基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究婦科調(diào)氣解毒方對(duì)慢性子宮內(nèi)膜炎的治療作用機(jī)制Δ

陳繼香,李 寧,鐘傳梅,宇文思

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院,南寧 530000; 2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院婦科,南寧 530000)

慢性子宮內(nèi)膜炎(chronic endometritis,CE)是一種以黏膜間質(zhì)水腫、局灶性或彌漫性充血、子宮內(nèi)膜息肉和間質(zhì)漿細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的持續(xù)性子宮內(nèi)膜炎癥[1]。CE的患病率在不孕婦女中為2.8%～56.8%,與不良孕育結(jié)局及子宮內(nèi)膜異位癥等有著明確相關(guān)性[2-4]。該病嚴(yán)重影響了婦女的健康和生活質(zhì)量,同時(shí)造成了社會(huì)家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),子宮內(nèi)膜炎的主要病因?yàn)槌Ｒ娂?xì)菌感染,如大腸桿菌、鏈球菌和葡萄球菌等,脂多糖(LPS)為細(xì)菌主要成分[5]。目前對(duì)于CE尚無(wú)普遍接受的標(biāo)準(zhǔn)化的診斷指南,也沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化的治療方案[6-7]。國(guó)內(nèi)外優(yōu)先推薦抗炎治療[8]。但目前的治療方法存在耐藥、反復(fù)發(fā)作以及有一定的不良反應(yīng)等問(wèn)題。因此,探究子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病機(jī)制,以進(jìn)行有效治療十分迫切。婦科調(diào)氣解毒方作為經(jīng)驗(yàn)方在臨床中治療CE多年,同時(shí)有改善月經(jīng)、提高受孕率等效果,但對(duì)其治療機(jī)制缺乏深入研究。本研究在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基礎(chǔ)上推斷其作用的通路及靶點(diǎn),并建立動(dòng)物模型對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行驗(yàn)證,為臨床用藥提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 婦科調(diào)氣解毒方成分庫(kù)的建立和關(guān)鍵靶點(diǎn)的篩選

從中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP,http:// tcmspw.com/)和中藥與化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)[9]中檢索白芍、白術(shù)、布渣葉、蒼術(shù)、柴胡、陳皮、甘草、荊芥穗、救必應(yīng)、綿萆薢、山藥和土茯苓,尋找中藥化學(xué)組成成分時(shí)設(shè)置口服生物利用度≥30%、類藥性≥0.18對(duì)化合物進(jìn)行篩選;同時(shí),從已發(fā)表的論文中檢索黃花倒水蓮、五指毛桃主要活性成分;將查詢得到的CAS號(hào)和Pubchem Cid號(hào)通過(guò)PubChem[10]生成2 D蛋白質(zhì)靶點(diǎn)結(jié)構(gòu)圖,通過(guò)SwissADME[11]對(duì)其活性成分進(jìn)行篩選,根據(jù)藥動(dòng)學(xué),排除胃腸道吸收度低的蛋白質(zhì)靶點(diǎn),最后通過(guò)TCMSP和Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)[12]將靶蛋白名轉(zhuǎn)換為標(biāo)準(zhǔn)基因名,得到化合物相應(yīng)關(guān)鍵靶點(diǎn)的基因;運(yùn)用SwissTargetPrediction[13]進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè),獲得婦科調(diào)氣解毒方靶點(diǎn)基因。

1.2 子宮內(nèi)膜炎疾病靶點(diǎn)的收集

以“Endometritis”“Endomyometritis”為關(guān)鍵詞,使用GeneCard[14]、DrugBank[15]和DisGeNET[16]收集子宮內(nèi)膜炎相關(guān)的目標(biāo)基因;使用Jvenn在線工具[17]將藥物預(yù)測(cè)的靶點(diǎn)與疾病的靶點(diǎn)進(jìn)行映射,獲得婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎的潛在靶點(diǎn)。

1.3 重疊基因的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)、藥物-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

為探索婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎蛋白靶點(diǎn)之間的相互作用并識(shí)別關(guān)鍵蛋白,將重疊的潛在靶點(diǎn)通過(guò)STRING 11.5數(shù)據(jù)庫(kù)[18],物種設(shè)置為選擇“多種蛋白質(zhì)”后的“智人”;其他參數(shù)為默認(rèn)值,利用Cytoscape 3.7.1軟件繪制交互網(wǎng)絡(luò),設(shè)置節(jié)點(diǎn)大小和顏色來(lái)反映度值的大小,設(shè)置邊的粗細(xì)來(lái)反映組合分?jǐn)?shù)的大小,得到最終的PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.4 重疊基因的基因本體(GO)功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析

為說(shuō)明和了解婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎的潛在機(jī)制,使用Metascape在線平臺(tái)[19],以P<0.01對(duì)重疊基因進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析,篩選排序靠前的生物過(guò)程和通路,并對(duì)富集分析結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

1.5 儀器

SIM-F140AY65-PC型制冰機(jī)(日本Panasonic公司);PowerPacTM通用電泳儀電源(美國(guó)BIO-RAD公司);Fluorchem E型超靈敏化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)(美國(guó)Protein Simple公司);5430R型高速冷凍離心機(jī)(艾本德中國(guó)有限公司);DW-86-L290-80 ℃冰箱(澳柯瑪股份有限公司);Light Cycler 96型全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(瑞士Roche公司);Infinite M200 pro型多功能微孔板檢測(cè)儀酶標(biāo)儀(瑞士Tecan公司)。

1.6 藥品與試劑

婦科調(diào)氣解毒方配方組成:黃花倒水蓮15 g,五指毛桃15 g,麩炒白術(shù)30 g,山藥30 g,救必應(yīng)15 g,土茯苓15 g,布渣葉15 g,棉萆薢10 g,麩炒蒼術(shù)15 g,白芍6 g,車前子(布包)9 g,柴胡3 g,荊芥穗3 g,甘草6 g,陳皮5 g。將飲片水煎成湯劑高、中、低3個(gè)濃度:3.84、1.92、0.96 g/mL,1 mL含生藥1.92 g,由廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院制劑科代煎。

鹽酸左氧氟沙星片(浙江京新藥業(yè)股份有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H19990060,規(guī)格為0.1 g)。LPS 10 mg(美國(guó)Sigma公司,批號(hào)為L(zhǎng)2630);髓過(guò)氧化物酶(MPO)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒、白細(xì)胞介素(IL)6 ELISA試劑盒、蛋白定量試劑盒、羊抗兔IgG、ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒(北京蘭杰柯科技有限公司,批號(hào)分別為MU30238、MU30044、BL521A-1、BL003A、BL523A);IL-1β ELISA試劑盒(武漢貝茵萊生物科技有限公司,批號(hào)為MU30369);兔抗Toll樣受體4(TLR4)抗體、兔抗核因子κB(NF-κB) P65多克隆抗體、P-NF-κB P65多克隆抗體(北京索萊寶科技有限公司,批號(hào)分別為K003881P、K003407P、K006209P);10% PAGE彩色凝膠超快速配制試劑盒(武漢賽維爾生物科技有限公司,批號(hào)為G2043-50T);定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(武漢諾華生物科技有限責(zé)任公司,批號(hào)分別為Q204、R202);RNA總提取試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司,批號(hào)為DP424]。

1.7 動(dòng)物選取與模型建立

所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理均遵循國(guó)家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)頒布的《動(dòng)物質(zhì)量管理辦法》實(shí)施。選取SPF級(jí)8周昆明雌性小鼠60只,體重30～35 g,將小鼠置于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室,室內(nèi)溫度20～25 ℃,濕度50%～60%,普通飼料、水飼養(yǎng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,隨機(jī)抽取10只為空白組,剩余50只隨機(jī)分為模型組,婦科調(diào)氣解毒方低、中、高劑量組,以及西藥組。婦科調(diào)氣解毒方生藥為192 g/付,成人口服劑量為192 g/d。根據(jù)等效劑量系數(shù)折算法小鼠日劑量為29.12 g/kg,因此,婦科調(diào)氣解毒方低、中及高劑量組分別按14.56、29.12及58.24 g/kg連續(xù)灌胃5 d,西藥組同理推算,1日2次,空白組灌胃等體積0.9%氯化鈉溶液。5 d后給小鼠子宮腔手術(shù)注入LPS(2.5 μg/μL)25 μL[20-21]。24 h后眼球取血后離心,脫頸椎處死小鼠后取組織置于-80 ℃冰箱待測(cè)相關(guān)指標(biāo)。

1.8 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果的驗(yàn)證

根據(jù)ELISA試劑盒的步驟對(duì)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)應(yīng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)Real-time PCR及蛋白質(zhì)印跡法對(duì)關(guān)鍵信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白和基因的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。TLR4、NF-κB及P65 NF-κB的引物序列見表1。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 婦科調(diào)氣解毒方的化合物與疾病的靶基因鑒定

婦科調(diào)氣解毒方由黃花倒水蓮、五指毛桃、白術(shù)和山藥等15味中草藥組成。按照篩選條件去除重復(fù)、冗雜以及未找到靶點(diǎn)的成分后,最終得到化學(xué)成分黃花倒水蓮5個(gè),五指毛桃48個(gè),白術(shù)3個(gè),山藥11個(gè),救必應(yīng)4個(gè),土茯苓12個(gè),布渣葉7個(gè),綿萆薢2個(gè),蒼術(shù)3個(gè),白芍8個(gè),陳皮5個(gè),車前子5個(gè),柴胡12個(gè),荊芥穗7個(gè),甘草87個(gè),共219個(gè)化合物。利用數(shù)據(jù)庫(kù)查詢主要化合物調(diào)控的靶點(diǎn)信息,篩選出對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn)698個(gè),通過(guò)Uniprot對(duì)靶點(diǎn)和基因信息進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。從GeneCards、DrugBank和DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)中共鑒定出151個(gè)子宮內(nèi)膜炎相關(guān)的靶基因。

2.2 婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎的潛在靶點(diǎn)

運(yùn)用Jvenn在線工具,將婦科調(diào)氣解毒方主要活性成分調(diào)控的靶點(diǎn)與子宮內(nèi)膜炎的疾病靶點(diǎn)取交集,最終得到36個(gè)靶點(diǎn),見圖1。

圖1 婦科調(diào)氣解毒方-子宮內(nèi)膜炎靶點(diǎn)韋恩圖Fig 1 Venn diagram of gynecological Tiaoqi Jiedu formula-endometritis target

圖2 婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎交接靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)Fig 2 PPI network of handover targets of gynecological Tiaoqi Jiedu formula in the treatment of endometritis

2.3 婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎潛在靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

為探索36個(gè)抗子宮內(nèi)膜炎靶基因的相關(guān)性,構(gòu)建了1個(gè)PPI網(wǎng)絡(luò)。PPI網(wǎng)絡(luò)中的節(jié)點(diǎn)代表蛋白質(zhì),邊代表蛋白質(zhì)之間的相互作用,節(jié)點(diǎn)的大小和顏色的深淺代表度值;節(jié)點(diǎn)的度值越高,其在網(wǎng)絡(luò)中的作用就越重要;每條邊表示蛋白與蛋白之間的相互作用,線條越多表示關(guān)聯(lián)度越大,見圖2。由圖2可知,IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)、半胱天冬酶3(CASP3)、環(huán)加氧酶2(PTGS2)、IL-1β、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)9、CXC趨化因子配體8(CXCL8)、IL-10、缺氧誘導(dǎo)因子1a(HIF1A)的度值顯著高于其余靶點(diǎn),在PPI網(wǎng)絡(luò)中起著重要的聯(lián)系作用,可能是婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎最主要的潛在靶點(diǎn)。

2.4 藥物-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

運(yùn)用Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建藥物-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò),見圖3。圖3中,中間代表疾病,第2圈代表交接作用靶點(diǎn),第3圈代表藥物名稱,每條邊表示化合物和靶點(diǎn)之間相互作用的關(guān)系,根據(jù)節(jié)點(diǎn)度值等網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征進(jìn)行核心節(jié)點(diǎn)的篩選,節(jié)點(diǎn)越大,顏色越深,代表化合物的作用越大。結(jié)果顯示,槲皮素(quercetin)、山柰酚(kaempferol)、木犀草素(luteolin)和β-谷甾醇(beta-sitosterol)等化合物在整個(gè)網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,可能是婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎的核心化合物。

2.5 婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎潛在靶點(diǎn)的GO分析

GO富集分析的結(jié)果包括生物過(guò)程、分子功能和細(xì)胞成分3類。GO生物功能分析共包含690條富集結(jié)果(P<0.01),其中生物過(guò)程636條,分子功能43條,細(xì)胞成分11條。將數(shù)據(jù)可視化,Gene Radio指差異表達(dá)基因中位于term entry的基因數(shù)與所有基因中位于term entry的基因總數(shù)的比值。氣泡的大小表示基因的數(shù)量(count值),氣泡越大,該富集的基因數(shù)量越多。氣泡顏色的深淺表示富集程度(P值);顏色越紅,表示富集程度越高。結(jié)果表明,婦科調(diào)氣解毒方可能是對(duì)炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)、信號(hào)受體調(diào)節(jié)、細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、細(xì)胞因子活子和生長(zhǎng)因子受體結(jié)合等生物過(guò)程進(jìn)行干預(yù)的,見圖4(A—C)。

圖3 藥物-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖Fig 3 Drug-compound-target-disease network

A. 生物過(guò)程;B.細(xì)胞成分;C.分子功能;D.KEGG通路A. biological process; B. cellular component; C. molecular function; D. KEGG pathway圖4 婦科調(diào)氣解毒方治療子宮內(nèi)膜炎潛在靶點(diǎn)的GO和KEGG通路富集分析Fig 4 GO and KEGG pathway enrichment analysis of potential targets of gynecological Tiaoqi Jiedu formula in the treatment of endometritis

2.6 KEGG通路富集分析

對(duì)重疊基因進(jìn)行KEGG通路富集分析,以P<0.01進(jìn)行篩選,共獲得了77條信號(hào)通路,對(duì)P值從小排序居前20位的信號(hào)通路進(jìn)行可視化,見圖4(D)。結(jié)果表明,潛在靶點(diǎn)主要參與NF-κB信號(hào)通路、晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGE)-AGE受體(RAGE)信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路和NOD-like受體信號(hào)通路等,與子宮內(nèi)膜炎發(fā)病機(jī)制報(bào)道相吻合。

2.7 小鼠造模一般情況

空白組小鼠精神狀態(tài)佳,反應(yīng)靈敏,飲食飲水正常、毛發(fā)光澤、大小便正常,陰道分泌物正常。模型組、低劑量組小鼠精神萎靡少動(dòng),反應(yīng)遲鈍,飲食飲水量變少,陰道分泌物增多。其余組無(wú)明顯異常。

2.8 婦科調(diào)氣解毒方對(duì)MPO及炎癥因子的影響

與空白組相比,模型組小鼠MPO活性明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與模型組相比,中劑量組、高劑量組及西藥組小鼠MPO活性明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),低劑量組小鼠MPO活性與模型組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與空白組相比,模型組小鼠炎癥因子IL-6、IL-1β含量顯著升高(P<0.01);與模型組相比,低劑量組小鼠IL-6含量明顯降低(P<0.05),中劑量組、高劑量組及西藥組小鼠IL-6、IL-1β含量明顯降低(P<0.01),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)高、中、低劑量組及西藥組之間的MPO活性、IL-6及IL-1β含量進(jìn)行比較,高劑量組與西藥組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其余差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 各組小鼠血清細(xì)胞因子水平比較Tab 2 Comparison of serum cytokine levels in each group

2.9 Real-time PCR檢測(cè)TLR4/NF-κB信號(hào)通路中P65、磷酸化蛋白65(P-P65)及TLR4 mRNA的表達(dá)

GAPDH和NF-κB信號(hào)通路中,P65、P-P65及TLR4的溶解曲線均為重疊的單峰,表示PCR產(chǎn)物單一,特異性好,見圖5。根據(jù)得出的內(nèi)參平均Ct值及目的基因平均Ct值算出ΔCt,最后用ΔΔCt值為相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示,與空白組比較,模型組小鼠子宮組織內(nèi)P-P65、TLR4 mRNA的表達(dá)量顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,P<0.001)。與模型組比較,低劑量組不能明顯抑制P-P65及TLR4 mRNA的表達(dá)(P>0.05),中、高劑量組及西藥組小鼠P-P65、TLR4 mRNA表達(dá)明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01,P<0.001),各組小鼠P65 mRNA表達(dá)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見圖6。

A.GAPDH;B.P-P65;C.P65;D.TLR4A.GAPDH;B.P-P65;C.P65;D.TLR4圖5 TLR4/NF-κB中實(shí)時(shí)熒光定量PCR溶解曲線Fig 5 Dissolution curve of real-time PCR in TLR4/NF-κB

A. P-P65 mRNA;B.P65 mRNA;C.TLR4 mRNA;與空白組比較,##P<0.01,###P<0.001;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001A. P-P65 mRNA; B. P65 mRNA; C. TLR4 mRNA; vs. blank group, ##P<0.01, ###P<0.001; vs. model group, *P<0.05, **P<0.01,***P<0.001圖6 各組P-P65、P65及TLR4 mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較Fig 6 Comparison of relative expression of P-P65, P65 and TLR4 mRNA in each group

2.10 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)TLR4/NF-κB信號(hào)通路中P-P65、P65及TLR4 蛋白表達(dá)量

與空白組比較,模型組小鼠子宮組織NF-κB P65磷酸化水平(P-P65)及TLR4蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.01);與模型組比較,低、中劑量組小鼠對(duì)NF-κB P65磷酸化水平及TLR4蛋白表達(dá)的抑制不明顯(P>0.05);高劑量組、西藥組能顯著抑制P-P65及TLR4蛋白表達(dá)量,與模型組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05);其中蛋白P65表達(dá)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見圖7。

與空白組比較,##P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01vs. blank group, ##P<0.01;vs. model group, *P< 0.05, **P<0.01圖7 各組小鼠子宮NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)Fig 7 Expression of NF-κB signaling pathway-related proteins in the uterus of mice in each group

3 討論

子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生不是一條通路的改變?cè)斐傻?其中涉及多條通路間相互作用,但篩選出的重要潛在靶點(diǎn)(見圖2)均可激活NF-κB信號(hào)通路。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),TLR4在羊膜細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞、母-胎界面蛻膜細(xì)胞及子宮內(nèi)膜中表達(dá)極高,起到調(diào)節(jié)免疫、炎癥和妊娠著床的作用[22]。LPS是激活TLR信號(hào)通路的主要模式,一旦被激活就會(huì)觸發(fā)炎癥通路上調(diào),尤其是NF-κB通路,進(jìn)而引起IL-1β、IL-6及TNF-α等炎癥因子的表達(dá)上調(diào),以及MPO的激活[23-24]。因此,NF-kB信號(hào)通路在CE免疫系統(tǒng)中起關(guān)鍵作用。在ELISA的檢測(cè)結(jié)果中,婦科調(diào)氣解毒方作用于CE的重要靶點(diǎn),即顯著的向下調(diào)控炎癥因子IL-1β、IL-6的表達(dá)及較少M(fèi)PO的激活;同時(shí)檢測(cè)由TLR4介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路的重要基因及蛋白的表達(dá),結(jié)果顯示,與空白組比較,模型組顯示基因及蛋白P-P65和TLR4的相對(duì)表達(dá)量明顯增加。婦科調(diào)氣解毒方中、高劑量組及鹽酸左氧氟星組能顯著地向下調(diào)控基因及蛋白P-P65及TLR4的表達(dá)。

在篩選的在活性化合物中(見圖2),槲皮素綜合評(píng)分遠(yuǎn)高于其他化合物。研究結(jié)果表明,槲皮素能被胃腸吸收且發(fā)揮抗氧化應(yīng)激的作用[25];并且可抑制膽固醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、線粒體功能障礙和炎癥[26-28]。此外,槲皮素可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子的產(chǎn)生、細(xì)胞增殖和NF-κB活化;降低NLR家族及細(xì)胞焦亡相關(guān)蛋白(如 NLRP3、Caspase-1、GSDMD裂解的IL-1β)的表達(dá)水平[29]。

將婦科調(diào)氣解毒方主要活性成分調(diào)控的靶點(diǎn)與子宮內(nèi)膜炎的治療靶點(diǎn)取交集,得到36個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn),其中IL-6的度值最大,IL-6是一種多效性細(xì)胞因子[30-31]。目前研究結(jié)果表明,通過(guò)IL-6阻斷能進(jìn)行多種疾病的免疫治療[32]。婦科調(diào)氣解毒方可能從疾病通路的上游進(jìn)行干預(yù),通過(guò)抑制IL-6的表達(dá),保護(hù)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的焦亡。同時(shí)作為重要作用靶點(diǎn)的CXCL8,具有血管生成、新的黃體生成及孕酮分泌的作用[33]。從而解釋了臨床中婦科調(diào)氣解毒方在治療CE的同時(shí)能改善月經(jīng)異常及提高受孕率的作用機(jī)制。

綜上所述,婦科調(diào)氣解毒方可以通過(guò)多靶點(diǎn)、多通路、多途徑協(xié)同作用治療CE,并可以在疾病早期進(jìn)行干預(yù)。本研究的不足之處是基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,與人體具有一定差異性。但本研究為今后進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ),為婦科調(diào)氣解毒方在治療CE的同時(shí)保護(hù)子宮內(nèi)膜、提高受孕率提供了新的思路及臨床用藥依據(jù)。