探討HPV E6/E7mRNA 檢測在宮頸病變中的診斷價(jià)值

陳媛

（湖北省鄂東醫(yī)療集團(tuán)婦幼保健院 檢驗(yàn)科，湖北 黃石 435000）

0 引言

宮頸病變常會(huì)發(fā)展為宮頸癌，作為危害女性健康的常見惡性腫瘤，據(jù)有關(guān)調(diào)查顯示每年全球發(fā)生宮頸癌的女性約50萬左右，而由于宮頸癌死亡的女性高達(dá)20 萬左右，宮頸癌的發(fā)病率比較高，會(huì)對女性身心健康與生命安全均帶來極大影響。而宮頸癌在發(fā)展時(shí)需要經(jīng)過較長且可逆轉(zhuǎn)的病變過程，因此在早期給予準(zhǔn)確有效的診斷，對后期的治療尤為關(guān)鍵[1]。宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸癌的主要發(fā)生原因是由于HPV 的持續(xù)性感染，臨床上常應(yīng)用HPV 檢測診斷HPV 感染情況，但對于大多數(shù)性生活活躍女性而言出現(xiàn)HPV 感染情況較為常見，因?yàn)榻?jīng)過一段時(shí)間機(jī)體的免疫系統(tǒng)能夠自動(dòng)清除，故僅存在一小部分慢性感染者有可能會(huì)發(fā)展為宮頸惡性腫瘤，因此HPV 檢測技術(shù)具有一定的靈敏性但特異度不夠，會(huì)使受檢者受到不必要的檢查與受訪，進(jìn)而增加受檢者的經(jīng)濟(jì)、身體以及心理壓力，而HPV 的早期基因中E6 與E7 蛋白能夠反映出腫瘤進(jìn)展和癌癥情況，發(fā)展為宮頸癌的前提就是具備HPVE6/E7 致癌蛋白[2]，因此HPV E6/E7mRNA 檢測能夠充分了解人體細(xì)胞中的HPV E6/E7 致癌蛋白轉(zhuǎn)錄與活性現(xiàn)象?；诖耍疚膶υ趯m頸病變中應(yīng)用HPV E6/E7mRNA 檢測展開分析，詳細(xì)內(nèi)容報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料?；仡櫺苑治鑫以涸?017 年2 月至2019 年1月收治的早期宮頸病變患者120 例的臨床資料，年齡20-49 歲，平均（35.68±4.12）歲。入選患者均通過相關(guān)檢查符合本病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。本次研究均告知患者并征得患者以及家屬同意，簽訂知情同意書且通過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 采集標(biāo)本：清潔患者宮頸外表面，使用宮頸刷置入患者的宮頸口，運(yùn)用順時(shí)針旋轉(zhuǎn)方式刷宮頸5 圈后，將已經(jīng)收集到的宮頸處上皮細(xì)胞放置在專用的細(xì)胞保存液容器中保存?zhèn)錂z。

1.2.2 HPV DNA 檢測：將標(biāo)本保存液左右搖至30 min 后，充分混勻保存液和標(biāo)本，盡量遠(yuǎn)離粘液，并將400 ul 上清液加入到2 mL 離心管中，并置于離心機(jī)中，轉(zhuǎn)速調(diào)整為5000 rpm，離心1 min 后清除掉上清液，選擇合適的HPV 試劑盒，提取分泌物中的HPVDNA，然后完成PCR 擴(kuò)增，進(jìn)行雜交、顯色等相關(guān)操作，在質(zhì)控斑點(diǎn)正常顯色的情況下，不同型別對應(yīng)的位置出現(xiàn)籃紫色斑點(diǎn)為此型陽性。

1.2.3 HPV E6/E7mRNA 檢測：將標(biāo)本置于3000 轉(zhuǎn)的離心機(jī)內(nèi)離心5 min，清除掉清液之后，加入2 mLDDH20，將細(xì)胞反復(fù)吹打之后混懸并離心5 min，將上清液完全去除達(dá)到同質(zhì)化，離心后的細(xì)胞團(tuán)再次進(jìn)行沉淀，之后將20 ul 裂解液與400ulDDH20 置于內(nèi)，充分吹打混勻之后將5 ul 的蛋白酶1 加入在內(nèi)，置于60℃的環(huán)境下約60 min，在此過程中需要充分振蕩2 次，之后去除上清液進(jìn)行測試，選用本院的試劑盒、冷光劑，操作方法依據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行相應(yīng)的操作。

1.3 觀察指標(biāo)。檢查后，經(jīng)專業(yè)的相關(guān)醫(yī)護(hù)人員仔細(xì)查看患者檢查情況，并詳細(xì)記錄其中陽性情況，同時(shí)對比分析2 種檢測方法應(yīng)用后其疾病檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過SPSS.20.0 統(tǒng)計(jì)軟件來比較分析所有數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，以X2 和t 來進(jìn)行組間檢驗(yàn)，采用P＜0.05 代表組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對比HPV E6/E7mRNA 與HPV DNA 檢測符合情況。HPV E6/E7mRNA 檢測陽性47 例，陽性率39.17%（47/120）；HPV DNA 檢測陽性98 例，陽性率56.67%（68/120），比較結(jié)果為（χ2=6.134，P=0.013）。2 種方法對比，HPV DNA 最高，差異明顯（P＜0.05）。

2.2 對比HPV E6/E7mRNA與HPV DNA檢測病變檢出率。HPV DNA 檢查出病變91 例，檢出率為75.83%；HPV 檢查出病變102 例，檢出率為85.0%；HPV E6/E7mRNA 檢查出病變120 例，檢出率為100.0%，比較結(jié)果為（χ2=11.216，P=0.000）。2 種方法對比HPV E6/E7mRNA 檢查的病變檢出率最高，差異明顯（P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌作為惡性腫瘤，近幾年來發(fā)病人群越來越趨于年輕化，并且在女性惡性腫瘤的致死率中久居不下，主要致病因素則為高危型HPV 感染，HPV 是人乳頭瘤病毒，該病毒會(huì)嚴(yán)重影響到患者機(jī)體免疫系統(tǒng)，因此檢測HPV 對于宮頸癌的診斷與預(yù)后尤為關(guān)鍵。臨床上應(yīng)用HPV 檢測基本能夠清楚患者病變情況，但由于人體中對個(gè)別病毒具有清除功能，會(huì)使得檢查結(jié)果會(huì)與患者的實(shí)際病情不符合[3]。宮頸癌發(fā)病率較高，通過安全可靠的篩查方法能夠在一定程度上使發(fā)生率降低，而有效的篩查方法需要同時(shí)具備高的靈敏度與特異度，臨床應(yīng)用的細(xì)胞學(xué)檢測方法，具有較高的特異度，但靈敏度卻較低，HPV DNA 檢測雖然可檢出高級(jí)別癌前病變，但其具備的特異度較低，使得陽性結(jié)果不準(zhǔn)確，易出現(xiàn)假陽性的情況，因此急需要一種特異度與靈敏度兼?zhèn)涞暮Y查方式。

有相關(guān)調(diào)查顯示HPV 感染的主要年齡分布為兩個(gè)高峰，其一是16-25 歲間，其二是34-50 歲間，主要是由于16-25歲的年輕女性性生活活躍等有關(guān)，而34-50 歲的女性與HPV持續(xù)與潛伏感染的激活狀態(tài)有密切關(guān)系[4]。本次研究中HPV DNA 陽性檢出率高于HPV E6/E7mRNA 檢測（P ＜0.05），這主要與HPV DNA 是結(jié)構(gòu)基因有關(guān)，當(dāng)出現(xiàn)感染時(shí)，HPV DNA 就能檢測到，但對于“假陽性”結(jié)果，往往會(huì)給患者一些心理負(fù)擔(dān)，并且后續(xù)還需要通過陰道鏡和組織活檢再次進(jìn)行檢測，對患者身體造成不必要的傷害，易引起醫(yī)患關(guān)系等社會(huì)問題；HPV 檢測出現(xiàn)漏診的原因：①HPV 分型檢測時(shí)主要是依靠檢測L1 衣殼蛋白的情況，來確定HPV 亞型，但當(dāng)HPV 基因整合宿主的細(xì)胞基因之后，L1 則不會(huì)再次表達(dá)；②HPV 分型檢測依據(jù)PCR 技術(shù)對HPV 亞型進(jìn)行檢查[5]，但對于該技術(shù)放大時(shí)對于不同型別的HPV 效率也不同，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)一些型別在放大的過程中突然消失，因此篩查方法的關(guān)鍵則在于明確癌基因的整合情況，而不是單純的對HPV 感染情況進(jìn)行檢測，而檢測E6/E7 癌基因的轉(zhuǎn)錄情況恰好彌補(bǔ)了該項(xiàng)缺陷，E6、E7 基因具備致癌作用，能夠轉(zhuǎn)錄mRNA表達(dá)癌蛋白，實(shí)現(xiàn)改變機(jī)體細(xì)胞的正常代謝功能，使細(xì)胞出現(xiàn)病變，導(dǎo)致產(chǎn)生癌變。病毒感染早期的病毒基因呈現(xiàn)游離現(xiàn)象，此階段的E6、E7 基因?qū)儆陟o默期[6]，表達(dá)mRNA 較低，一旦HPV 病毒出現(xiàn)持續(xù)感染，病毒基因整合人類基因，進(jìn)而激活E6、E7 基因，借助宿主細(xì)胞使mRNA 出現(xiàn)轉(zhuǎn)錄，大量表達(dá)癌蛋白，從而增加細(xì)胞發(fā)生高級(jí)別病變風(fēng)險(xiǎn)。而HPV E6/E7mRNA 檢測能夠主要就是檢出E6、E7 基因，提高對病變細(xì)胞檢出的準(zhǔn)確性，降低患者的心理壓力。

綜上所述，HPV E6/E7mRNA 檢測在宮頸病變中的診斷效果顯著，值得臨床應(yīng)用推廣。