• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    平貝母多糖的提取工藝及其體外抗氧化活性研究

    2023-08-18 09:02:08劉佳維張雪茹羅付禹王宣才玉婷
    食品工業(yè) 2023年8期
    關(guān)鍵詞:單糖無(wú)水乙醇自由基

    劉佳維,張雪茹,羅付禹,王宣,才玉婷

    牡丹江醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院(牡丹江 157011)

    平貝母為百合科貝母屬多年生草本平貝母(Fritillaria ussuriensisMaxim)的干燥莖[1],亦稱平貝,為我國(guó)東北珍貴藥用植物之一,發(fā)展歷史和使用歷史較長(zhǎng),在臨床應(yīng)用和藥材市場(chǎng)中占有重要位置。平貝母記載始見(jiàn)于《神農(nóng)本草經(jīng)》,將其列為中品,具有化痰止咳、清熱潤(rùn)肺之功效?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明平貝母具有平喘、鎮(zhèn)咳祛痰[2]、抗炎[3]、抗氧化等多方面生物活性[4-5]。平貝母中含有皂苷類、生物堿類[6-7]、多糖類[8]、核苷類等有效化學(xué)成分。已報(bào)道關(guān)于平貝母中多糖的研究甚少。

    天然的抗氧化劑具有安全、易獲取、穩(wěn)定性好等特點(diǎn),因此從藥食同源的植物中提取抗氧化劑成為研究熱點(diǎn)。試驗(yàn)以平貝母為原料,采用響應(yīng)面法對(duì)平貝母多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,平貝母多糖體外抗氧化活性通過(guò)其對(duì)DPPH自由基的清除能力來(lái)評(píng)價(jià),以期為平貝母資源的深層次開(kāi)發(fā)與利用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    平貝母(購(gòu)自吉林省吉林市)。

    1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH,國(guó)藥集團(tuán)工業(yè)股份有限公司);維生素C(VC,陜西京西藥業(yè)有限公司);單糖標(biāo)準(zhǔn)品(博睿糖生物科技有限公司);苯酚、無(wú)水乙醇、正丁醇、氯仿、濃硫酸(均為分析純)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    HN-1000CT恒溫超聲波提取機(jī)(上海汗諾儀器有限公司);723型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司);RE-529旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海予華儀器有限公司);L-550臺(tái)式低速離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司);BS 110S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

    1.3 平貝母多糖的制備

    平貝母粉碎后,過(guò)篩(0.180 mm,即80目)。圓底燒瓶?jī)?nèi)加入平貝母和無(wú)水乙醇(1∶5 g/mL),加熱回流2 h,過(guò)濾,重復(fù)2次。脫脂后的平貝母過(guò)濾烘干,待用。平貝母采用超聲輔助法提取,重復(fù)2次,濾液合并后濃縮至適當(dāng)體積,用無(wú)水乙醇調(diào)整乙醇體積分?jǐn)?shù)至80%,靜置過(guò)夜(4 ℃),離心。沉淀復(fù)溶后按1/4的比例加入Sevage試劑,磁力攪拌30 min(4 000 r/min),離心20 min,取上層清液重復(fù)操作。多糖溶液放入3 500 Da的透析袋中透析48 h,冷凍干燥得到平貝母多糖[9]。

    1.4 平貝母多糖提取率的測(cè)定

    多糖含量采用苯酚-硫酸法[10]測(cè)定,獲得回歸方程y=2.39x-0.011 1,R2=0.999 1。根據(jù)式(1)計(jì)算平貝母多糖提取率。

    式中:C為多糖質(zhì)量濃度,mg/mL;D為溶液稀釋倍數(shù);V為多糖溶液體積,mL;m為平貝母質(zhì)量,mg。

    1.5 單因素試驗(yàn)

    精確稱取2.0 g平貝母干粉,在固定超聲功率50 W、超聲時(shí)間20 min、料液比1∶30 g/mL、提取溫度40 ℃條件下,考察料液比(1∶20,1∶25,1∶30,1∶35和1∶40 g/mL)、超聲功率(30,40,50,60和70 W)、超聲時(shí)間(10,15,20,25和30 min)和提取溫度(25,30,35,40和45 ℃)對(duì)平貝母多糖提取率的影響[11-12]。

    1.6 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

    平貝母多糖提取工藝采用響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化[13-14],以料液比(A)、超聲功率(B)、超聲時(shí)間(C)、提取溫度(D)為考察參數(shù),多糖提取率為響應(yīng)值。響應(yīng)面試驗(yàn)的因素水平見(jiàn)表1。

    表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平表

    1.7 紫外吸收光譜分析

    配制平貝母多糖(0.1 mg/mL)溶液,用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在190~900 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。

    1.8 單糖組成分析

    1.8.1 單糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

    配制16種10 mg/mL單糖的儲(chǔ)備液。

    1.8.2 樣品準(zhǔn)備

    精密稱取5 mg樣品置于安瓿瓶中,加入2 mL 3 mol/L TFA,于120 ℃水解3 h。準(zhǔn)確吸取酸水解溶液轉(zhuǎn)移至管中氮吹吹干,加入5 mL水渦旋混勻,吸取50 μL加入950 μL去離子水,按12 000 r/min離心5 min。取上清進(jìn)IC分析。

    1.8.3 色譜條件

    色譜柱Dionex CarbopacTM PA20(3 mm×150 mm);流動(dòng)相A為H2O,流動(dòng)相B為15 mmol/L NaOH,流動(dòng)相C為15 mmol/L NaOH-100 mmol/L NaOAC;流速0.3 mL/min;進(jìn)樣量5 μL;柱溫30 ℃;檢測(cè)器為電化學(xué)檢測(cè)器。

    1.9 紅外光譜分析

    根據(jù)參考文獻(xiàn)[15]方法,精密稱取1 mg平貝母多糖,與100 mg KBr晶體充分研磨,均勻混合后壓片,在4 000~400 cm-1范圍內(nèi)掃描。

    1.10 DPPH自由基的清除作用測(cè)定

    根據(jù)參考文獻(xiàn)[16]的方法,稍作改動(dòng)。配制VC和平貝母多糖溶液(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,2.0和4.0 mg/mL),分別取2 mL于試管中,加入2 mL 0.1 mmol/L DPPH-乙醇溶液,混勻,避光反應(yīng)(30 min),測(cè)其在517 nm波長(zhǎng)處的吸光度,3次重復(fù)試驗(yàn)。以無(wú)水乙醇為空白對(duì)照,VC為陽(yáng)性對(duì)照,平貝母多糖對(duì)DPPH自由基的清除率用式(2)計(jì)算。

    式中:A0為無(wú)水乙醇+DPPH的吸光度;A1為多糖+DPPH的吸光度;A2為多糖+無(wú)水乙醇的吸光度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗(yàn)

    2.1.1 料液比對(duì)多糖提取率的影響

    由圖1可知,料液比中液體占比由1∶20 g/mL增加至1∶30 g/mL后,多糖提取率也逐漸提高。多糖提取率在料液比1∶30 g/mL時(shí)最大,為8.31%。料液比中液體占比繼續(xù)升高增至1∶40 g/mL時(shí),多糖提取率則降低。其主要原因是料液比中液體占比過(guò)小時(shí)多糖無(wú)法完全滲入溶劑而使得提取率偏低,料液比中液體占比過(guò)大時(shí)多糖會(huì)和其他可溶性組分相結(jié)合而造成提取率降低[17]。所以選取料液比1∶25~1∶35 g/mL用于優(yōu)化試驗(yàn)。

    圖1 料液比對(duì)多糖提取率的影響

    2.1.2 超聲功率對(duì)多糖提取率的影響

    如圖2所示,超聲功率由30 W增加到50 W時(shí),多糖提取率逐漸增大。超聲功率50 W時(shí),平貝母多糖提取率達(dá)到最大值8.59%。超聲功率大于50 W后,多糖提取率則緩慢降低,這可能是因?yàn)榭昭ㄐ?yīng)導(dǎo)致溶劑中的氣泡數(shù)增多,導(dǎo)致超聲能量向介質(zhì)傳播的效率降低[18]。因此選取超聲功率40~60 W用于優(yōu)化試驗(yàn)。

    圖2 超聲功率對(duì)多糖提取率的影響

    2.1.3 超聲時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響

    由圖3可知,超聲時(shí)間10~30 min時(shí),多糖提取率先升高后逐漸下降,超聲時(shí)間15 min時(shí)達(dá)到最大值9.67%,可能是超聲10~15 min內(nèi)對(duì)平貝母破壞作用較強(qiáng),因此多糖提取率較高。超聲時(shí)間繼續(xù)增加后,平貝母多糖提取率緩慢下降,可能是由于超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng),多糖結(jié)構(gòu)被破壞[19-20]。因此選取超聲時(shí)間10~20 min用于優(yōu)化試驗(yàn)。

    圖3 超聲時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響

    2.1.4 提取溫度對(duì)多糖提取率的影響

    如圖4所示,提取溫度25~45 ℃區(qū)間內(nèi),多糖提取率先升高然后逐漸降低,35 ℃時(shí),平貝母多糖提取率達(dá)到最高(10.02%)。因此選取提取溫度30~40 ℃用于優(yōu)化試驗(yàn)。

    圖4 提取溫度對(duì)多糖提取率的影響

    2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與分析

    在Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上,進(jìn)行四因素三水平響應(yīng)面分析試驗(yàn)。在Design-Expert軟件分析,試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表2。得到二次多項(xiàng)回歸方程:多糖提取率(Y)=9.678-0.210 833A+0.085B+0.032 5C-0.091 666 7D+1.332 5AB+1.512 5AC+0.077 5AD-0.407 5BC+0.135BD+0.727 5CD-1.289A2-1.332 75B2-1.299C2-0.812 75D2。

    表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

    由表3可得,該模型F=85.46,P<0.000 1,表明模型極顯著。試驗(yàn)設(shè)計(jì)中,響應(yīng)面回歸模型AB、AC、BC、CD、A2、B2、C2、D2項(xiàng)為極顯著差異項(xiàng)(P<0.001),A項(xiàng)為顯著差異項(xiàng)(P<0.01)。影響平貝母多糖提取率的排序是料液比(A)>提取溫度(D)>超聲功率(B)>超聲時(shí)間(C)。模型決定系數(shù)R2等于0.988 4,表明回歸模型顯著性很高,而Radj2等于0.976 9,可以解釋試驗(yàn)響應(yīng)值在97.69水平上的變異情況,并且它與預(yù)測(cè)相關(guān)系數(shù)Rpred2=0.941 6的數(shù)值也較為相近,表明該試驗(yàn)?zāi)P蛯?duì)真實(shí)數(shù)據(jù)有較好的擬合程度,對(duì)實(shí)際工作有一定的指導(dǎo)意義,據(jù)此可利用該模型對(duì)多糖提取率的最優(yōu)提取工藝進(jìn)行分析及預(yù)測(cè)。

    表3 回歸方程方差分析

    應(yīng)用Design-Expert軟件分析得到提取平貝母多糖的最佳提取工藝:料液比1∶29.112 mg/mL、超聲功率49.545 W、超聲時(shí)間14.408 min、提取溫度34.391 ℃,通過(guò)模型預(yù)測(cè)出的平貝母多糖提取率為9.789%。

    在軟件預(yù)測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上,考慮到實(shí)際工藝設(shè)定的可行性,將最佳工藝調(diào)整為料液比1∶29 mg/mL,超聲功率50 W、超聲時(shí)間14 min、提取溫度34 ℃,在此條件下,重復(fù)試驗(yàn)3次,多糖提取率均值達(dá)到9.70%±0.10%,與模型預(yù)測(cè)結(jié)果相近,說(shuō)明基于響應(yīng)面模型的多糖提取率優(yōu)化工藝分析方法有效且可行。

    2.3 紫外光譜分析

    如圖5所示,平貝母多糖在200 nm波長(zhǎng)處有強(qiáng)吸收峰,在260和280 nm波長(zhǎng)處有小的吸收峰,可能存在少量的核酸及蛋白質(zhì)[21]。

    圖5 平貝母多糖的紫外光譜

    2.4 單糖組成分析

    用16種單糖標(biāo)準(zhǔn)品作為對(duì)照,用離子色譜法測(cè)定平貝母多糖的單糖組成,單糖標(biāo)準(zhǔn)品和平貝母多糖的離子色譜圖如圖6和圖7所示。結(jié)果表明,平貝母多糖主要由Glc組成,含有少量Ara和Gal,摩爾比為99.3∶0.3∶0.4。

    圖6 單糖的離子色譜圖

    圖7 平貝母多糖的離子色譜圖

    2.5 紅外光譜分析

    如圖8所示:3 419.06 cm-1處吸收峰為O—H和N—H伸縮振動(dòng)產(chǎn)生[22];2 926.83 cm-1處吸收峰由C—H伸縮振動(dòng)產(chǎn)生[23];1 653.62 cm-1處吸收峰為多糖內(nèi)—CHO及—COOH基團(tuán)C=O伸縮振動(dòng)產(chǎn)生,提示有糖醛酸存在;1 369.17 cm-1處吸收峰由C—H變角振動(dòng)產(chǎn)生[24],1 155.40 cm-1和1 022.47 cm-1處有吸收峰為糖環(huán)的特征吸收峰,表明具有吡喃環(huán)特征結(jié)構(gòu)[25],852.87 cm-1和761.39 cm-1處吸收峰為α-糖苷鍵的特征吸收[26]。綜上,平貝母多糖具有多糖的一般特征峰,具由α-糖苷鍵連接的吡喃環(huán)型多糖。

    圖8 平貝母多糖的紅外光譜

    2.6 平貝母多糖對(duì)DPPH自由基的清除能力

    DPPH清除率檢測(cè)是一種靈敏、快速、簡(jiǎn)單的方法,被廣泛用于藥品和食品抗氧化能力評(píng)估[27]。由圖9可知,平貝母多糖質(zhì)量濃度在0.2~4.0 mg/mL時(shí),對(duì)DPPH自由基清除率隨質(zhì)量濃度的增大逐漸增強(qiáng),質(zhì)量濃度4.0 mg/mL時(shí),其清除率為60.40%,達(dá)到最大值。平貝母多糖對(duì)DPPH自由基具有一定清除能力,表現(xiàn)出較好的體外抗氧化能力,但效果弱于VC。

    圖9 平貝母多糖的對(duì)DPPH自由基清除作用

    3 結(jié)論

    試驗(yàn)采用響應(yīng)面法優(yōu)化平貝母多糖超聲提取工藝,通過(guò)平貝母多糖對(duì)DPPH自由基清除能力評(píng)價(jià)其體外抗氧化活性。得到最優(yōu)工藝:料液比1∶29 g/mL、超聲功率50 W、超聲時(shí)間14 min、提取溫度34 ℃。影響平貝母多糖提取率的排序是料液比>提取溫度>超聲功率>超聲時(shí)間。在此工藝條件下,平貝母多糖提取率為9.70%。離子色譜測(cè)定平貝母多糖主要由Glc、Ara和Gal組成,摩爾比99.3∶0.3∶0.4。平貝母多糖對(duì)DPPH自由基具有一定清除能力,質(zhì)量濃度4 mg/mL時(shí),其清除率達(dá)到最大值60.40%。試驗(yàn)結(jié)果為平貝母多糖研究及其開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    單糖無(wú)水乙醇自由基
    無(wú)水乙醇局部注射治療慢性結(jié)核性膿胸的效果
    無(wú)水乙醇輔助低溫直接法制備堿式碳酸鎂晶體
    自由基損傷與魚(yú)類普發(fā)性肝病
    自由基損傷與巴沙魚(yú)黃肉癥
    海藻多糖的單糖組成對(duì)體外抗氧化活性的影響
    陸克定:掌控污染物壽命的自由基
    蹄葉槖吾葉多糖提取工藝優(yōu)化及單糖組成研究
    超聲引導(dǎo)下應(yīng)用無(wú)水乙醇和聚桂醇治療單純性肝、腎囊腫的療效分析
    超聲引導(dǎo)下穿刺留置導(dǎo)管無(wú)水乙醇灌洗治療腎囊腫的療效分析
    HPLC-ELSD法測(cè)定煙草中單糖含量
    湘潭市| 浦东新区| 临沭县| 大同市| 莲花县| 新河县| 文水县| 即墨市| 昌图县| 铜川市| 南江县| 海口市| 密山市| 江门市| 开封市| 洛宁县| 东至县| 驻马店市| 南丹县| 广州市| 鄄城县| 左权县| 会理县| 若尔盖县| 双峰县| 彭州市| 花垣县| 镇康县| 昌邑市| 宽城| 大足县| 连平县| 博客| 金坛市| 志丹县| 高邮市| 荥经县| 康保县| 旅游| 资溪县| 凤冈县|