藥用野生稻基因組DNA提取方法比較

畢繼安 王芳 張國(guó)芳 朱宏芬 沈嵐 鄭紅英 嚴(yán)成其

摘要 以藥用野生稻為試驗(yàn)材料，分別選用傳統(tǒng)的CTAB提取法、CTAB改良方法、堿裂解法、磁珠法、吸附柱法、尿素提取法及酶消化法7種方法提取水稻葉片組織DNA，7種方法分別標(biāo)記為A～G。通過(guò)比較這些方法提取出DNA的濃度和純度，分析這些方法的優(yōu)劣勢(shì)。7種方法均能獲得較好的基因組，按獲得DNA濃度表現(xiàn)為A＞B＞F＞C＞G＞E＞D，純度表現(xiàn)為D＞E＞C＞G＞B＞F＞A。綜合考量DNA的純度、濃度、提取時(shí)間、成本、安全無(wú)毒等方面因素，若對(duì)基因組的質(zhì)量要求不高，只是做簡(jiǎn)單的檢測(cè)且考慮成本問(wèn)題，可以選擇CTAB提取法、CTAB改良方法和尿素提取法；若需要高純度基因組，可以選擇磁珠法、吸附柱法、堿裂解法；若考慮安全無(wú)毒、快速提取及成本可控，可以選擇磁珠法、吸附柱法；若樣品稀有，可以選用CTAB提取法和CTAB改良法。

關(guān)鍵詞 藥用野生稻；葉片；基因組；提取方法；有利基因

中圖分類(lèi)號(hào) S511? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A? 文章編號(hào) 0517-6611（2023）14-0086-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.14.021

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

作者簡(jiǎn)介 畢繼安（1987—），男，山東青島人，博士，從事抗病育種研究。

*通信作者，研究員，博士，從事抗病育種研究。

藥用野生稻多生長(zhǎng)于海拔600～1 100 m丘陵山坡中下部的沖積地和溝邊，為喜暖、喜雨、喜潮濕的短日照植物，適宜在陰蔽、腐殖質(zhì)豐富、pH為6左右的肥沃砂壤土上生長(zhǎng)。藥用野生稻在稻屬22個(gè)種中長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)，是普通栽培稻的20倍以上，在進(jìn)化過(guò)程中，藥用野生稻形成了豐富的遺傳多樣性，藥用野生稻因長(zhǎng)期處于野生環(huán)境，經(jīng)受各種自然災(zāi)害和地理生態(tài)因素的考驗(yàn)，形成了較強(qiáng)的抗性和耐受不良環(huán)境因素等方面的優(yōu)異性狀，是天然的基因庫(kù)。藥用野生稻農(nóng)藝性狀具有大穗、寬葉片、粗莖稈等性狀，為遺傳改良提供了良好的資源條件。因此，深入挖掘藥用野生稻的優(yōu)良基因?qū)τ谛路N質(zhì)創(chuàng)新具有重要意義。①大量的抗病基因。有研究人員通過(guò)對(duì)抗病基因的克隆以及高抗條紋葉枯病水稻材料的獲得，使藥用野生稻資源得到了充分利用，更進(jìn)一步推動(dòng)了藥用野生稻抗病基因的開(kāi)發(fā)與研究［ 1］。水稻白葉枯病是水稻生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中常見(jiàn)的病害，而藥用野生稻具有大量的優(yōu)異抗性基因，因此從藥用野生稻中挖掘抗白葉枯病基因并加以利用，得到了廣大科研工作者的高度重視。研究發(fā)現(xiàn)，云南藥用野生稻多個(gè)居群類(lèi)型對(duì)4種主要病害存在一定抗性［ 2-3］，云南藥用野生稻種質(zhì)資源對(duì)當(dāng)?shù)匾欢〞r(shí)期流行的白葉枯病小種及國(guó)內(nèi)外部分強(qiáng)致病菌整體抗性較好［ 4］，這些研究為藥用野生稻的有效抗病基因挖掘奠定了基礎(chǔ)。②創(chuàng)制新種質(zhì)資源。研究發(fā)現(xiàn)，利用構(gòu)建藥用野生稻TAC文庫(kù)篩選有利基因并通過(guò)克隆、遺傳轉(zhuǎn)化方法及結(jié)合育種技術(shù)，有望實(shí)現(xiàn)藥用野生稻在新種質(zhì)資源上的創(chuàng)制［ 5-7］。同時(shí)，栽培稻與藥用野生稻種間雜種體內(nèi)異源基因組重組引起的DNA甲基化變異規(guī)律為不對(duì)稱(chēng)體細(xì)胞雜交的基因融合奠定了基礎(chǔ)［ 8］，有研究發(fā)現(xiàn)，將藥用野生稻總DNA通過(guò)穗莖注射法導(dǎo)入恢復(fù)系R225可以創(chuàng)制耐陰、耐光氧化的水稻新種質(zhì)［ 9］。③優(yōu)異內(nèi)源基因的挖掘。有研究表明，云南藥用野生稻凈光合速率較高，其在羧化效率和光飽和點(diǎn)上所表現(xiàn)出的高光效潛能為探索機(jī)體高光效基因提供了理論依據(jù)［ 10-11］。藥用野生稻中淀粉合成酶基因在同屬內(nèi)的自然進(jìn)化規(guī)律的探索，也為水稻的遺傳育種和品質(zhì)改良提供科學(xué)依據(jù)［ 12-13］。④抗逆途徑基因挖掘。有研究人員通過(guò)基于藥用野生稻干旱脅迫轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析探索ADF基因?qū)λ幱靡吧痉巧锩{迫的影響［ 14］，同時(shí)還有研究表明，藥用野生稻中LEA蛋白在植物抗逆反應(yīng)起著重要的作用，這為水稻遺傳改良提供重要的理論依據(jù)［ 11，15］。上述研究說(shuō)明藥用野生稻中藥用野生稻中存在大量、有利、可挖掘的基因，是種質(zhì)創(chuàng)新的有利基因庫(kù)，而組織樣品的提取方法還不夠完善與全面，這將會(huì)導(dǎo)致存在部分有利基因片段獲取不夠完整，因此選擇一種合適的方法提取藥用野生稻基因組DNA對(duì)于有利基因的深入挖掘至關(guān)重要。藥用野生稻因其生理結(jié)構(gòu)特征比栽培稻較為復(fù)雜，其基因組提取相對(duì)困難，提取質(zhì)量相對(duì)偏低，因此對(duì)藥用野生稻DNA提取方法進(jìn)行探索，優(yōu)化提取步驟，為獲得更加合適、更加完整的基因組結(jié)構(gòu)提供理論依據(jù)。筆者以藥用野生稻為素材，綜合采用7種方法來(lái)提取植物的基因組，比較各種方法所提取的基因組含量與純度，旨在為后序深入挖掘藥用野生稻的有利基因提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

藥用野生稻為該試驗(yàn)培育，準(zhǔn)備藥用野生稻相同葉位的7組樣品，每組樣品準(zhǔn)確稱(chēng)取0.6 g，然后三等分。

主要試劑：聚乙烯吡咯烷酮（生工生物工程（上海）股份有限公司，中國(guó)），β-巰基乙醇（索萊寶生物科技有限公司，中國(guó)），Protein K（索萊寶生物科技有限公司，中國(guó)），磁珠（美國(guó)Promega公司，US），DNA提取試劑盒（QIAGEN，Germany），R-淀粉酶（美國(guó)Sigma公司，US）。主要儀器：組織研磨儀（Tissuelyser-96，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司），離心機(jī)（5424R，德國(guó)艾本德股份公司），恒溫水浴鍋（DK-8D，上海一恒科學(xué)儀器有限公司），超微量紫外分光光度計(jì)（NanoDrop One C，US）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 基于CTAB的經(jīng)典DNA提取方法。

①取0.2 g水稻葉片組織于液氮中研磨成細(xì)粉狀，并將粉末快速轉(zhuǎn)移到2 mL離心管中。

②加入500 μL提取緩沖液［2% CTAB，100 mmol/L Tris-HCl（pH 7.4），50 mmol/L EDTA （pH 8.0），1.4 mol/L NaCl，0.2% β-巰基乙醇］，顛倒混合均勻離心管，將混合物置于65 ℃水浴中孵育30 min，每隔10 min顛倒混勻一次。

③將離心管置于離心機(jī)中，12 000 r/min 離心15 min。轉(zhuǎn)移離心管中上層液體到新的 1.5 mL 離心管中。

④加入200 μL苯酚∶氯仿∶異戊醇（25∶24∶1）到離心管中并顛倒混合均勻，于室溫靜置5 min，將離心管置于離心機(jī)中，12 000 r/min 離心10 min，轉(zhuǎn)移離心管中上層液于新的 1.5 mL 離心管中。

⑤加入200 μL 氯仿∶異戊醇（24∶1）溶液輕輕顛倒混勻，于室溫靜置5 min后，將其置于離心機(jī)中，12 000 r/min 離心10 min，轉(zhuǎn)移離心管的上層液體到新的 1.5 mL 離心管中。⑥加入2倍體積的冷乙醇（預(yù)先于-20 ℃保存），輕混勻，并轉(zhuǎn)移到-20 ℃冰箱中靜置30 min。

⑦將離心管置于離心機(jī)中，14 000 r/min 離心2 min，棄上清。

⑧加入洗滌緩沖液（70% 乙醇，10 mmol/L醋酸銨），重懸沉淀，12 000 r/min 離心1 min，棄上清。重復(fù)該操作步驟一次。

⑨將沉淀置于空氣中干燥并用100 μL 超純水將其溶解，并將其置于37 ℃水浴鍋中孵育30 min。最后將其置于-20 ℃冰箱中備用或用于后續(xù)試驗(yàn)［ 16-17］。

1.2.2 基于CTAB提取DNA方法的改良。

①取0.2 g水稻葉片和0.1 g聚乙烯吡咯烷酮于液氮中研磨成粉末。

②將粉末轉(zhuǎn)移至2 mL離心管中。隨后將1 mL預(yù)冷提取緩沖液（100 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L EDTA、500 mmol/L NaCl和2% β-巰基乙醇，最終調(diào)節(jié)pH至8.0）加入離心管中，渦旋振蕩混合物，并在室溫下靜置10 min。然后將離心管于4 ℃ 12 000 r/min下離心10 min，棄上清。

③將沉淀懸浮于1 mL預(yù)熱的提取緩沖液中（3% CTAB、1.4 mmol/L NaCl、100 mmol/L Tris-HCl、0.5 mol/L EDTA和2% β-ME，pH為80），與此同時(shí)加入20 μL Protein K 并將混合物于65 ℃水浴下孵育至少1 h，同時(shí)每隔20 min顛倒混勻一次，然后將混合物于4 ℃ 12 000 r/min下離心10 min。

④將上清液轉(zhuǎn)移到新的 2 mL 離心管中，然后向離心管中加入等體積的氯仿∶異戊醇（24∶1）。顛倒混勻后置于室溫下靜置10 min，然后于4 ℃ 12 000 r/min 離心10 min。

⑤將水相轉(zhuǎn)移到新的2 mL離心管中。加入大約1/10體積的 2.5 mol/L KAC溶液（pH 5.2）。

⑥將上層水相轉(zhuǎn)移到另一個(gè)新的2 mL 管中，加入1/3體積的冰異丙醇溶液。將離心管靜置于-20 ℃冰箱中30 min，隨后在 4 ℃12 000 r/min下離心10 min。

⑦棄上清，用多糖、多酚洗滌緩沖液（含50 mmol/L Tris-HCl、5 mmol/L EDTA、350 mmol/L 山梨糖醇，pH 8.0）洗滌1次。

⑧棄掉上清液，將含有DNA的白色沉淀用70%乙醇洗滌2次，自然環(huán)境干燥。

⑨將最終的DNA沉淀用100 μL 超純水溶解［ 18-19］。

1.2.3 堿裂解法。

①取0.2 g水稻葉片組織于液氮中研磨成細(xì)粉狀，接著將其轉(zhuǎn)移到2 mL離心管中。

②在離心管中加入100 μL堿性裂解試劑［25 mmol/L NaOH 和 0.2 mmol/L EDTA（PH 8.0）］，隨后添加100 μL 緩沖試劑［40 mmol/L Tris-HCl（pH 5）］并混勻，靜置2 min。

③將離心管置于離心機(jī)中12 000 r/min 離心5 min，取上清液。

④上清液中加入20 μL 蛋白酶 K（20 mg/mL）及5 μL RNase（10 mg/mL）后于37 ℃水浴鍋中孵育30 min，再將其置于65 ℃水浴鍋孵育10 min。

⑤加入200 μL 氯仿∶異戊醇（24∶1）溶液并輕輕顛倒混勻，靜置5 min后，將其置于離心機(jī)中，12 000 r/min 離心10 min，轉(zhuǎn)移離心管中的上層液體到新的 1.5 mL 離心管中。

⑥加入2倍體積的冷乙醇（預(yù)先于-20 ℃保存），輕混勻，并于-20 ℃冰箱中靜置30 min。

⑦將離心管置于離心機(jī)中，14 000 r/min 離心2 min，棄上清。

⑧加入70%乙醇溶液重懸沉淀，12 000 r/min 離心1 min，棄上清；重復(fù)該操作步驟 1次。

⑨室溫條件下晾干沉淀，加入100 μL超純水充分溶解，保存于-20 ℃冰箱中待用［ 20］。

1.2.4 磁珠法。

①取0.2 g水稻葉片組織于液氮中研磨成粉末，并將粉末轉(zhuǎn)移到2 mL 離心管中，并加入1 mL裂解緩沖液（2% CTAB、2.5 mmol/L NaCl、0.1 mol/L Tris-HCl、20 mmol/L EDTA），顛倒混勻。

②將上述混合物通過(guò)0.22 μm 過(guò)濾器，轉(zhuǎn)移到新2 mL離心管中，在濾液中加入800 μL異丙醇和50 μL蛋白酶K，充分混勻。

③在濾液中加入20 μL 磁珠原液并渦旋3～4 min，靜置1 min。

④將混合物置于磁力架沉淀磁珠，棄去上清中不含磁珠的液體。

⑤磁珠用 1 mL CW1 緩沖液（含7 mol/L鹽酸胍的50%異丙醇溶液）進(jìn)行清洗。

⑥磁珠再用 1 mL CW2 緩沖液（75%乙醇）洗滌2次。隨后室溫放置 5 min以蒸發(fā)殘留的乙醇。

⑦將30 μL洗脫緩沖液（10 mmol/L Tris-HCl，pH 8.5，預(yù)熱至55 ℃）加入磁珠中，隨后在55 ℃水浴鍋中孵育5 min，孵育期間每隔1 min渦旋20 s。

⑧將混合物置于磁力架上，吸取上清液備用［ 21-23］。

1.2.5 吸附柱法。

①取0.2 g水稻葉片組織置于研缽中，同時(shí)加入液氮充分研磨。

②加入440 μL緩沖液AP1，顛倒混勻材料，再加4 μL RNase后，劇烈渦旋混勻。

③將上述混合物在65 ℃下溫浴15 min，每隔5 min輕輕顛倒試管2～3次。

④加入130 μL緩沖液AP2后，輕柔顛倒混勻，并將其置于冰上靜置5 min。

⑤將離心管置于離心機(jī)中，14 000 r/min離心5 min，緩慢吸取上層液體（500 μL）置于Mini Spin Colum（柱）中，14 000 r/min離心1 min。

⑥將上一步中的濾液（450 μL）緩慢轉(zhuǎn)移至一新的離心管中，并在溶液中緩慢加入1.5倍體積（675 μL）的緩沖液AP3。

⑦將上一步中混合液（包括形成的沉淀）轉(zhuǎn)移至Mini Spin Colum（柱）中，14 000 r/min離心1 min，丟棄廢液。

⑧在Mini Spin Colum（柱）中加入500 μL緩沖液AW，放置3～5 min，12 000 r/min離心1 min，棄掉廢液。重復(fù)洗滌1次。

⑨在Mini Spin Colum（柱）中加入500 μL無(wú)水乙醇，放置3～5 min，12 000 r/min離心3 min，丟棄廢液和收集管。

⑩在Mini Spin Colum（柱）下置1.5 mL離心管，吸取100 μL超純水加到Dneasy膜上。65 ℃水浴鍋中靜置5 min，14 000 r/min離心1 min得到DNA。

1.2.6 尿素提取法。

①利用液氮將0.2 g 水稻葉片組織研磨成粉末，并轉(zhuǎn)移到2 mL離心管中。

②在離心管中加入600 μL 尿素提取液（42 g尿素、7 mL 5 mol/L NaCl、5 mL 1 mol/L Tris-HCl pH 8.0、4 mL 0.5 mol/L EDTA pH 8.0和 5 mL 20% Na-N-月桂酰肌氨酸，加入無(wú)菌蒸餾水調(diào)整最終體積至 100 mL，溫度不高于70 ℃）渦旋混勻，于室溫下靜置1 h。

③將離心管置于離心機(jī)中，以12 000 r/min 離心5 min。

④取上清，加入等體積的苯酚∶氯仿（1∶1）溶液，渦旋混勻離心管。

⑤將離心管置于預(yù)冷的4 ℃離心機(jī)中，12 000 r/min 離心5 min。

⑥取上清液，加入等體積的異丙醇溶液，顛倒混勻，于4 ℃環(huán)境靜置1 h。

⑦將離心管置于預(yù)冷的4 ℃的離心機(jī)中，12 000 r/min 離心5 min。

⑧棄上清，真空干燥沉淀2 min。

⑨用100 μL TE緩沖液（1 mL 1.0 mol/L Tris-HCl和 0.2 mL 0.5 mol/L EDTA，調(diào)節(jié)pH到8.0，并用無(wú)菌水定容至100 mL）溶解沉淀，待用［ 24-25］。

1.2.7 酶消化法。

①取0.2 g水稻組織葉片在液氮中充分研磨后加入300 μL緩沖液［含0.1 mol/L Tris-HCl（pH 8.0）和 0.1 mol/L NaCl］，并渦旋振蕩混勻。

②在上述溶液中加入10 μL R-淀粉酶（Sigma，US），顛倒混勻，于80 ℃恒溫金屬浴中孵育1 h。

③加入33 μL 2% SDS、20 μL Protein K和1 μL RNase A，并將其置于55 ℃恒溫金屬浴中孵育1 h。

④加入300 μL苯酚∶氯仿∶異戊醇（25∶24∶1）溶液，劇烈渦旋振蕩2 min。

⑤將上述溶液于15 000 r/min 離心1 min，轉(zhuǎn)移上清溶液至2.0 mL 離心管中，隨后加入2倍體積預(yù)冷乙醇并置于冰上靜置15 min。

⑥將離心管置于預(yù)冷的離心機(jī)中，4 ℃ 15 000 r/min離心15 min，棄上清。

⑦離心管中加入500 μL 預(yù)冷的70%乙醇，洗滌沉淀，4 ℃，15 000 r/min離心1 min。重復(fù)1遍。

⑧棄上清，室溫下風(fēng)干沉淀，加入100 μL 超純水溶解沉淀，待用［ 26-28］。

2 結(jié)果與分析

2.1 水稻基因組濃度

采用7種方法得到水稻葉片的基因組后，利用超微量紫外分光光度計(jì)測(cè)量其濃度，具體數(shù)值見(jiàn)表1，不同提取方法得到的DNA濃度存在差異，濃度由高到低依次為A＞B＞F＞C＞G＞E＞D，通過(guò)CTAB法獲得的基因組DNA可能存在與植物組織中少量的糖類(lèi)及淀粉或其他物質(zhì)結(jié)合，因此在測(cè)量過(guò)程中存在一定偏差，導(dǎo)致濃度偏高；而通過(guò)磁珠法提取的基因組，因其是在外磁場(chǎng)的作用下納米磁性微球與核酸結(jié)合，磁場(chǎng)大小及磁性微球的特性決定其結(jié)合能力，因此濃度偏低一些。

2.2 水稻基因組純度

核酸純度一般用A260/A230和A260/A280來(lái)表示。其中，260 nm是核酸最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，230 nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，280 nm是蛋白最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)。高純度的DNA其A260/A280比值大于1.8，如果比值小于1.8，表示受到蛋白（芳香族）或酚類(lèi)物質(zhì)的污染，需要對(duì)樣品進(jìn)行純化；同時(shí)DNA純度的另一個(gè)指標(biāo)為A260/A230，如果A260/A230的比值大于1.8，說(shuō)明純度較高，如果小于1.8，表示樣品被碳水化合物（糖類(lèi)）、鹽類(lèi)或有機(jī)溶劑污染，需要對(duì)樣品進(jìn)行純化。根據(jù)測(cè)定結(jié)果來(lái)看，這些方法提取的DNA純度均較高，純度表現(xiàn)為D＞E＞C＞G＞B＞F＞A（表1）。從純度數(shù)據(jù)來(lái)看，利用磁珠法提取的基因組純度最高。

3 討論

對(duì)以上7種方法提取的基因組DNA濃度及純度進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)經(jīng)典CTAB提取方法提取的濃度及純度較高，適合一般性試驗(yàn)需要，但在試驗(yàn)過(guò)程中會(huì)用到含有氯仿的有毒試劑，且耗時(shí)較長(zhǎng)，這需要試驗(yàn)人員規(guī)范操作；基于CTAB的改良方法，提取過(guò)程中會(huì)使用蛋白酶K，這樣會(huì)有效酶解與核酸結(jié)合的組蛋白，使 DNA游離在溶液中，且EDTA等螯合劑均不能使之失活，這樣提取出的DNA純度會(huì)更高一些；利用堿裂解法提取的葉片組織效果和CTAB相差不大，在裂解植物組織方面效果較好，尤其是在提取纖維素較多的根部、莖部?jī)?yōu)勢(shì)較為明顯；磁珠法提取基因組DNA在前期裂解上使用的是CTAB試劑，但是在純化的過(guò)程中利用了磁珠的優(yōu)勢(shì)，使其能在微觀界面上與核酸分子特異性地識(shí)別和高效結(jié)合，并利用二氧化硅包被的納米磁性微球的超順磁性，在Chaotropic鹽（鹽酸胍、異硫氰酸胍等）和外加磁場(chǎng)的作用下，能從樣本中分離出純度較高的基因組DNA，可用于后續(xù)分子雜交試驗(yàn)，但是價(jià)格較昂貴。吸附柱法是在離心吸附柱內(nèi)使用一種硅基質(zhì)濾膜，這種濾膜在低pH、高濃度鹽存在的條件下，可以選擇性吸附DNA片段，而蛋白和其他雜質(zhì)不會(huì)被吸附。通過(guò)這種方法提取出的DNA濃度相對(duì)其他方法較低，有一定量的DNA損失，但是純度相對(duì)較高，減少了有毒試劑的使用，提取時(shí)間也相對(duì)較短；尿素提取法操作過(guò)程比較溫和，不需要?jiǎng)×业恼袷幖案邷氐奶幚?，不易造成DNA變性降解；酶消化法提取的DNA可以輕松地去除植物組織中的淀粉和糖原，用這種方法提取的DNA能避免了基因組中淀粉及糖原的干擾，使DNA的純度會(huì)更高一些，利于基因組獲取更加全面與完整。因此，需要根據(jù)試驗(yàn)材料、目的以及后續(xù)研究需要綜合評(píng)估選用適宜的提取純化方法，在得率與純度間取得平衡。該研究比較了7種不同DNA提取方法，為后續(xù)開(kāi)展藥用野生稻基因組的分離及其功能研究奠定基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

藥用野生稻作為我國(guó)的主要野生稻物種，因其體內(nèi)含有大量未知功能的有利基因，近些年得到了較為廣泛的研究。筆者比較了不同提取野生稻基因組DNA方法，綜合各方面因素考量，若只需簡(jiǎn)單的檢測(cè)且考慮成本問(wèn)題，可以選擇CTAB提取法、CTAB改良方法和尿素提取法，但在使用過(guò)程中會(huì)用到較毒的有機(jī)試劑，提取過(guò)程需小心謹(jǐn)慎；如需要高純度基因組可以選擇磁珠法、吸附柱法、堿裂解法；若考慮安全無(wú)毒、快速提取及成本可控可以選磁珠法、吸附柱法；若樣品稀有可以選用CTAB提取法和CTAB改良法。通過(guò)比較這些方法的優(yōu)劣勢(shì)，可以為滿足不同試驗(yàn)需要選擇高效、簡(jiǎn)便、安全無(wú)毒、低成本的最優(yōu)DNA提取方法提供了一定理論依據(jù)，同時(shí)也為指導(dǎo)水稻不同組織部位DNA的提取提供了參考價(jià)值，進(jìn)一步為開(kāi)發(fā)與優(yōu)化快速提取藥用野生稻基因組DNA提供理論指導(dǎo)。

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