張儷緣
(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院高新醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 南昌330000 )
IgA 腎病(IgAN)是最為常見的一種原發(fā)性腎小球疾病,以腎小球系膜區(qū)以IgA 或IgA 沉積為特點(diǎn)[1]。腎小管間質(zhì)損害(Tubulointerstitial lesions,TIL)為間質(zhì)性腎炎,研究表明,TIL 程度已成為決定腎臟疾病的預(yù)后的重要指標(biāo)[2]。早期判斷TIL 程度尤為重要,可以避免不必要的或過度的治療。近年來國內(nèi)分子診斷技術(shù)飛速發(fā)展,纖溶酶原激活物抑制物-1(Plasminogen activator Inhibitor-1,PAI-1)是組織型纖溶酶原激活物和尿激酶型纖溶酶原激活物的主要抑制劑,可抑制組織和血漿纖維蛋白溶解[3]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(Vascular endothelium growth factor,VEGF)是一種對(duì)血管生長有強(qiáng)誘導(dǎo)作用并且能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增生、遷移的生長因子[4]。本研究就PAI-1、VEGF 及其受體VEGF-R2(flk-1)與IgAN 患者TIL 程度相關(guān)性進(jìn)行分析,旨在為臨床診治提供新思路。
1.1 一般資料 選取2019 年8 月至2021 年9 月我院收治的IgAN 患者86 例,作為IgAN 組。其中男48 例,女38 例,年齡為38~64 歲,平均年齡(51.28±5.67)歲;根據(jù)Katafuchi 半定量積分[5]評(píng)估TIL 損傷程度,輕度損傷者31 例,中度損傷者25例,重度損傷者30 例。納入標(biāo)準(zhǔn):滿足IgAN 診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];入組前未接受規(guī)范性治療;臨床資料完整無缺失。排除標(biāo)準(zhǔn):伴有缺血性腎損傷;合并急性或慢性感染者;合并糖尿病、冠心病或(和)惡性腫瘤疾病者;繼發(fā)性IgAN 者。
同時(shí)以同期于我院疑似腎臟惡性腫瘤而進(jìn)行病理活檢且結(jié)果正常的85 例對(duì)象作為對(duì)照組,男46 例,女39 例,年齡為36~63 歲,平均年齡(52.87±5.43)歲。IgAN 組與健康對(duì)照組性別、年齡比較無差異,具有可比性(P>0.05)。
1.2 方法 采用免疫組化染色法檢測兩組VEGF及其受體flk-1 的表達(dá)情況。詳細(xì)步驟為:取腎活檢組織制成的石蠟,按2 μm 切片、脫蠟。蒸餾水沖洗,PBS 浸泡5 分鐘。5%~10%正常山羊血清封閉,孵育。傾去血清后滴加稀釋的兔抗人VEGF 多抗(購自北京義翹神州科技股份有限公司)、鼠抗人flk-1 單抗(購自杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司),37 ℃孵育1 h 或4 ℃過夜。PBS 沖洗,加稀釋的生物素標(biāo)記二抗,37 ℃孵育30 mim;或滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液,37℃或室溫孵育30分鐘。PBS 沖洗,滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素,37 ℃孵育30 min。PBS 沖洗,顯色劑顯色,沖洗、復(fù)染、封片。于400 倍視野下每例隨機(jī)選取10 個(gè)腎小球,分別計(jì)算VEGF、flk-1 陽性面積占腎小球面積的百分比,取其均值為最終表達(dá)量。
PAI-1:抽取所有研究對(duì)象肘靜脈血5 mL,離心提取血漿,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定,人ELISA PAI-1 試劑盒購自北京義翹神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.),按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料采用()描述,兩組間比較行t 檢驗(yàn),多組間比較行F 檢驗(yàn);相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析;P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 不同組別PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)的對(duì)比IgAN 患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)均高于對(duì)照組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。
表1 不同組別PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)的對(duì)比
2.2 不同TIL 損傷患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)的比較 在IgAN 患者中,以重度TIL 損傷組PAI-1、VEGF 及flk-1 最高,輕度TIL 損傷組PAI-1、VEGF 及flk-1 最低,各組間PAI-1、VEGF 及flk-1表達(dá)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。
表2 不同TIL 損傷患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)對(duì)比
2.3 PAI-1、VEGF 及flk-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析 PAI-1、VEGF 及flk-1 均與腎小管間質(zhì)損害程度呈正相關(guān)性(P<0.05),見表3、圖1-3。
圖1 PAI-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析散點(diǎn)圖
圖2 VEGF 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析散點(diǎn)圖
圖3 flk-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析散點(diǎn)圖
表3 PAI-1、VEGF 及flk-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析
IgAN 常伴無癥狀性血尿及不同程度蛋白尿,隨著病情的發(fā)展最終可誘發(fā)終末期腎?。‥ndstage renal disease,ESRD)[7]。腎小管間質(zhì)病變程度與IgAN 患者腎功能密切相關(guān),是影響預(yù)后的病理組織學(xué)改變的因素之一。因此,準(zhǔn)確判斷腎小管間質(zhì)損傷程度有利于了解臨床診治療效及預(yù)測疾病發(fā)展。
PAI-1 即內(nèi)皮細(xì)胞型纖溶酶原激活物抑制因子,屬于絲氨酸蛋白酶抑制物。腎小管間質(zhì)損害與細(xì)胞外基質(zhì)降解受到抑制有關(guān),而在這一過程中,PAI-1 則其重要作用[8]。馬燕等[9]研究發(fā)現(xiàn),血清PAI-1 水平在原發(fā)性IgA 腎病患者中隨病情程度加劇持續(xù)增高,血清PAI-1 水平有利于評(píng)估原發(fā)性IgA 腎病病情程度。本研究結(jié)果顯示,IgAN 患者PAI-1 表達(dá)高于對(duì)照組,隨著腎小管間質(zhì)損害程度的加重,PAI-1 水平明顯升高。其原因是PAI-1 在高水平狀態(tài)下不僅可導(dǎo)致腎內(nèi)腎小球血管硬化,同時(shí)還可促進(jìn)腎小管間質(zhì)纖維化,加速病變發(fā)展[10]。
VEGF 是一種選擇性的內(nèi)皮有絲分裂原,其受體則屬于絡(luò)氨酸激酶c-fms 中的一種。本研究結(jié)果顯示,VEGF 及flk-1 均與腎小管間質(zhì)損害程度呈正相關(guān)性,表明VEGF 及其受體參與IgAN 患者腎小管間質(zhì)損害的進(jìn)展。進(jìn)一步分析其原因,VEGF對(duì)腎小球功能的影響基于刺激新生血管生成、刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移以及免疫抑制作用等生物學(xué)功能[11]。此外,安麗麗等[12]研究指出,VEGF 與受體flk-1 結(jié)合后可促使下游炎性介質(zhì)聚集,誘發(fā)炎性反應(yīng)綜合征;而炎癥反應(yīng)的爆發(fā)繼而可破壞腎小管上皮細(xì)胞完整性,刺激系膜細(xì)胞增生,改變細(xì)胞外基質(zhì)?;谏鲜鲅芯?,我們認(rèn)為PAI-1、VEGF及其受體flk-1 在IgAN 腎損傷發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色,臨床可單獨(dú)或聯(lián)合檢測三者水平變化,及時(shí)評(píng)估臨床診治的進(jìn)展。
綜上所述,PAI-1、VEGF 及其受體flk-1 與IgAN 患者腎小管間質(zhì)損害程度顯著相關(guān),監(jiān)測各指標(biāo)水平有利于判斷腎小管病理損害程度。
實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)2023年3期