系統(tǒng)性紅斑狼瘡女性患者IgG N-糖基與紅細(xì)胞分布寬度的關(guān)聯(lián)性研究

盧新霞 王連高 王英杰 張玉靜 李 翔 張 蕓 李 棟 潘相鵬

1. 山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）公共衛(wèi)生與健康管理學(xué)院，山東 濟(jì)南 250117；2. 泰安市泰山區(qū)疾病預(yù)防控制中心，山東 泰安 271001

紅細(xì)胞分布寬度（red blood cell distribution width，RDW）是血常規(guī)檢測(cè)中的一項(xiàng)基礎(chǔ)指標(biāo)，臨床上用于反映紅細(xì)胞體積的異質(zhì)性程度，即紅細(xì)胞體積大小的變異程度，常用于不同類型貧血的鑒別診斷[1］。RDW被證明與心血管疾病、癌癥以及肝臟疾病有著密切聯(lián)系[2-4］，同時(shí)RDW 與自身免疫性疾病的診斷及病情變化緊密相關(guān)，如強(qiáng)直性脊柱炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）等[5-8］。SLE 是涉及全身多個(gè)系統(tǒng)與器官的一種自身免疫性疾病，患者RDW 水平與疾病的病情活動(dòng)度及診斷結(jié)果存在聯(lián)系，與患者是否貧血無關(guān)，表明RDW 對(duì)SLE 的診斷與病情評(píng)價(jià)的應(yīng)用價(jià)值是巨大的[9］。

糖基化是生物學(xué)中蛋白質(zhì)被翻譯后修飾的一種機(jī)制，通過改變蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能，進(jìn)而影響90%的哺乳動(dòng)物蛋白的表達(dá)[10］，異常的糖基化會(huì)導(dǎo)致某些特定疾病的發(fā)生[11］。IgG 的糖基化結(jié)構(gòu)對(duì)IgG 的功能具有很大的影響，其Fc 段的結(jié)構(gòu)可以被IgG Fc 段連接的糖基結(jié)構(gòu)的微小變化所影響，進(jìn)而導(dǎo)致IgG 的分子功能發(fā)生改變甚至發(fā)生逆轉(zhuǎn)[12］，異常的IgG N-糖基化會(huì)引起免疫學(xué)變化，介導(dǎo)機(jī)體抗炎和促炎反應(yīng)的改變[13］。有研究顯示，IgG N-糖基與自身免疫性疾病、神經(jīng)退行性疾病、慢性非傳染疾病及癌癥等疾病的發(fā)生與發(fā)展存在關(guān)聯(lián)，可作為疾病的潛在生物標(biāo)志物[14-17］。本研究擬通過檢測(cè)341 例SLE 女性患者的IgG N-糖基水平與RDW 水平，并探討二者之間的關(guān)聯(lián)性，為后續(xù)二者作為SLE聯(lián)合標(biāo)志物的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

本研究以2018 年10 月—2020 年5 月在山東省聊城市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診確診及住院的SLE患者作為研究對(duì)象，共納入女性患者341例，所有研究對(duì)象均符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)，且所有研究對(duì)象均為自愿參加并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)[18］，并具有明確的系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷結(jié)果，且由2名副主任醫(yī)師及以上級(jí)別的?？漆t(yī)師確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有其他自身免疫性疾病，如強(qiáng)直性脊柱炎、干燥綜合征等；（2）患有其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病，如癌癥、心腦血管疾病等；（3）數(shù)據(jù)信息不全者。

1.2 研究方法

1.2.1 基本信息收集 由經(jīng)統(tǒng)一培訓(xùn)的調(diào)查人員對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行基本資料收集，采用杠桿秤測(cè)量研究對(duì)象的身高（cm）和體質(zhì)量（kg），測(cè)量時(shí)研究對(duì)象赤足并脫去衣帽，結(jié)果分別精確到1 cm和0.1 kg，計(jì)算身體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）。由專業(yè)護(hù)理人員對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行晨起空腹外周靜脈血液的采集，并進(jìn)行血常規(guī)檢查（含RDW指標(biāo)）。使用乙二胺四乙酸二 鈉（ethylenediaminetetraacetic acid disodium，EDTA）真空采血管采集研究對(duì)象晨起空腹肘部外周靜脈血液樣本5 mL 用于IgG N-糖基水平的檢測(cè)與分析，采用低溫離心機(jī)（4℃，3 000 r/min）離心10 min，收集上層血漿，并置于-80℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 IgG N-糖基水平檢測(cè)方法 研究采用Waters ACQUITY 超高效液相色譜（ultra-high performance liquid chromatography，UHPLC）儀器通過超高壓液相色譜技術(shù)對(duì)IgG N-糖基水平進(jìn)行高通量檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)要流程為：（1）采用96孔Protein G提取板對(duì)血漿IgG進(jìn)行分離純化；（2）采用N-糖苷酶（N-glyeosidase F）釋放與IgG結(jié)合的N-糖鏈；（3）采用2-氨基苯甲酰胺（2-Aminobenzamide，2-AB）進(jìn)行熒光標(biāo)記；（4）通過超高效液相色譜進(jìn)行分離及檢測(cè)分析。最終可以得到24個(gè)色譜峰（GP1-GP24），每個(gè)峰可代表一種或多種糖基化結(jié)構(gòu)，IgG N-糖基水平可用各個(gè)色譜峰的面積占所有色譜峰面積之和的百分比表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用單樣本K-S 檢驗(yàn)對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布資料使用均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)資料采用中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，定性資料使用n（%）表示。將SLE 女性患者根據(jù)RDW 水平的四分位數(shù)（Q1= 12.75，M= 13.30，Q3= 14.60）分為Q1 ~ Q3（≤ 14.60%）與Q4（ > 14.60%）2組，2組間計(jì)量資料比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或Mann-WhitneyU秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman 秩相關(guān)分析，采用Logistic 回歸分析進(jìn)行RDW 水平組與IgG N-糖基水平間的關(guān)聯(lián)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α= 0.05。

2 結(jié) 果

2.1 研究對(duì)象的基本特征

共收集確診SLE 女性患者341 例，平均年齡為（40.36 ± 12.93）歲，在不同RDW 水平組，2 組間的RDW、TG 水平以及高血壓差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05），結(jié)果見表1。

表1 SLE女性患者的基本特征[n（%）/（± s）］

表1 SLE女性患者的基本特征[n（%）/（± s）］

注：SLE為系統(tǒng)性紅斑狼瘡；BMI為體質(zhì)量指數(shù)；RDW為紅細(xì)胞分布寬度；TC 為總膽固醇；HDL 為高密度脂蛋白；LDL 為低密度脂蛋白。

基本特征t/χ2 P 0.878 0.041 0.666 0.270 0.473< 0.001 0.449 0.016 0.134 0.768年齡/歲高血壓糖尿病貧血BMI/（kg/m2）RDW/%TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）HDL/（mmol/L）LDL/（mmol/L）RDW低水平組Q1 ~ Q3（n = 266）40.30 ± 12.73 32（12.03）24（9.02）100（37.59）23.96 ± 3.11 13.13 ± 0.75 4.80 ± 1.57 1.43 ± 0.78 1.30 ± 0.40 6.92 ± 64.06 RDW高水平組Q4（n = 75）40.56 ± 13.71 16（21.33）8（10.67）23（30.67）23.67 ± 3.27 16.72 ± 2.15 4.96 ± 1.70 1.77 ± 1.13 1.38 ± 0.47 9.32 ± 56.70 0.153 4.187 0.186 1.217 0.718 14.249 0.759 2.458 1.501 0.295

2.2 IgG N-糖基水平在不同RDW水平組間差異

在不同RDW 水平組間，GP1、GP3、GP4 及GP8在Q4 組的含量顯著高于Q1 ~ Q3 組，GP12、GP14、GP18、GP19 與GP23 在Q1 ~ Q3 組含量顯著高于Q4組，Q1 ~ Q3 組的半乳糖基化和唾液酸化水平均高于Q4 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05），結(jié)果見表2。

2.3 IgG N-糖基與RDW水平的相關(guān)性分析

IgG N-糖基與RDW水平的相關(guān)性分析顯示，在總體水平上，GP4 （r= 0.113，P= 0.038）及GP8（r= 0.286，P< 0.001）與RDW 水平呈正相關(guān)；GP12 （r= -0.202，P< 0.001）、GP14 （r= -0.159，P= 0.003）、GP18（r= -0.117，P= 0.030）、GP19（r= -0.131，P= 0.015）及GP21 （r= -0.123，P=0.023）與RDW水平呈負(fù)相關(guān)，結(jié)果見表3。

表3 SLE女性患者RDW水平與IgG-N糖基水平相關(guān)性分析

2.4 IgG N-糖基水平與RDW水平組的多因素分析

以SLE 女性患者的不同RDW 水平組為因變量，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)換后的GP1、GP3、GP4、GP8、GP12、GP14、GP18、GP19 與GP23 為 自 變 量 分 別 納 入logistic 回歸模型，在調(diào)整年齡、BMI、高血壓、糖尿病、貧血、TG、TC、HDL及LDL后，GP12、GP14、GP18與GP23為RDW 升高的保護(hù)因素（P< 0.05），OR值分 別 為0.564 （95%CI：0.352 ~ 0.904）、0.902（95%CI： 0.834 ~ 0.976）、0.840 （95%CI：0.745 ~0.947）及0.473（95%CI：0.244 ~ 0.918）；GP4 與GP8 為RDW 升高的危險(xiǎn)因素（P< 0.05），OR值分別為1.052 （95%CI：1.005 ~ 1.102）、1.138（95%CI：1.055 ~ 1.277），結(jié)果見表4。

表4 IgG N-糖基水平與RDW水平組的logistic回歸分析

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，RDW 低水平（Q1 ~ Q3）組中的半乳糖基化及唾液酸化水平顯著高于RDW高水平（Q4）組（P< 0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，SLE女性患者的RDW 水平與GP12、GP14、GP18、GP19及GP21 呈負(fù)相關(guān)，與GP4 及GP8 呈正相關(guān)。在隨后的logistic 回歸分析中發(fā)現(xiàn)，低水平的GP12、GP14、GP18與GP23為RDW 升高的保護(hù)因素，高水平的GP4 與GP8 為RDW 升高的危險(xiǎn)因素，反映著這些因素所代表的IgG N-糖基結(jié)構(gòu)可能與SLE女性患者RDW水平存在相關(guān)性。

有研究顯示，當(dāng)IgG N-糖基唾液酸化修飾降低時(shí)，會(huì)促進(jìn)IgG 與免疫細(xì)胞上的Fc 受體（FcγRIIIa）結(jié)合，從而增加免疫復(fù)合物與免疫細(xì)胞的相互作用，加重炎癥反應(yīng)[19］。當(dāng)機(jī)體的半乳糖基較低時(shí)，會(huì)使Fc 受體及Dectin-1 與IgG 的結(jié)合受到抑制，進(jìn)而引起或促進(jìn)機(jī)體的炎癥反應(yīng)，半乳糖基修飾水平增加則可以促進(jìn)機(jī)體的抗炎效應(yīng)[20］。SLE患者在不同種族中的IgG N-糖基化變化是十分相似的，患者的IgG N-糖基的半乳糖基化水平和唾液化水平較正常人群均減少[14］。而RDW 水平受機(jī)體炎癥的影響，持續(xù)的炎癥反應(yīng)可以激活補(bǔ)體系統(tǒng)，導(dǎo)致患者的自身抗體或補(bǔ)體可附著于紅細(xì)胞表面，從而導(dǎo)致紅細(xì)胞的破壞及RDW的升高[8］。同時(shí)，炎癥因子水平的增加，會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞表面的特異性受體增加，也可直接或間接作用于促紅細(xì)胞生成素，達(dá)到抑制紅細(xì)胞成熟的作用，最終無效或大小不一的紅細(xì)胞進(jìn)入外周血，導(dǎo)致RDW升高。異常的IgG N-糖基化可能通過影響機(jī)體炎癥反應(yīng)，引起機(jī)體抗炎或促炎狀態(tài)的改變，從而導(dǎo)致或干預(yù)紅細(xì)胞的正常生長(zhǎng)發(fā)育及生成代謝，最終影響RDW的變化，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究探討了SLE 女性患者IgG N-糖基水平與RDW水平的關(guān)系，但仍處于初步關(guān)聯(lián)性研究階段，且具體機(jī)制仍需進(jìn)一步驗(yàn)證，后續(xù)應(yīng)加大樣本量及增添免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)以加強(qiáng)二者間因果關(guān)系的論證與具體機(jī)制的研究。后續(xù)研究RDW 聯(lián)合IgG N-糖基指標(biāo)對(duì)SLE 的早期診斷或病情監(jiān)測(cè)具有一定的實(shí)用臨床價(jià)值。

綜上所述，在SLE女性患者中，IgG N-糖基水平與RDW水平存在一定的關(guān)聯(lián)性，異常的IgG N-糖基化或許是影響RDW 水平升高的原因之一，但具體的因果關(guān)系及機(jī)制仍需進(jìn)一步研究驗(yàn)證，為后續(xù)IgG N-糖基與RDW 作為聯(lián)合指標(biāo)對(duì)疾病進(jìn)行早期診斷或反映疾病情況的研究提供理論基礎(chǔ)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突