結(jié)腸癌特異性抗原-3、結(jié)腸癌特異性抗原-4在結(jié)腸良惡性腫瘤組織中表達(dá)及臨床意義

陳成輝, 張鐵民, 蔡親平, 王 丹, 鄭華山, 王綏群, 王石堅(jiān)

海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院1.胃腸外科;2.病理科;3.心血管外科,海南 ?？?570311;4.海南省人民醫(yī)院 肝膽胰外科,海南 海口 570311

結(jié)腸腫瘤是指發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道占位性病變,好發(fā)于直腸和乙狀結(jié)腸交界處,受黏膜上皮菌群環(huán)境變化、飲食和遺傳因素的影響[1-3]。結(jié)腸腫瘤難以在早期被發(fā)現(xiàn),多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期,錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)機(jī),近期和遠(yuǎn)期預(yù)后均不理想[2,4-5]。雖然結(jié)腸腫瘤治療取得了一定進(jìn)展,但5年存活率仍<50%[4]。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高結(jié)腸癌患者存活率的重要途徑之一。目前,許多血清腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于結(jié)腸癌的輔助診斷,其表達(dá)水平與腫瘤臨床分期相關(guān),但缺乏特異性與敏感性,不適合單獨(dú)用于早期結(jié)腸腫瘤的大規(guī)模臨床篩查。結(jié)腸癌特異性抗原(colon cancer-specific antigen,CCSA)是通過(guò)對(duì)結(jié)腸腫瘤組織細(xì)胞核內(nèi)結(jié)構(gòu)蛋白的聚焦蛋白組分析的特異性標(biāo)志物之一[6-7]。有研究報(bào)道,CCSA蛋白的表達(dá)量與直腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[8]。但CCSA與結(jié)腸腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移相關(guān)性的文獻(xiàn)少見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在探討CCSA-3、CCSA-4在結(jié)腸良惡性腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2019年10月至2022年10月海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的150例結(jié)腸腫瘤患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):年齡18～70歲;經(jīng)腸鏡病理檢查,確診為結(jié)腸良性腫瘤或惡性腫瘤;接受手術(shù)切除腫瘤治療;術(shù)前和術(shù)后病歷資料完整;所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):結(jié)直腸癌復(fù)發(fā);曾接受過(guò)化療、放療及相關(guān)抗腫瘤治療;伴其他臟器惡性腫瘤。根據(jù)腫瘤良惡性及分期,將患者分為A組(良性腫瘤;n=50)、B組(惡性腫瘤Dukes-A、B期;Dukes-A期腫瘤侵犯結(jié)腸內(nèi)壁,且無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移;Dukes-B期腫瘤侵犯漿膜層或侵入周?chē)M織,且無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移;n=50)和C組(惡性腫瘤Dukes-C、D期;Dukes-C期侵犯腸壁全層且無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移,或未侵犯全層但存在淋巴轉(zhuǎn)移;Dukes-D期伴遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移,或廣泛浸潤(rùn)及淋巴轉(zhuǎn)移;n=50)。各組患者一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 各組患者一般資料比較/例(百分率/%)

1.2 研究方法 收集各組患者禁食后的新鮮結(jié)腸癌組織、癌旁組織、正常結(jié)腸組織、良性腫瘤組織,10%甲醛溶液固定,石蠟包埋,制成組織石蠟塊,做好編碼標(biāo)記,常溫存放,待用。在術(shù)前和術(shù)后檢測(cè)日清晨空腹抽取患者外周靜脈血,離心后-20℃低溫保存?zhèn)溆谩４茉嚇?biāo)本收集工作完成后,將所有收集好的組織石蠟標(biāo)本使用切片機(jī)切厚度為4 μm的石蠟組織切片、烤片。血液樣本離心取上清液。采用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測(cè)組織樣本及血液樣本中的CCSA-3、CCSA-4表達(dá)水平,嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作說(shuō)明進(jìn)行試驗(yàn)操作。做好相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄。結(jié)果由2位以上副主任職稱(chēng)以上的病理學(xué)專(zhuān)家雙盲閱片判定。

2 結(jié)果

2.1 各組患者血液、組織中CCSA-3及CCSA-4水平比較 各組患者血液、組織中CCSA-3、CCSA-4水平比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。術(shù)后各組血液CCSA-3、CCSA-4均降低,且A組、B組低于C組,A組低于B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組組織中CCSA-3、CCSA-4水平均高于血液,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組患者血液、組織中CCSA-3、CCSA-4表達(dá)水平比較

2.2 CCSA-3、CCSA-4對(duì)結(jié)腸腫瘤良惡性診斷效能 CCSA-3診斷結(jié)腸惡性腫瘤的ROC曲線(xiàn)下面積為0.921,取約登指數(shù)最大時(shí)的截?cái)?cut-off)值為2.05 μg/ml,敏感度為89.00%,特異度為85.40%。CCSA-4診斷結(jié)腸惡性腫瘤的ROC曲線(xiàn)下面積為0.859,取約登指數(shù)最大時(shí)的cut-off值為0.25 μg/ml,敏感度為94.00%,特異度為84.30%。CCSA-3和CCSA-4聯(lián)合診斷結(jié)腸惡性腫瘤的ROC曲線(xiàn)下面積為0.957,敏感度為100.00%,特異度為96.20%。見(jiàn)表3、圖1。

圖1 CCSA-3、CCSA-4檢測(cè)結(jié)腸惡性腫瘤的ROC曲線(xiàn)

表3 ROC曲線(xiàn)分析結(jié)果

2.3 CCSA-3、CCSA-4對(duì)結(jié)腸癌分期診斷效能 CCSA-3診斷結(jié)腸癌分期的ROC曲線(xiàn)下面積為0.831,敏感度為79.10%,特異度為72.20%。CCSA-4診斷結(jié)腸癌分期的ROC曲線(xiàn)下面積為0.795,敏感度為74.80%,特異度為61.10%。CCSA-3和CCSA-4聯(lián)合診斷結(jié)腸癌分期的ROC曲線(xiàn)下面積為0.874,敏感度為81.30%,特異度為77.80%。見(jiàn)表4、圖2。

圖2 CCSA-3、CCSA-4檢測(cè)結(jié)腸癌分期的ROC曲線(xiàn)

表4 ROC曲線(xiàn)分析結(jié)果

3 討論

腫瘤標(biāo)志物是能夠反映腫瘤發(fā)生、發(fā)展的一類(lèi)指標(biāo),可在一定程度上指導(dǎo)臨床治療,監(jiān)測(cè)治療效果[9-10]。腫瘤標(biāo)志物存在于腫瘤組織、血液(或其他體液)和排泄物中,可通過(guò)免疫檢測(cè)反映其水平變化[11]。血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、癌抗原19-9(cancer antigen,CA19-9)等標(biāo)志物已被應(yīng)用于臨床,在部分腫瘤的診斷和治療中具有特異性[12-14]。核基質(zhì)蛋白包括CCSA-3和CCSA-4,在細(xì)胞內(nèi)為遺傳物質(zhì)復(fù)制提供場(chǎng)所,是膀胱癌、前列腺癌等的特異性標(biāo)志物[15-16]。與健康人群相比,結(jié)直腸腫瘤/病變中核基質(zhì)蛋白表達(dá)水平明顯異常,但無(wú)法區(qū)分良性腫瘤和惡性腫瘤。本研究結(jié)果顯示,術(shù)前結(jié)腸惡性腫瘤Dukes-C、D期患者血液、組織中的CCSA-3和CCSA-4水平均最高,而良性腫瘤最低;與術(shù)前比較,患者術(shù)后CCSA-3和CCSA-4水平均明顯下降。這提示,患者組織和血液中CCSA-3、CCSA-4水平可作為結(jié)腸良惡性腫瘤的鑒別診斷指標(biāo)。

血液檢測(cè)具有低創(chuàng)、重復(fù)性佳、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[17]。血液CEA、CA19-9是結(jié)腸癌常用的標(biāo)志物,但其敏感度和特異度均較低,無(wú)法滿(mǎn)足高敏感度和特異度、操作簡(jiǎn)便、適用度高等需求[18-19]。CCSA-3、CCSA-4可通過(guò)細(xì)胞分解或凋亡釋放到體液中,在體液中保持穩(wěn)定[20]。本研究使用ROC曲線(xiàn)評(píng)估CCSA-3和CCSA-4檢測(cè)結(jié)腸腫瘤良惡性及其分期的效能,結(jié)果顯示,CCSA-3和CCSA-4同時(shí)診斷結(jié)腸惡性腫瘤及其分期的曲線(xiàn)下面積分別為0.957和0.874。這提示,CCSA-3、CCSA-4聯(lián)合檢測(cè)用于分辨結(jié)腸腫瘤良惡性具有較高的特異性。

CCSA-3和CCSA-4的分子量相似但等電聚焦點(diǎn)略有不同。盡管這兩種蛋白質(zhì)可能密切相關(guān)或同類(lèi)不同亞型,但cut-off值不同。這提示,與CCSA-4比較,CCSA-3在血清/組織中可能更豐富,這種差異可能因蛋白合成部位不同造成。因此,需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確認(rèn)CCSA-3和CCSA-4的基因編碼方式或蛋白序列。

綜上所述,結(jié)腸惡性腫瘤患者組織、血液中的CCSA-3、CCSA-4均呈高表達(dá),檢測(cè)血液中這兩種蛋白的敏感度較高,CCSA-3和CCSA-4有可能成為結(jié)腸癌診斷、分級(jí)和評(píng)估的特異性標(biāo)志物。