有機磷農(nóng)藥敵百蟲脅迫對東北蝲蛄毒性效應(yīng)研究※

●蔣翠紅 楊翼羽 于林?！?郭貴良 修 磊孫 麗 潘發(fā)林 于 涵 李 霞 汪 朕

（1.長春市水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心 吉林 長春 130033；2.敦化市水產(chǎn)技術(shù)推廣站 吉林 敦化 133700）

敵百蟲（Dipterex，O，O-二甲基-（2，2，2-三氯-1-羥基乙基）磷酸酯）是有機磷脂類化合物，化學(xué)式為C4H8Cl3O4P，在農(nóng)畜漁業(yè)中被廣泛應(yīng)用，是目前最常用的有機磷殺蟲劑之一[1-2]。但有機磷農(nóng)藥作為農(nóng)業(yè)面源污染的一大污染物，超量使用可使其在土壤和水體中富集，污染水質(zhì)[3-4]。敵百蟲可用于防治魚體內(nèi)外寄生蟲病[5]，但過量及長期使用會殘留在魚體，對其造成傷害，威脅人體健康[6]。

東北蝲蛄（Cambaroides dauricus）隸屬于節(jié)肢動物門、軟甲綱、十足目、正螯蝦科（蝲蛄科）、蝲蛄屬，是世界淡水鰲蝦的一種，學(xué)名東北螯蝦，俗稱蝲蛄、水蝲蛄、蝲蛄夾、石蟹、鰲蝦、龍蝦、長白山龍蝦、東北小龍蝦、大頭蝦、草龍蝦等。東北蝲蛄是東北地區(qū)著名珍稀土著經(jīng)濟水產(chǎn)品之一，食用價值很高。其肉質(zhì)鮮嫩、風(fēng)味獨特、營養(yǎng)豐富、且易消化，肌肉中富含鈣、磷、鎂等，對心臟有很好的功能調(diào)節(jié)作用，對身體虛弱及病后需調(diào)養(yǎng)的人也是極好的食物。研究還發(fā)現(xiàn)，蝲蛄體內(nèi)的蝦青素有助于消除因時差反應(yīng)而產(chǎn)生的“時差癥”[7]。此外，東北蝲蛄還是著名中藥材蝲蛄石的原料，藥用價值很高。目前，大規(guī)格的東北蝲蛄市場價格達(dá)到500 元/kg 以上，且很難買到，其人工養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)具有良好市場前景[8-12]。

超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）和總抗氧化能力（T-AOC）是經(jīng)典的反應(yīng)生物機體氧化脅迫狀況的生理指標(biāo)，在外源污染物對水生動物氧化應(yīng)激損傷研究中應(yīng)用較多[13]。監(jiān)測水體中全部污染物含量不切實際，但可通過水生生物暴露在污染物下生化指標(biāo)的變化來反映其個體生理過程潛在損害的程度，以此來評價水體生態(tài)環(huán)境質(zhì)量是可行的[14-15]。目前，關(guān)于敵百蟲脅迫對東北蝲蛄的毒性效應(yīng)研究尚未見報道，因此研究敵百蟲脅迫對東北蝲蛄養(yǎng)殖具有重要意義。通過敵百蟲對東北蝲蛄脅迫試驗，測得半致死濃度及安全濃度，討論敵百蟲對東北蝲蛄肝胰臟組織中SOD、CAT、MDA、GSH 和T-AOC 幾種典型氧化脅迫相關(guān)指標(biāo)的影響，旨在進一步探討敵百蟲對東北蝲蛄的毒副作用及機制，以此評價敵百蟲污染水體對東北蝲蛄可能產(chǎn)生的毒理學(xué)影響因素，為東北蝲蛄健康生態(tài)養(yǎng)殖和水產(chǎn)品安全評價提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為安全使用該類農(nóng)藥提供科學(xué)依據(jù)。同時，東北蝲蛄可作為環(huán)境敏感生物，為漁業(yè)資源科學(xué)監(jiān)控和管理提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗對象從敦化市購回活潑健康、體色正常的東北蝲蛄作為受試生物。東北蝲蛄在實驗室玻璃水族箱中暫養(yǎng)7 d，期間連續(xù)充氣，每天定時定量投喂魚飼料，實驗前24 h 停止喂食。急性毒理試驗所用容器為45 cm×25 cm×35 cm 方形玻璃水族箱，實驗用水為自來水充分曝氣7 d，試驗過程中全天持續(xù)充氣，每天定時測定試驗養(yǎng)殖水體的水溫、電導(dǎo)率、溶解氧和pH，試驗期間水溫（22.1±0.2）℃，電導(dǎo)率（337.8±4.8）μs/cm，溶解氧（DO）（7.0±0.1）mg/L，pH 值（8.10±0.04）。

1.1.2 試驗藥品敵百蟲［農(nóng)藥生許（魯）0170］可溶粉劑，有效成分含量為90%，為山東大成生物化工有限公司生產(chǎn)；冰醋酸（分析純），購于北京化工廠；無水乙醇（分析純）購于北京化工廠。根據(jù)敵百蟲有效成分，試驗前用蒸餾水將其配置成一定濃度的母液備用，試驗時將母液稀釋成所需濃度使用。現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.1.3 試驗儀器紫外可見分光光度計（普析TU1900）；離心機（Hermle Z216 MK）；電熱恒溫水浴鍋（博訊 HHS-21-6）；電子分析天平（METTLER TOLEDO AL204）；移液槍（Thermo）；便攜式多參數(shù)水質(zhì)分析儀（YSI Pro 2030）；pH 計（Thermo）。

1.2 試驗方法

1.2.1 急性毒性試驗采用靜水式試驗法，試驗期間不更換藥，不換水，進行人工增氧，為防止飼料影響，試驗期間不投餌。挑選體格強壯、規(guī)格基本一致的東北蝲蛄進行預(yù)試驗，確定24 h 使東北蝲蛄全部死亡和96 h 全部存活的濃度范圍[6]。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果按等比設(shè)7 個濃度組（0.23，0.47，0.94，1.88，3.75，7.50，15.00 mg/L），同時設(shè)空白對照組，每組3 個平行，每個水族箱放水20 L，隨機各放入10 尾東北蝲蛄，其平均體長為（4.30±0.23）cm，平均體重為（7.76±1.63）g。試驗開始后觀察東北蝲蛄游動等生活狀態(tài)，記錄其在12，24，48，72，96 h 的活動和死亡狀況，以沉底、喪失游泳能力、對外界刺激無反應(yīng)作為死亡標(biāo)準(zhǔn)，并及時撈出死亡個體。

1.2.2 氧化脅迫相關(guān)指標(biāo)試驗與上述急性毒性試驗方法相同，每個水族箱隨機各放入15 尾東北蝲蛄，每24 h 取出各個梯度三尾東北蝲蛄，迅速取出肝胰臟組織，用0.86%預(yù)冷生理鹽水淋洗、濾紙吸附。稱取0.5 g 肝胰臟組織，按重量（g）、體積（mL）1∶9 的比例，加入9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下，制備成10%的勻漿液，2500 r/min，離心10 min，取上清液待測。SOD、MDA、CAT、GSH、T-AOC 均采用南京建成公司生產(chǎn)的試劑盒進行測定。總蛋白含量的測定采用考馬斯亮藍(lán)法。

1.3 數(shù)據(jù)處理及分析

采用Bliss 法（概率單位法）計算敵百蟲對東北蝲蛄的急性毒性數(shù)據(jù)LC50[16]；單因素方差分析（ANOVA），比較不同處理組間相關(guān)指標(biāo)的差異顯著性，并應(yīng)用LSD 檢驗法進行均值間多重比較，差異顯著性水平P＜0.05。所有統(tǒng)計分析均采用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進行。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 敵百蟲脅迫對東北蝲蛄急性毒性的影響

在整個急性毒性試驗過程中，觀察不同濃度敵百蟲脅迫下東北蝲蛄的生活行為。對照組全部東北蝲蛄在整個試驗過程中呼吸、泳動、對外界物理刺激（如輕敲箱壁）等行為無明顯變化。受試東北蝲蛄中毒癥狀：初期，先表現(xiàn)出急躁不安，出現(xiàn)活動異常、狂游沖撞、間歇性急速后退等反應(yīng)。隨時間延長，呈痙攣性抽搐，失去平衡，仰臥水底，附肢無力劃動直至死亡。敵百蟲濃度越高，東北蝲蛄的中毒癥狀越明顯、越迅速，而在低濃度組中，經(jīng)過很長時間后才有個別受試東北蝲蛄出現(xiàn)異常癥狀。

隨著敵百蟲濃度增加，東北蝲蛄死亡率逐漸提高，呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系（圖1），可見，隨敵百蟲濃度的增大及時間的延長，東北蝲蛄對其耐受力不斷減弱。

圖1 不同敵百蟲濃度下東北蝲蛄死亡率

敵百蟲對東北蝲蛄24、48、72、96 h 的LC50值分別為2.07，1.02，0.67，0.47 mg/L（表1），安全濃度（SC）通過公式SC=96 h LC50×0.1 計算得到[17]，為0.047 mg/L。由于敵百蟲對生物體的毒副作用，因此確定其對東北蝲蛄的安全濃度尤為重要?；瘜W(xué)物質(zhì)對魚類的急性毒性按LC50值的大小分為劇毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5 個等級[18]，據(jù)此判斷，敵百蟲對東北蝲蛄為高毒甚至劇毒物質(zhì)。

表1 敵百蟲對東北蝲蛄的急性LC50 值及95%置信區(qū)間

2.2 敵百蟲脅迫對東北蝲蛄肝胰臟抗氧化性能的影響

2.2.1 敵百蟲對東北蝲蛄肝胰臟SOD 活力的影響不同濃度敵百蟲對東北蝲蛄肝胰臟組織SOD活力的影響，見圖2。

由圖2 可見，不同時間段和濃度敵百蟲脅迫對東北蝲蛄肝胰臟SOD 活力均有誘導(dǎo)作用。低濃度處理組（0.23 mg/L）肝胰臟組織SOD 活力被誘導(dǎo)升高，在24、48、72 h 與對照組有顯著性差異（P＜0.05）。中高濃度各處理組（0.47，0.94，1.88，3.75，7.50，15.00 mg/L）SOD 活力在24、48h 分別各自呈現(xiàn)升高趨勢；72、96 h，1.88 mg/L 處理組SOD 活力升高最為明顯。中低濃度各處理組（0.23，0.47，0.94 mg/L）SOD 活力隨著脅迫時間的延長分別各自呈先升高再降低的趨勢。

2.2.2 敵百蟲對東北蝲蛄CAT 活力的影響不同濃度敵百蟲對東北蝲蛄肝胰臟組織CAT 活力的影響，見圖3。

圖3 敵百蟲濃度及時間對東北蝲蛄肝胰臟組織CAT 活力的影響

由圖3 可知，在整個試驗過程中，中低濃度各處理組（0.23，0.47，1.88 mg/L）CAT 活力隨著脅迫時間的延長分別各自呈現(xiàn)先升高再降低；中濃度處理組（0.94 mg/L）CAT 活力隨著脅迫時間的延長呈降低趨勢。48 h 時，與對照組相比，中濃度處理組（1.88 mg/L）肝胰臟組織CAT 活力隨著脅迫時間的延長顯著升至最高（P＜0.05）。高濃度處理組（15.00 mg/L）CAT 活力均低于同一時間段其它各濃度組的CAT 活力。試驗結(jié)束時（96 h），敵百蟲各濃度處理組CAT 活力與對照組無明顯差異（P＞0.05）。

2.2.3 敵百蟲對東北蝲蛄MDA 含量的影響不同濃度敵百蟲對東北蝲蛄胰臟組織MDA 含量的影響，見圖4。

圖4 敵百蟲濃度及時間對東北蝲蛄肝胰臟組織MDA 含量的影響

由圖4 可知，在整個試驗過程中，中低濃度處理組（0.23，0.47，0.94，1.88，3.75 mg/L）與對照組MDA 含量均無顯著性差異（P＞0.05），而高濃度處理組（15.00 mg/L）MDA 含量則顯著高于對照組（P＜0.05）；試驗結(jié)束時（96 h），高濃度處理組（15.00 mg/L）MDA 含量高出對照組49.9%（P＜0.05）。

2.2.4 敵百蟲對東北蝲蛄GSH 含量的影響不同濃度敵百蟲對東北蝲蛄肝胰臟組織GSH 含量的影響，見圖5。

圖5 敵百蟲濃度及時間對東北蝲蛄肝胰臟組織GSH 含量的影響

由圖5 可知，在24 h 短時間內(nèi)，敵百蟲脅迫中濃度處理組（0.47，0.94，1.88，3.75 mg/L）與對照組相比便顯著降低（P＜0.05）；在48、72、96 h，與對照組相比，同一時間段不同濃度東北蝲蛄肝胰臟GSH 含量表現(xiàn)為顯著性降低（P＜0.05）。隨敵百蟲脅迫時間的延長，各時間段對照組GSH 含量呈現(xiàn)下降趨勢；在試驗結(jié)束時（96 h），對照組GSH 含量仍顯著高于同時間段各敵百蟲脅迫組（P＜0.05）。

2.2.5 百蟲對東北蝲蛄T-AOC 水平的影響不同濃度敵百蟲對東北蝲蛄肝胰臟組織T-AOC 水平的影響，見圖6。

圖6 敵百蟲濃度及時間對東北蝲蛄肝胰臟組織T-AOC 水平的影響

由圖6 可知，不同時間段不同濃度敵百蟲對東北蝲蛄肝胰臟T-AOC 水平均有誘導(dǎo)作用。低濃度處理組（0.23 mg/L）肝胰臟組織T-AOC 水平有升高趨勢，48、72、96 h 時與對照組存在顯著性差異（P＜0.05）。中濃度處理組（0.47，0.94，1.88，3.75 mg/L）T-AOC 水平在24、48、72h 分別各自呈現(xiàn)逐漸升高。在試驗結(jié)束時（96 h），高濃度處理組（15.00 mg/L）T-AOC 水平與對照組相比顯著升高67.8%（P＜0.05）。

3 討論

3.1 敵百蟲對東北蝲蛄的毒性

有機磷農(nóng)藥敵百蟲能殺滅寄生蟲，同時對水體中的水生生物也能產(chǎn)生毒副作用，特別是其水解以后，膽堿酯酶的活性受到抑制，不能分解體內(nèi)的乙酰膽堿，使之造成蓄積，使甲殼類動物的神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，最終致其死亡[19]。一般當(dāng)組織膽堿酯酶抑制達(dá)40%～60%時，動物可在幾秒鐘內(nèi)死亡[20]。有研究顯示，敵百蟲對克氏原螯蝦24、48 h LC50分別為4.94，2.78 mg/L，SC為0.264 mg/L[21]。由此可見，東北蝲蛄對敵百蟲的耐受力比克氏原螯蝦差，東北蝲蛄對敵百蟲比克氏原螯蝦更為敏感。東北蝲蛄對敵百蟲的耐受力比魚類要低得多，有研究表明，敵百蟲對異育銀鯽仔魚（1.0 g±0.3 g）48，72，96 h LC50分別為121.19，90.22，59.78 mg/L，SC 為5.98 mg/L；對異育銀鯽魚種（23.2 g±3.6 g）48 h LC50為411.65 mg/L[6]；對5 日齡大鱗副泥鰍24、48 h LC50分別為7.52，4.89 mg/L，SC 為0.40 mg/L[1]。在用敵百蟲防治魚體內(nèi)外寄生蟲病時，其常用劑量一般為0.2～0.5 mg/L[6]，而本試驗中首次確定了敵百蟲對東北蝲蛄的SC 為0.047 mg/L，說明東北蝲蛄對敵百蟲極為敏感，且作為魚藥，敵百蟲主要用來殺滅魚體外寄生的甲殼動物[22]，故在東北蝲蛄的養(yǎng)殖過程中，不能使用敵百蟲進行寄生蟲病防治，同時還要防止被農(nóng)藥污染的水進入養(yǎng)殖池。試驗觀察到在低濃度組96 h 后存活下來的東北蝲蛄個體很少死亡，表明東北蝲蛄受到輕度影響后也有一定存活率，因此，可采用微生物及其產(chǎn)生的降解酶降解水體中的有機磷農(nóng)藥[20，23]，從而凈化水質(zhì)。

此外，在預(yù)試驗期間，由于東北蝲蛄正處于蛻殼高峰的生長旺季期，再加上敵百蟲藥物刺激，使受試東北蝲蛄蛻殼周期明顯縮短，更易脫殼。這一應(yīng)激反應(yīng)，可能是東北蝲蛄受外部環(huán)境刺激的一種自我保護機制，因東北蝲蛄吸收毒物后，可經(jīng)代謝將毒物富集到體壁，隨蛻殼過程排出體外，以此減輕對機體的毒害作用[24]，這也表明東北蝲蛄對環(huán)境污染敏感。但蛻殼后的新皮又軟又薄，因體表吸水膨脹，更易吸收毒物，反而加速東北蝲蛄的死亡。試驗發(fā)現(xiàn)多數(shù)東北蝲蛄在蛻殼過程中或蛻殼后不久死亡，說明在蛻殼階段，東北蝲蛄對藥物的耐受性降低，這與有關(guān)研究結(jié)果相符[22]。因此，在施藥后短時間內(nèi)出現(xiàn)東北蝲蛄大量蛻殼時，要注意調(diào)節(jié)水質(zhì)；同時，蛻殼高峰期應(yīng)避開用藥。正式試驗期間，幾乎未見東北蝲蛄蛻殼，可能是因為其過了易蛻殼的生長旺季期，不易脫殼，就將毒物富集起來。

3.2 敵百蟲脅迫對東北蝲蛄肝胰臟抗氧化性能的影響

當(dāng)水體環(huán)境不在水生生物生存的適宜范圍內(nèi)時，會使其產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，持續(xù)應(yīng)激會影響其免疫防御功能，最終可能出現(xiàn)病害和死亡。環(huán)境脅迫能導(dǎo)致生物體有氧代謝異常，活性氧自由基大量累積，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，進而形成過氧化終產(chǎn)物MDA，而肝胰臟細(xì)胞受到外界刺激，細(xì)胞分泌酶量增多[25]。此時，機體內(nèi)SOD、CAT 等抗氧化酶聯(lián)合作用和GSH 等抗氧化物質(zhì)能及時、有效地清除自由基，緩解機體的氧化損傷，這是機體防止中毒和克服不良環(huán)境的一種適應(yīng)性反應(yīng)[26-27]，對機體的氧化與抗氧化平衡起重要作用?？寡趸镔|(zhì)可通過保護SOD、CAT 等抗氧化酶的活性來發(fā)揮作用，故常用SOD、CAT、MDA、GSH 和T-AOC 指標(biāo)的變化來反映機體受到的氧化脅迫[28-29]，以此判斷機體自由基代謝及細(xì)胞損傷情況。

SOD 是生物體內(nèi)存在的一種抗氧化金屬酶。本試驗結(jié)果表明，低濃度處理組（0.23 mg/L）肝胰臟組織SOD 活力被誘導(dǎo)升高，24、48、72 h 時與對照組有顯著性差異（P＜0.05），表明低濃度敵百蟲不能抑制SOD 活性，符合“毒物興奮效應(yīng)”[30-31]。中高濃度各處理組（0.47，0.94，1.88，3.75，7.50，15.00 mg/L）SOD 活力在24、48 h 分別各自呈現(xiàn)逐漸升高；72、96 h，1.88 mg/L 處理組SOD 活力升高最為明顯?？梢?，不同時間段不同濃度敵百蟲脅迫對東北蝲蛄肝胰臟SOD 活力均有誘導(dǎo)作用，在24、48 h 隨著敵百蟲脅迫時間的延長，自由基增多而誘導(dǎo)了SOD 的分泌；在短時間（24 h）內(nèi)高濃度敵百蟲會更快地激發(fā)SOD活性[19]；72、96 h，1.88 mg/L 處理組自由基可能增多的最高，這也是生物體通過誘導(dǎo)SOD 活性的升高與體內(nèi)過量的活性氧自由基達(dá)成一種新的平衡，以此抵御外界毒物對機體的影響。中低濃度各處理組（0.23，0.47，0.94 mg/L）SOD 活力隨著脅迫時間的延長分別各自呈現(xiàn)先升高再降低，有研究證實，當(dāng)水生生物體受到長時間脅迫時，SOD 活性會降低[14]，表明隨脅迫時間的延長，該中低濃度敵百蟲脅迫可能使東北蝲蛄抗氧化能力受到一定抑制，未能及時清除的活性氧自由基會使機體產(chǎn)生氧化損傷。

CAT 在減輕活性氧自由基對機體細(xì)胞的氧化損傷方面起重要作用[32]，是蝦蟹類重要的免疫因子。本研究結(jié)果顯示，在整個試驗過程中，中低濃度各處理組（0.23，0.47，1.88 mg/L）CAT 活力隨著脅迫時間的延長分別各自呈現(xiàn)先升高再降低，中濃度處理組（0.94 mg/L）CAT 活力隨著脅迫時間的延長呈降低趨勢。先升高，表明東北蝲蛄體內(nèi)活性氧原本平衡的狀態(tài)被外源敵百蟲的進入所破壞，為保持體內(nèi)的平衡，受刺激的機體會產(chǎn)生一些自主的氧化應(yīng)激反應(yīng)，其可通過提高CAT 活性應(yīng)對中低濃度敵百蟲脅迫，有助于清除過量的H2O2；降低，原因可能是隨著脅迫時間的延長，當(dāng)機體內(nèi)的毒物濃度超過東北蝲蛄的耐受能力范圍，機體的正常代謝就會受到影響，對機體造成一定程度的氧化損傷，導(dǎo)致CAT 活性下降[32]。高濃度處理組（15.00 mg/L）CAT 活力均低于同一時間段其它各濃度組的CAT 活力，表明高濃度敵百蟲對CAT 活性的抑制程度更強，這與有關(guān)研究結(jié)論相符[19]。

有研究表明，生物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平能通過測定組織中MDA 含量反映出來，從而細(xì)胞氧化損傷情況和程度能被間接反映出來[28，33]。本試驗結(jié)果表明，在整個試驗過程中，中低濃度處理組（0.23，0.47，0.94，1.88，3.75 mg/L）與對照組均無顯著性差異（P＞0.05）。這可能是由于在脅迫初期機體立即啟動自身的應(yīng)激防御系統(tǒng)，誘導(dǎo)SOD、CAT 活性升高，抵御敵百蟲誘發(fā)產(chǎn)生的活性氧自由基，應(yīng)激時抗氧化酶能夠清理產(chǎn)生的活性氧自由基，從而阻止MDA 快速大量生成，避免因毒物入侵造成氧化損傷。本研究表明，在整個試驗過程中，高濃度處理組（15.00 mg/L）MDA含量則顯著高于對照組（P＜0.05）；在試驗結(jié)束時（96 h），高濃度處理組（15.00 mg/L）MDA 含量高出對照組49.9%（P＜0.05）。這可能是由于高濃度敵百蟲對東北蝲蛄的抗氧化系統(tǒng)產(chǎn)生了一定影響，SOD、CAT 活性被抑制，體內(nèi)產(chǎn)生大量氧自由基，未能被及時清理，造成肝胰臟氧化損傷，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化反應(yīng)加劇，MDA 含量增加。

所有器官組織細(xì)胞內(nèi)均能生成GSH，以肝臟內(nèi)最為重要[29]。GSH 能直接與自由基反應(yīng)，使機體抗應(yīng)激能力有效提高，降低機體應(yīng)激反應(yīng)，起到抗氧化防御作用。GSH 能顯著提高凡納濱對蝦、皺紋盤鮑肝胰臟中抗氧化酶活性以及總抗氧化能力[34]。肝臟中GSH 含量的變化對敵百蟲引起的損傷反應(yīng)靈敏且發(fā)揮了重要作用，對毒性反應(yīng)靈敏且迅速[35]。本研究在24 h 短時間內(nèi)，敵百蟲脅迫中濃度處理組（0.47，0.94，1.88，3.75 mg/L）與對照組相比便顯著降低（P＜0.05）；48、72、96 h，與對照組相比，同一時間段不同濃度東北蝲蛄肝胰臟GSH 含量表現(xiàn)為顯著性降低（P＜0.05）?？赡苁怯捎跈C體消耗體內(nèi)GSH 來抵御敵百蟲脅迫引起東北蝲蛄體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物及過氧化氫堆積的原因[36]。此外，隨敵百蟲脅迫時間的延長，各時間段對照組GSH 含量呈現(xiàn)下降趨勢；在試驗結(jié)束時（96 h），對照組GSH 含量仍顯著高于同時間段各敵百蟲脅迫組GSH 含量（P＜0.05）。GSH 含量減少可能與細(xì)胞對污染物及其代謝物解毒能力的飽和作用有關(guān)[29]。機體被敵百蟲脅迫時間越長，受損傷程度越嚴(yán)重。衡量機體抗氧化能力大小的重要因素是GSH 含量的多少，缺乏或耗竭GSH會促使很多化學(xué)物質(zhì)或環(huán)境因素產(chǎn)生中毒作用或加重中毒作用[37]。同時，也說明隨著時間的延長，正常水體環(huán)境中的東北蝲蛄自身體內(nèi)的GSH 含量也可能會減少。

T-AOC 是指各種抗氧化酶和抗氧化物質(zhì)等構(gòu)成的總抗氧化水平，是衡量機體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶促系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)，能代表、反映機體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)對外來刺激的代償能力及機體自由基代謝的狀態(tài)[38]。為保護細(xì)胞和機體免受氧化應(yīng)激損傷，可用T-AOC 來評價生物活性物質(zhì)的抗氧化能力。本試驗結(jié)果顯示，低濃度處理組（0.23 mg/L）肝胰臟組織T-AOC 水平被誘導(dǎo)升高，表明低濃度敵百蟲脅迫可能對東北蝲蛄的抗氧化防御功能起促進作用。本研究結(jié)果表明，中濃度處理組（0.47，0.94，1.88，3.75 mg/L）T-AOC 水平在24、48、72 h 時分別各自呈現(xiàn)逐漸升高；在試驗結(jié)束時（96 h），高濃度處理組（15.00 mg/L）T-AOC 水平與對照組相比顯著升高67.8%（P＜0.05）?？梢?，不同時間段不同濃度敵百蟲脅迫對東北蝲蛄肝胰臟T-AOC 水平均有誘導(dǎo)作用。表明隨著敵百蟲脅迫時間的延長，顯著激活了東北蝲蛄機體自身抗氧化防御系統(tǒng)，肝胰臟仍有抗氧化物質(zhì)儲備或產(chǎn)生，肝胰臟為抗敵百蟲毒性作用的重要器官[39]，也表明機體抗氧化能力會通過自我調(diào)整來應(yīng)對毒性脅迫作用。通過本研究結(jié)果顯示，T-AOC 水平的升高可能是由抗氧化酶活性的提高引起，而并非通過調(diào)動機體的非酶促系統(tǒng)來完成。

綜上，高濃度敵百蟲脅迫通過影響肝胰臟組織結(jié)構(gòu)，使肝胰臟生理功能受到抑制，從而威脅到東北蝲蛄的生存，證實了東北蝲蛄資源的減少與農(nóng)藥使用有關(guān)。東北蝲蛄對敵百蟲敏感，可作為水環(huán)境中有機磷農(nóng)藥類污染的生物標(biāo)志物。敵百蟲脅迫下東北蝲蛄各組織酶活性的變化，反映了東北蝲蛄在不同時間段對不同濃度敵百蟲污染的響應(yīng)，對此種誘導(dǎo)或抑制酶活性的機理仍需進一步探討。