急性腦梗死患者血清miR-134、miR-451表達(dá)水平與腦損傷標(biāo)志物和預(yù)后不良的關(guān)系

潘艷艷,楊雅男,喬正梅,郝 濤

陜西省寶雞高新醫(yī)院:1.神經(jīng)內(nèi)科;2.檢驗(yàn)科,陜西寶雞 721000

急性腦梗死(ACI)屬于臨床上較為常見(jiàn)的一種腦血管疾病,隨著人口老齡化問(wèn)題的逐漸凸顯及人們生活方式的轉(zhuǎn)變,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),具有較高的致殘率與死亡率[1-2]。因此早期有效預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后尤為重要。血清學(xué)指標(biāo)在多種疾病的預(yù)后預(yù)測(cè)中展現(xiàn)出極為重要的作用,且有檢測(cè)簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì),因此尋找敏感性較高的血清學(xué)指標(biāo)對(duì)快速預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后具有重要價(jià)值[3-4]。微小RNA(miRNA)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)新型基因調(diào)控分子,介導(dǎo)多種神經(jīng)系統(tǒng)生物進(jìn)程,其異常表達(dá)可能與心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后、轉(zhuǎn)歸密切相關(guān),具有良好應(yīng)用前景[5]。miR-134、miR-451是miRNA家族的重要成員,兩者可能通過(guò)調(diào)控相關(guān)基因或(和)蛋白的表達(dá),參與ACI的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后、轉(zhuǎn)歸過(guò)程?；诖?本研究通過(guò)研究ACI患者血清miR-134、miR-451的表達(dá)水平與腦損傷標(biāo)志物和預(yù)后不良的關(guān)系,以期為臨床診治ACI提供參考依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年3月至2022年3月本院收治的230例ACI患者作為觀(guān)察組,其中男135例,女95例;年齡43～78歲,平均(63.27±9.26)歲;冠心病70例,高血壓143例,糖尿病78例,高脂血癥48例;平均梗死灶面積(1.89±0.21)cm2;溶栓149例,取栓81例。另選擇同期健康體檢志愿者100例作為對(duì)照組,其中男58例,女42例;年齡41～76歲,平均(63.55±9.33)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)有明確的頭部電子計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)或磁共振成像(MRI)診斷結(jié)果,且符合《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》[6]中的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn);(2)臨床病歷資料完整;(3)發(fā)病至入院時(shí)間<72 h;(4)年齡>18歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)復(fù)發(fā)性腦梗死;(2)入組前7 d內(nèi)有感染病史;(3)合并惡性病變或(和)服用抗炎/免疫抑制劑藥物治療;(4)重要臟器出現(xiàn)重大病變;(5)神志異常。所有研究對(duì)象及其家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū),本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1治療方法 入院后在溶栓時(shí)間窗的患者給予阿替普酶或尿激酶治療,有機(jī)械取栓指征者積極進(jìn)行機(jī)械取栓,不符合靜脈溶栓及機(jī)械取栓患者給予抗血小板聚集、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)等治療,并做好預(yù)防相應(yīng)并發(fā)癥的準(zhǔn)備。

1.2.2基線(xiàn)資料獲取 采用醫(yī)院病歷數(shù)據(jù)庫(kù)完成,內(nèi)容包含年齡、性別、基礎(chǔ)疾病、發(fā)病至入院時(shí)間、入院時(shí)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院腦卒中量表(NIHSS)評(píng)分等。

1.2.3血清miR-134、miR-451表達(dá)水平檢測(cè) 患者入院第二天檢測(cè)血清miR-134、miR-451表達(dá)水平。借助RNA提取試劑盒完成總RNA的提取,采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒實(shí)施RNA反轉(zhuǎn)錄,獲取cDNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)血清miR-134、miR-451表達(dá)水平。反應(yīng)體系共20 μL,其中cDNA模板2 μL,上、下游引物各0.8 μL,二次蒸餾水6.4 μL,qRT-PCR試劑盒10 μL。反應(yīng)參數(shù):95 ℃,5 min;95 ℃,30 s;58 ℃,30 s;72 ℃,30 s;共40個(gè)循環(huán)。miR-134、miR-451與內(nèi)參U6的引物均由天根生化科技有限公司設(shè)計(jì)合成。所有樣品均設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔,以2-△△Ct法計(jì)算血清miR-134、miR-451相對(duì)表達(dá)量。miR-134上游引物序列為5′-ACACTCCATCTGGGTGTGA-3′,下游引物序列為5′-CTCAACATGGTGTAGTGGA-3′。miR-451上游引物序列為5′-ATTGCACTTGTCTCGGTCTG-3′,下游引物序列為5′-CTCAACTGGTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGCTT ACAG-3′。

1.2.4腦損傷標(biāo)志物檢測(cè) 以視錐蛋白樣蛋白1(VILIP-1)與神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)水平作為腦損傷標(biāo)志物指標(biāo)。采集所有研究對(duì)象治療前靜脈血3 mL,離心半徑為8 cm,3 500 r/min離心10 min獲取血清,通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)腦損傷標(biāo)志物,試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)免疫生物科技有限公司,所有操作均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.5分組方式 出院后對(duì)所有患者均開(kāi)展為期3個(gè)月的隨訪(fǎng)觀(guān)察,采用改良Rankin量表(mRS)[7]評(píng)估患者神經(jīng)功能狀況,根據(jù)mRS評(píng)分差異分為預(yù)后良好組(mRS≤2分,143例)和預(yù)后不良組(mRS>2分,87例)。

2 結(jié) 果

2.12組血清miR-134、miR-451表達(dá)水平及腦損傷標(biāo)志物水平比較與相關(guān)性分析 觀(guān)察組血清miR-134、miR-451及VILIP-1、NSE水平均高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,血清miR-134、miR-451與VILIP-1、NSE水平均呈正相關(guān)(r=0.692、0.459、0.672、0.493,P<0.05)。見(jiàn)表1、2。

表1 2組血清miR-134、miR-451表達(dá)水平及腦損傷標(biāo)志物水平比較

表2 血清miR-134、miR-451表達(dá)水平與VILIP-1、NSE水平的相關(guān)性分析

2.2各因素與ACI患者預(yù)后情況比較 預(yù)后不良組年齡、入院時(shí)NIHSS評(píng)分、血清miR-134、miR-451表達(dá)水平及VILIP-1、NSE水平均高于預(yù)后良好組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各因素與ACI患者預(yù)后情況比較

2.3ACI患者預(yù)后不良的多因素Logistic回歸分析 以ACI預(yù)后不良為因變量,賦值如下:是=1,否=0。以年齡、入院時(shí)NIHSS評(píng)分、miR-134、miR-451、VILIP-1、NSE為自變量,賦值均為原值輸入。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示,年齡升高、入院時(shí)NIHSS評(píng)分升高、血清miR-134、miR-451表達(dá)水平及VILIP-1、NSE水平升高均為ACI患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 ACI患者預(yù)后不良的多因素Logistic回歸分析

2.4血清miR-134、miR-451單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的效能 ROC曲線(xiàn)分析發(fā)現(xiàn),血清miR-134、miR-451單獨(dú)預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的ROC曲線(xiàn)下面積(AUC)分別為0.784、0.802,低于兩項(xiàng)聯(lián)合預(yù)測(cè)的0.911。提示血清miR-134、miR-451聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的效能優(yōu)于兩項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)預(yù)測(cè)。見(jiàn)表5、圖1。

圖1 血清miR-134、miR-451單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的效能的ROC曲線(xiàn)

表5 血清miR-134、miR-451單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的效能

3 討 論

ACI具有致殘率、復(fù)發(fā)率及病死率均高的特點(diǎn),嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命安全,因此如何有效預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后及轉(zhuǎn)歸尤為重要[8]。臨床上主要通過(guò)NIHSS評(píng)分、梗死體積、血腦屏障滲透率、基線(xiàn)白質(zhì)高強(qiáng)度評(píng)分等實(shí)現(xiàn)對(duì)ACI患者預(yù)后的預(yù)測(cè)[9-11]。然而上述預(yù)測(cè)指標(biāo)在反應(yīng)神經(jīng)缺損、病灶細(xì)微變化方面存在特異性和敏感性均較差的缺陷,可能導(dǎo)致預(yù)測(cè)效果與真實(shí)數(shù)據(jù)之間存在較大差異[12-13]。因此尋求一種更為積極、有效的預(yù)測(cè)手段尤為重要。

本研究結(jié)果顯示,觀(guān)察組血清miR-134、miR-451表達(dá)水平及VILIP-1、NSE水平均高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),血清miR-134、miR-451表達(dá)水平與VILIP-1、NSE水平均呈正相關(guān)(r=0.692、0.459、0.672、0.493,P<0.05)。表明miR-134與miR-451均可能通過(guò)靶向調(diào)控p38 MAPK等靶基因或靶蛋白的表達(dá)緩解腦微血管損傷,促進(jìn)血管的再生與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié),進(jìn)一步參與疾病進(jìn)展過(guò)程[14-15]。馮蕪若等[16]發(fā)現(xiàn),血清miR-134與ACI患者的病情嚴(yán)重程度及炎癥反應(yīng)程度均密切相關(guān),有助于評(píng)估患者病情。潘長(zhǎng)福等[17]指出,血清外泌體miR-451對(duì)腦損傷患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后均具有評(píng)估價(jià)值。上述研究均與本研究結(jié)果相似,且本研究同時(shí)對(duì)上述兩項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行分析,為臨床研究提供了較為全面的依據(jù)。VILIP-1在腦部受損及部分神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演著至關(guān)重要的角色,而NSE屬于神經(jīng)元標(biāo)志性酶之一,在腦組織遭受損傷后可通過(guò)血腦屏障釋放入血[18]。因此對(duì)血清miR-134、miR-451表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)可為醫(yī)生預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示,預(yù)后不良組年齡、入院時(shí)NIHSS評(píng)分、血清miR-134、miR-451表達(dá)水平及VILIP-1、NSE水平均高于預(yù)后良好組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。多因素Logistic回歸發(fā)現(xiàn),年齡升高、入院時(shí)NIHSS評(píng)分升高、血清miR-134、miR-451表達(dá)水平及VILIP-1、NSE水平升高均為ACI患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。可能是隨著年齡的增長(zhǎng),患者機(jī)體抵抗力、免疫力均下降,加之合并高風(fēng)險(xiǎn)的基礎(chǔ)疾病,導(dǎo)致臨床治療治療難度增加,對(duì)預(yù)后產(chǎn)生負(fù)面影響[19]。NIHSS評(píng)分是評(píng)估機(jī)體神經(jīng)功能缺損程度的有效工具,該評(píng)分的增加往往反映了神經(jīng)功能缺損程度的加劇,患者預(yù)后相對(duì)欠佳[20]。VILIP-1、NSE均是反映腦損傷程度的可靠標(biāo)志物,其水平升高說(shuō)明腦組織損傷加劇,患者預(yù)后不良。另有研究表明,miR-134表達(dá)水平升高與老年急性缺血性腦卒中患者神經(jīng)缺損程度及預(yù)后密切相關(guān)[21]。王蒙蒙等[22]發(fā)現(xiàn),miR-451與缺血性腦卒中的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。分析原因可能是miR-134、miR-451可通過(guò)調(diào)控下游靶基因或蛋白的表達(dá)參與疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,并對(duì)預(yù)后產(chǎn)生影響[23-24]。本研究ROC曲線(xiàn)分析發(fā)現(xiàn),血清miR-134、miR-451單獨(dú)預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的AUC分別為0.784、0.802,低于兩項(xiàng)聯(lián)合的0.911。提示血清miR-134、miR-451聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的效能優(yōu)于兩項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)預(yù)測(cè),表明上述兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的價(jià)值較高。

綜上所述,ACI患者血清miR-134、miR-451水平均呈異常高表達(dá),與腦損傷標(biāo)志物水平和預(yù)后不良均密切相關(guān)。但本研究仍存樣本量偏少而可能導(dǎo)致研究結(jié)果出現(xiàn)偏倚的局限,后續(xù)研究將加大樣本量以進(jìn)一步驗(yàn)證本研究的結(jié)論。