單胞藻餌料培養(yǎng)的技術(shù)要點(diǎn)

李志剛

摘要：總結(jié)了單胞藻餌料培養(yǎng)的主要技術(shù)，包括培養(yǎng)種類(lèi)選擇，一級(jí)培養(yǎng)、二級(jí)培養(yǎng)、三級(jí)培養(yǎng)的設(shè)施條件、培養(yǎng)器具、培養(yǎng)用水的處理與消毒、營(yíng)養(yǎng)鹽的配制及日常管理等環(huán)節(jié)。

關(guān)鍵詞：?jiǎn)伟?；餌料培養(yǎng)；營(yíng)養(yǎng)鹽

單胞藻是指天然水域中生長(zhǎng)的一類(lèi)個(gè)體微小，呈單個(gè)細(xì)胞或多個(gè)細(xì)胞相連的低等級(jí)植物，是水體的初級(jí)生產(chǎn)力。幾十年來(lái)，廣大水產(chǎn)科研工作者經(jīng)過(guò)不懈努力，陸續(xù)分離、提純出了一些營(yíng)養(yǎng)豐富，適口性好，比較易于大規(guī)模培養(yǎng)的單細(xì)胞藻類(lèi)品種如金藻、角毛藻、扁藻、塔胞藻、小球藻、小新月菱形藻等等，并在雙殼類(lèi)貝類(lèi)育苗中獲得了廣泛的、大規(guī)模的應(yīng)用。筆者多年來(lái)在貝類(lèi)苗種生產(chǎn)中從事單胞藻餌料培養(yǎng)工作，積累了較多的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)將這些經(jīng)驗(yàn)和工作中的一些心得體會(huì)加以總結(jié)，供同行們借鑒參考。

1 培養(yǎng)品種的選擇

培養(yǎng)品種的選擇應(yīng)遵循營(yíng)養(yǎng)豐富、適口性好、廣溫、廣鹽、比較易于培養(yǎng)的原則?；谏鲜鲈瓌t，進(jìn)行貝類(lèi)苗種生產(chǎn)，選擇金藻（叉鞭金藻或等鞭金藻）、角毛藻、扁藻（或塔胞藻）、小球藻這幾個(gè)品種作為餌料，即可以完全滿(mǎn)足貝苗不同發(fā)育階段的營(yíng)養(yǎng)需求。

2 單胞藻的一級(jí)培養(yǎng)

2.1 一級(jí)培養(yǎng)室的設(shè)施條件

單胞藻一級(jí)培養(yǎng)室一般要求采光條件好，要具備日光燈或LED白光燈照明條件，以備連續(xù)陰雨天氣時(shí)補(bǔ)充光照；要具備空調(diào)可以調(diào)節(jié)室內(nèi)溫度。

2.2 培養(yǎng)器具

一級(jí)培養(yǎng)所需的容器及工具主要有：5000mL三角燒瓶；1000mL量筒或量杯；500mL燒杯；20mL注射器；液化氣爐具；酒精棉球；A4紙或?yàn)V紙；橡皮筋以及稱(chēng)量工具等。

2.3 藻種的引進(jìn)

要選擇專(zhuān)業(yè)的保種單位引進(jìn)藻種，引進(jìn)的藻種要求品種純正，無(wú)雜藻及細(xì)菌污染，處于指數(shù)生長(zhǎng)期。引種所用的容器要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的消毒處理以防止污染。

2.4 培養(yǎng)用水的處理與消毒

單胞藻一級(jí)培養(yǎng)用水要求潔凈清澈，砂濾效果不理想時(shí)，要采用紗布和脫脂棉進(jìn)行二次過(guò)濾。一級(jí)培養(yǎng)用水采用5000mL三角燒瓶煮沸消毒法進(jìn)行消毒處理，沸騰時(shí)間保持1min。煮沸好的三角燒瓶要及時(shí)用濾紙或A4紙封口。

2.5 營(yíng)養(yǎng)鹽的配制

營(yíng)養(yǎng)鹽的主要成分為氮肥和磷肥，氮肥可選擇硝酸鈉或尿素，磷肥可選擇磷酸二氫鉀，此外還有鐵、錳等微量元素、維生素、氨基酸等輔助成分以及絡(luò)合劑乙二胺四乙酸二鈉。配制時(shí)按營(yíng)養(yǎng)鹽配方準(zhǔn)確稱(chēng)取各種成分放入三角燒瓶中，加入定量的淡水，配制成1000倍母液。搖動(dòng)三角燒瓶，待營(yíng)養(yǎng)鹽全部溶解后燒至沸騰，如此可避免營(yíng)養(yǎng)鹽堆積瓶底，散熱不均造成燒瓶炸裂。加熱易分解的成分如維生素、氨基酸等要待營(yíng)養(yǎng)鹽冷卻至室溫后再加。

2.6 分瓶擴(kuò)種

當(dāng)三角燒瓶中單胞藻濃度較高時(shí)，要及時(shí)分瓶擴(kuò)種。擴(kuò)種所需的燒杯、注射器等要經(jīng)煮沸消毒后再用。擴(kuò)種時(shí)用酒精棉球?qū)⑹肿屑?xì)擦拭消毒，用注射器吸取營(yíng)養(yǎng)鹽，按1：1000的比例向消毒海水中加入營(yíng)養(yǎng)鹽，搖勻后即可進(jìn)行分瓶擴(kuò)種。分瓶擴(kuò)種的比例通常為1：2，如果急于擴(kuò)大培養(yǎng)，也可以按1：4的比例進(jìn)行。

2.7 一級(jí)培養(yǎng)的日常管理

2.7.1 搖瓶一級(jí)培養(yǎng)過(guò)程中，每日早、午、晚三次搖瓶，通過(guò)搖瓶，一方面使空氣中的二氧化碳融入藻液中，以補(bǔ)充單胞藻的光合作用對(duì)二氧化碳的消耗，降低藻液pH值，同時(shí)使沉淀的單胞藻懸浮起來(lái)，避免沉淀堆積影響單胞藻的光合作用和生長(zhǎng)。

2.7.2 調(diào)節(jié)光照單胞藻喜漫射光，要根據(jù)天氣情況隨時(shí)調(diào)整光照，晴天要調(diào)整遮光簾，避免陽(yáng)光直射。陰雨天氣要打開(kāi)人工光源補(bǔ)充光照的不足。

2.7.3 控制溫度大多數(shù)單胞藻的適宜生長(zhǎng)溫度在20～25℃，低溫和高溫期間，利用空調(diào)升溫或降溫，使一級(jí)培養(yǎng)室溫度控制在單胞藻的最佳生長(zhǎng)溫度。

2.7.4 觀(guān)察監(jiān)測(cè)要經(jīng)常觀(guān)察單胞藻的生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)情況，根據(jù)不同單胞藻的習(xí)性和特點(diǎn)，結(jié)合顯微鏡觀(guān)察，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并做出判斷。對(duì)光照、溫度等因素造成的問(wèn)題，要及時(shí)加以調(diào)整。對(duì)受到細(xì)菌微生物污染而造成的問(wèn)題，要及時(shí)更換藻種。

3 單胞藻的二級(jí)培養(yǎng)

單胞藻的二級(jí)培養(yǎng)通常在室外塑料大棚中進(jìn)行。大棚內(nèi)上方要設(shè)有遮光簾可以便利地調(diào)節(jié)光照。具備充氣設(shè)施。二級(jí)培養(yǎng)容器比較多樣化，20L左右的礦泉水桶、50～100L塑料桶均可。如果進(jìn)行中繼培養(yǎng)，也可以使用500～2000L的塑料缸。

3.1 培養(yǎng)用水的消毒與處理

單胞藻二級(jí)培養(yǎng)用水通常采用氯制劑消毒處理，常用的有漂白粉、三氯異氰尿酸消毒片等。由于單胞藻二級(jí)藻種存放時(shí)間較長(zhǎng)，水的消毒處理必須完全徹底。以漂白粉為消毒劑時(shí)，漂白粉有效氯要求30％～32％，使用濃度100～200mg／L。罐裝時(shí)用水泵將上清液注入培養(yǎng)容器并溢出，使容器上口邊緣及外部也能同時(shí)得到消毒處理。注滿(mǎn)水的容器要及時(shí)用浸泡過(guò)消毒液的塑料布或桶蓋封口，以免氯氣揮發(fā)影響消毒效果。

3.2 單胞藻二級(jí)擴(kuò)種

二級(jí)擴(kuò)種最好在晴天的上午進(jìn)行。擴(kuò)種所需要的增氧管、氣泡石、燒杯、量筒、注射器等物品以及中和漂白粉余氯用的硫代硫酸鈉溶液以及營(yíng)養(yǎng)鹽均需經(jīng)過(guò)煮沸消毒處理，容器封口所用的塑料布亦需提前用漂白粉溶液浸泡消毒處理。擴(kuò)種時(shí)先將容器中消毒好的海水倒掉一部分，安裝好充氣管充氣；加入漂白粉的1／3～1／2的硫代硫酸鈉中和余氯；將1000倍的營(yíng)養(yǎng)鹽母液按1：1000的比例加入營(yíng)養(yǎng)鹽；將一級(jí)藻種加入二級(jí)培養(yǎng)容器中，容器封口，完成二級(jí)擴(kuò)種。二級(jí)擴(kuò)種的比例可根據(jù)生產(chǎn)需要進(jìn)行調(diào)整，以50L塑料桶為例，可以1瓶擴(kuò)1桶，也可以1瓶擴(kuò)多桶。

3.3 單胞藻二級(jí)培養(yǎng)的日常管理

單胞藻二級(jí)培養(yǎng)通常在常溫下進(jìn)行，其日常管理主要是根據(jù)天氣調(diào)節(jié)光照；根據(jù)溫度情況保溫或通風(fēng)降溫；經(jīng)常檢查充氣管是否正常充氣；同時(shí)要注意觀(guān)察容器中藻類(lèi)的生長(zhǎng)情況，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，查明原因，妥善予以處理。

4單胞藻的三級(jí)培養(yǎng)

單胞藻的三級(jí)培養(yǎng)通常在水泥池中進(jìn)行，在貝類(lèi)大規(guī)模苗種生產(chǎn)中三級(jí)培養(yǎng)池通常在20～50m3。培養(yǎng)用水通常采用漂白粉消毒法進(jìn)行消毒處理。

4.1 三級(jí)培養(yǎng)用水的處理

三級(jí)培養(yǎng)用水的處理通常在下午進(jìn)行。水泥池加好砂濾水后，充氣狀態(tài)下將漂白粉用20～40目篩絹網(wǎng)袋洗入池內(nèi)，保持充氣10～20 min左右，待漂白粉完全散布均勻后關(guān)閉氣閥，增氧管摘下全部浸沒(méi)在水中，以使得增氧管內(nèi)壁得到充分的消毒處理。漂白粉要求粉末細(xì)膩，殘?jiān)?，有效?0％以上。漂白粉使用量一般50～100mg／L，應(yīng)根據(jù)砂濾效果和水溫進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，砂濾效果好、水溫低時(shí)可適當(dāng)少些；砂濾效果較差、高溫期細(xì)菌和微生物繁殖活躍時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加使用量。

4.2 單胞藻的三級(jí)擴(kuò)種

單胞藻三級(jí)擴(kuò)種前，安裝好增氧管充氣，排掉部分池水，排水量除了加入藻種的量外，還要在擴(kuò)種完成后在水面以上留出8～10cm的無(wú)菌帶。按漂白粉用量的三分之一左右加入硫代硫酸鈉中和余氯，待中和反應(yīng)完成后，加入營(yíng)養(yǎng)鹽，然后加入二級(jí)藻種，完成三級(jí)擴(kuò)種。

單胞藻三級(jí)培養(yǎng)中，營(yíng)養(yǎng)鹽的添加量以氮肥計(jì)算一般5～20mg／L，可一次性添加，也可以分次添加，具體用量因當(dāng)?shù)厮|(zhì)條件和天氣條件而加以調(diào)整。如果當(dāng)?shù)刈匀粭l件下終年水質(zhì)較瘦，說(shuō)明水中營(yíng)養(yǎng)鹽較為貧乏，三級(jí)培養(yǎng)時(shí)營(yíng)養(yǎng)鹽要適當(dāng)增加。溫度適宜、天氣晴好、藻類(lèi)生長(zhǎng)旺盛時(shí)，營(yíng)養(yǎng)鹽可以適當(dāng)增加，反之應(yīng)適當(dāng)減少。

三級(jí)培養(yǎng)擴(kuò)種時(shí)，要挑選顏色深而濃，色澤純正，生長(zhǎng)旺盛的二級(jí)種作為種源，以提高三級(jí)培養(yǎng)的成功率。三級(jí)培養(yǎng)接種比例應(yīng)因天氣的變化而變化，低溫和連續(xù)陰雨天氣，接種比例適當(dāng)提高，水溫適宜，天氣晴好，接種比例可適當(dāng)降低。

4.3 單胞藻三級(jí)培養(yǎng)的日常管理

單胞藻三級(jí)培養(yǎng)期間，每日通過(guò)目視觀(guān)察與顯微鏡相結(jié)合的方式，密切關(guān)注藻類(lèi)的生長(zhǎng)繁殖情況，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)采取措施。根據(jù)天氣變化情況及時(shí)調(diào)整光照強(qiáng)度，低溫天氣注意保溫，高溫季節(jié)注意開(kāi)窗通風(fēng)，盡可能為藻類(lèi)快速增長(zhǎng)創(chuàng)造一個(gè)良好的環(huán)境條件。

5 小結(jié)與討論

5.1 單胞藻餌料培養(yǎng)工作的核心和重點(diǎn)

單胞藻餌料培養(yǎng)工作的核心和重點(diǎn)是預(yù)防細(xì)菌及原生動(dòng)物的污染，無(wú)論是一級(jí)培養(yǎng)、二級(jí)培養(yǎng)，還是三級(jí)培養(yǎng)，都必須把防范細(xì)菌微生物污染放在首位，各個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)必須嚴(yán)格、規(guī)范地實(shí)行無(wú)菌操作，這是單胞藻餌料培養(yǎng)成功的基礎(chǔ)和前提條件。

5.2 單胞藻三級(jí)培養(yǎng)中營(yíng)養(yǎng)鹽的使用

營(yíng)養(yǎng)鹽是單胞藻生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)，其多寡直接影響單胞藻的繁殖速度和藻液濃度。由于三級(jí)培養(yǎng)后的單胞藻要直接投喂給貝苗，殘留過(guò)多的營(yíng)養(yǎng)鹽并不利于貝苗的生長(zhǎng)發(fā)育，因此三級(jí)培養(yǎng)中營(yíng)養(yǎng)鹽并不是越豐富越好。在實(shí)際生產(chǎn)當(dāng)中，要根據(jù)天氣、水溫、培養(yǎng)品種來(lái)適當(dāng)調(diào)整。天氣晴好，水溫適宜，藻類(lèi)繁殖速度快，營(yíng)養(yǎng)鹽可適當(dāng)多一點(diǎn)，反之應(yīng)減量使用。對(duì)于小球藻、扁藻這類(lèi)抗污染能力較強(qiáng)，培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)的品種，營(yíng)養(yǎng)鹽可以多一些，以期獲得較高的藻液濃度。如何以最少的營(yíng)養(yǎng)鹽、最少的營(yíng)養(yǎng)鹽殘留，獲得較好的繁殖速度和較高的藻液濃度，是每一個(gè)單胞藻餌料培養(yǎng)工作者需要細(xì)心觀(guān)察、總結(jié)和研究的問(wèn)題。這不僅是生產(chǎn)成本問(wèn)題，更是安全生產(chǎn)的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。

參考文獻(xiàn)：

［1］陳明耀．生物餌料培養(yǎng)［M］北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1995：25-26.

Technical key points for unicellular algae cultivation

LI Zhigang

（Dandong Fishery Development Service Center，Dandong，Liaoning，118000）

Abstract：The key technique for cultivating unicellular algae was summarized， including the selection of algae species， facility conditions， cultivation equipment， treatment and disinfection of cultivation water， preparation of nutrient salts， and daily management for primary， secondary， and tertiary culti- vation.

Key words：unicellular algae， feed cultivation，nutrient salts

（收稿日期：2023—04—19）