一例蛋雞傳染性喉氣管炎病毒與大腸桿菌混合感染的診斷報告

沙那提·斯蘭拜　巴哈提

中圖分類號：S858.31? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C? ? ? 文章編號：1673-1085（2023）07-0078-03

雞傳染性喉氣管炎（AILT）是當(dāng)前養(yǎng)雞場重點防范的主要呼吸道傳染病之一[1]，近年來在我國呈現(xiàn)出“老病新發(fā)”的流行趨勢，臨床中以“溫和型”和“非典型”癥狀為主，增加了防控的難度，也給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。雞大腸桿菌病是危害我國養(yǎng)雞業(yè)的常見多發(fā)病，在潮濕、寒冷的冬、春季易發(fā)生，通風(fēng)不良、營養(yǎng)不足、環(huán)境應(yīng)激等不良因素易誘發(fā)[2]。2023年4月，塔城某蛋雞場發(fā)生了一起以呼吸道和消化道病變?yōu)橹鞯囊卟?，通過綜合診斷確診為雞傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）與大腸桿菌混合感染，經(jīng)敏感試驗篩選出合適藥物治療以及采取其他輔助措施，養(yǎng)殖場迅速控制了疫情?，F(xiàn)將整個診治過程匯報如下，供基層獸醫(yī)工作者借鑒。

1 發(fā)病情況

2023年4月，塔城某蛋雞場飼養(yǎng)的7月齡蛋雞突然發(fā)病，初期個別雞單眼流淚，喘鳴，伸頸張口呼吸，精神萎靡，飲食減少，每天死亡6～10只；隨后擴(kuò)展至整群發(fā)病，咳嗽加重，張口喘氣，產(chǎn)蛋量急驟減少，每天死亡增加至30只。

2 臨床癥狀

雞群精神沉郁，食欲減退；流涕，張口呼吸，咳嗽，可咳出帶血粘液；腹瀉，水樣糞便，白痢增多，迅速消瘦；產(chǎn)蛋率由90%降至60%，最后因呼吸困難、窒息、消瘦、衰竭至死亡。

3 病理變化

可見病死雞氣管含大量血色黏痰，有出血點，肝臟、脾臟、腎臟出血、腫大，心包膜增厚、附有纖維素性灰白色滲出物，腺胃粘膜水腫、出血點，腸道變薄、廣泛性出血。

4 實驗室診斷

病死雞剖檢后無菌采集喉頭、氣管、心臟、肝臟等組織病料樣品，低溫保存，迅速送往實驗室進(jìn)行病原分離和PCR檢測。

4.1 病原分離培養(yǎng)、鑒定

細(xì)菌分離：采用無菌操作的方法將喉頭、肝臟病料劃線接種麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，結(jié)果在平板上長出很多露珠狀小菌落，菌落表面光滑、中間圓形隆起、邊緣整齊，符合大腸桿菌菌落特征。

染色鏡檢：挑取單個小菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢，可見革蘭氏陰性短小桿菌，單個或散在排列。分離菌鏡檢結(jié)果與大腸桿菌的形態(tài)學(xué)特征相符。

生化鑒定：取分離菌分別進(jìn)行糖發(fā)酵試驗、甲基紅試驗和吲哚試驗等，觀察結(jié)果。分離菌生化鑒定結(jié)果如表1所示。

4.2 藥物敏感性試驗

采用常規(guī)的K-B紙片法測定分離菌株對11種常見藥物的敏感性，結(jié)果顯示分離菌株對阿奇霉素、氧氟沙星、頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考、環(huán)丙沙星較敏感，藥物敏感率為54.55%（6/11）；對阿米卡星、紅霉素、慶大霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素耐藥，藥物耐藥率為45.45%（5/11），耐藥性相對較嚴(yán)重。

4.3 RT-PCR檢測

對上述采集的病料按照病毒基因組RNA/DNA提取試劑盒說明書抽提DNA，按照李海利等[3]建立的雞傳染性喉氣管炎病毒PCR檢測方法，設(shè)計一對雞傳染性喉氣管炎病毒特異性引物并送生物公司合成，并按照文中優(yōu)化的PCR反應(yīng)條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增，成功擴(kuò)增出一條690 bp的目的基因片段，片段大小與預(yù)期結(jié)果一致。表明臨床病料樣品中存在LITV核酸，存在雞傳染性喉氣管炎病毒感染。

5 綜合診斷結(jié)果

通過臨床診斷、剖解變化和實驗室診斷，綜合判定雞場飼養(yǎng)的蛋雞發(fā)生傳染性喉氣管炎病毒與大腸桿菌混合感染。

6 討論與分析

對臨床混合感染的病例，應(yīng)借助實驗室診斷方法快速確診，為疫病治療爭取時間。雞傳染性喉氣管炎是屬于老病新發(fā)的傳染病，近年來隨著雞傳染性喉氣管炎弱毒疫苗的推廣應(yīng)用，在臨床中主要呈現(xiàn)出“溫和型”和“非典型”的臨床癥狀，雖然不能確定這兩種臨床癥狀的出現(xiàn)與ILTV弱毒疫苗的毒力返強(qiáng)有關(guān)[4]，但大大增加了AILT臨床診斷與防治的難度。為避免誤診，還需通過分子生物學(xué)方法和血清學(xué)方法進(jìn)行準(zhǔn)確診斷[5]。病毒分離鑒定方法在臨床是一種常用的實驗室診斷手段，雖然技術(shù)成熟可靠，但需要采購SPF雞胚，存在操作復(fù)雜、試驗周期長等缺點，無法滿足臨床快速確診的需要；ELISA等血清學(xué)方法操作簡單、但無法進(jìn)行潛伏感染期的早期診斷；PCR等分子生物學(xué)方法具有操作簡單、檢測快速、成本低廉、特異性和敏感性高的優(yōu)點，能夠檢測早期感染或潛伏感染期時極低含量的病毒核酸，特別適合于臨床中ILTV感染的快速診斷。因此，本次病例參考他人建立的PCR方法進(jìn)行了臨床應(yīng)用，提高了診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。

大腸桿菌病是養(yǎng)雞生產(chǎn)中的常見病，屬于條件性致病菌，其發(fā)生與飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生較差、溫度驟變、寒冷、潮濕、擁擠、飼料霉變等誘發(fā)因素密切相關(guān)，臨床上常見與其他病毒或細(xì)菌繼發(fā)感染、混合感染和并發(fā)感染的現(xiàn)象，會加重病情，在臨床中一定要做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，這對大腸桿菌的防控非常重要。

筆者認(rèn)為對大腸桿菌病的防控應(yīng)堅持防大于治的理念，通過改善環(huán)境衛(wèi)生、定期消毒、保持通風(fēng)、避免擁擠、避免刺激、嚴(yán)禁飼喂霉變飼料等措施來避免該病的發(fā)生。臨床中一旦暴發(fā)大腸桿菌病，應(yīng)快速確診，根據(jù)藥敏試驗結(jié)果篩選出適合本場的藥物。在當(dāng)前養(yǎng)殖生產(chǎn)中，抗菌性藥物的長期濫用必然導(dǎo)致耐藥性不斷增強(qiáng)。袁敬知等[6]研究發(fā)現(xiàn)大腸桿菌的耐藥性最強(qiáng)，四環(huán)素耐藥率最高，達(dá)到100%。李娟等[7]發(fā)現(xiàn)分離的雞源大腸桿菌總體耐藥情況比較嚴(yán)重，對頭孢氨芐、泰樂霉素的耐藥率達(dá)到65%以上。而本病例中的分離菌株在11種常見藥物中對6種敏感，藥物敏感率達(dá)54.55%；對5種藥物耐藥，藥物耐藥率為45.45%，結(jié)果顯示分離菌株的耐藥性較嚴(yán)重，這必定與該養(yǎng)殖場平時大量濫用抗菌性藥物有關(guān)。所以，對病例中大腸桿菌病的治療應(yīng)進(jìn)行藥物敏感性試驗篩選出敏感藥物，輪換用藥，避免產(chǎn)生耐藥性。

推測兩種可能的發(fā)病情況：一種可能是蛋雞先感染了AILT，導(dǎo)致蛋雞免疫力降低，加上棚舍環(huán)境差，大腸桿菌迅速繁殖，從而發(fā)生大腸桿菌混合感染，導(dǎo)致發(fā)病率和死亡率增加；另一種可能是蛋雞在通風(fēng)條件差、環(huán)境簡陋的棚舍中飼養(yǎng)，先感染了大腸桿菌，導(dǎo)致蛋雞體質(zhì)下降，后又因受外界環(huán)境應(yīng)激和管理粗放等影響，繼發(fā)感染雞傳染性喉氣管炎。本病例雖然無法確定是ILTV還是大腸桿菌在蛋雞發(fā)病過程中起到了主導(dǎo)和決定性作用，但無論是哪一種可能，都與蛋雞的機(jī)體免疫力下降有關(guān)。此次發(fā)病可能與該養(yǎng)殖場的養(yǎng)殖環(huán)境較差有關(guān)，現(xiàn)場查看發(fā)病蛋雞群所在的飼養(yǎng)大棚簡陋、通風(fēng)條件較差，棚舍內(nèi)氨氣味、腥臭味較濃；其次，新疆塔城四月的天氣早晚溫差大，相差約14 ℃，且棚舍保暖性差，以上原因?qū)е码u群發(fā)生混合感染。因此，建議通過加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和改善養(yǎng)殖環(huán)境增強(qiáng)雞群的免疫力，減少不良應(yīng)激的影響，避免和降低疫病的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

[1]? 崔秀麗.雞傳染性喉氣管炎的流行病學(xué)、臨床癥狀、鑒別診斷和防控措施[J].現(xiàn)代畜牧科技，2022，86（2）：115-116.

[2]? 李賦.雞大腸桿菌病的流行病學(xué)及中西藥防治[J].中國動物保健，2022，24（10）：69-70.

[3]李海利，易秀玲，郎利敏，等.雞傳染性喉氣管炎病毒PCR檢測方式的建立和應(yīng)用[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2016，328（3）：1-7.

[4]? 忻效福，丁勇. 雞傳染性喉氣管炎老病新發(fā)防控[J].養(yǎng)殖與飼料，2017（2）：70-71.

[5]? 冷秋仙，王群義，劉紅祥，等. 雞傳染性喉氣管炎流行新特點及防控措施[J].家禽科學(xué)，2016（2）：44-45.

[6]? 袁敬知，楊莉瑤，陳思宇，等.活禽產(chǎn)業(yè)鏈中大腸桿菌耐藥性及耐藥基因調(diào)查[J].中國畜牧獸醫(yī)，2021，48（7）：2661-2670.

[7]? ?李娟，劉秋晨，翟宏旭，等.雞源大腸桿菌分離鑒定、耐藥分析及與乳桿菌體外競爭研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2019，579（15）：101-104.