全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊的影響及應(yīng)對(duì)措施分析

陳惠芹 連愛(ài)瓊 廈門(mén)大學(xué)附屬第一醫(yī)院杏林分院病理科 （福建 廈門(mén) 361022）

內(nèi)容提要： 目的：分析全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊所產(chǎn)生的影響并根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)分析總結(jié)應(yīng)對(duì)措施。方法：通過(guò)使用乙醇濃度計(jì)檢測(cè)櫻花全封閉脫水機(jī)每缸乙醇溶液使用前后的變化情況，分析乙醇濃度變化對(duì)組織處理效果的影響，并及時(shí)采取相應(yīng)措施。結(jié)果：全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)運(yùn)行1～4次，所有組織塊均取得了良好的脫水效果；第5次時(shí)偶爾會(huì)出現(xiàn)脫水不良，主要是因?yàn)樽訉m肌瘤組織在制片時(shí)存在一定困難，這是由于該組織容易化開(kāi)所致；第6次時(shí)部分組織塊出現(xiàn)脫水不良的情況，這些組織塊大多是子宮內(nèi)膜以及少量闌尾組織等，石蠟組織在切完之后，切片中央部位發(fā)生內(nèi)陷，其他一些體積較小的組織塊都未發(fā)生明顯的異常情況。結(jié)論：因第1缸乙醇濃度低于臨界值，通過(guò)聯(lián)合監(jiān)測(cè)第2缸乙醇，并適當(dāng)調(diào)整脫水程序或更換新液，可以保證組織塊的脫水質(zhì)量。

全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)是各大醫(yī)院病理科以及科研機(jī)構(gòu)常用的處理病理組織的重要儀器，其具有較高的穩(wěn)定性，可以在較短時(shí)間內(nèi)處理大量標(biāo)本，安全性極高，這也使得其得到了相關(guān)科研人員的廣泛認(rèn)可[1]。病理切片在制作的過(guò)程中，每個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)影響到最終的病理切片的質(zhì)量，在切片制作過(guò)程中，對(duì)病理組織進(jìn)行脫水處理是關(guān)鍵步驟之一。這一步驟的最終處理質(zhì)量將會(huì)對(duì)后續(xù)的切片和染色質(zhì)量產(chǎn)生直接影響，進(jìn)而影響到免疫組化、原位雜交、二代測(cè)序等檢測(cè)方式的最終檢測(cè)結(jié)果，可導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差[2]。在醫(yī)院疾病診斷過(guò)程中，檢測(cè)結(jié)果會(huì)直接影響到醫(yī)生對(duì)患者病情判斷，檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確就很容易導(dǎo)致出現(xiàn)誤診漏診情況，可能延誤患者的最佳治療時(shí)機(jī)，造成難以挽回的后果。病理組織脫水處理過(guò)程中，乙醇是最常用的脫水機(jī)，而乙醇的濃度會(huì)直接影響到檢測(cè)結(jié)果，因此需要對(duì)乙醇濃度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，防止其出現(xiàn)過(guò)高或者過(guò)低的情況，從而對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成不利影響[3]。當(dāng)乙醇濃度出現(xiàn)異常時(shí)，需要及時(shí)采取一定的應(yīng)對(duì)措施，保證組織塊在每一個(gè)換液周期內(nèi)的脫水質(zhì)量，將所用試劑的效能提升到最大，這樣有助于減少?gòu)U液排放，延長(zhǎng)全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)的使用期限。為了更加深入地研究全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊造成的不同影響以及探討針對(duì)這些情況而采取的一些有效的應(yīng)對(duì)措施，本文對(duì)本院病理科2019年9月份標(biāo)本，選擇120份病理組織開(kāi)展研究，研究結(jié)果具體如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

儀器型號(hào)：全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)（櫻花全封閉脫水機(jī)Tissue-Tek?VIPtm 5Jr）；乙醇濃度計(jì)：40%～50%、50%～60%、60%～70%、70%～80%、80%～90%、90%～100%，這些乙醇濃度計(jì)的精度均為0.1%；1500mL量筒。

病理組織標(biāo)本：選擇本院病理科120例病理組織，時(shí)間為2019年9月1日～9月30日，其中闌尾組織30例，子宮內(nèi)膜組織40例，子宮肌瘤組織50例。

試劑：本次研究中所采用的試劑為10%中性緩沖甲醛溶液（本院藥劑室配制）、分析純無(wú)水乙醇、二甲苯（西隴科學(xué)股份有限公司）以及熔點(diǎn)為58～60?C的高效切片石蠟（上海華永石蠟有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 工作原理

櫻花全封閉脫水機(jī)共有16缸，各缸中放置的溶液及濃度分別如下：第1缸：10%的中性緩沖甲醛溶液；第2～7缸：乙醇溶液，并且需要按照不同濃度梯度依次放置，濃度從小到高逐漸升高；第8～10缸：二甲苯；第11～14缸：液體石蠟；第15～16缸：清洗液。除了15～16缸容量都是5.00L外，其他缸容量均在3.50～3.75L[4]。

1.2.2 脫水處理時(shí)間

第1缸和第2缸中的10%中性緩沖甲醛溶液的處理時(shí)間分別控制在90min和180min；其中第1缸中乙醇的處理時(shí)間控制在90min，第2缸則為70min，第3～6缸則是60min；三缸二甲苯的處理時(shí)間分別控制在40min、35min及30min；四缸液體石蠟的處理時(shí)間分別控制在30min、45min、45min、60min[5]。

1.2.3 試劑更換

①將第1缸甲醛溶液全部倒掉同時(shí)更換新的甲醛溶液；②將第1缸的乙醇溶液全部倒掉并清洗，晾干后加入無(wú)水乙醇并將其放置在第7缸的位置，其他乙醇缸前移一位；③將第8缸二甲苯全部倒掉，其他二甲苯缸前移一位，向第8缸中加入新的二甲苯溶液并將其放置在原先第10缸的位置；④將第11缸的石蠟全部倒掉，其他石蠟缸前移一位，向第11缸加入新的石蠟后將其放置在第14缸的位置[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

乙醇試劑濃度的檢測(cè)的條件是環(huán)境溫度為20?C，檢測(cè)者需對(duì)檢測(cè)每缸乙醇濃度進(jìn)行檢測(cè)并將結(jié)果做好詳細(xì)記錄，在每次處理完一定數(shù)量的病理組織之后，檢測(cè)者需使用乙醇濃度計(jì)檢測(cè)每缸乙醇濃度并做好記錄。在研究結(jié)束后，對(duì)組織塊HE染色切片的質(zhì)量進(jìn)行分析研究并總結(jié)相關(guān)經(jīng)驗(yàn)[7]。

2.結(jié)果

2.1 組織塊脫水效果

通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)，全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)運(yùn)行1～4次后，機(jī)器中的組織塊均獲得良好的脫水效果；第5次時(shí)偶爾會(huì)出現(xiàn)脫水不良，主要是因?yàn)樽訉m肌瘤組織在制片時(shí)會(huì)出現(xiàn)化開(kāi)的情況，這就導(dǎo)致制片過(guò)程存在一定的難度；第6次時(shí)部分組織塊出現(xiàn)脫水不良的情況，這些組織塊大多是子宮內(nèi)膜以及少量闌尾組織等，石蠟組織在切完之后，切片中央部位發(fā)生內(nèi)陷，其他一些體積較小的組織塊都未發(fā)生異常情況。

2.2 一個(gè)換液周期內(nèi)乙醇濃度的變化

在一個(gè)換液周期內(nèi)，第1缸乙醇濃度降低速度最快，第2缸降低速度比第1缸稍慢，第3～6缸的變化量呈現(xiàn)出逐漸減小的趨勢(shì)，見(jiàn)表1。

表1.換液前后乙醇濃度變化(±s,%)

表1.換液前后乙醇濃度變化(±s,%)

項(xiàng)目換液前換液后變化量第1缸79.6±1.3 54.6±3.4 35.2±2.3第2缸90.3±0.8 81.3±2.4 10.5±1.7第3缸94.6±0.6 92.4±1.3 3.5±0.9第4缸97.2±0.5 96.1±0.6 2.3±0.7第5缸99.2±0.2 98.4±0.4 1.6±0.5第6缸99.9±0.1 99.7±0.2 0.5±0.1

2.3 組織塊HE染色質(zhì)量

使用顯微鏡觀察HE切片，可以發(fā)現(xiàn)切片的細(xì)胞核著色清晰、細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)之間的分界對(duì)比非常明顯、染色質(zhì)量較好，切片整體效果較好，可以成為病理診斷的可靠依據(jù)。

3.討論

隨著現(xiàn)代病理技術(shù)的不斷創(chuàng)新發(fā)展，越來(lái)越多的新技術(shù)和新設(shè)備進(jìn)入到病理科并發(fā)揮著巨大作用，同時(shí)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢查對(duì)組織標(biāo)本的處理要求日益提高，傳統(tǒng)的手工組織脫水由于耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，工作量大，脫水效果不理想等原因，已經(jīng)逐步被全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)取代。自動(dòng)病理組織脫水機(jī)是集固定、脫水、透明、浸蠟于一體的高技術(shù)檢測(cè)儀器，具有自動(dòng)化、安全高效、污染小、組織處理好的優(yōu)點(diǎn)，因此其開(kāi)始被廣泛應(yīng)用于病理科對(duì)組織塊的處理過(guò)程中，有效滿足了病理科工作量不斷增長(zhǎng)的需求[8]。在實(shí)際病理切片處理過(guò)程中，會(huì)出現(xiàn)許多因素影響到切片質(zhì)量，比如組織固定、組織脫水等，但是主要還是取決于對(duì)標(biāo)本組織前期處理得好壞，脫水又是前期處理過(guò)程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，因此對(duì)全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)乙醇濃度的變化對(duì)組織塊的影響進(jìn)行研究分析并制定有效的應(yīng)對(duì)措施具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

實(shí)驗(yàn)室換液方法大多為階梯替換法以及分組替換法，這兩種換液方法可使得乙醇的濃度產(chǎn)生并保持合適的梯度，便于將組織內(nèi)的游離水置換出來(lái)，為后續(xù)透明、浸蠟操作創(chuàng)造有利條件，保證了組織細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整[9]。通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)，將多個(gè)周期乙醇濃度的變化量控制在一定范圍內(nèi)，其組織脫水質(zhì)量就能得到保證。

本研究對(duì)多個(gè)周期內(nèi)缸中乙醇濃度進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明第1和第2缸中的乙醇濃度變化相對(duì)較大，通過(guò)分析第1和第2缸的乙醇濃度的檢測(cè)結(jié)果，就能確定全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)的換液時(shí)機(jī)。通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)?缸中的乙醇濃度降至50%的時(shí)候，在最開(kāi)始設(shè)定的脫水程序下，全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)會(huì)偶爾發(fā)生部分大塊組織脫水不良的情況，在研究時(shí)對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行查詢(xún)確認(rèn)后發(fā)現(xiàn)研究結(jié)果與文獻(xiàn)內(nèi)容記載基本一致；因此如果要確保脫水質(zhì)量，就要時(shí)刻注意第1缸和第2缸中的乙醇濃度，當(dāng)前者濃度降至50%左右，后者降至80%左右時(shí)，就需要及時(shí)更換新的乙醇；當(dāng)組織塊數(shù)量較少并且其中的小組織塊的數(shù)量占比較高時(shí)，在經(jīng)過(guò)換液處理過(guò)后，觀察發(fā)現(xiàn)，組織塊的質(zhì)地明顯較硬并且偏脆，制片過(guò)程中的難度相對(duì)較大，在其中出現(xiàn)了少數(shù)組織脫水質(zhì)量較差的情況。通過(guò)對(duì)相關(guān)研究資料的分析結(jié)合實(shí)際情況變現(xiàn)來(lái)看，導(dǎo)致出現(xiàn)此類(lèi)情況的原因可能是濃度較高的乙醇溶液在脫水時(shí)的速度較快，使得體積較大的組織塊表面發(fā)生硬化的情況，乙醇此時(shí)就難以發(fā)揮滲透、置換的作用，就會(huì)使得該組織塊內(nèi)存在部分水分[10]。同時(shí)在本次研究過(guò)程中還出現(xiàn)了體積較大的組織塊脫水不徹底的情況，比如子宮內(nèi)膜組織、子宮肌瘤組織中存在的部分體積較大的組織塊。部分組織塊在切完片后還出現(xiàn)了組織蠟塊凹陷的現(xiàn)象，根據(jù)相關(guān)研究資料并結(jié)合實(shí)際效果進(jìn)行判斷，導(dǎo)致出現(xiàn)這種現(xiàn)象與組織塊的體積有關(guān)，體積過(guò)大就會(huì)導(dǎo)致取材較厚，如果在脫水時(shí)使用的乙醇濃度過(guò)低，其內(nèi)部仍會(huì)留存一定的低濃度乙醇，其內(nèi)部水分不能完全被置換出來(lái)，同時(shí)，由于二甲苯和水互不相容的特性，使得后續(xù)的組織透明、浸蠟操作無(wú)法有效進(jìn)行，當(dāng)組織蠟塊中的水分揮發(fā)之后，蠟塊內(nèi)部就會(huì)留有一些空隙，最終使得其中心部位組織發(fā)生凹陷[11]。當(dāng)按照上述操作要求及時(shí)更換乙醇溶液之后，組織塊則未出現(xiàn)脫水質(zhì)量差的相關(guān)情況，所以在更換試劑過(guò)程中，需要準(zhǔn)確把握前兩缸的乙醇濃度并嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行換液操作。對(duì)乙醇濃度進(jìn)行日常檢測(cè)并詳細(xì)記錄相關(guān)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)就可以準(zhǔn)確把握每個(gè)換液周期內(nèi)每缸中的乙醇濃度的變化規(guī)律，并據(jù)此適時(shí)調(diào)整全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)的運(yùn)行程序并按照操作流程更換新的溶液，從而保證組織塊的脫水質(zhì)量[12]。每缸乙醇濃度需要定時(shí)測(cè)定，特別注意其中前兩缸乙醇濃度的變化，這樣檢測(cè)人員可明確并把握換液的時(shí)機(jī)，使得全自動(dòng)病理組織脫水機(jī)中的乙醇濃度始終保持在合理的態(tài)度范圍內(nèi)。

綜上所述，每個(gè)病理組織檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中的接受檢測(cè)的組織類(lèi)型以及數(shù)量都是不同的，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用的脫水機(jī)類(lèi)型以及相關(guān)脫水程序的設(shè)定也是不同的，但是在條件允許的情況下，都可以通過(guò)適當(dāng)?shù)膿Q液方法和換液時(shí)機(jī)維持每個(gè)缸中乙醇濃度的正常范圍，最大程度上減少乙醇濃度變化對(duì)組織塊造成的影響，從而保證脫水質(zhì)量。