• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高氧水和戊己丸對幽門螺桿菌的抑菌作用研究*

    2023-07-12 03:29:48劉富林張叔琦許文娟夏旭婷李镕偉
    中醫(yī)藥導(dǎo)報 2023年6期
    關(guān)鍵詞:氧水古方布氏

    施 敏,劉富林,張叔琦,許文娟,夏旭婷,張 婷,李镕偉

    (湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長沙 410208)

    幽門螺旋菌(Helicobacter pylori,Hp)是一種微需氧細(xì)菌,主要形態(tài)為螺旋彎曲,多定植在人體胃黏膜上皮表面和黏液底層[1]。因高感染率、高危害性,Hp廣受臨床工作者及科研工作者的關(guān)注。Hp在全球均具有高感染率[2],我國Hp的感染率為41.35%~72.30%[3]。Hp有較強(qiáng)致病性,與慢性胃炎、消化性潰瘍等一系列消化系統(tǒng)疾患的發(fā)生密切相關(guān)[4]。研究發(fā)現(xiàn)Hp與神經(jīng)系統(tǒng)疾病、癌癥、糖尿病等疾病也有一定相關(guān)性[5-7]。目前西醫(yī)治療Hp感染存在耐藥性強(qiáng)、副作用明顯、患者依從性差等問題[8],而中醫(yī)藥辨證治療Hp感染具有安全有效、可提高根除率等優(yōu)勢[9-10]。

    高氧水是將無菌飲用水進(jìn)行光化學(xué)容氧所得。高氧水的氧分壓從21kPa升高至100~120kPa,氧含量從4.6%提高至14.6%,且常溫常壓下氧氣不易逸出[11]。基于高氧環(huán)境對微需氧菌和厭氧菌的抑制作用,有學(xué)者提出高氧水或許可替代抗生素,開辟厭氧/微需氧菌感染治療新途徑的猜想[12]。車?yán)俚萚13]將高氧水運(yùn)用于厭氧菌的抑制研究,結(jié)果顯示高氧水對異鏈球菌、中間普氏菌、黏性放線菌3種厭氧菌均具有抑菌作用。由此推測,高氧水對Hp亦應(yīng)具有抑菌作用。

    戊己丸由黃連、吳茱萸和白芍組成,臨床研究發(fā)現(xiàn)超微戊己丸對Hp清除率為66.7%[14]。唐小梅等[15]運(yùn)用戊己丸水煎液對Hp進(jìn)行體外抑菌研究,結(jié)果顯示戊己丸對Hp具有抑制作用。戊己丸能顯著調(diào)節(jié)Hp感染胃炎小鼠胃內(nèi)微生物及酶活性.[16]?!豆沤皲涷烉B(yǎng)生必用方》的戊己丸是黃連、吳茱萸、白芍按照1∶1∶1的質(zhì)量配比[17]。2020年版《中華人民共和國藥典》所載戊己丸中黃連、吳茱萸、白芍的藥物質(zhì)量配比為6∶1∶6[18]。

    本研究基于高氧水可破壞Hp的生存環(huán)境和戊己丸能抑制Hp生長的理論,運(yùn)用體外抑菌實驗論證高氧水抑制Hp的可行性,并比較古方戊己丸和藥典戊己丸在抑制Hp方面的優(yōu)劣,再選用效果更好的戊己丸以檢驗高氧水和戊己丸對Hp的抑制作用,旨在探索更安全、有效、廉價的治療Hp感染的手段。

    1 材料

    1.1 菌株、藥物 (1)細(xì)菌:H.pylori(批號:ATCC43504)購自廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)。(2)藥物:黃連超微顆粒40 g(批號:20010)、吳茱萸超微顆粒15 g(批號:200779)、白芍超微顆粒40 g(批號:191014)均購自湖南春光九匯現(xiàn)代中藥有限公司,經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)張裕民主任藥師鑒定合格。阿莫西林鈉克拉維酸鉀粉針劑(0.6 g/劑,批號:H10910017)購自華北制藥有限公司。

    1.2 試劑 胎牛血清(批號:10270106)、1640細(xì)胞培養(yǎng)基(批號:C1187500BT)均購自gibco公司;布氏瓊脂培養(yǎng)基(批號:HB0315)購自青島海博生物技術(shù)有限公司;無菌脫纖維綿羊血(批號:BJLY10031)購自南京便診生物科技有限公司;高氧水由浙江氧典飲品有限公司提供,生產(chǎn)許可證號:SC10633102401450。

    1.3 主要儀器 MIS型高溫高壓滅菌鍋(施都凱儀器設(shè)備有限公司);GNP-9270型恒溫恒濕培養(yǎng)箱(上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司);TG16-WS型離心機(jī)(湖南湘儀實驗儀器開發(fā)有限公司);DK-98-IIA型水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)。

    2 方法

    2.1 各試劑對Hp的抑菌活性測定及比較

    2.1.1 藥物制備 (1)古方戊己丸:取黃連、吳茱萸、白芍超微顆粒劑各10 g分別置于試管中加蒸餾水30 mL攪拌使之充分溶解,4 ℃,4 000 r/min離心10 min(離心半徑為8 cm)吸取上清液,混合置于1個大試管再按上述條件離心10 min,吸取離心后的上清液得到戊己丸藥液。(2)藥典戊己丸:取黃連30 g、吳茱萸5 g、白芍30 g超微顆粒劑,制備方法同古方戊己丸。(3)高氧戊己湯:于無菌環(huán)境下吸取制備好的古方戊己丸藥液5 mL,再吸取5 mL高氧水置于無菌試管中,得到10 mL高氧戊己湯。(4)抗生素藥液制備:吸取蒸餾水5 mL注入阿莫西林鈉克拉維酸鉀粉針劑瓶中,搖晃瓶身使之溶解,加入10 mL生理鹽水稀釋至每1 mL藥液含有阿莫西林10 μg的試劑。

    2.1.2 布氏瓊脂培養(yǎng)皿制備 稱取布氏瓊脂培養(yǎng)基粉8.62 g置于椎型瓶中加入200 mL蒸餾水,加熱攪拌溶解后于120 ℃高壓滅菌15 min。取一個90 mL玻璃平皿,倒入約20 mL蒸餾,標(biāo)記液面水平。比照已經(jīng)標(biāo)記好的平皿,將加入無菌脫纖維綿羊血的布氏液體瓊脂倒入90 mL平皿,高度與標(biāo)記線平齊。待制備好的布氏瓊脂培養(yǎng)皿瓊脂凝固后,密封放入恒溫恒濕培養(yǎng)箱中鑒定培養(yǎng)24 h,無雜菌生長則為可用。

    2.1.3 菌株成活及分裂培養(yǎng) 抽取菌株液0.5 mL注入于含有1640細(xì)胞培養(yǎng)基和滅活后胎牛血清的無菌真空采血管中,使試管內(nèi)形成微需氧環(huán)境,封口并貼標(biāo)簽。置于微需氧密封箱中,放入微需氧產(chǎn)氣袋后將微需氧密封箱加蓋密封,放入37 ℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱48 h。采血管內(nèi)液體顏色變淡,采血管底部灰白色沉淀產(chǎn)生,且采血管內(nèi)液體變渾濁提示菌株成活。

    2.1.4 Hp菌液的制備 將復(fù)活菌株的采血管放入離心機(jī)中,4 ℃,4 000 r/min離心10 min(離心半徑為8 cm),使Hp菌落置底,于無菌環(huán)境下吸取采血管底部含有Hp菌落的液體加入1640細(xì)胞培養(yǎng)基,再用0.5麥?zhǔn)媳葷峁苓M(jìn)行比濁,使菌液濃度達(dá)到1.5×108個/mL。

    2.1.5 抑菌圈實驗 (1)取滅菌后直徑為6 mm的圓形紙片,分別于戊己丸藥液、生理鹽水、抗生素藥液中浸濕后,于37 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中4 h制備成含相應(yīng)試劑的干燥藥敏紙片,高氧水紙片選擇含高氧水濕紙片。(2)將制備好的布氏瓊脂培養(yǎng)皿均勻分為A、B、C、D、E區(qū),分別代表古方戊己丸、藥典戊己丸、高氧水、生理鹽水和抗生素藥液。(3)將Hp菌液0.1 mL均勻涂布在布氏瓊脂培養(yǎng)皿上,取制備好的藥敏紙片平貼于布氏瓊脂培養(yǎng)皿對應(yīng)的位置。(4)將貼好藥敏紙片的布氏瓊脂培養(yǎng)皿置于微需氧密封箱中,放入微需氧產(chǎn)氣袋后將微需氧密封箱加蓋密封,放入37 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h后取出布氏瓊脂培養(yǎng)皿,觀察抑菌圈并用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑。

    2.2 各試劑對Hp的MIC及MBC測定 通過“2.1.5”中抑菌圈實驗結(jié)果選取抑菌效果更好的戊己丸,進(jìn)行對Hp的MIC及MBC測定。(1)取6×8的48孔一次性無菌細(xì)胞培養(yǎng)板,各行由上到下依次標(biāo)注為A、B、C、D,其中A、B、C分別代表戊己丸組、高氧戊己湯組、高氧水組;D行無指代,作為對照用。將每一列從左到右依此標(biāo)注為“1”“2”“3”“4”“5”“6”“7”“8”。(見圖1)

    圖1 細(xì)胞培養(yǎng)板

    (2)向無菌48孔細(xì)胞培養(yǎng)板前3行和D1、D2各孔注入100 μL 1640細(xì)胞培養(yǎng)基。

    (3)抽吸制備好的每1 mL含藥1 000 mg的戊己丸藥液,注入A1~A8孔中,使A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8各孔含戊己丸藥液質(zhì)量濃度應(yīng)依次為500.000 00、250.000 00、125.000 00、62.500 00、31.250 00、15.625 00、7.812 50、3.906 25 mg/mL。同樣方法在B行各孔中注入稀釋高氧戊己湯,在C行各孔中注入稀釋的高氧水。

    (4)D3孔中注入100 μL每1 mL含藥1 000 mg的戊己丸藥液,D4孔中注入100 μL每1 mL含藥1 000 mg的高氧戊己湯藥液,D5孔中注入100 μL每1 mL含藥1 000 mg的高氧水。

    (5)分別向細(xì)胞培養(yǎng)板前3行和D1、D2各孔注入10 μL胎牛血清和10 μL制備好的菌液。

    (6)將48孔細(xì)胞培養(yǎng)板用封口膜封口,置于微需氧密封箱中,將微需氧密封箱放入37 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。

    (7)微需氧環(huán)境恒溫恒濕培養(yǎng)48 h后將48孔細(xì)胞培養(yǎng)板取出,于燈下肉眼觀察,無菌落生成、無試劑變色或變渾濁者為該藥的MIC。

    (8)運(yùn)用點(diǎn)試法測定各藥對Hp的MBC,于無菌環(huán)境下取制備好的90 mL含無菌脫纖維綿羊血的布氏瓊脂培養(yǎng)皿3個,將每個平均分為12個扇形區(qū)域,并用馬克筆依次標(biāo)記為A1、A2、A3······D5。(見圖2)

    圖2 瓊脂培養(yǎng)皿

    (9)將48孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔接種到劃分好的90 mL含無菌脫纖維綿羊血布氏瓊脂培養(yǎng)皿對應(yīng)的區(qū)域上,接種完畢后,置于微需氧密封箱中,放入37 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h,取出觀察各區(qū)域是否有菌落生長,其中完全無菌落生長的最小濃度即為該藥的MBC。

    2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 25.0軟件處理。計量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(±s)表示,滿足正態(tài)性和方差齊性的計量資料采用多樣本單因素方差分析,各組間兩兩比較使用LSD法;不符合正態(tài)性者采用非參數(shù)檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    3.1 抑菌圈實驗(紙片瓊脂擴(kuò)散法)結(jié)果 高氧水、古方戊己丸、藥典戊己丸、抗生素的抑菌圈直徑均大于生理鹽水(P<0.05或P<0.01),且古方戊己丸的抑菌圈直徑大于藥典戊己丸(P<0.01)。(見表1、圖3)

    表1 各藥物抑菌圈直徑比較 (±s,mm)

    表1 各藥物抑菌圈直徑比較 (±s,mm)

    注:與生理鹽水比較,aP<0.01,bP<0.05;與典戊己丸比較,cP<0.01。

    藥物n抑菌圈生理鹽水36.7±0.0藥典戊己丸316.5±0.8b古方戊己丸325.4±0.7ac高氧水312.2±0.8b抗生素314.5±0.4a F 332.572 P 0.000

    圖3 紙片瓊脂擴(kuò)散法測定各試劑的抑菌圈

    3.2 各藥物對Hp的MIC及MBC測定 燈下肉眼觀測各培養(yǎng)孔細(xì)菌的生長情況,A組和B組未見菌落生長的最后一個菌孔均為5號孔;C組未見菌落生長的最后一個菌孔為4號孔;D組為對照組,除2號孔外,其余菌孔均未見菌落生長。(見表2)

    表2 肉眼觀測各孔Hp的生長情況

    運(yùn)用點(diǎn)試法測定各培養(yǎng)孔細(xì)菌的存活性,A組和B組試劑未見菌落生長的最后一個菌孔均為4號孔;C組未見菌落生長的最后一個菌孔為2號孔;D組為對照組,除2號孔外,其余菌孔均未見菌落生長。(見表3)

    表3 點(diǎn)試法測定各孔Hp的生長情況

    對照組2發(fā)現(xiàn)菌落生長,對照組1、3、4、5未發(fā)現(xiàn)菌落成長。(見表4)

    表4 各對照組Hp菌落的生長情況及意義

    古方戊己丸對Hp的MIC為31.25 mg/mL,MBC為62.50 mg/mL;高氧水對Hp的MIC為62.50 mg/mL,MBC為250.00 mg/mL;高氧戊己湯MIC對Hp的為31.25 mg/mL,MBC為62.50 mg/mL。(見表5)

    表5 各藥物組對Hp的MIC、MBC (mg/mL)

    4 討論

    Hp感染具有高感染率、高致病性特點(diǎn),根除Hp已成為胃炎、消化性潰瘍、胃癌、消化不良等患病人群的首要治療方案。但抗Hp的臨床實踐存在Hp高耐藥性和徹底根除的矛盾性的問題。隨著Hp抑菌藥物的使用,關(guān)于Hp耐藥性的報道逐年增多。以克拉霉素為例,其在日本和意大利的耐藥比率高達(dá)30%,中國為50%,土耳其為40%,且其他抗生素也顯示出相似的趨勢[19-23]。臨床工作中,根除Hp存在矛盾和爭議。如肝腎功能不全或者對抗生素廣泛過敏的Hp感染者如何徹底根除Hp?此外,依從性較差的患者難以規(guī)范使用四聯(lián)療法,或者反復(fù)根除Hp后再感染,已經(jīng)形成明顯耐藥的Hp感染者,是否繼續(xù)使用四聯(lián)療法根除Hp?因此,開發(fā)出一種更安全有效的方法防治Hp感染已迫在眉睫。針對這一現(xiàn)實需求,本研究團(tuán)隊結(jié)合中醫(yī)藥特色,進(jìn)行了積極探索。

    Hp感染在中醫(yī)學(xué)中沒有相對應(yīng)的病名,歷代醫(yī)家根據(jù)其臨床癥狀將其歸為“胃脘痛”“反酸”“嘈雜”“痞滿”等范疇。中醫(yī)證候主要以脾胃濕熱、肝胃不和及脾胃虛弱為主[24]。治療主要以清熱利濕、疏肝理氣、活血化瘀、清熱解毒、和胃止痛、健脾和胃、辛開苦降等立法[25]?!豆沤皲涷烉B(yǎng)生必用方》[26]記載戊己丸由黃連、吳茱萸、白芍按照1∶1∶1的質(zhì)量配比。方中黃連為君藥,清肝胃之熱;白芍為臣藥,和里止痛;吳茱萸為佐藥,其辛助開郁,其熱制黃連之苦寒。全方辛開苦降,肝胃同治,用以治療肝火犯胃、肝胃不和所致的胃脘灼熱疼痛、口苦嘈雜、嘔吐吞酸、腹痛泄瀉。

    本研究的抑菌圈實驗發(fā)現(xiàn)《古今錄驗養(yǎng)生必用方》記載的戊己丸抑菌效果優(yōu)于藥典戊己丸,原因可能是古方戊己丸中黃連和吳茱萸以1∶1質(zhì)量配伍,平調(diào)寒熱,適用證型廣,而藥典戊己丸中黃連和吳茱萸以6∶1質(zhì)量配伍,方性寒重于溫,適用證型較為局限。

    本研究通過抑菌圈實驗和各藥物對Hp的MIC及MBC測定發(fā)現(xiàn)高氧水對Hp有一定的抑菌活性,其作用機(jī)理可能與高氧水可以破壞Hp的微需氧生存環(huán)境有關(guān)。高氧水是食品級商品,對人體的毒副作用相對較小,暫未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于高氧水的過敏和不良反應(yīng)報道。因此,本研究論證的高氧水可抑制Hp假說具有臨床意義,使不服用藥物即可殺滅Hp成為可能,同時為肝腎功能不全的Hp患者、對抗生素過敏的Hp患者、不能耐受四聯(lián)療法的Hp患者、未見臨床癥狀的Hp感染者提供了安全可行的抗Hp手段。戊己丸水煎液對Hp也有抑殺作用,這與諸多學(xué)者的[14-16]研究結(jié)果一致,

    實驗結(jié)果顯示高氧戊己湯對Hp的抑菌作用未明顯優(yōu)于戊己丸單獨(dú)使用,分析原因如下。其一,中藥在人體中對Hp的抑制作用有兩種方式:與Hp直接接觸抑殺細(xì)菌以及通過介導(dǎo)人體的免疫細(xì)胞抑殺細(xì)菌。本研究為體外抑菌,未在活體中進(jìn)行,故無法介導(dǎo)人體的免疫細(xì)胞,故未形成協(xié)同抑菌的結(jié)果。其二,高氧水與戊己丸1∶1質(zhì)量配比時,中藥藥液稀釋了高氧水,使高氧戊己湯每毫升含氧量不足以破壞Hp的生存環(huán)境,故高氧戊己湯對Hp的抑殺作用主要依靠藥液中的中藥成分。

    后續(xù)研究將考慮中藥湯劑與高氧水配比,設(shè)置不同濃度中藥與高氧水配比的比較研究,尋找最強(qiáng)的抑菌配比,以此為后續(xù)的動物實驗及臨床研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    綜上所述,戊己丸和高氧水對Hp均有抑制作用,為中醫(yī)藥臨床防治Hp感染提供了防治思路和實驗依據(jù)。

    猜你喜歡
    氧水古方布氏
    富氧水真的更健康嗎
    愛你(2020年10期)2020-11-19 14:09:59
    富氧水真的更健康嗎
    喝富氧水真能強(qiáng)身健體嗎
    千年古方三拗湯,止咳、化痰、平喘
    布氏菌病患者抗體測定與細(xì)菌學(xué)檢驗結(jié)果的比較觀察
    滴鼻免疫布氏菌活疫苗保護(hù)效果的研究
    羊種布氏菌043強(qiáng)毒株BRA0434基因缺失突變株的構(gòu)建與毒力的初步評價
    布氏菌與巨噬細(xì)胞的相互作用機(jī)制
    活氧水聯(lián)合微波治療育齡婦女陰道炎的臨床觀察
    古方今用 驗案存真(十一)
    美女内射精品一级片tv| 国产av精品麻豆| 欧美三级亚洲精品| 国产熟女午夜一区二区三区 | 有码 亚洲区| 性色avwww在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 特大巨黑吊av在线直播| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品.久久久| 日韩一本色道免费dvd| 国产男人的电影天堂91| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国产精品99久久久久久久久| 国产一区二区在线观看日韩| 毛片一级片免费看久久久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 成人亚洲精品一区在线观看| 中文欧美无线码| 啦啦啦在线观看免费高清www| 一区二区三区乱码不卡18| 18禁动态无遮挡网站| 欧美+日韩+精品| 亚洲精品视频女| 色哟哟·www| 一本一本综合久久| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲av二区三区四区| 五月伊人婷婷丁香| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产亚洲一区二区精品| 18+在线观看网站| 伊人亚洲综合成人网| 在线观看三级黄色| 我要看黄色一级片免费的| av在线app专区| 国产精品一区二区在线观看99| 日韩中字成人| av国产久精品久网站免费入址| 自线自在国产av| 成年人免费黄色播放视频 | a 毛片基地| 中文字幕久久专区| 欧美三级亚洲精品| 99热国产这里只有精品6| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 91久久精品国产一区二区三区| 日本爱情动作片www.在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 只有这里有精品99| 丰满迷人的少妇在线观看| 午夜激情福利司机影院| 国产午夜精品一二区理论片| 国产真实伦视频高清在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品国产三级国产专区5o| 成人午夜精彩视频在线观看| 日日啪夜夜撸| 免费观看性生交大片5| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产黄片美女视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 欧美变态另类bdsm刘玥| av网站免费在线观看视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久久久精品性色| h视频一区二区三区| 永久免费av网站大全| 日韩av免费高清视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 高清视频免费观看一区二区| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 全区人妻精品视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 好男人视频免费观看在线| av线在线观看网站| 亚洲成人av在线免费| 七月丁香在线播放| 日本欧美国产在线视频| 国产色婷婷99| 久久99蜜桃精品久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 99热这里只有精品一区| 高清视频免费观看一区二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 晚上一个人看的免费电影| 免费大片黄手机在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 一区二区三区四区激情视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产男女内射视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 欧美一级a爱片免费观看看| 两个人的视频大全免费| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲av中文av极速乱| 青春草亚洲视频在线观看| 色视频www国产| 国产成人freesex在线| 少妇被粗大猛烈的视频| av国产久精品久网站免费入址| tube8黄色片| 国产免费一级a男人的天堂| 2018国产大陆天天弄谢| 99热6这里只有精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 少妇熟女欧美另类| 国产成人一区二区在线| 五月伊人婷婷丁香| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲av成人精品一区久久| av网站免费在线观看视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 男人狂女人下面高潮的视频| 永久网站在线| 视频中文字幕在线观看| 成年av动漫网址| 最近中文字幕2019免费版| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产乱来视频区| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲欧洲国产日韩| 春色校园在线视频观看| 精品视频人人做人人爽| freevideosex欧美| 免费观看性生交大片5| 亚洲精品一区蜜桃| 男女免费视频国产| 一级毛片电影观看| 少妇熟女欧美另类| 岛国毛片在线播放| freevideosex欧美| 夫妻午夜视频| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩伦理黄色片| 最后的刺客免费高清国语| 精品久久久噜噜| 婷婷色麻豆天堂久久| 嫩草影院新地址| 97在线人人人人妻| 两个人的视频大全免费| 欧美性感艳星| 乱码一卡2卡4卡精品| 中文天堂在线官网| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产熟女欧美一区二区| 一级毛片电影观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲av.av天堂| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 成人黄色视频免费在线看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产午夜精品一二区理论片| 国产成人免费观看mmmm| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲av免费高清在线观看| 人人妻人人看人人澡| 午夜av观看不卡| 一区二区三区免费毛片| 成年女人在线观看亚洲视频| 午夜av观看不卡| av国产久精品久网站免费入址| h视频一区二区三区| 久久国产乱子免费精品| 黄色毛片三级朝国网站 | 精品久久国产蜜桃| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产高清有码在线观看视频| 91成人精品电影| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产爽快片一区二区三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 9色porny在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 人妻一区二区av| 日韩亚洲欧美综合| 国精品久久久久久国模美| 国产成人免费无遮挡视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 在线观看人妻少妇| 久久久a久久爽久久v久久| av在线老鸭窝| 欧美日本中文国产一区发布| 最新的欧美精品一区二区| 国产一区二区在线观看av| 99九九线精品视频在线观看视频| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲av成人精品一区久久| 久久国产精品大桥未久av | 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲av不卡在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲自偷自拍三级| 精品久久久精品久久久| 久久这里有精品视频免费| 精品国产乱码久久久久久小说| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 少妇精品久久久久久久| 一级,二级,三级黄色视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 在线播放无遮挡| 十分钟在线观看高清视频www | 色网站视频免费| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲精品一区蜜桃| 天天操日日干夜夜撸| 日本av手机在线免费观看| 新久久久久国产一级毛片| 久久久亚洲精品成人影院| 啦啦啦中文免费视频观看日本| tube8黄色片| 亚洲天堂av无毛| 亚洲欧美清纯卡通| 日本黄色日本黄色录像| 一级a做视频免费观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 午夜激情久久久久久久| 晚上一个人看的免费电影| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 我要看黄色一级片免费的| 精品少妇黑人巨大在线播放| 伦理电影免费视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 日本与韩国留学比较| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美高清成人免费视频www| 久久久久精品久久久久真实原创| 免费在线观看成人毛片| 最近中文字幕2019免费版| av天堂久久9| 久久久a久久爽久久v久久| 哪个播放器可以免费观看大片| 曰老女人黄片| 国产av精品麻豆| 青青草视频在线视频观看| av在线app专区| 亚洲欧美精品专区久久| 日日爽夜夜爽网站| 伊人久久国产一区二区| 99国产精品免费福利视频| 美女大奶头黄色视频| 五月伊人婷婷丁香| 又大又黄又爽视频免费| 国产男女内射视频| 日本欧美国产在线视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 老司机影院毛片| 久久精品国产自在天天线| 热re99久久国产66热| 免费看av在线观看网站| 国产伦理片在线播放av一区| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 成人美女网站在线观看视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲精品一区蜜桃| 日本免费在线观看一区| 国产综合精华液| 青春草视频在线免费观看| 又大又黄又爽视频免费| 国产69精品久久久久777片| 91久久精品电影网| 成人无遮挡网站| 色5月婷婷丁香| 国产精品免费大片| 观看免费一级毛片| 少妇人妻 视频| 亚洲成人一二三区av| 欧美精品一区二区大全| 亚洲综合精品二区| 久久久久久久久久久免费av| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲性久久影院| 少妇的逼好多水| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 五月伊人婷婷丁香| 人妻系列 视频| 成人毛片60女人毛片免费| 一区二区三区免费毛片| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 成人影院久久| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产高清三级在线| 日本vs欧美在线观看视频 | 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美+日韩+精品| 国产精品三级大全| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品久久久噜噜| 十分钟在线观看高清视频www | 欧美日韩在线观看h| 97精品久久久久久久久久精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 好男人视频免费观看在线| 看免费成人av毛片| 偷拍熟女少妇极品色| 午夜免费观看性视频| 国产精品人妻久久久影院| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产一区二区在线观看av| 亚洲av不卡在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 在现免费观看毛片| 欧美日韩综合久久久久久| 丰满迷人的少妇在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 国产男女超爽视频在线观看| 十分钟在线观看高清视频www | 免费黄网站久久成人精品| 国产成人精品福利久久| 精品国产乱码久久久久久小说| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产一区有黄有色的免费视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲精品国产成人久久av| 一级av片app| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 男人和女人高潮做爰伦理| 人妻一区二区av| 日本vs欧美在线观看视频 | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日韩av免费高清视频| 亚洲成人一二三区av| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 九色成人免费人妻av| 男人狂女人下面高潮的视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 青青草视频在线视频观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美少妇被猛烈插入视频| 秋霞伦理黄片| 色哟哟·www| 99久久精品一区二区三区| 有码 亚洲区| 秋霞伦理黄片| av天堂久久9| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 成人漫画全彩无遮挡| 国产又色又爽无遮挡免| 我要看日韩黄色一级片| 国产伦在线观看视频一区| 国产精品一区二区在线不卡| 国产又色又爽无遮挡免| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品久久久噜噜| 亚洲av福利一区| 欧美97在线视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 秋霞伦理黄片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一边亲一边摸免费视频| 人妻 亚洲 视频| 久久久精品94久久精品| 两个人免费观看高清视频 | 免费看光身美女| 午夜免费鲁丝| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久午夜福利片| 国产高清不卡午夜福利| 一本久久精品| 中文天堂在线官网| 欧美日韩av久久| 一级,二级,三级黄色视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 日本与韩国留学比较| 婷婷色av中文字幕| av免费观看日本| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 午夜91福利影院| 人体艺术视频欧美日本| 一本一本综合久久| 日韩人妻高清精品专区| 少妇熟女欧美另类| 亚洲熟女精品中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 日本wwww免费看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲国产欧美在线一区| 午夜视频国产福利| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产探花极品一区二区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 夫妻性生交免费视频一级片| 在现免费观看毛片| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产淫片久久久久久久久| 寂寞人妻少妇视频99o| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美激情国产日韩精品一区| 精华霜和精华液先用哪个| 热99国产精品久久久久久7| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人91sexporn| 下体分泌物呈黄色| 一级爰片在线观看| 22中文网久久字幕| 精品少妇久久久久久888优播| 青春草视频在线免费观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 久久亚洲国产成人精品v| 一区二区av电影网| 性色av一级| 两个人的视频大全免费| 99久久综合免费| 尾随美女入室| 精品久久久久久电影网| 国产精品一二三区在线看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 视频中文字幕在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲欧美清纯卡通| 日韩av在线免费看完整版不卡| 欧美丝袜亚洲另类| 精品一区二区免费观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 观看美女的网站| 五月开心婷婷网| 性色avwww在线观看| 永久免费av网站大全| 日韩一区二区三区影片| 免费观看a级毛片全部| 九九爱精品视频在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产色爽女视频免费观看| 精品午夜福利在线看| 在线观看免费视频网站a站| 一级二级三级毛片免费看| 女人久久www免费人成看片| 婷婷色综合www| 美女大奶头黄色视频| 热re99久久精品国产66热6| 最黄视频免费看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 一级毛片 在线播放| 免费人成在线观看视频色| av一本久久久久| 亚洲欧美日韩东京热| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲成人av在线免费| 简卡轻食公司| 亚洲精品日韩av片在线观看| 观看免费一级毛片| 在线观看国产h片| av有码第一页| 成年人午夜在线观看视频| av在线观看视频网站免费| 亚洲av不卡在线观看| 各种免费的搞黄视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产熟女欧美一区二区| 少妇熟女欧美另类| 精品一区二区免费观看| 久热这里只有精品99| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 国产美女午夜福利| 观看av在线不卡| 丝袜喷水一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品99久久99久久久不卡 | 91精品国产国语对白视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 99热6这里只有精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 极品人妻少妇av视频| h视频一区二区三区| 国产黄片视频在线免费观看| 高清午夜精品一区二区三区| 99热6这里只有精品| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产精品一二三区在线看| 欧美精品一区二区大全| 99久国产av精品国产电影| 色网站视频免费| 天美传媒精品一区二区| 欧美高清成人免费视频www| 一级片'在线观看视频| 久久久久久久久久久丰满| 黄片无遮挡物在线观看| 久久人人爽人人片av| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精品日本国产第一区| 欧美xxⅹ黑人| 日本欧美国产在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 午夜91福利影院| 老司机影院毛片| 六月丁香七月| 不卡视频在线观看欧美| av天堂久久9| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美另类一区| 两个人免费观看高清视频 | 欧美97在线视频| 午夜激情久久久久久久| 男女无遮挡免费网站观看| 一级片'在线观看视频| 精品视频人人做人人爽| 有码 亚洲区| 国产在线男女| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 免费看不卡的av| 午夜福利视频精品| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美成人午夜免费资源| 伦理电影免费视频| 亚洲成人av在线免费| 国产日韩欧美视频二区| 精品久久久久久电影网| 91精品一卡2卡3卡4卡| 午夜91福利影院| 国产极品天堂在线| 十八禁高潮呻吟视频 | 看十八女毛片水多多多| 欧美日韩av久久| 人人妻人人澡人人看| 成人午夜精彩视频在线观看| videossex国产| 只有这里有精品99| 99热这里只有是精品50| 久久精品久久精品一区二区三区| 交换朋友夫妻互换小说| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 97超视频在线观看视频| 三上悠亚av全集在线观看 | 成年人免费黄色播放视频 | 在线精品无人区一区二区三| 在线 av 中文字幕| 国产极品天堂在线| 高清在线视频一区二区三区| 欧美性感艳星| 在线看a的网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产一区二区在线观看av| 中文资源天堂在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲不卡免费看| 女人精品久久久久毛片| 中文字幕久久专区| 欧美日韩视频精品一区| 好男人视频免费观看在线| 日本欧美视频一区| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美区成人在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 久久国产精品大桥未久av | 免费看不卡的av| 久久6这里有精品| 国产熟女欧美一区二区| av女优亚洲男人天堂| 亚洲精品自拍成人| 极品教师在线视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩一区二区视频免费看| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲中文av在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 日韩欧美 国产精品| 在线观看www视频免费| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 中文字幕久久专区| 丰满迷人的少妇在线观看| 女人久久www免费人成看片| 我要看黄色一级片免费的| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲精品456在线播放app| 久久久久久久久大av| 久久这里有精品视频免费| 免费观看性生交大片5|