超聲造影聯(lián)合血清CA125 VEGF miR-125a miR-200a對(duì)早期診斷子宮內(nèi)膜癌的診斷價(jià)值觀察

孫宏偉, 李麗娟, 龔 雪

(1.河北省承德市第三醫(yī)院, 河北 承德 067000 2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院, 河北 承德 067000)

子宮內(nèi)膜癌(Endometrial carcinoma,EC)主要表現(xiàn)為陰道不規(guī)則出血、排液癥狀,在晚期可出現(xiàn)惡病質(zhì)表現(xiàn),雖然現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展使得子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后有一定的改善,但其發(fā)病率依然處于增長(zhǎng)趨勢(shì),及早診治是提高患者預(yù)后的關(guān)鍵[1]。目前臨床診斷EC的方式有細(xì)胞學(xué)檢查、刮診、陰道超聲及血清腫瘤標(biāo)志物,其中刮診能夠通過(guò)病理學(xué)確診病理類型,但由于其屬于有創(chuàng)性操作,受檢者往往存在抗拒心理而推遲檢查,耽誤診治時(shí)機(jī)[2];隨著影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展,經(jīng)陰道超聲造影(transvaginal sonography contrast-enhanced ultrasonography,TVS-CEUS)技術(shù)憑借其安全性高及動(dòng)態(tài)觀察病灶等優(yōu)勢(shì)在臨床得到了廣泛應(yīng)用[3]。糖類抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VAGF)等血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)EC的早期診斷有一定的臨床價(jià)值,但其效能均不夠理想,而血清微小RNA(micro-RNA,miRNA)作為一種新的生物標(biāo)記,盡管迄今為止尚未將其包括在臨床應(yīng)用規(guī)范中,但一些臨床研究指出,miRNA為疾病的早期臨床監(jiān)測(cè)和確定治療方案提供了方向[4]?；诖吮敬窝芯恐荚谔骄砍曉煊奥?lián)合血清腫瘤標(biāo)記物早期診斷EC的臨床價(jià)值,以期為臨床診治提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取我院2021年10月至2022年2月診治的120例早期EC患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合EC相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn),且經(jīng)診斷性刮宮后病理診確診為早期EC;②無(wú)放、化療病史或?qū)υ煊皠┻^(guò)敏;③于本院完成TVS-CEUS檢查;④無(wú)手術(shù)禁忌證。排除標(biāo)準(zhǔn):①宮腔手術(shù)史;②其他部位惡性腫瘤或嚴(yán)重內(nèi)分泌疾病;③影像學(xué)資料異常。另選取同期120例接受手術(shù)切除的子宮肌瘤患者為對(duì)照組,入組患者均經(jīng)術(shù)后病理診斷。EC組患者中年齡38～79歲,平均(56.15±9.67)歲,絕經(jīng)前18例,圍絕經(jīng)39例,絕經(jīng)后63例,術(shù)后病理:內(nèi)膜樣癌106例,漿液性癌14例。對(duì)照組患者中年齡36～78歲,平均(57.39±10.24)歲,絕經(jīng)前20例,圍絕經(jīng)35例,絕經(jīng)后65例。兩組患者年齡及絕經(jīng)狀態(tài)比較具有可比性(P>0.05)。

1.2方 法

1.2.1TVS-CEUS:取膀胱截石位,使用GE公司LOGIQ E8彩色多普勒成像儀和RIC 5-9-D陰道探頭,頻率 5 ～ 9MHz行常規(guī)彩超檢查,完成后將儀器調(diào)到超聲造影模式,經(jīng)肘部靜脈團(tuán)注射2.0mL的Sonovue(意大利Brocca),持續(xù)性觀察180s,記錄好病灶組織的顯影過(guò)程,并將獲得的造影劑灌注圖像進(jìn)行編碼,觀察不同區(qū)域造影劑灌注的先后時(shí)間。由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的婦科超聲醫(yī)師進(jìn)行圖像分析并行診斷。

1.2.2血清CA125、VAGF水平檢測(cè):治療前采集空腹靜脈血,經(jīng)離心處理獲得血清,2h內(nèi)完成檢測(cè),電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清CA125、VEGF水平。

1.2.3血清miR-125a、miR-200a表達(dá)水平的檢測(cè):使用3mL惰性分離凝膠凝結(jié)管采集患者全血,室溫下以4000g離心10min以去除血細(xì)胞并收集血清,然后將收集到的血清以16000g離心3min,進(jìn)一步除去剩余的血細(xì)胞,離心后收集血清,并保存在-80℃的冰箱中。將100μL樣品加到300μL水中,充分混合后,加入200μL(pH=4.7-5.5)酸性苯酚。劇烈渦旋后,加入200μL氯仿。再次搖勻后,將混合物在室溫下以16000g離心15min。將上清液(約400μL)小心地移入800μL異丙醇中,并加入40μL、3M(pH=5.2)乙酸鈉。充分混合后,將混合物在-20℃下放置1h,然后在4℃下以16000g離心20min,完全棄掉上清液后,加入1mL的75%乙醇,輕輕顛倒幾次,并在4℃下以16000g離心20min。將上清液完全丟棄并在室溫下干燥。加入20μL DEPC后,沉淀物溶解并儲(chǔ)存在-80℃的冰箱中。按照下列RT-qPCR反應(yīng)體系進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè):TaqMan@SmallRNAAssay(20×)1.0μL,ProductfromRTreaction 2.0μL,TaqMan@UnibersalPCRMasterMixⅡ(2×)10μL,H2O 7μL,cDNA 2μL,共計(jì)20μL。反應(yīng)條件:2min,50℃;95min,10℃;15min,95℃;60min,60℃。擴(kuò)增條件:10min,95℃;15s,95℃;60s,60℃;40個(gè)循環(huán)。U6為內(nèi)參,2-△△Ct法計(jì)算miR-125a、miR-200a的相對(duì)表達(dá)水平。

1.3觀察指標(biāo):①根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行術(shù)后病理評(píng)估并作為金標(biāo)準(zhǔn),分析TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及kappa一致性;②比較兩組患者血清CA125、VAGF水平;③比較兩組患者血清miR-125a、miR-200a相對(duì)表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1TVS-CEUS診斷早期EC與術(shù)后病理的一致性分析:以術(shù)后病理為金標(biāo)準(zhǔn),TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及kappa分別為81.67%、71.67%、76.67%、74.24%、79.63%和0.533。見(jiàn)表1。

表1 TVS-CEUS診斷早期EC的效能

2.2兩組患者血清CA125、VEGF水平的比較:EC組患者血清CA125、VEGF水平均顯著高于對(duì)照組患者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者血清CA125 VEGF水平的比較

2.3兩組患者血清miR-125a、miR-200a的相對(duì)表達(dá)比較:EC組患者血清miR-125a相對(duì)表達(dá)水平低于對(duì)照組患者,miR-200a的相對(duì)表達(dá)水平高于對(duì)照組患者(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者清miR-125a miR-200a的相對(duì)表達(dá)水平的比較

2.4血清CA125、VEGF水平與miR-125a、miR-200a相對(duì)表達(dá)水平的相關(guān)性分析:Pearson相關(guān)性分析:結(jié)果顯示,患者血清CA125、VEGF水平與miR-125a相對(duì)表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),與miR-200a相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.05),見(jiàn)表4。

表4 血清CA125 VEGF與miR-125a miR-200a相對(duì)表達(dá)水平的相關(guān)性分析

2.5TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物預(yù)測(cè)模型構(gòu)建:以病理診斷結(jié)果為因變量(“EC”=1,“子宮肌瘤”=0),以TVS-CEUS(“陽(yáng)性”=1,“陰性”=0)、CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a為自變量,納入二元Logistic回歸分析,預(yù)測(cè)模型為L(zhǎng)ogit(y)=-3.202+0.489X(TVS-CEUS)+0.547X(CA125)+0.424X(VEGF)-0.580X(miR-125a)+0.658(miR-200a),X表示回歸系數(shù),見(jiàn)表5。

表5 VS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物預(yù)測(cè)模型構(gòu)建二元Logistic回歸分析

2.6TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物早期診斷EC的ROC分析:以預(yù)測(cè)模型所得值、CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a為檢驗(yàn)變量,以病理診斷結(jié)果為狀態(tài)變量,納入ROC分析,ROC結(jié)果顯示:TVS-CEUS聯(lián)合CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a早期診斷EC的AUC顯著高于CA125、VEGF、miR-125a、miR-200a單獨(dú)診斷的AUC(P<0.05),見(jiàn)表6、圖1。

圖1 TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物早期診斷EC的ROC曲線

表6 TVS-CEUS聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物早期診斷EC的效能

3 討 論

超聲造影作為臨床使用比較常見(jiàn)的聲學(xué)造影檢查方法,能夠在造影劑的作用下測(cè)定病灶部位的散射回聲、造影參數(shù)及血供情況,因而在多種疾病的診斷中均發(fā)揮著重要的作用[5]。50%確診EC的患者處于I期,準(zhǔn)確的評(píng)估病變的大小、肌層浸潤(rùn)的深度對(duì)患者的預(yù)后至關(guān)重要。目前臨床常用的診斷方式雖然能夠?qū)C有明確的診斷,但對(duì)肌層侵犯的深度無(wú)法做出準(zhǔn)確判斷,而超聲造影則可以有效的展示病灶與子宮肌層的微循環(huán)灌注,對(duì)病灶良惡性進(jìn)行評(píng)估并通過(guò)病灶與子宮肌層微循環(huán)的差異為早期EC分期提供依據(jù)。本研究結(jié)果顯示,TVS-CEUS診斷早期EC的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為81.67%、71.67%、76.67%,kappa一致性有0.533,具有中度一致性,這主要因?yàn)閷?duì)于不典型的病例患者,即使是超聲造影也沒(méi)法顯示出正常肌層與腫瘤侵襲肌層的邊界,但相較于一般的超聲檢查,其診斷效能還是顯著提高了,與廖濤等[6]研究結(jié)果一致。

除了影像學(xué)及病理檢查外,分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展促進(jìn)了血液學(xué)診斷方式在惡性腫瘤診斷中的應(yīng)用,通過(guò)一種及多種血清因子輔助疾病篩查在疾病診斷鑒別中具有重要價(jià)值。CA125在女性卵巢組織、輸卵管及子宮內(nèi)膜上均有表達(dá),是一種廣譜的惡性腫瘤標(biāo)志物,但其單獨(dú)診斷的意義不大;VEGF作為影響細(xì)胞外基質(zhì)變形及血管生成的作用因子,目前對(duì)于EC的機(jī)理研究認(rèn)為,子宮內(nèi)膜異常增生后引起細(xì)胞間連接受損是CA125釋放進(jìn)入血液,而VEGF則通過(guò)增強(qiáng)血管通透性促進(jìn)血管生成加速癌細(xì)胞增殖[7]。本研究結(jié)果顯示,EC組患者血清CA125、VEGF水平均明顯高于對(duì)照組患者,但通過(guò)ROC分析結(jié)果顯示,CA125、VEGF用于早期診斷EC的AUC分別為0.651、0.664,效能較低,但李柯[8]的研究認(rèn)為兩者聯(lián)合診斷EC可在一定程度上彌補(bǔ)單獨(dú)CA125檢測(cè)的準(zhǔn)確性。血清miRNA將成為一種新的生物標(biāo)記,已發(fā)現(xiàn)在不同體液之間具有不同豐度的miRNA。最近的研究發(fā)現(xiàn),血液循環(huán)和其他體液中存在大量穩(wěn)定的miRNA,血清miRNA可以抵抗核酸酶降解[9]。血清miRNA可以保存很長(zhǎng)時(shí)間,血清miRNA具有良好的重復(fù)性和再現(xiàn)性,在某些疾病狀態(tài)下,尤其是在腫瘤患者的體液中,某些miRNA的表達(dá)會(huì)發(fā)生特異性變化,并且這些表達(dá)譜的特征變化可以被深入研究,體液miRNA將為疾病提供一種新的非侵入性生物標(biāo)志物,具有良好的臨床應(yīng)用潛力和前景。一項(xiàng)基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn),過(guò)表達(dá)miR-125a能夠促進(jìn)EC RD95-2細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖,但目前臨床研究尚未明確miR-125a在血清中的表達(dá)水平[10];國(guó)外的一項(xiàng)回顧性隊(duì)列研究結(jié)果顯示,miR-200a在EC患者中表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組,并且與多種miR共同診斷EC的AUC達(dá)到了0.958[11]。本研究結(jié)果顯示,EC組患者血清miR-125a相對(duì)表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組患者,而miR-200a相對(duì)表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組,并且相關(guān)性分析結(jié)果顯示,CA125、VEGF水平與miR-125a相對(duì)表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān),與miR-200a相對(duì)表達(dá)水平呈正相關(guān)。ROC結(jié)果顯示,與CA125、VEGF水平的AUC相比,miR-125a與miR-200a早期診斷EC的AUC為0.827、0.851,具有較高的診斷效能,而聯(lián)合超聲造影與4個(gè)血清指標(biāo)后的AUC為0.945,敏感度為90.00%,特異度為94.17%,具有極高的診斷價(jià)值。綜上所述,TVS-CEUS在輔助早期EC診斷具有一定的價(jià)值,單獨(dú)使用血清腫瘤標(biāo)志物的效能較低,但聯(lián)合診斷后的效能較高,可用于早期EC的篩查。