HS-SPME-GC-MS法分析雞蛋花不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成分*

陳柳生，王如意，林曉璇，周偉明，王麗凡

(廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東 廣州 510520)

雞蛋花，又名緬梔子，蛋黃花，擂捶花，是夾竹桃科植物雞蛋花PlumeriarubraL.cv.Acutifolia的干燥花朵。它原產(chǎn)于熱帶美洲，現(xiàn)廣泛栽種于全球熱帶地區(qū)，在我國則主產(chǎn)于廣東、福建、廣西、海南等地。其味甘、淡，性涼，具有清熱利濕止痢，潤肺止咳解毒之功效，臨床上可用于濕熱下痢，里急后重，肺熱咳嗽等癥，療效確切[1-2]。雞蛋花是嶺南地區(qū)習(xí)用草藥，也是廣東涼茶中的主要原料藥材之一，如市場銷售的著名品牌涼茶“王老吉涼茶”、“五花茶”、“夏桑菊”等都以雞蛋花為主要組成原料。另其鮮花浸膏亦可用于食品香精和化妝品[3]?；陔u蛋花的上述藥用價(jià)值，近年來國內(nèi)外學(xué)者對雞蛋花其化學(xué)成分及藥理活性方面開展了較為系統(tǒng)的研究，梁靜等[4]用氣相色譜法、李穎等[5]及黃美燕等[6]用GC-MS方法對雞蛋花提取物的揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行了研究，分離鑒定出數(shù)十種揮發(fā)油成分。Brigitta E和Karsten K等[7]從干燥的雞蛋花樹皮中分離出雞蛋花素plumericin，異雞蛋花素Isoplumericin。關(guān)曄等[8]從雞蛋花的花中分離到兩個(gè)新環(huán)烯醚萜類化合物以及雞蛋花苷。從雞蛋花的葉、樹皮、莖等非藥用部位分離得到香豆素雞蛋花苷、黃嬋花素等環(huán)烯醚萜類成分，從雞蛋花的花中分離到山萘酸，阿亞黃素和pilloin等黃酮醇類成分。Bina S S等[9]從雞蛋花葉中分離出1α-雞蛋花苷。在2001年，Kavita V和Sanjay G[10]發(fā)現(xiàn)雞蛋花中的黃雞蛋花素對HIV病毒逆轉(zhuǎn)錄過程有抑制作用。Egwaikhide P A等[11]發(fā)現(xiàn)雞蛋花的花和葉的甲醇提取物對化膿棒桿菌、糞鏈球菌、芽孢桿菌屬等都有很強(qiáng)的抑制作用。Elfahmi和Komar R等[12]發(fā)現(xiàn)雞蛋花的甲醇提取物雞蛋花苷對纖維肉瘤細(xì)胞有抑制作用。但有關(guān)雞蛋花揮發(fā)性成分的含量分析藥材產(chǎn)地大多數(shù)來自國內(nèi)的不同省份，國外產(chǎn)的雞蛋花揮發(fā)油成分的含量分析研究報(bào)道得較少，特別是來自產(chǎn)地印度尼西亞巴厘島和爪哇島的雞蛋花的揮發(fā)油成分分析還未見報(bào)道。

本試驗(yàn)采用頂空固相微萃取-氣相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HS-SPME-GC-MS)分析來自巴厘島和爪哇島兩個(gè)不同產(chǎn)地的雞蛋花中的揮發(fā)性成分及含量差異，為進(jìn)一步研究和利用雞蛋花提供研究基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

QP2010型氣相-質(zhì)譜儀，日本Shimadzu公司；DK-3001N頂空進(jìn)樣器，北京中興分析儀器；手動(dòng)固相微萃取裝置，美國Supelco公司；50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取纖維頭，美國Supelco公司；10 mL頂空瓶，美國Supelco公司。

實(shí)驗(yàn)用雞蛋花由廣州市食安科技有限公司從印度尼西亞進(jìn)口采購，自然陰干，經(jīng)廣東省中藥研究所鄭海博士鑒定為雞蛋花PlumeriarubraL.cv.Acutifolia的干燥花朵。

2 方法與結(jié)果

2.1 GC-MS 分析條件

2.1.1 色譜條件

TG-5 MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm，0.50 μm，Thermo公司)；載氣為高純度氦氣(99.999%)；體積流量1.0 mL/min；不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣口溫度250 ℃；接口溫度280 ℃；程序升溫：50 ℃保持5 min，6 ℃/min升到120 ℃保持5 min，3 ℃/min升到160 ℃保持3 min，10 ℃/min升到220 ℃保持10 min，總程序時(shí)間54 min。

2.1.2 質(zhì)譜條件

離子源：電子轟擊源(EI)；電子能量：70 eV；離子源溫度：230.0 ℃；掃描方式：Scan；掃描范圍：45～450 m/z。

2.1.3 圖譜檢索

采用NIST 17-1、NIST 17-2、NIST 17-S質(zhì)譜庫進(jìn)行數(shù)據(jù)檢索及分析。

2.2 雞蛋花藥材的預(yù)處理

將來自巴厘島和爪哇島的雞蛋花自然晾干，分別粉碎，過24目篩，備用。

2.3 HS-SPME方法

取經(jīng)處理過的來自巴厘島和爪哇島的雞蛋花各0.5 g，置于10 mL頂空瓶中，80 ℃下平衡40 min，將裝有50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器插入瓶中，推出萃取頭萃取30 min，取出立即插入色譜儀進(jìn)樣口中，解吸附5 min。

2.4 揮發(fā)油的化學(xué)成分分析

取經(jīng)“2.3”項(xiàng)下處理所得的揮發(fā)物，按“2.1”項(xiàng)下條件用GC-MS聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定。數(shù)據(jù)處理時(shí)，設(shè)定積分參數(shù)初始斜率為5000，得總離子流圖見圖1和圖2。采用NIST 17-1、NIST 17-2、NIST 17-S質(zhì)譜庫進(jìn)行檢索，并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖和相關(guān)文獻(xiàn)鑒定各揮發(fā)成分，采用色譜峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，得出各揮發(fā)成分在總揮發(fā)性組分中的相對含量，結(jié)果如表1所示。

表1 巴厘島雞蛋花和爪哇島雞蛋花中揮發(fā)物的化學(xué)成分Table 1 Chemical constituents of volatiles from Plumeria rubra L. cv. Acutifolia (Bali Island and Java Island)

圖1 巴厘島雞蛋花揮發(fā)物總離子流圖Fig.1 Total ion current of volatile matter from Plumeria rubra L. cv. Acutifolia (Bali Island)

圖2 爪哇島雞蛋花揮發(fā)物總離子流圖Fig.2 Total ion current of volatile matter from Plumeria rubra L. cv. Acutifolia (Java Island)

巴厘島雞蛋花揮發(fā)物中鑒定出41個(gè)化合物，占揮發(fā)物總量的78.63%，其中含量較高的化合物為反式-橙花叔醇(8.20%)、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯(9.05%)、苯甲醛(5.31%)、芳樟醇(1.42%)、氧化芳樟醇(1.48%)、1-十九碳烯(3.80%)、正十九烷(3.44%)、正十七烷(2.16%)、香葉醇(1.29%)、香葉醛(4.80%)、橙花醛(2.40%)、香茅醇(1.96%)、金合歡醇(2.52%)，這13種成分共占揮發(fā)性組分的45.31%。

爪哇島雞蛋花揮發(fā)物中鑒定出47個(gè)化合物，占揮發(fā)物總量的81.87%，其中含量較高的化合物為反式-橙花叔醇(5.87%)、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯(4.84%)、苯甲醛(4.79%)、α-松油醇(3.64%)、芳樟醇(2.34%)、氧化芳樟醇(2.61%)、1-十九碳烯(3.80%)、正十九烷(3.44%)、正十七烷(2.38%)、棕櫚酸甲酯(2.90%)、香葉醇(2.33%)、香葉醛(5.90%)、橙花醛(3.49%)、香茅醇(2.58%)。這14種成分共占揮發(fā)性組分的50.91%。

3 分析與討論

從巴厘島雞蛋花和爪哇島雞蛋花中共鑒定出54個(gè)化合物，其中有34個(gè)化合物是兩個(gè)產(chǎn)地共有的，其中反式-橙花叔醇、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯、苯甲醛、芳樟醇、氧化芳樟醇、1-十九碳烯、正十九烷、正十七烷、香葉醇、香葉醛、橙花醛、香茅醇等化合物的含量在兩個(gè)產(chǎn)地雞蛋花中均較高。鑒定得到的揮發(fā)物成分?jǐn)?shù)量豐富，已有文獻(xiàn)報(bào)道過的揮發(fā)物成分有37個(gè)，其它13個(gè)化合物為首次發(fā)現(xiàn)，未見其它文獻(xiàn)報(bào)道過。

通過氣質(zhì)聯(lián)用研究國產(chǎn)的雞蛋花中揮發(fā)性成分的文獻(xiàn)有很多報(bào)道。黃美燕[6]對來自廣東暨南大學(xué)的雞蛋花品種進(jìn)行分析，共鑒定出22種化學(xué)成分，其中β-芳香醇(20.67%)、順-香葉醇(16.19%)、反-苦橙油醇(14.06%)為主要成分。韓明[13]對采自廣東華南農(nóng)業(yè)大學(xué)的雞蛋花品種進(jìn)行分析，共鑒定出16種成分，其中苦橙油醇(20.25%)、香葉基芳樟醇(10.11%)、二十七烷(7.65%)、肉豆蔻酸(6.73%)為主要成分。張麗霞等[14]從采自廣西南寧的品種中分離鑒定出20種成分，其中香葉酯類含量較高達(dá)到了40%，苦橙醇等萜類化合物約占28%，脂肪酸約占17%，烷烴約占2.6%。程必強(qiáng)等[15]分析云南西雙版納的品種的主要成分為芳樟醇、氧化芳樟醇、苯甲酸甲酯、橙花醇、香葉醇、橙花叔醇、金合歡醇、苯甲酸芐酯、水楊酸芐酯和松油醇等。從表1中可知，巴厘島雞蛋花和爪哇島雞蛋花中揮發(fā)物的化學(xué)成分有萜類、醇類、醛類、酮類、酯類、脂肪酸、烷烴、烯烴及烴類衍生物等。與上述國內(nèi)幾個(gè)產(chǎn)地的化學(xué)成分對比發(fā)現(xiàn)，本研究所用雞蛋花其揮發(fā)物主要化學(xué)成分除了與云南西雙版納品種有些相似外，與國內(nèi)產(chǎn)地的雞蛋花在化學(xué)成分上的差異較大，這說明雞蛋花的化學(xué)成分與產(chǎn)地有一定的關(guān)系，不同產(chǎn)地的化學(xué)成分各異。但來自印尼巴厘島和爪哇島的兩個(gè)品種在化學(xué)成分上極其相似，相同化學(xué)成分?jǐn)?shù)量達(dá)到34個(gè)，可能是地域上比較接近的緣故。它們的主要化學(xué)成分為反式-橙花叔醇、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯、苯甲醛、香葉醛，(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯在雞蛋花中作為揮發(fā)油主要化學(xué)成分還是首次發(fā)現(xiàn)。通過研究比較，發(fā)現(xiàn)巴厘島雞蛋花和爪哇島雞蛋花的成分基本一致，本法可以作為來自印尼這兩地的雞蛋花揮發(fā)油成分的指紋圖譜，對于區(qū)分不同品種或產(chǎn)地的雞蛋花具有一定的意義。

本研究采用頂空固相微萃取技術(shù)采集揮發(fā)性成分，通過合理優(yōu)化氣相色譜柱箱升溫程序，化合物得到充分采集、分離、鑒定，從中分離得到的化合物較多，是一種快捷、高效的揮發(fā)性成分處理方法。

4 結(jié) 論

從巴厘島雞蛋花中鑒定出41個(gè)化合物，占揮發(fā)物總量的78.63%；從爪哇島雞蛋花中鑒定出47個(gè)化合物，占揮發(fā)物總量的81.87%。有34個(gè)化合物是兩個(gè)產(chǎn)地共有的，其中反式-橙花叔醇、(3E，7E)-4,8,12-三甲基十三-1,3,7,11-四烯、苯甲醛、芳樟醇、氧化芳樟醇、1-十九碳烯、正十九烷、正十七烷、香葉醇、香葉醛、橙花醛、香茅醇等化合物的含量均較高。本研究首次發(fā)現(xiàn)雞蛋花揮發(fā)物中一些新的化學(xué)成分，能為雞蛋花的藥用、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立等多方面的研究提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)和參考。