經(jīng)典名方甘草瀉心湯基準(zhǔn)樣品的量值傳遞研究

王孟緣，霍 然，于孟涵，徐 偉，邱智東，邱 野

經(jīng)典名方甘草瀉心湯基準(zhǔn)樣品的量值傳遞研究

王孟緣，霍 然，于孟涵，徐 偉，邱智東，邱 野*

長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130117

建立經(jīng)典名方甘草瀉心湯（Gancao Xiexin Decoction，GXD）基準(zhǔn)樣品的HPLC圖譜及指標(biāo)性成分含量測定方法，研究GXD基準(zhǔn)樣品量值傳遞規(guī)律。制備15批GXD基準(zhǔn)樣品，建立特征圖譜并選用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)》軟件進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，明確特征峰并對(duì)其進(jìn)行歸屬。測定指標(biāo)性成分甘草苷、甘草酸、黃芩苷、鹽酸小檗堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀的含量，計(jì)算指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率，分析指標(biāo)成分在飲片-基準(zhǔn)樣品中量值傳遞的規(guī)律。15批GXD基準(zhǔn)樣品指紋圖譜相似度均大于0.90，共指認(rèn)22個(gè)共有峰，甘草5個(gè)、黃芩5個(gè)、甘草和黃芩共有3個(gè)、黃連6個(gè)、黃芩和黃連共有2個(gè)、干姜1個(gè)；各指標(biāo)成分從藥材-飲片平均轉(zhuǎn)移率分別為98.69%、98.13%、96.94%、94.59%、91.76%、88.08%、94.16%；飲片-基準(zhǔn)樣品平均轉(zhuǎn)移率為49.08%、42.24%、28.34%、26.72%、29.32%、33.62%、47.93%。特征圖譜與多指標(biāo)成分含量測定方法相結(jié)合，對(duì)GXD藥材-飲片-基準(zhǔn)樣品的量值傳遞過程進(jìn)行分析研究，為經(jīng)典名方GXD制劑開發(fā)提供參考。

經(jīng)典名方；甘草瀉心湯；基準(zhǔn)樣品；特征圖譜；甘草苷；甘草酸；黃芩苷；鹽酸小檗堿；表小檗堿；黃連堿；巴馬??；量值傳遞

經(jīng)典名方，承載著中醫(yī)藥理論，體現(xiàn)了古人的智慧，以“組方魅力，加和效應(yīng)”的特點(diǎn)體現(xiàn)了中醫(yī)藥特色理論知識(shí)。近年來，國家一直出臺(tái)多項(xiàng)政策，鼓勵(lì)經(jīng)典名方研究，本實(shí)驗(yàn)研究的經(jīng)典名方甘草瀉心湯（Gancao Xiexin Decoction，GXD）是國家中醫(yī)藥管理局公布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》第11號(hào)方劑。GXD出自東漢張仲景《傷寒論》[1]，原文記載：甘草（炙四兩）、干姜（三兩）、黃芩（三兩）、半夏（洗，半升）、大棗（擘，十二枚）、黃連（一兩）。以水一斗，煮取六升，去滓，再煎取三升，溫服一升，日三服。GXD組方嚴(yán)謹(jǐn)，全方藥材一溫一寒，一補(bǔ)一瀉，辛開苦降，益氣和胃，是張仲景治療脾胃虛熱的經(jīng)典方劑。隨著中醫(yī)藥的發(fā)展，現(xiàn)代醫(yī)家遵循異病同治的原則，將GXD擴(kuò)展應(yīng)用于白塞病、復(fù)發(fā)性口腔潰瘍、反流性食管炎、寒熱交錯(cuò)導(dǎo)致的潰瘍性結(jié)腸炎等多種疾病[2-3]，GXD制劑研究具有良好的發(fā)展前景。

調(diào)查發(fā)現(xiàn)GXD的臨床應(yīng)用和藥理研究較多，質(zhì)量控制研究較少，極少部分為單味藥材炙甘草的研究[4]，缺乏GXD整體的指紋圖譜及含量測定研究，為了推進(jìn)GXD復(fù)方制劑的進(jìn)一步研究應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)遵循《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑物質(zhì)基準(zhǔn)的申報(bào)資料要求》[5]，查閱古籍文獻(xiàn)，確定處方劑量[6]，還原出GXD的基準(zhǔn)樣品制備方法，開展對(duì)GXD指紋圖譜及多指標(biāo)成分含量測定研究。本研究通過測定15批GXD基準(zhǔn)樣品指紋圖譜、指標(biāo)成分的含量及出膏率，探究甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿等指標(biāo)成分在藥材-飲片-基準(zhǔn)樣品的傳遞規(guī)律，初步建立了GXD基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為后續(xù)GXD在制劑方面的深入研究提供借鑒和科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，美國Agilent公司；MS105DU型十萬分之一電子分析天平、EL204型萬分之一電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ-500B型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；FTS-40B型分體黑陶壺，潮州壺百飲電器實(shí)業(yè)有限公司；DK-98-II型電熱恒溫水浴鍋，天津泰斯特儀器有限公司；FDU-1200型冷凍干燥機(jī)，上海政泓實(shí)業(yè)有限公司。

1.2 試劑與試藥

1.2.1 試劑 色譜純乙腈、甲醇，美國Fisher公司；分析純甲醇，北京化工廠；實(shí)驗(yàn)用水為純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。

1.2.2 對(duì)照品 甘草苷（批號(hào)111610-202008，質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%）、甘草酸（批號(hào)110731-202021，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.2%）、黃芩苷（批號(hào)111715-202122，質(zhì)量分?jǐn)?shù)94.2%）、漢黃芩苷（批號(hào)111514-201706，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%）、鹽酸小檗堿（批號(hào)110713-202015，質(zhì)量分?jǐn)?shù)85.9%）、姜辣素（批號(hào)111833-202007，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.3%）、鹽酸巴馬?。ㄅ?hào)110732- 201913，質(zhì)量分?jǐn)?shù)85.7%），中國食品藥品檢定研究院；表小檗堿（批號(hào)B20108，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%）、鹽酸黃連堿（批號(hào)B20560，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%），上海源葉生物科技有限公司；槲皮素（批號(hào)SQ8030，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%），索萊寶科技有限公司。

1.2.3 藥材信息 GXD各味藥材總批數(shù)均為15批，藥材產(chǎn)地信息見表1（字母為地區(qū)名稱縮寫），經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室翁麗麗教授鑒定，甘草為豆科甘草屬植物甘草Fisch.的干燥根和根莖、半夏為天南星科半夏屬植物半夏(Thunb.) Breit.的干燥塊莖、黃芩為唇形科黃芩屬植物黃芩Georgi.的干燥根、黃連為毛茛科黃連屬植物黃連Franch.的干燥根莖、干姜為姜科姜屬植物姜Rosc.的干燥根莖、大棗為鼠李科棗屬植物棗Mill.的干燥成熟果實(shí)。遵循《中國藥典》2020年版項(xiàng)下規(guī)定，對(duì)藥材進(jìn)行檢驗(yàn)，藥材合格。結(jié)合前期古籍考證及研究，甘草（炙）為炒甘草，半夏（洗）湯洗半夏，并將藥材炮制并檢驗(yàn)，飲片均符合《中國藥典》2020年版的相關(guān)要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 GXD基準(zhǔn)樣品的制備

將單味藥各批飲片通過Excel中Randbetween函數(shù)隨機(jī)組合制備GXD，各批次組合具體信息見表2。GXD原方記載：甘草四兩、干姜三兩、黃芩三兩、半夏半升、大棗十二枚、黃連一兩，以水一斗，煮取六升，去滓，再煎取三升，溫服一升?！秱摗分袧h1合約為20 mL左右，1升為200 mL，半夏1升＝84 g相接近。但半夏有毒，半升42 g遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了方中其它藥味的用量，這與配伍原則不符，參考《經(jīng)典名方開發(fā)指引》與近幾版的《方劑學(xué)》教材及現(xiàn)代名家應(yīng)用都以東漢一兩為3 g，半夏半升＝12 g為主，本研究半夏也采用較為合理的12 g[6-8]。綜上，折算后取炒甘草12 g，黃芩9 g，干姜9 g，大棗12 g，半夏12 g，黃連3 g，于3 L砂鍋中，加水2000 mL，采用電加熱方式，武火（2000 W）煎至沸騰，文火（800 W）開蓋煎煮160 min（煎至濾液為1200 mL），200目絹布趁熱過濾，繼續(xù)煎煮55 min（煎至濾液約為600 mL），冷凍干燥，即得GXD基準(zhǔn)樣品的凍干粉。稱定質(zhì)量，計(jì)算出膏率。

表1 15批GXD基準(zhǔn)樣品藥材組合信息

Table 1 Combination information of 15 batches of GXD benchmark herbs

甘草批號(hào)產(chǎn)地黃芩批號(hào)產(chǎn)地干姜批號(hào)產(chǎn)地 GLH-20210428甘肅隴西SJX-20210401山西稷山NLB-20201009云南曲靖 GLS-20210529甘肅隴西SJX-20210402山西稷山NLM-20201010云南曲靖 NCX-20210722內(nèi)蒙古赤峰SWG-20210404山西萬榮NLD-20201011云南曲靖 NCX-20210721內(nèi)蒙古赤峰SWD-20210405山西聞喜NLT-20201012云南曲靖 NCX-20210805內(nèi)蒙古赤峰SWX-20210406山西聞喜NLF-20201013云南曲靖 NCN-20210807內(nèi)蒙古赤峰SHX-20210319陜西韓城SCC-20201015山東臨沂 NCN-20210811內(nèi)蒙古赤峰SHZ-20210320陜西韓城SCX-20201016山東臨沂 NCN-20210809內(nèi)蒙古赤峰SHS-20210321陜西韓城SCS-20201017山東臨沂 XYJ-20210826新疆和田SHB-20210322陜西韓城SCJ-20201018山東臨沂 XME-20200919新疆和田SHL-20210323陜西韓城SCB-20201019山東臨沂 XHY-20210306新疆和田SHJ-20210324陜西韓城SCD-20201020四川樂山 NCN-20210329內(nèi)蒙古赤峰GQN-20210405甘肅慶陽SLT-20201018四川樂山 GLK-20210326甘肅隴西GQN-20210406甘肅慶陽SLT-20201019四川樂山 GCW-20210327甘肅隴西GQN-20210407甘肅慶陽SLT-20201020四川樂山 GLS-20210329甘肅隴西GQN-20210408甘肅慶陽SLT-20201021四川樂山 黃連批號(hào)產(chǎn)地半夏批號(hào)產(chǎn)地大棗批號(hào)產(chǎn)地 CSL-20201012重慶石柱HAZ-20200912河北安國XHY-20210310新疆哈密 CSL-20201013重慶石柱HAZ-20200913河北安國XHY-20210311新疆哈密 CSF-20201012重慶石柱HAD-20200921河北安國XHY-20210312新疆哈密 CSL-20201015重慶石柱HAD-20200922河北安國XHY-20210313新疆哈密 CSW-20201020重慶石柱HAD-20200923河北安國XHY-20210314新疆哈密 SEL-20201017四川峨眉山HAD-20200924河北安國XHY-20210315新疆哈密 SES-20201017四川峨眉山GLN-20200905甘肅隴西XBR-20201009新疆巴州 SEL-20201020四川峨眉山GLX-20200920甘肅隴西XBR-20201010新疆巴州 SEL-20201018四川峨眉山GLX-20200921甘肅隴西XBR-20201011新疆巴州 SEJ-20201017四川峨眉山GMM-20200901甘肅隴西XBR-20201015新疆巴州 CLB-20201016四川成都GMM-20200902甘肅隴西XBR-20201018新疆巴州 CLB-20201017四川成都AQC-20201001安徽亳州XMR-20201015新疆墨玉 CLB-20201018四川成都AQC-20201002安徽亳州XMR-20201016新疆墨玉 CLB-20201019四川成都AQC-20201003安徽亳州XHH-20201009新疆和田 CLB-20201020四川成都AAH-20200907安徽安慶XHM-20901010新疆和田

出膏率＝1個(gè)處方量的凍干粉質(zhì)量/1個(gè)處方量的飲片質(zhì)量

同法制備單味飲片及缺單味飲片陰性樣品。

2.2 GXD基準(zhǔn)樣品指紋圖譜的建立

2.2.1 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取甘草苷、甘草酸、黃芩苷、漢黃芩苷、鹽酸小檗堿、表小檗堿、鹽酸黃連堿、槲皮素、姜辣素、鹽酸巴馬汀對(duì)照品適量，加70%甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為47.0、226.6、60.8、46.7、11.1、5.1、10.6、43.0、50.0、94.8 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱定GXD凍干粉0.2 g，精密加入10 mL 70%甲醇，稱定質(zhì)量，超聲30 min（40 kHz、500 W）冷卻后稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足缺失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液過0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

表2 15批GXD基準(zhǔn)樣品藥材組合信息及出膏率

Table 2 Combination information and paste yield of 15 batches of GXD benchmark herbs

編號(hào)炒甘草半夏黃芩黃連干姜大棗出膏率/% S1GLH-20210428HAZ-20200912SJX-20210401CLB-20201016NLB-20201009XHY-2021031030.76 S2GLS-20210529HAZ-20200913SJX-20210402CLB-20201017NLM-20201010XHY-2021031130.59 S3NCX-20210722HAD-20200921SWG-20210404CLB-20201018NLD-20201011XHY-2021031229.98 S4NCX-20210721HAD-20200922SWD-20210405CLB-20201019NLJ-20201012XHY-2021031328.34 S5NCX-20210805HAD-20200923SWX-20210406CLB-20201020NLF-20201013XHY-2021031431.47 S6NCN-20210807HAD-20200924SHX-20210319CSL-20201013SCC-20201015XHY-2021031528.09 S7NCN-20210811GLN-20200905SHZ-20210320CSL-20201015SCX-20201016XBR-2020100927.97 S8NCN-20210809GLX-20200920SHS-20210321CSW-20201020SCS-20201017XBR-2020101026.63 S9XHY-20210326GLX-20200921SHB-20210322SEJ-20201017SCJ-20201018XBR-2020101131.42 S10GLK-20210326GMM-20200901SHL-20210323SEL-20201017SCB-20201019XBR-2020101529.67 S11NCN-20210329GMM-20200902SHJ-20210324SEL-20201018SCD-20201020XBR-2020101831.11 S12GLS-20210329AQC-20201001GQN-20210406SEL-20201020SLJ-20201018XMR-2020101528.33 S13GLW-20210327AQC-20201002GQN-20210407SES-20201017SLJ-20201019XMR-2020101627.91 S14XYJ-20200826AQC-20201003GQN-20210408CSL-20201012SLJ-20201020XHH-2020100926.48 S15NCN-20210809AAH-20200907GQN-20210409CSF-20201012SLJ-20201021XHM-2020101031.10

2.2.3 色譜條件 色譜柱為Zorbax Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫：0～10 min，19%乙腈；10～18 min，19%～21%乙腈；18～34 min，21%～24%乙腈；34～40 min，24%～26%乙腈；40～50 min，26%～29%乙腈；50～60 min，29%～36%乙腈；60～70 min，36%～44%乙腈；70～80 min，44%～52%乙腈；80～85 min，52%～71%乙腈；85～95 min，71%～19%乙腈；95～110 min，19%乙腈；體積流量為0.8 mL/min；檢測波長237 nm；柱溫25 ℃；對(duì)照品溶液及供試品溶液進(jìn)樣量均為10 μL。

2.2.4 精密度考察 取編號(hào)S1供試品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)色譜條件連續(xù)測定6次，以黃芩苷為參照峰（黃芩苷峰面積穩(wěn)定，分離度優(yōu)，無拖尾），計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果24個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD＜1.0%，相對(duì)峰面積的RSD＜4.0%，表明該方法精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取S1基準(zhǔn)樣品按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液6份，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件測定，以黃芩苷為參照峰，計(jì)算共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD＜1.0%，相對(duì)峰面積的RSD＜3.0%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取S1供試品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣后測定，以黃芩苷為參照峰，計(jì)算得出共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD＜1.0%，相對(duì)峰面積的RSD＜5.0%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 指紋圖譜建立及相似度評(píng)價(jià) 將15批GXD基準(zhǔn)樣品供試品溶液（S1～S15），按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖并導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》軟件中，生成疊加圖（圖1），以S1為參照?qǐng)D譜，時(shí)間窗寬度0.1 s，設(shè)置中位數(shù)法，Marker峰匹配，并生成對(duì)照?qǐng)D譜（R），以相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算，得到15批GXD基準(zhǔn)樣品（S1～S15）與R的相似度結(jié)果分別為0.956、0.929、0.922、0.965、0.943、0.980、0.968、0.976、0.966、0.967、0.982、0.933、0.943、0.929、0.969，結(jié)果表明，不同批次間差異較小，GXD基準(zhǔn)樣品制備工藝較為穩(wěn)定。

將GXD基準(zhǔn)樣品指紋圖譜進(jìn)行特征峰歸屬，全方共有22個(gè)共有峰，同對(duì)照品相比共指認(rèn)10個(gè)色譜峰，其中2（甘草苷）、7（表小檗堿）、8（鹽酸黃連堿）、10（黃芩苷）、11（鹽酸巴馬?。?2（鹽酸小檗堿）、15（槲皮素）、16（漢黃芩苷）、19（甘草酸）、21（姜辣素）號(hào)峰，混合對(duì)照品及GXD基準(zhǔn)樣品特征圖譜見圖2。

對(duì)比單味飲片樣品、缺單味飲片陰性樣品和GXD基準(zhǔn)樣品對(duì)照?qǐng)D譜，對(duì)各特征峰進(jìn)行歸屬分析，結(jié)果見圖3、4。結(jié)果表明，1、2（甘草苷）、18、19（甘草酸）、20號(hào)峰來源于甘草，4、10（黃芩苷）、13、14、16（漢黃芩苷）號(hào)峰來源于黃芩，9、15（槲皮素）、17號(hào)峰為甘草、黃芩共有，5、6、7（表小檗堿）、8（鹽酸黃連堿）、11（鹽酸巴馬汀）、12（鹽酸小檗堿）號(hào)峰歸屬黃連，3、22號(hào)峰為黃芩、黃連共有，21（姜辣素）號(hào)峰歸屬于干姜。大部分色譜峰歸屬清晰，飲片中物質(zhì)群可以穩(wěn)定傳遞到基準(zhǔn)樣品中。

圖1 15批GXD基準(zhǔn)樣品HPLC疊加指紋圖譜和對(duì)照指紋圖譜(R)

2-甘草苷 7-表小檗堿 8-鹽酸黃連堿 10-黃芩苷 11-鹽酸巴馬汀 12-鹽酸小檗堿 15-槲皮素 16-漢黃芩苷 19-甘草酸 21-姜辣素

2.3 15批GXD基準(zhǔn)樣品出膏率及出膏轉(zhuǎn)移率考察

按“2.1”項(xiàng)下分別制備15批GXD各單味飲片及全方水煎液，凍干后記錄質(zhì)量，計(jì)算單味飲片及基準(zhǔn)樣品的實(shí)際出膏率，結(jié)果見表3。全方含有甘草12 g，黃芩9 g，干姜9 g，大棗12 g，半夏12 g，黃連3 g，總計(jì)57 g。理論出膏率應(yīng)為單位藥折算。

理論出膏率＝0.210×對(duì)應(yīng)批次甘草飲片的出膏率＋0.053×對(duì)應(yīng)批次黃連飲片的出膏率＋0.210×對(duì)應(yīng)批次半夏飲片的出膏率＋0.160×對(duì)應(yīng)批次黃芩飲片的出膏率＋0.160×對(duì)應(yīng)批次干姜飲片的出膏率＋0.210×對(duì)應(yīng)批次大棗飲片的出膏率[9]

實(shí)際出膏率＝凍干粉質(zhì)量/各飲片取樣量[9]

轉(zhuǎn)移率＝全方實(shí)際/全方理論[10]

變化幅度＝(全方理論－全方實(shí)際)/全方理論[10]

結(jié)果顯示，15批GXD基準(zhǔn)樣品的實(shí)際出膏率為28.09%～30.76%，均值為29.48%，皆在均值的70%～130%（20.64%～38.32%），未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)；理論出膏率為31.28%～34.44%，均值為33.16%，皆在均值的70%～130%（23.21%～43.11%），未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)；整體理論出膏率高于實(shí)際出膏率，平均出膏率轉(zhuǎn)移率為88.94%，出膏率的變化幅度為7.59%～16.75%，滿足經(jīng)典名方研究技術(shù)指導(dǎo)原則，顯示出經(jīng)典名方GXD煎煮工藝的穩(wěn)定可行，以實(shí)際出膏率均值的70%和130%作為上下限，故建議GXD基準(zhǔn)樣品出膏率在20.64%～38.32%。

圖3 GXD基準(zhǔn)樣品與單味藥對(duì)照?qǐng)D譜

圖4 GXD基準(zhǔn)樣品與各單味藥陰性樣品對(duì)照?qǐng)D譜

表3 GXD基準(zhǔn)樣品出膏率及轉(zhuǎn)移率結(jié)果

Table 3 Results of paste yield rate and transfer rate of GXD benchmark samples

編號(hào)實(shí)際出膏率/%理論出膏率/%轉(zhuǎn)移率/%變化幅度/%編號(hào)實(shí)際出膏率/%理論出膏率/%轉(zhuǎn)移率/%變化幅度/%編號(hào)實(shí)際出膏率/%理論出膏率/%轉(zhuǎn)移率/%變化幅度/% S130.7633.3092.377.63S628.0933.3984.1415.86S1130.1132.9091.528.48 S230.5934.4488.8111.19S728.9731.6791.488.52S1228.3333.0285.7914.21 S329.9832.8991.158.85S828.6333.5185.4414.56S1328.9131.2892.417.59 S428.7433.1686.6713.33S930.4233.3391.268.74S1428.4834.2183.2516.75 S530.4733.0792.157.85S1029.6733.6288.2511.75S1530.1033.6589.4510.55

2.4 GXD基準(zhǔn)樣品中多成分含測方法建立

2.4.1 色譜條件

（1）甘草苷和甘草酸定量色譜條件：色譜柱為Agilent Zorbax SB-Aq柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為0.05%磷酸水溶液-乙腈；梯度洗脫：0～8 min，19%乙腈；8～35 min，19%～50%乙腈；35～36 min，50%～70%乙腈；36～40 min，70%乙腈；40～41 min，70%～19%乙腈；41～50 min，19%乙腈；體積流量1 mL/min；柱溫25 ℃；波長237 nm；進(jìn)樣量10 μL；HPLC圖見圖5。

（2）黃芩苷定量色譜條件：色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為0.2%磷酸水溶液-乙腈；梯度洗脫：0～20 min，19%～21%乙腈；20～34 min，21%～24%乙腈；34～35 min，24%～60%乙腈；35～38 min，60%～19%乙腈；38～45 min，19%乙腈；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長280 nm；進(jìn)樣量10 μL；HPLC圖見圖6。

圖5 甘草苷和甘草酸含量測定HPLC圖

圖6 黃芩苷含量測定HPLC圖

（3）表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿定量色譜條件：色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀水溶液（50∶50）為流動(dòng)相，等度洗脫：0～25 min，100%乙腈；體積流量1 mL/min；柱溫35 ℃；檢測波長345 nm；進(jìn)樣量10 μL；HPLC圖見圖7。

2.4.2 供試品溶液的制備

（1）甘草苷和甘草酸的測定：精密稱取GXD基準(zhǔn)樣品凍干粉0.3 g，置具塞錐形瓶中，加入70%乙醇10 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30 min，冷卻后補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

圖7 表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿含量測定HPLC圖

（2）黃芩苷的測定：精密稱取GXD基準(zhǔn)樣品凍干粉0.56 g，置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇10 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30 min，冷卻后補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

（3）表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿的測定：精密稱取GXD基準(zhǔn)樣品凍干粉0.4 g，置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇10 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30 min，冷卻后補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 對(duì)照品溶液的制備

（1）甘草苷和甘草酸：精密稱取甘草苷、甘草酸銨對(duì)照品適量，加入70%乙醇溶解，制得質(zhì)量濃度分別為甘草苷929.1 μg/mL、甘草酸906.204 μg/mL的對(duì)照品溶液，0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

（2）黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿：精密稱取黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加入70%甲醇制得濃度分別為黃芩苷805 μg/mL、表小檗堿982 μg/mL、黃連堿1 066 μg/mL、巴馬汀948 μg/mL、鹽酸小檗堿944 μg/mL的對(duì)照品溶液，0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.4.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液進(jìn)行稀釋，制成含甘草苷質(zhì)量濃度929.1、464.55、232.275、116.137 5、58.068 75、29.034 375 μg/mL，甘草酸質(zhì)量濃度906.204、453.102、226.551、113.275 5、56.637 75、28.318 875 μg/mL，黃芩苷質(zhì)量濃度805、402.5、201.25、100.625、40.25、20.125 μg/mL，表小檗堿質(zhì)量濃度982、245.5、122.75、61.375、30.687 5、15.343 75 μg/mL，黃連堿質(zhì)量濃度1066、533、266.5、133.25、66.625、33.312 5 μg/mL，巴馬汀質(zhì)量濃度948、474、237、118.5、59.25、29.625 μg/mL，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度944、295、147.5、59、29.5、14.75 μg/mL的對(duì)照品溶液。按照“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)應(yīng)的色譜條件進(jìn)樣測定，以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果分別為甘草苷＝17.755＋42.852，＝0.999 9，線性范圍29.0～929.1 μg/mL；甘草酸＝5.3065－28.088，＝0.999 9，線性范圍28.3～906.2 μg/mL；黃芩苷＝25 798＋733.21，＝0.999 6，線性范圍16.1～1 610.0 μg/mL；表小檗堿＝33 494＋339.26，＝0.999 4，線性范圍15.3～982.0 μg/mL；鹽酸黃連堿＝34 575＋52.274，＝0.999 9，線性范圍33.3～1 066.0 μg/mL；鹽酸巴馬汀＝53 084＋568.63，＝0.999 9，線性范圍29.6～948.0 μg/mL；鹽酸小檗堿＝28 223＋282.18，＝0.999 7，線性范圍14.8～944.0 μg/mL；結(jié)果表明，甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.5 精密度考察 取GXD基準(zhǔn)樣品（S1）供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)應(yīng)的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿峰面積的RSD值分別為0.58%、0.55%、0.06%、1.86%、0.05%、0.04%、0.06%，表明儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性考察 取GXD基準(zhǔn)樣品（S1）供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于制備后0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿峰面積的RSD值分別為0.74%、0.06%、0.42%、0.24%、0.39%、0.53%、0.45%，表明24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.4.7 重復(fù)性考察 取GXD基準(zhǔn)樣品（S1）凍干粉，按照“2.3.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值分別為0.67%、0.02%、0.18%、0.13%、0.09%、0.17%、0.10%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收率考察 精密稱取9份已測定指標(biāo)成分含量的GXD基準(zhǔn)樣品（S1）凍干粉樣，按照加入對(duì)照品含量與樣品含量分別為1.5∶1、1∶1、0.5∶1精密加入相應(yīng)甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對(duì)照品，按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下相應(yīng)色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的平均加樣回收率分別為101.96%、100.38%、99.43%、99.17%、101.57%、102.26%、99.21%，RSD分別為1.35%、1.54%、1.80%、1.00%、0.65%、1.84%、1.94%，表明方法加樣回收率良好。

2.5 樣品含量測定及量值傳遞關(guān)系研究

將GXD 15批藥材、飲片、基準(zhǔn)樣品的樣品按照“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測定各樣品中指標(biāo)性成分含量并計(jì)算其在藥材-飲片-基準(zhǔn)樣品過程中的轉(zhuǎn)移率，藥材到飲片轉(zhuǎn)移率＝飲片中指標(biāo)性成分含量/對(duì)應(yīng)批次藥材中指標(biāo)成分含量，飲片-基準(zhǔn)樣品轉(zhuǎn)移率＝(基準(zhǔn)樣品中該指標(biāo)成分含量×該處方基準(zhǔn)樣品質(zhì)量)/(飲片中該指標(biāo)成分含量×飲片投料量)[11-12]，結(jié)果見表4、5?？芍?，甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿從藥材-飲片轉(zhuǎn)移率均值為98.69%、98.13%、96.94%、94.59%、91.76%、88.08%、94.16%，轉(zhuǎn)移率皆在均值的±30%內(nèi)，未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)，符合相關(guān)規(guī)定[8]，表明了藥材在炮制工藝穩(wěn)定。

飲片到基準(zhǔn)樣品平均轉(zhuǎn)移率分別為49.08%、42.24%、28.34%、26.72%、29.32%、33.62%、47.93%，15批基準(zhǔn)樣品中飲片-GXD的基準(zhǔn)樣品的轉(zhuǎn)移率均在均值的±30%內(nèi)，未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)，即GXD中有效成分在飲片及煎煮過程中轉(zhuǎn)移率較一致，說明GXD的基準(zhǔn)樣品制備工藝較為穩(wěn)定。

此外，GXD的基準(zhǔn)樣品的出膏率、水分、浸出物的結(jié)果均在均值的±30%內(nèi)，未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)，說明上述指標(biāo)在GXD的基準(zhǔn)樣品批次間較穩(wěn)定，進(jìn)而驗(yàn)證了GXD的基準(zhǔn)樣品制備工藝的穩(wěn)定。

3 討論

3.1 GXD特征圖譜供試品溶液制備方法考察

本實(shí)驗(yàn)前期通過對(duì)提取方式、提取溶劑、提取時(shí)間、料液比等進(jìn)行考察，最終確定樣品制備方法，稱取GXD基準(zhǔn)樣品凍干粉0.2 g，加入70%甲醇10 mL，超聲提取30 min，放冷，稱定質(zhì)量后用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液，即可。

表4 GXD藥材、飲片、基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分含量

Table 4 Content of index components in GXD herbs, decoction pieces and benchmark samples

編號(hào)甘草苷/%甘草酸/%黃芩苷/%表小檗堿/%黃連堿/%巴馬汀/%鹽酸小檗堿/% 藥材飲片基準(zhǔn)樣品藥材飲片基準(zhǔn)樣品藥材飲片基準(zhǔn)樣品藥材飲片基準(zhǔn)樣品藥材飲片基準(zhǔn)樣品藥材飲片基準(zhǔn)樣品藥材飲片基準(zhǔn)樣品 S12.332.270.693.643.520.6911.7211.451.921.721.640.071.451.340.061.251.051.055.865.635.63 S22.402.340.784.013.980.6813.7512.932.011.511.370.061.641.470.051.171.091.095.845.555.55 S31.661.670.602.672.710.5714.5713.282.010.860.790.041.831.790.061.471.271.276.246.146.40 S41.971.930.703.052.970.5815.8615.802.241.061.020.061.581.370.071.371.181.185.986.076.17 S51.931.900.603.583.590.5311.8411.121.511.151.140.061.381.240.071.291.131.136.555.825.82 S61.681.670.593.273.280.5413.0412.901.681.151.080.061.641.480.071.321.181.186.825.795.79 S70.990.900.313.903.720.3114.6714.882.262.342.110.101.591.410.081.311.211.105.565.445.64 S81.611.640.522.872.800.5111.2510.741.571.000.930.051.971.930.071.181.081.086.155.625.62 S91.681.580.593.273.280.3812.2512.352.010.800.780.041.581.380.071.331.191.196.196.046.05 S100.520.530.192.682.600.1814.9514.572.461.281.190.041.691.590.091.251.191.197.146.056.05 S110.670.660.213.583.660.1712.9212.892.021.151.060.051.611.460.091.351.131.136.045.665.66 S120.500.510.183.813.610.1411.5811.811.990.950.910.041.641.410.081.361.121.126.275.685.68 S130.610.610.232.062.080.1813.0812.311.601.081.090.051.651.390.091.461.191.196.315.985.98 S140.630.630.243.183.000.1812.3511.651.741.621.510.071.491.510.051.301.181.135.775.685.68 S150.500.510.173.813.610.1211.9211.121.420.970.930.041.941.930.071.461.281.186.116.026.02

表5 GXD藥材、飲片、基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率

Table 5 Transfer rate of index components in GXD herbs, decoction pieces and benchmark samples

批號(hào)甘草苷轉(zhuǎn)移率/%甘草酸轉(zhuǎn)移率/%黃芩苷轉(zhuǎn)移率/%表小檗堿轉(zhuǎn)移率/%黃連堿轉(zhuǎn)移率/%巴馬汀轉(zhuǎn)移率/%鹽酸小檗堿轉(zhuǎn)移率/% 藥材-飲片飲片-基準(zhǔn)樣品藥材-飲片飲片-基準(zhǔn)樣品藥材-飲片飲片-基準(zhǔn)樣品藥材-飲片飲片-基準(zhǔn)樣品藥材-飲片飲片-基準(zhǔn)樣品藥材-飲片飲片-基準(zhǔn)樣品藥材-飲片飲片-基準(zhǔn)樣品 S197.6143.5796.7443.2597.7031.9095.3525.4992.4127.3184.0033.0796.0851.55 S297.5347.8599.1341.5994.0429.6390.7325.2389.6318.6393.1639.5095.0346.26 S3100.6551.37101.4548.3791.1528.7591.8628.8497.8119.1986.3934.9398.4052.77 S497.9352.0997.4342.7399.6226.9796.2332.1186.7130.8286.1337.11101.5145.09 S598.6944.76100.1239.4393.9225.7599.1327.6289.8632.2187.6032.1588.8551.89 S699.4050.11100.3245.3098.9324.4293.9131.3590.2428.2689.3937.5684.9036.40 S790.9248.3895.2448.08101.4328.5390.1725.9088.6831.8692.3740.7397.8448.17 S8101.7045.0797.4144.8395.4727.9593.0029.9097.9720.5491.5336.4591.3843.09 S994.2952.83100.2933.86100.8230.6897.5025.6687.3428.6689.4727.2597.5848.63 S10101.1550.6996.9247.2197.4631.6892.9721.1594.0832.3795.2033.8784.7356.93 S1198.0444.96102.2136.7899.7729.8392.1727.4690.6835.2083.7030.3293.7145.40 S12101.5950.0594.7338.32101.9932.0695.7925.1385.9832.4382.3530.6390.5945.29 S1399.8253.56100.6341.3394.1124.47100.9326.9384.2435.2281.5136.0894.7749.05 S14100.7353.5794.5839.8194.3328.2393.2126.36101.3418.4490.7720.4098.4444.89 S15100.3647.3194.7332.6493.2924.2295.8825.8199.4820.5487.6729.0898.5350.98 均值98.6949.0898.1342.2496.9428.3494.5926.7291.7629.3288.0832.6294.1647.93 SD/%2.923.272.633.833.402.723.062.385.272.664.112.905.094.49 RSD/%2.966.902.689.073.519.593.238.905.749.074.678.905.419.37

3.2 基準(zhǔn)樣品特征峰歸屬

15批GXD基準(zhǔn)樣品的特征圖譜共確定了22個(gè)共有峰，對(duì)色譜峰進(jìn)行歸屬，并從色譜峰個(gè)數(shù)來看，甘草、黃芩、黃連對(duì)特征圖譜貢獻(xiàn)較大，干姜對(duì)于指紋圖譜貢獻(xiàn)較低，半夏、大棗未指認(rèn)出特征峰。半夏主要成分為生物堿、有機(jī)酸、氨基酸，多次湯洗，成分損失大，水煎液中含量極少[13]，大棗為方中佐藥，主要含有多糖、齊墩果酸，水煎液中含量極低[14]。半夏、大棗在本實(shí)驗(yàn)條件下特征峰不明顯，后續(xù)將對(duì)其采取單獨(dú)建立特征圖譜或含量測定方法進(jìn)行研究。

3.3 指標(biāo)成分含量測定分析

GXD主治潰瘍性疾病、具有抗炎的功效。通過古籍考證與參考文獻(xiàn)選用與病癥相關(guān)的藥效成分，有研究表明，甘草中的甘草苷、甘草酸有抗菌、抗炎多種作用[15-20]，黃芩中黃芩苷具有較強(qiáng)的殺菌作用[21-26]，黃連主要活性成分是生物堿類化合物[27-29]，小檗堿具有明顯抗炎作用[30]，且黃芩、黃連聯(lián)用可解濕熱疫毒[31]。上述成分穩(wěn)定，在GXD基準(zhǔn)樣品中含量較高，且皆為《中國藥典》2020年版藥材項(xiàng)下規(guī)定的指標(biāo)成分。GXD中6-姜辣素雖有抗炎活性，但因干姜為佐藥，方中含量較低且對(duì)熱不穩(wěn)定，在煎煮過程中受到溫度與時(shí)間的影響，造成含量變化，故不選用6-姜辣素為指標(biāo)性成分[32]。綜上，本研究共選取甘草苷、甘草酸、黃芩苷、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、鹽酸小檗堿7個(gè)指標(biāo)成分建立含量測定方法，進(jìn)行GXD藥材-飲片-基準(zhǔn)樣品中量值傳遞的研究。

研究過程中發(fā)現(xiàn)，藥材-飲片中有效成分轉(zhuǎn)移率均值比飲片-基準(zhǔn)樣品成分轉(zhuǎn)移率均值高，造成此情況的原因可能為藥材-飲片的炮制過程是僅為自身藥材的洗、切，而飲片-基準(zhǔn)樣品過程是需通過煎煮加熱方式完成的，在此過程中有效成分溶出、分解受到一定的影響，或因中藥在煎煮過程中成分易發(fā)生復(fù)雜化學(xué)反應(yīng)，影響成分含量值，具體原因有待進(jìn)一步驗(yàn)證。此外，在藥材-飲片傳遞過程中，甘草苷及甘草酸的轉(zhuǎn)移率較為一致，而飲片-基準(zhǔn)樣品過程中甘草苷的轉(zhuǎn)移率比甘草酸的轉(zhuǎn)移率略高，可能由于甘草苷在水中溶解性高于甘草酸，甘草酸受熱易分解轉(zhuǎn)化為甘草次酸，藥典中選用甘草酸銨而非甘草酸為對(duì)照品也側(cè)面印證了甘草酸溶解性不佳、相對(duì)不穩(wěn)定。且在藥材合煎過程中，甘草中甘草酸易發(fā)生氧化反應(yīng)，或與黃連中的小檗堿發(fā)生酸堿中和反應(yīng)生成新的化合物[33]，可能為不溶于水的雙小檗堿單甘草酸鹽沉淀[34]，導(dǎo)致甘草酸在飲片-基準(zhǔn)樣品過程中的轉(zhuǎn)移率略低于甘草苷。在飲片-基準(zhǔn)樣品傳遞過程中還發(fā)現(xiàn)黃芩苷與黃連中生物堿的轉(zhuǎn)移率明顯降低，對(duì)此進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，黃連、黃芩水提取液皆為澄清透明，混合后明顯有大量沉淀生成，在GXD在煎煮中自沉淀現(xiàn)象較為明顯，究其原因可能為黃芩中主要成分黃芩苷的結(jié)構(gòu)中存在羧基，是一種顯酸性的苷類物質(zhì)，易同黃連中的生物堿成分發(fā)生酸堿中和[35]，產(chǎn)生沉淀，導(dǎo)致煎液中生物堿中的溶出率降低[36]。此外，煎劑易在過濾時(shí)少許沉淀附著在絹布上或在凍干并收集凍干粉過程中可能產(chǎn)生些許損耗，導(dǎo)致一些成分含量降低，后續(xù)課題組將進(jìn)一步研究。

中藥復(fù)方成分復(fù)雜，基準(zhǔn)樣品的研究是中藥復(fù)方制劑的關(guān)鍵。本研究建立了GXD基準(zhǔn)樣品的特征圖譜及指標(biāo)性成分含量測定方法，通過指標(biāo)成分含量對(duì)GXD從藥材-飲片-基準(zhǔn)樣品進(jìn)行量值傳遞研究，結(jié)果表明，7個(gè)指標(biāo)成分對(duì)應(yīng)批次間的轉(zhuǎn)移率皆在規(guī)定范圍（均值70%～130%）內(nèi)，說明GXD的藥材炮制工藝以及基準(zhǔn)樣品制備工藝穩(wěn)定可行，成分具有良好穩(wěn)定地傳遞性，為后續(xù)經(jīng)典名方GXD制劑開發(fā)奠定基礎(chǔ)，為基準(zhǔn)樣品質(zhì)量控制研究提供了參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Research on quantitative transmitting of classical prescription Gancao Xiexin Decoction substance benchmarks

WANG Meng-yuan, HUO Ran, YU Meng-han, XU Wei, QIU Zhi-dong, QIU Ye

School of Pharmaceutical Sciences Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China

To establish the HPLC profiles and methods for detecting the index components in benchmark sample of the classical recipe Gancao Xiexin Decoction (GXD, 甘草瀉心湯) to explicit its law of quantity value transfer.Fifteen batches of GXD substance benchmarks were prepared to establish characterization profiles. The similarity was evaluated by similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM, to attribute the characteristic peaks. The the index components of liquiritin, glycyrrhetinic acid, baicalin, berberine hydrochloride, epiberberine, coptisine and palmatine were determined to calculate the transfer rates of the index components and analyze quantitative transfer laws of index components between decoction pieces and samples.The similarities of 15 batches of GXD benchmark sample fingerprint profiles were all higher than 0.90. Totally, 22 common peaks were identified, thereinto, five for Gancao (et, GRR), five for Huangqin (, SR), three for GRR and SR, six for Huanglian (, CR), two for SR and CR, and one for Ganjiang (). The average transfer rates of herbs to decoction pieces were 98.69%, 98.13%, 96.94%, 94.59%, 91.76%, 88.08%, 94.16% respectively; Average transfer rates of decoction pieces to benchmark sample were 49.08%, 42.24%, 28.34%, 26.72%, 29.32%, 33.62%, 47.93% respectively.The research on quantitative transmitting of herbs-decoction pieces-benchmark sample of GXD by combination chromatographic fingerprint and multi-indicator determination method, which can provide references for the the formulation development of classic GXD.

classical prescriptions; Gancao Xiexin Decoction; benchmark samples; characteristic chromatogram; liquiritin; glycyrrhetinic acid; baicalin; berberine hydrochloride; epiberberine; coptisine; palmatine; quantity value transferring

R283.6

A

0253 - 2670(2023)16 - 5214 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.16.010

2023-03-14

吉林省發(fā)改委項(xiàng)目“經(jīng)典名方甘草瀉心湯物質(zhì)基準(zhǔn)的建立”（2021C035-4）

王孟緣（1999—），女，碩士研究生，主要從事中藥基礎(chǔ)研究與新藥開發(fā)。E-mail: 2836133491@qq.com

邱 野（1989—），男，博士研究生，副教授，主要從事中藥炮制的方法與機(jī)制及其生物活性物質(zhì)發(fā)現(xiàn)與評(píng)價(jià)研究。E-mail: ccyeqiu@163.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]