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    鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗保存期試驗研究

    2023-10-25 16:52:44張俊平蔣鳳英張春玲王瑞陽趙本進丁衛(wèi)星楊惠萍李春華
    國外畜牧學·豬與禽 2023年5期
    關鍵詞:保存期

    張俊平 蔣鳳英 張春玲 王瑞陽 趙本進 丁衛(wèi)星 楊惠萍 李春華

    摘? 要:為了確定鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗的保存期,對不同溫度下保存不同時間的3批鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗實驗室制品的物理性狀、安全性和免疫效力進行了檢測。試驗結果表明,該疫苗冷藏(2~8 ℃)保存12個月、室溫(25 ℃左右)保存6個月,其物理性狀、安全性和免疫效力無明顯變化,均能達到《鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗質量標準》的要求。因此,在《鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗制造及檢驗試行規(guī)程》中規(guī)定該疫苗的保存期為:冷藏(2~8 ℃)保存,保存期為12個月。

    關鍵詞:鴿Ⅰ型副黏病毒;滅活疫苗;保存期

    中圖分類號:S858.39 文獻標志碼:A ? ? ? ?文章編號:1001-0769(2023)05-0073-04

    鴿Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus 1,PPMV-Ⅰ)病俗稱鴿瘟或鴿新城疫,是一種由禽Ⅰ型副黏病毒引起的、流行于鴿群的急性、熱性、高度接觸性傳染病,以腸炎、嚴重腹瀉和神經癥狀為特征,迄今為止,鴿新城疫仍然是嚴重危害養(yǎng)鴿業(yè)的主要病毒性傳染病之一[1-4]。? ? ? ? ? ?Dortmans等[5]認為,PPMV-Ⅰ是適應了宿主鴿的新城疫病毒(Newcastle disease viruse,NDV)變異株。PPMV-Ⅰ與雞的NDV具有一定的同源性,也有一定的血清學交叉反應,但PPMV-Ⅰ經在鴿體內傳代,已適應鴿體內寄生和增殖,使PPMV-Ⅰ與雞NDV在抗原性上有了很大差異,因此在使用新城疫疫苗免疫鴿群后,出現(xiàn)抗體水平不高,保護率低,免疫期短,不能完全抵抗強毒的攻擊[6]。因此,分離、培育出免疫原性良好的毒株,研制出具有良好免疫原性的鴿Ⅰ型副黏病毒滅活疫苗,對預防該病至關重要[7]。本實驗室在分離鑒定的基礎上研制了鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗,并對疫苗進行了前期研究,現(xiàn)對該疫苗進行不同保存條件、不同保存時間的物理性狀、安全性和免疫效力的測定,為鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗的保存期提供科學的理論依據。

    1? 試驗材料

    1.1 試驗疫苗

    鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗的批號分別為20200801、20200802和20200803,均由上海佳牧生物制品有限公司制備。按照《鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗制造及檢驗試行規(guī)程》制造和檢驗,符合要求。

    1.2 試驗儀器

    TDZ4-WS低速自動平衡離心機購自上海盧湘儀離心機儀器有限公司;DVNXLVCJC黏度計購自美國博勒飛公司;DNP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱購自上海精宏實驗設備有限公司;BPC-250F生化培養(yǎng)箱購自上海一恒科學儀器有限公司;SPF雞隔離器購自蘇州市馮氏實驗動物設備有限公司。

    1.3 培養(yǎng)基

    硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(fluid thioglycollate medium,TG)、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tryplic soy broth,TSB)、酪胨瓊脂培養(yǎng)基(casein peptone agar medium,GA)均購自北京中海生物科技有限公司。

    1.4 試驗動物

    30日齡非免疫銀王幼鴿(HI抗體水平≤2log2)由上海申裕鴿業(yè)養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供。

    1.5 攻毒毒株

    鴿Ⅰ型副黏病毒強毒株(川沙株E5代)由上海市農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所分離、鑒定和保存,病毒含量為107.5 ELD50/0.1 mL。

    2? 試驗方法

    2.1 試驗方案設計

    將鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗樣本分別保存在冷藏(2~8 ℃)、室溫(25 ℃左右)溫度條件下,按以下時間點檢測物理性狀、安全性和免疫效力。

    冷藏保存,分別在保存3、6、9、12、15個月后抽取樣本進行檢測;室溫保存,分別在保存1、2、3、6、9個月后抽取樣本進行檢測。

    2.2 疫苗物理性狀檢驗

    按現(xiàn)行《中華人民共和國獸藥典》三部[8]中常規(guī)油乳劑滅活疫苗檢驗方法進行。

    2.3 疫苗安全性檢驗

    給10羽試驗幼鴿分別接種在不同溫度下保存不同時間的疫苗,每羽肌內注射疫苗? ?1.0 mL,觀察14 d,記錄試驗鴿的臨床反應情況。

    2.4 疫苗免疫效力檢驗

    給10羽試驗幼鴿分別接種下不同溫度下保存不同時間的疫苗,每羽肌內注射疫苗? ? ? 50 μL。接種后28 d,每羽采血,分離血清,進行HI抗體效價測定,統(tǒng)計抗體效價的幾何平均值。

    3? 試驗結果

    3.1 鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗冷藏保存試驗結果

    實驗室試制的3批(生產批號分別為:20200801、20200802、20200803)鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗冷藏保存12個月,疫苗的物理性狀、安全性和免疫效力檢驗均合格;保存15個月,生產批號為20200802的疫苗免疫效力檢驗不合格。根據試驗結果確定鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗冷藏保存期為12個月。具體試驗結果見表1。

    3.2 鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗室溫保存試驗結果

    實驗室試制的3批鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗室溫保存6個月,疫苗的物理性狀、安全性和免疫效力檢驗均合格,保存9個月的生產批號為20200802的疫苗經物理性狀和免疫效力檢驗均不合格,根據試驗結果確定鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗室溫保存期為6個月。具體試驗結果見表2。

    4? 分析與討論

    鴿Ⅰ型副黏病毒病是危害養(yǎng)鴿業(yè)的主要疾病之一,迄今尚無有效治療藥物,接種疫苗是預防該病的關鍵。盡管鴿副黏病毒與雞新城疫病毒為同一屬,但兩種病毒在抗原性上有一定差異,在致病性上也有一定區(qū)別,許多報道表明,用現(xiàn)有的雞新城疫疫苗接種鴿子雖具有一定的效果,但保護率并不理想[9-10]。因此,研制一種安全有效的鴿Ⅰ型副黏病毒滅活疫苗迫在眉睫。疫苗研制過程中疫苗保存期的確定是必不可少的環(huán)節(jié)。

    本研究是在鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗前期研究的基礎上,進行的不同保存條件、不同保存時間的鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗的物理性狀、安全性和免疫效力檢測,根據試驗結果判定,疫苗冷藏(2~ 8 ℃)可保存12個月,室溫(25 ℃左右)可保存6個月??紤]到實際生產及疫苗運輸過程中存在很多影響因素,并且目前絕大部分生產、經營、使用單位都具備冷藏(2~8 ℃)保存條件。因此,將鴿Ⅰ型副黏病毒(S-1株)滅活疫苗保存期定為:冷藏(2~8 ℃)保存,保存期為12個月。

    參考文獻

    [1] MARLIER D,VINDEVOGEL H.Viral infections in pigeons[J].The Veterinary Journal,2006,172(1):40-51.

    [2] KIM L M,KING D J,GUZMAN H,et al.Biological and phylogenetic characterization of pigeon paramyxovirus serotype 1 circulating in wild North American pigeons and doves[J].Journal of Clinical Microbiology,2008,46(10):3303-3310.

    [3] KALETA E F,ALEXANDER D J,RUSSELL P H.The first isolation of the PPMV-1 virus responsible for the current panzootic in Pigeons[J].Avian Pathology,1985,14:553-557.

    [4] (美)Y. M. 塞弗(SAIF Y M)主編.蘇敬良,高福,索勛主譯.禽病學[M].第十一版.北京:中國農業(yè)出版社,2005:108-130.

    [5] DORTMANS J C F M,ROTTIER P J M,KOCH G,et al.Passaging of a Newcastle disease virus pigeon variant in chickens results in selection of viruses with mutations in the polymerase complex enhancing virus replication and virulence[J].Journal of General Virology,2011,92(Pt2):336-345.

    [6] 秦彤,劉小惠,崔奕杰,等.鴿Ⅰ型副黏病毒HT40克隆株的篩選及其生物學特性鑒定[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43(6):11-12.

    [7] 仇微紅,葉賀佳,李敏,等.1株鴿新城疫病毒的分離、鑒定及生物學特性研究[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2012(3):7-10.

    [8] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典2020年版三部[S].北京:中國農業(yè)出版社,2021.

    [9] 張淑霞,楊增歧,趙余放,等.鴿禽I型副粘病毒油佐劑滅活苗對肉種鴿免疫效果觀察[J].中國預防獸醫(yī)學報,1999,21(3):163-165.

    [10] 古靜,黨安坤,蘭鄒然.鴿I型副黏病毒病研究進展[J].中國獸醫(yī)雜志,2019,55(1):95-97.

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