血必凈通過(guò)miR-155/JAK2/STAT1信號(hào)通路對(duì)肺炎克雷伯菌所致重癥肺炎大鼠肺組織損傷的影響

尉飛 王湘雨 劉志勇

1河南省中醫(yī)院（河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院）（鄭州 450000）；2河南中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 （鄭州 450011）

肺炎克雷伯菌是常見(jiàn)的致病菌，其引發(fā)的重癥肺炎（SP）在臨床上最為常見(jiàn)，近年來(lái)，克雷伯桿菌肺炎的發(fā)病率逐年升高［1-2］。由于該類(lèi)肺炎對(duì)一般抗生素具有一定的耐藥性，因此，尋找有效的治療藥物具有重要意義［3］。血必凈是紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸等提取物的注射液，臨床上用于SP 及臟器衰竭等。近年來(lái)，有研究［4-5］證實(shí)血必凈能夠通過(guò)調(diào)控miR-233、miR-17-5P 等微小RNA，對(duì)肝、肺等的重要臟器起到保護(hù)作用損傷，因此，推測(cè)血必凈能夠通過(guò)某種機(jī)制調(diào)控微小RNA，降低SP 對(duì)肺部的損傷。微小RNA-155（miR-155）是一種多功能基因，轉(zhuǎn)錄后能夠抑制目的基因的表達(dá)，參與免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)及腫瘤的發(fā)生與發(fā)展等，是SP 研究中熱門(mén)的基因之一，目前，血必凈對(duì)SP 大鼠肺組織損傷的影響研究較少，其作用機(jī)制尚不清楚，而JAK2/STAT1 通路參與細(xì)胞的增殖、分化等多種途徑，是免疫調(diào)節(jié)的重要通路［6-7］。因此，本研究通過(guò)建立SP 大鼠模型，探究血必凈通過(guò)miR-155/JAK2/STAT1 通路對(duì)SP 大鼠肺組織損傷的影響，為治療該疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)、SD雄性大鼠，體質(zhì)量185 ～215 g，平均（200 ± 15）g，購(gòu)于斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，許可證為［生產(chǎn)許可SCXK（京）2019-0010］。本研究經(jīng)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 主要試劑與儀器 血必凈注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20040033，天津紅日藥業(yè)股份有限公司）；miR-155 激動(dòng)劑購(gòu)于廣州瑞博生物科技有限公司；肺炎克雷伯菌標(biāo)準(zhǔn)菌株購(gòu)于上海碩欣生物科技有限公司；戊巴比妥鈉（CAS：57-33-0，上海哈靈生物科技有限公司）；多聚甲醛（CAS：30525-89-4，上海西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司；TRIzol 試劑盒購(gòu)于武漢純度生物科技有限公司；IFN-γ、IL-4 試劑盒（上海江萊生物科技有限公司）；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒購(gòu)于北京康瑞納生物科技有限公司；受體酪氨酸激酶2（JAK2）及其山羊抗兔二抗購(gòu)于深圳市豪地華拓生物科技有限公司；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子1（STAT1）單克隆抗體及及其山羊抗兔二抗（上海圻明生物科技有限公司）。

離心機(jī)（型號(hào)：M1324R，深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；分析天平（型號(hào)：FA2204C，北京佳源興業(yè)科技有限公司）；恒濕恒溫箱購(gòu)于上海連橋生物科技有限公司；Premier3000 大小鼠血?dú)夥治鰞x購(gòu)于上海玉研科學(xué)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 大鼠模型建立及分組 將肺炎克雷伯菌，以生理鹽水稀釋為1.2 × 109cfu/mL 的菌液，備用。取50 只SD 雄性大鼠，隨機(jī)選取8 只為對(duì)照組，其余大鼠建立SP 模型。將所有大鼠稱(chēng)重后進(jìn)行麻醉處理（30 mg/kg，2%戊巴比妥鈉），麻醉后固定于鼠板，對(duì)頸部進(jìn)行常規(guī)消毒、備皮，暴露出氣管上端，除對(duì)照組外，采用注射器經(jīng)氣管注入3 mL菌液，對(duì)照組注入等量的生理鹽水。接種后使大鼠保持直立20 s，便于菌液進(jìn)入肺部，縫合傷口，密切關(guān)注大鼠生命體征。當(dāng)大鼠、表情呆滯、呼吸急促、活動(dòng)量明顯減少，且經(jīng)血?dú)夥治鰞x檢測(cè)動(dòng)脈氧分壓≤ 8 kPa 時(shí)，建模成功［8］。

建模過(guò)程中2 只建模過(guò)程中死亡，其余大鼠隨機(jī)分為模型組，miR-155 激動(dòng)劑組，血必凈低、高組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組，每組各8 只。

1.3.2 藥物處理 參照人與大鼠藥物計(jì)量換算系數(shù)［9］，miR-155 激動(dòng)劑組給予miR-155 激動(dòng)劑80 mg/kg，血必凈低、高劑量組分別給予血必凈注射液4、8 mg/kg，miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組給予miR-155 激動(dòng)劑80 mg/kg 和血必凈8 mg/kg，對(duì)照組與模型組均給予等量的生理鹽水，均尾靜脈注射，每天1 次，連續(xù)給藥7 d。

1.3.3 標(biāo)本采集及處理 給藥7 d 后，禁食12 h，采集大鼠眼眶靜脈血5 mL，2 mL 冷藏保存，用于miR-155 檢測(cè)，剩余血液離心5 min（轉(zhuǎn)速：5 000 r/min，離心半徑：10 cm），取上層血清，于-80 ℃冷藏箱中冷凍保存。所有大鼠麻醉后處死，取大鼠全肺，用于稱(chēng)重并計(jì)算肺系數(shù)（LI），每組取4 只大鼠全肺用于測(cè)量濕重/干重比值（W/D），另外4 只右肺于4%多聚甲醛固定，用于HE 染色，左肺于液氮中冷凍保存，用于qRT-PCR 及免疫印跡法檢測(cè)mRNA 及蛋白表達(dá)量。

1.3.4 大鼠肺系數(shù)（LI）及濕重/干重比值（W/D）取大鼠全肺，采用濾紙擦干肺組織表面水分，稱(chēng)重，根據(jù)公式計(jì)算LI，［LI=肺質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）×10］。稱(chēng)取全肺濕重后，置于恒溫箱（80 ℃）中連續(xù)烘烤20 h，稱(chēng)取干重，計(jì)算W/D 值。

1.3.5 大鼠血清白細(xì)胞介素-1β（L-1β）、白細(xì)胞介素-18（L-18）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平 取上清液，室溫解凍后進(jìn)行血清IL-1β、IL-18及TNF-α水平檢測(cè)，采用全自動(dòng)生化分析儀，以酶聯(lián)免疫（ELISA）雙抗夾心法進(jìn)行檢測(cè)，按照相應(yīng)ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3.6 大鼠肺組織病理檢測(cè) 取部分固定的大鼠肺組織，乙醇脫水后進(jìn)行石蠟包埋，切片（4 μm）后進(jìn)行HE 染色，采用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠肺組織水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理學(xué)變化。

1.3.7 qRT-PCR 檢測(cè)大鼠miR-155 表達(dá)情況［10］取靜脈血2 mL，室溫解凍后根據(jù)TRIzol 試劑盒說(shuō)明書(shū)，提取總RMA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到cDNA，進(jìn)行qRT-PCR 檢測(cè)根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)建立反應(yīng)體系：Master Mix10 μL，cDNA 模板2 μL，上下游引物各1 μL，TaqDNA 聚合酶酶0.4 μL；純水加至20 μL；反應(yīng)條件：95 ℃，30 s→60 ℃，15 s→72 ℃，10 s，循環(huán)40 次。以U6 為內(nèi)參，采用2-△△CT法計(jì)算miR-155表達(dá)量，引物序列見(jiàn)表1。

表1 PCR 引物序列Tab.1 PCR primevs

1.3.8 大鼠肺組織JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)情況 取部分凍存肺組織約0.5 g，研磨成勻漿，采用TRIzol法提取肺組織總RMA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，按照熒光定量PCR 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，建立反應(yīng)體系（10 μL）：SYBR Green 10 μL，cDNA 模板1 μL，上下游引物各1 μL；擴(kuò)增條件：95 ℃，30 s，60 ℃，15 s，72 ℃，10 s，循環(huán)40 次［11］。以GAPDH 為內(nèi)參，采用2-△△CT法計(jì)算JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)量，引物序列見(jiàn)表2。

表2 PCR 引物序列Tab.2 PCR primevs

1.3.9 大鼠肺組織JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT1 蛋白表達(dá)情況 取部分液氮保存的肺組織，將其研磨成勻漿并加入RIPA 緩沖液，離心后提取上清液，采用BCA 試劑盒測(cè)定蛋白濃度，加入上樣緩沖液，煮沸5 min 后進(jìn)行電泳，分離目的蛋白，轉(zhuǎn)膜后室溫封閉2 h，加入兔抗大鼠JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT1 一抗及內(nèi)參，4 ℃孵育過(guò)夜，沖洗后加入山羊抗兔二抗，室溫孵育2 h，再次沖洗，最終進(jìn)行ECL 顯影，并分析結(jié)果。蛋白表達(dá)量為目的蛋白條與β-Actin 帶灰度值的比值［12］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 22.0 軟件分析數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多樣本計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠LI 及肺W/D 值比較 與對(duì)照組比較，模型組LI 及肺W/D 值均升高（P＜ 0.05）；與模型組比較，miR-155 激動(dòng)劑組LI 及肺W/D 值升高，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組LI 及肺W/D 值均降低（P＜ 0.05）；與miR-155 激動(dòng)劑組比較，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組LI 及肺W/D 值均降低（P＜ 0.05），與血必凈低劑量組比較，血必凈高劑量組LI 及肺W/D 值升高（P＜ 0.05），與血必凈高劑量組比較，miR-155激動(dòng)劑+血必凈組LI 及肺W/D 值升高（P＜ 0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 大鼠LI 及肺W/D 值Fig.1 LI and lung W/D values in rats

2.2 大鼠血清IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平比較 與對(duì)照組比較，模型組IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平均升高（P＜ 0.05）；與模型組比較，miR-155 激動(dòng)劑組IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平升高，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組IL-1β、IL-18及TNF-α水平降低（P＜ 0.05）；與miR-155激動(dòng)劑組比較，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平降低（P＜ 0.05），與血必凈低劑量組比較，血必凈高劑量組IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平降低（P＜ 0.05），與血必凈高劑量組比較，miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組IL-1β、IL-18及TNF-α 水平升高（P＜ 0.05）。見(jiàn)表3。

表3 大鼠血清IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平比較Tab.3 Comparison of serum IL-1β，IL-18 and TNF-α levels in rats ±s，mg/kg

表3 大鼠血清IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平比較Tab.3 Comparison of serum IL-1β，IL-18 and TNF-α levels in rats ±s，mg/kg

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與miR-155激動(dòng)劑組比較，cP＜0.05；與血必凈低劑量組比較，dP＜0.05；與血必凈高劑量組比較，eP＜0.05

TNF-α 66.53 ± 5.22 102.31 ± 7.34a 118.28 ± 9.26ab 84.68 ± 7.08abc 75.85 ± 6.82abcd 83.71 ± 7.25abde組別對(duì)照組模型組miR-155激動(dòng)劑組血必凈低劑量組血必凈高劑量組miR-155激動(dòng)劑+血必凈組鼠量8 8 8 8 8 8 IL-1β 52.83 ± 6.12 87.48 ± 8.24a 96.38 ± 9.24ab 80.31 ± 8.35abc 66.23 ± 6.03abcd 79.77 ± 8.05abde IL-18 92.34 ± 8.38 238.87 ± 10.54a 253.15 ± 12.06ab 172.38 ± 7.49abc 113.23 ± 10.03abcd 168.77 ± 9.05abde

2.3 大鼠肺組織病理檢測(cè)結(jié)果 對(duì)照組：肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡大小均勻；模型組：肺泡完整性遭到破壞，可見(jiàn)肺泡水腫，肺間質(zhì)增厚，伴隨炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；miR-155 激動(dòng)劑組：肺泡結(jié)構(gòu)破壞、水腫等情況較模型組嚴(yán)重，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增多；血必凈低劑量組：肺泡結(jié)構(gòu)部分恢復(fù)，水腫減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)部分減少；血必凈高劑量組：肺泡結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)，水腫減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少；miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組：肺泡結(jié)構(gòu)部分恢復(fù)，水腫部分減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯局部減少，但減輕程度小于血必凈高劑量組。見(jiàn)圖2。

2.4 大鼠miR-155 表達(dá)量比較 與對(duì)照組比較，模型組miR-155 表達(dá)升高（P＜ 0.05）；與模型組比較，miR-155 激動(dòng)劑組miR-155 表達(dá)升高，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組miR-155表達(dá)均降低（P＜ 0.05）；與miR-155 激動(dòng)劑組比較，血必凈低、高劑量及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組miR-155表達(dá)降低（P＜ 0.05），與血必凈低劑量組比較，血必凈高劑量組miR-155 表達(dá)降低（P＜ 0.05），與血必凈高劑量組比較，miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組miR-155 表達(dá)升高（P＜ 0.05），見(jiàn)表4。

表4 大鼠miR-155 表達(dá)量比較Tab.4 Comparison of relative expression levels of rat miR-155 ±s

注：與對(duì)照組比較，aP ＜ 0.05；與模型組比較，bP ＜ 0.05；與miR-155激動(dòng)劑組比較，cP ＜ 0.05；與血必凈低劑量組比較，dP ＜ 0.05；與血必凈高劑量組比較，eP ＜ 0.05

miR-155 1.00 ± 0.02 3.29 ± 0.72a 3.72 ± 0.82ab 2.63 ± 0.61abc 1.90 ± 0.55abcd 2.60 ± 0.60abce組別對(duì)照組模型組miR-155激動(dòng)劑組血必凈低劑量組血必凈高劑量組miR-155激動(dòng)劑+血必凈組鼠量8 8 8 8 8 8

2.5 大鼠肺組織JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)情況 與對(duì)照組比較，模型組JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)升高（P＜ 0.05）；與模型組比較，miR-155 激動(dòng)劑組JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)升高，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)均降低（P＜ 0.05）；與miR-155 激動(dòng)劑組比較，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組JAK2、STAT1 mRNA表達(dá)降低（P＜ 0.05），與血必凈低劑量組比較，血必凈高劑量組JAK2、STAT1 mRNA表達(dá)降低（P＜ 0.05），與血必凈高劑量組比較，miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)升高（P＜ 0.05），見(jiàn)表5。

表5 大鼠肺組織JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)量比較Tab.5 Comparison of the relative expression of JAK2 and STAT1 mRNA in rat lung tissue ±s

表5 大鼠肺組織JAK2、STAT1 mRNA 表達(dá)量比較Tab.5 Comparison of the relative expression of JAK2 and STAT1 mRNA in rat lung tissue ±s

注：與對(duì)照組比較，aP ＜ 0.05；與模型組比較，bP ＜ 0.05；與miR-155激動(dòng)劑組比較，cP ＜ 0.05；與血必凈低劑量組比較，dP ＜ 0.05；與血必凈高劑量組比較，eP ＜ 0.05

STAT1 mRNA 1.00 ± 0.03 3.31 ± 1.26a 4.07 ± 1.68ab 2.98 ± 0.43abc 2.27 ± 0.77abcd 3.02 ± 0.48abde組別對(duì)照組模型組miR-155激動(dòng)劑組血必凈低劑量組血必凈高劑量組miR-155激動(dòng)劑+血必凈組鼠量8 8 8 8 8 8 JAK2 mRNA 1.00 ± 0.05 2.89 ± 0.96a 3.27 ± 1.01ab 1.88 ± 0.44abc 1.31 ± 0.24abcd 1.90 ± 0.40abde

2.6 大鼠肺組織JAK2、STAT1 蛋白表達(dá)情況 與對(duì)照組比較，模型組p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 升高（P＜ 0.05）；與模型組比較，miR-155 激動(dòng)劑組p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 升高，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 均降低（P＜ 0.05）；與miR-155 激動(dòng)劑組比較，血必凈低、高劑量組及miR-155激動(dòng)劑+血必凈組p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1降低（P＜ 0.05），與血必凈低劑量組比較，血必凈高劑量組p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 降低（P＜0.05），與血必凈高劑量組比較，miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 升高（P＜0.05），見(jiàn)表6、圖3。

圖3 肺組織JAK2、STAT1 蛋白表達(dá)圖Fig.3 Expression of JAK2 and STAT1 protein in lung tissue

表6 大鼠肺組織p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 比較Tab.6 Comparison of p-JAK2/JAK2，p-STAT1/STAT1 in rat lung tissue ±s

表6 大鼠肺組織p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 比較Tab.6 Comparison of p-JAK2/JAK2，p-STAT1/STAT1 in rat lung tissue ±s

注：與對(duì)照組比較，aP ＜ 0.05；與模型組比較，bP ＜ 0.05；與miR-155激動(dòng)劑組比較，cP ＜ 0.05；與血必凈低劑量組比較，dP ＜ 0.05；與血必凈高劑量組比較，dP ＜ 0.05

p-STAT1/STAT1 0.31 ± 0.03 0.58 ± 0.03a 0.81 ± 0.02ab 0.41 ± 0.04abc 0.29 ± 0.04abcd 0.43 ± 0.04abde組別對(duì)照組模型組miR-155激動(dòng)劑組血必凈低劑量組血必凈高劑量組miR-155激動(dòng)劑+血必凈組鼠量4 4 4 4 4 4 p-JAK2/JAK2 0.24 ± 0.02 0.48 ± 0.04a 0.83 ± 0.03ab 0.26 ± 0.04abcd 0.21 ± 0.03abcd 0.28 ± 0.04abde

3 討論

血必凈是一種中藥注射液，主要成分為紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸等中藥材提取物，臨床中常用作呼吸道等疾病的炎癥反應(yīng)或器官衰竭的治療［13］。肺炎克雷伯菌引發(fā)的SP，或?qū)Ψ谓M織造成不同程度的損傷，由于該類(lèi)肺炎對(duì)常規(guī)抗生素具有一定的抗藥性，因此中藥被開(kāi)始治療該類(lèi)疾?。?4-15］。有研究［16］顯示血必凈對(duì)于應(yīng)激性器官損傷具有一定的保護(hù)作用，因此，推測(cè)血必凈對(duì)SP 大鼠肺組織損傷具有一定的保護(hù)作用。JAK2/STAT1 信號(hào)通路與機(jī)體的免疫作用相關(guān)，而miR-155 在免疫調(diào)節(jié)中具有重要作用，同時(shí)在炎癥反應(yīng)的研究中較為熱門(mén)［17-19］。本研究建立SP 大鼠，探究血必凈通過(guò)miR-155/JAK2/STAT1 通路對(duì)SP 大鼠肺組織損傷影響及其作用機(jī)制。

本研究對(duì)各組SP 大鼠的LI，肺W/D 及血清炎癥因子進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示模型組LI，肺W/D，IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平升高，表明SP 會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)，并對(duì)肺組織造成一定損傷，而miR-155 激動(dòng)劑會(huì)加重炎癥反應(yīng)及肺損傷；在給予模型大鼠或miR-155 激動(dòng)劑模型大鼠血必凈后，LI，肺W/D，IL-1β、IL-18 及TNF-α 水平上升，IL-1β、IL-18 及TNF-α 均為促炎因子，注射血必凈后，促炎因子受到抑制，表明血必凈對(duì)于炎癥反應(yīng)有很好的抑制作用，進(jìn)而減少對(duì)肺組織的損傷，起到保護(hù)肺組織的作用，同時(shí)能夠減少部分miR-155 激動(dòng)劑帶來(lái)的損傷，其中高劑量血必凈保護(hù)作用更強(qiáng)。分析原因?yàn)?，血必凈注射液中具有紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸五中中藥提取物，多個(gè)治療靶點(diǎn)，具有更好的抗炎效果，同時(shí)還具有抗氧化、改善微循環(huán)，保護(hù)上皮細(xì)胞的作用，通過(guò)多種機(jī)制對(duì)SP 造成的肺損傷具有一定的保護(hù)作用［20-21］。另外大鼠的肺組織病理學(xué)結(jié)果顯示，miR-155 能夠增加SP對(duì)肺組織造成的結(jié)構(gòu)破壞，加重水腫及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而血必凈則會(huì)改善肺泡結(jié)構(gòu)，減輕水腫，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，推測(cè)其能夠通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)減輕肺部損傷。

JAK2/STAT1 通路是免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)中的重要途徑，參與細(xì)胞的增殖、分化等，多數(shù)細(xì)胞因子由該通道進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［22-23］。吳舒懋等［24］研究而結(jié)果顯示，SP 肺組織中，升高mir-34a 表達(dá)，能夠抑制sirt1 表達(dá)，加重肺損傷；降低mir-34a 表達(dá)表達(dá)，能夠促進(jìn)sirt1 表達(dá)，減輕肺損傷。吳程程［25］等證實(shí)，血必凈通過(guò)調(diào)控p38 MAPK/NF-kB 通路，降低百草枯中毒大鼠的炎癥反應(yīng)，減少對(duì)肺組織的損傷。根據(jù)以上研究結(jié)果推測(cè)血必凈可能通過(guò)miR-155調(diào)控JAK2/STAT1 通路，起到對(duì)肺部的保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示，模型組、miR-155激動(dòng)劑組JAK2、STAT1 mRNA 及p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 升高，表明SP 的會(huì)激活JAK2/STAT1 通路，該通路可能由miR-155 進(jìn)行調(diào)控，當(dāng)JAK2 激活后，使STAT1磷酸化形成p-STAT1，STAT1 活化巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，調(diào)控促炎因子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)［26］。另外，血必凈低、高劑量組及miR-155 激動(dòng)劑+血必凈組JAK2、STAT1 及p-JAK2/JAK2、p-STAT1/STAT1 降低，表明血必凈可抑制JAK2/STAT1 通路，從而抑制SP 引起的炎癥反應(yīng)，同時(shí)能降低部分miR-155激動(dòng)劑對(duì)JAK2/STAT1 通路的激活作用，提示血必凈對(duì)JAK2/STAT1 通路的調(diào)控作用可能是通過(guò)miR-155 進(jìn)行。

綜上所述，miR-155 在SP 大鼠肺組織中表達(dá)升高，血必凈能夠通過(guò)抑制miR-155 降低JAK2/STAT1 信號(hào)通路，減輕肺損傷。但本研究具有一定的局限性，僅對(duì)肺部損傷的可能機(jī)制之一進(jìn)行研究，而肺損傷會(huì)受到多種通路及因子影響，因此應(yīng)對(duì)其他可能機(jī)制進(jìn)行深入研究，為臨床治療SP提供給新有效藥物；在外界條件限制下未設(shè)置miR-155 拮抗劑組為血必凈的作用機(jī)制提供佐證，可作為研究方向，進(jìn)一步驗(yàn)證血必凈可能機(jī)制。

【Author contributions】WEI Fei performed the experiments and wrote the article.WANG Xiangyu performed the experiments.WANG Xiangyu and LIU Zhiyong revised the article.LIU Zhiyong designed the study and reviewed the article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.