人成看片| 成年女人毛片免费观看观看9 | 99精国产麻豆久久婷婷| av网站在线播放免费| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 成人免费观看视频高清| 老司机福利观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 丝袜在线中文字幕| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 高清毛片免费观看视频网站 | 日本一区二区免费在线视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| tube8黄色片| 欧美激情极品国产一区二区三区| 人人妻人人澡人人看| 亚洲国产精品合色在线| 天堂√8在线中文| 免费不卡黄色视频| 亚洲欧美激情在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产亚洲精品久久久久5区| av天堂久久9| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美在线一区亚洲| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 男人操女人黄网站| 激情在线观看视频在线高清 | 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 757午夜福利合集在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲欧美激情在线| 满18在线观看网站| 真人做人爱边吃奶动态| 一进一出好大好爽视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美精品av麻豆av| 亚洲第一av免费看| 女警被强在线播放| 久久久精品区二区三区| av网站免费在线观看视频| 久久 成人 亚洲| 精品一区二区三卡| 99久久精品国产亚洲精品| 久久国产精品影院| 午夜亚洲福利在线播放| 美女福利国产在线| 99热只有精品国产| 婷婷丁香在线五月| av中文乱码字幕在线| 国产成人影院久久av| 色播在线永久视频| 国产精品免费一区二区三区在线 | av电影中文网址| 日韩欧美一区视频在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美大码av| 亚洲一区二区三区不卡视频| 十八禁网站免费在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲五月天丁香| 日日爽夜夜爽网站| 91字幕亚洲| videosex国产| 亚洲精品自拍成人| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久精品国产综合久久久| 丝瓜视频免费看黄片| 国产欧美亚洲国产| 在线观看午夜福利视频| 国产精品 欧美亚洲| 又黄又爽又免费观看的视频| 丁香欧美五月| 18禁美女被吸乳视频| 欧美黄色淫秽网站| 在线观看免费高清a一片| 免费在线观看影片大全网站| 两个人免费观看高清视频| 香蕉丝袜av| 精品无人区乱码1区二区| 淫妇啪啪啪对白视频| 黄色 视频免费看| 午夜福利在线免费观看网站| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 人妻 亚洲 视频| 99久久精品国产亚洲精品| 丰满饥渴人妻一区二区三| 精品免费久久久久久久清纯 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 免费观看精品视频网站| 午夜福利一区二区在线看| 操美女的视频在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一区二区三区精品91| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99在线人妻在线中文字幕 | 国产一区二区激情短视频| 高清在线国产一区| 免费黄频网站在线观看国产| 久久香蕉激情| 身体一侧抽搐| 在线观看午夜福利视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 69av精品久久久久久| 窝窝影院91人妻| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 12—13女人毛片做爰片一| 交换朋友夫妻互换小说| 国产亚洲精品一区二区www | 国产在视频线精品| 黑丝袜美女国产一区| 久久热在线av| 另类亚洲欧美激情| 人妻久久中文字幕网| 日本五十路高清| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲五月色婷婷综合| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 在线永久观看黄色视频| 国产激情久久老熟女| 国产亚洲精品第一综合不卡| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 免费观看人在逋| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品二区激情视频| 人人澡人人妻人| 一区二区日韩欧美中文字幕| 午夜久久久在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 女人被狂操c到高潮| 999久久久国产精品视频| a在线观看视频网站| 欧美国产精品va在线观看不卡| 视频区欧美日本亚洲| 十八禁高潮呻吟视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 香蕉丝袜av| 亚洲av片天天在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 色播在线永久视频| 免费高清在线观看日韩| 99国产精品99久久久久| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲成人手机| 久久久国产精品麻豆| 人人澡人人妻人| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | ponron亚洲| 欧美日韩成人在线一区二区| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美乱码精品一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 一区二区三区国产精品乱码| 国产精品九九99| 99久久综合精品五月天人人| 国产亚洲一区二区精品| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 香蕉国产在线看| 国产视频一区二区在线看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中出人妻视频一区二区| 国产亚洲精品久久久久5区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品九九99| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美日本中文国产一区发布| 最新美女视频免费是黄的| av视频免费观看在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区 | 中文欧美无线码| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| a级毛片在线看网站| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 狂野欧美激情性xxxx| 婷婷精品国产亚洲av在线 | avwww免费| 成熟少妇高潮喷水视频| 99re在线观看精品视频| 国产精品久久电影中文字幕 | aaaaa片日本免费| 嫩草影视91久久| 99香蕉大伊视频| 婷婷成人精品国产| 免费观看a级毛片全部| 日本黄色视频三级网站网址 | 成人国产一区最新在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 免费黄频网站在线观看国产| 婷婷丁香在线五月| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 校园春色视频在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 正在播放国产对白刺激| 99热只有精品国产| av国产精品久久久久影院| 人妻一区二区av| 久久久久久久久免费视频了| 在线天堂中文资源库| 欧美乱色亚洲激情| 满18在线观看网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 欧美日韩黄片免| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产成人精品久久二区二区免费| 欧美性长视频在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 无遮挡黄片免费观看| 女性生殖器流出的白浆| aaaaa片日本免费| 97人妻天天添夜夜摸| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲精品乱久久久久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 欧美激情高清一区二区三区| 久久久久久久久免费视频了| 国产又爽黄色视频| 操出白浆在线播放| 国产精品免费视频内射| 国产精品av久久久久免费| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产又爽黄色视频| 久99久视频精品免费| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 90打野战视频偷拍视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久国产乱子伦精品免费另类| 成人手机av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 99久久99久久久精品蜜桃| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 日韩人妻精品一区2区三区| 在线观看66精品国产| 中国美女看黄片| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | av中文乱码字幕在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 在线av久久热| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| www.熟女人妻精品国产| 亚洲久久久国产精品| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产精品九九99| 黑人操中国人逼视频| 日韩欧美免费精品| 97人妻天天添夜夜摸| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产精品久久久av美女十八| av一本久久久久| 人妻一区二区av| 中文字幕av电影在线播放| 国产精品.久久久| 91在线观看av| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | ponron亚洲| 久久久精品免费免费高清| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 大码成人一级视频| 麻豆成人av在线观看| 日韩欧美免费精品| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产国语露脸激情在线看| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久精品人人爽人人爽视色| 我的亚洲天堂| 黄色女人牲交| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品在线观看二区| 久久久国产成人免费| 久久香蕉精品热| 亚洲一码二码三码区别大吗| 美国免费a级毛片| 美女高潮到喷水免费观看| 久久热在线av| 黄色女人牲交| 高清av免费在线| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久久国产精品麻豆| 91在线观看av| a级毛片在线看网站| 不卡一级毛片| av片东京热男人的天堂| 人妻 亚洲 视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 一个人免费在线观看的高清视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 一夜夜www| 亚洲专区字幕在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 涩涩av久久男人的天堂| 欧美成狂野欧美在线观看| 岛国在线观看网站| 极品教师在线免费播放| 我的亚洲天堂| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美中文综合在线视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 日本wwww免费看| 国产99白浆流出| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美国产精品va在线观看不卡| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 精品人妻1区二区| 无人区码免费观看不卡| 国产成人欧美| 一区二区三区精品91| 一边摸一边做爽爽视频免费| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲第一av免费看| 精品一区二区三区av网在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产亚洲av高清不卡| 国产国语露脸激情在线看| 国产xxxxx性猛交| 亚洲情色 制服丝袜| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲片人在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲欧美激情在线| 性少妇av在线| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲av片天天在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美一级毛片孕妇| www.999成人在线观看| 在线观看免费高清a一片| 老司机影院毛片| 亚洲一区二区三区不卡视频| 免费日韩欧美在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 91精品国产国语对白视频| 一二三四社区在线视频社区8| 黄色怎么调成土黄色| 国产一区二区激情短视频| 91老司机精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产熟女午夜一区二区三区| 黄色成人免费大全| av超薄肉色丝袜交足视频| 女性被躁到高潮视频| 国产伦人伦偷精品视频| 在线国产一区二区在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美黑人欧美精品刺激| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲 国产 在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美成狂野欧美在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 丝袜人妻中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 欧美日韩av久久| 久久久久久久精品吃奶| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久99一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 免费高清在线观看日韩| 精品国产国语对白av| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| videosex国产| 美女福利国产在线| 日韩三级视频一区二区三区| 看免费av毛片| 天堂动漫精品| 啦啦啦在线免费观看视频4| videosex国产| 9191精品国产免费久久| 久久中文字幕一级| 老司机亚洲免费影院| 黄色视频不卡| 热re99久久国产66热| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中文字幕av电影在线播放| 大香蕉久久网| 色播在线永久视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 黄色丝袜av网址大全| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产野战对白在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 十八禁高潮呻吟视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 99久久99久久久精品蜜桃| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 黄片播放在线免费| 国产精品九九99| 午夜日韩欧美国产| 久久国产精品大桥未久av| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲九九香蕉| 国产精品免费视频内射| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 999久久久国产精品视频| x7x7x7水蜜桃| 免费看a级黄色片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 男女午夜视频在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 一进一出好大好爽视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久国产精品大桥未久av| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 中国美女看黄片| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美丝袜亚洲另类 | 日韩免费av在线播放| av一本久久久久| 午夜亚洲福利在线播放| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久国产精品大桥未久av| 老司机亚洲免费影院| 日本wwww免费看| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 久久久久久久久免费视频了| 国产男女超爽视频在线观看| 手机成人av网站| 视频区图区小说| 久久狼人影院| 脱女人内裤的视频| 精品福利永久在线观看| 婷婷成人精品国产| av网站在线播放免费| 色94色欧美一区二区|