內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解蛋白Derlin-1和配對(duì)盒2在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系

李少良，胡蝶，柯賢勝，朱海霞

武穴市第一人民醫(yī)院1腫瘤科，2產(chǎn)科，湖北 武穴 435400

子宮內(nèi)膜癌屬于上皮性惡性腫瘤，多見(jiàn)于圍絕經(jīng)期女性，早期無(wú)特異性癥狀，確診時(shí)患者多已處于晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)機(jī)，預(yù)后較差[1]。盡早明確患者的疾病進(jìn)展，才能在最佳時(shí)機(jī)對(duì)其開(kāi)展針對(duì)性治療，進(jìn)而改善患者的預(yù)后[2]。目前，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制尚未明確，有研究認(rèn)為與基因表達(dá)異常、雌激素大量分泌密切相關(guān)[3-4]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解蛋白Derlin-1 和配對(duì)盒2（paired box 2，PAX2）在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Derlin-1是臨床公認(rèn)的致癌基因，具有誘導(dǎo)腫瘤新生血管生成的作用；PAX2屬于細(xì)胞核器官早期發(fā)育的調(diào)控基因之一，具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的作用[5-6]?；诖?，本研究探討Derlin-1和PAX2 在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2021年12月武穴市第一人民醫(yī)院收治的子宮內(nèi)膜癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南（第四版）》[7]中關(guān)于子宮內(nèi)膜癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理學(xué)檢查確診；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期為Ⅰ～Ⅳ期。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；合并免疫系統(tǒng)疾??；妊娠期或哺乳期女性。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入80 例子宮內(nèi)膜癌患者，年齡28～68 歲，平均（44.66±4.26）歲；FIGO 分期：Ⅰ期32 例，Ⅱ期26 例，Ⅲ期14 例，Ⅳ期8 例；分化程度：高分化22 例，中分化42 例，低分化16 例；病理學(xué)分級(jí)：G1級(jí)28 例，G2級(jí)27 例，G3級(jí)25 例。另選取同期武穴市第一人民醫(yī)院收治的80 例子宮肌瘤患者，年齡27～70 歲，平均（45.11±4.13）歲。兩組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有患者均知情同意。

1.2 免疫組化法檢測(cè)Derlin-1 和PAX2 蛋白的表達(dá)情況

取子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織和子宮肌瘤患者的正常子宮內(nèi)膜組織，5 μm 厚切片，滴入兔抗人Derlin-1 一抗（稀釋濃度為1∶500）、兔抗人PAX2 一抗（稀釋濃度為1∶500）和生物標(biāo)記羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）二抗（稀釋濃度為1∶1000），于室溫下孵育4 h 后滴入辣根過(guò)氧化物酶，再次孵育30 min 后磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗3 次，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色后，蘇木素復(fù)染8～10 s，中性樹(shù)膠密封切片，顯微鏡下觀察染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例。

判定標(biāo)準(zhǔn)：光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例分別計(jì)分。無(wú)著色計(jì)0分，淡黃色染色計(jì)1分，棕黃色染色計(jì)2分，黃褐色染色計(jì)3分；陽(yáng)性細(xì)胞所占比例﹤10%計(jì)1 分，10%～50%計(jì)2 分，51%～80%計(jì)3 分，﹥80%計(jì)4分。將染色強(qiáng)度評(píng)分和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分相乘，≥4分判定為陽(yáng)性，﹤4分判定為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；Derlin-1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響因素采用多因素Logistic 回歸分析；以P﹤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Derlin-1、PAX2 表達(dá)情況的比較

子宮內(nèi)膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）。（表1、圖1）

圖1 Derlin-1、PAX2蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況（免疫組化染色，×400）

2.2 不同臨床特征子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白表達(dá)情況的比較

不同年齡、絕經(jīng)情況、病理類型、肌層浸潤(rùn)深度、脈管浸潤(rùn)情況、病理學(xué)分級(jí)子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Derlin-1 陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）；FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Derlin-1 陽(yáng)性表達(dá)率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。不同年齡、絕經(jīng)情況、病理類型、FIGO 分期、肌層浸潤(rùn)深度、脈管浸潤(rùn)情況、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理學(xué)分級(jí)子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中PAX2 陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白表達(dá)情況的比較

2.3 Derlin-1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素Logistic 回歸分析

將2.2 中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的FIGO 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況作為自變量，Derlin-1 蛋白表達(dá)情況作為因變量納入多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為Derlin-1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P﹤0.05）。（表3）

表3 Derlin-1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素Logistic 回歸分析

3 討論

子宮內(nèi)膜癌作為嚴(yán)重威脅女性生命健康的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率逐年升高，若不及時(shí)治療，極有可能引發(fā)不孕不育或子宮內(nèi)膜異位性痛經(jīng)等并發(fā)癥，影響患者的生活質(zhì)量[8-9]。因此，盡早確診并根據(jù)其疾病嚴(yán)重程度及時(shí)對(duì)患者開(kāi)展針對(duì)性治療十分有必要。目前，臨床認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞增殖和凋亡密切相關(guān)，一旦人體的原癌基因或抑癌基因表達(dá)異常，其細(xì)胞增殖和凋亡周期也會(huì)隨之失衡，最終加快腫瘤細(xì)胞的增殖，對(duì)腫瘤的生物學(xué)特征影響較大[10-11]。既往臨床主要通過(guò)診斷性刮宮篩查該病，但該方法無(wú)法區(qū)分子宮頸腺癌和子宮內(nèi)膜癌，誤診的可能性較大[12-13]。隨著篩查技術(shù)的不斷成熟，免疫組化法逐漸應(yīng)用于臨床，逐漸成為子宮內(nèi)膜癌早期篩查的主要方法[14-15]。

Derlin-1是臨床常見(jiàn)的癌基因，正常情況下可起到降解錯(cuò)誤蛋白的作用，有助于減輕細(xì)胞的負(fù)擔(dān)[16-17]。Derlin-1 主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜中，可直接參與腫瘤細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞凋亡過(guò)程，Derlin-1表達(dá)異常上調(diào)，患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞侵襲速度會(huì)隨之加快，而Derlin-1 表達(dá)下調(diào)能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，可見(jiàn)Derlin-1 表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)[18-19]。此外，Derlin-1 還能通過(guò)與泛素結(jié)合酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C，UBE2C）相結(jié)合的方式促使蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）的磷酸化增加，導(dǎo)致Derlin-1 異常表達(dá)，而Derlin-1 異常表達(dá)能夠加快子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和遷移，一定程度上加快了子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展速度，一旦子宮內(nèi)膜癌進(jìn)展至晚期，其低分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性也會(huì)隨之上升，且Derlin-1 表達(dá)越高，出現(xiàn)低分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性也就越大，說(shuō)明Derlin-1 表達(dá)上調(diào)能夠加快子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展，促使其分化，進(jìn)而加大淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性。

配對(duì)盒（paired box，PAX）是人體中普遍存在的發(fā)育調(diào)控基因家族，共9 個(gè)成員，PAX2是原癌基因，在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，一旦表達(dá)即可加速細(xì)胞增殖，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞迅速增殖轉(zhuǎn)移，加重腫瘤患者的病情[20-21]。相關(guān)研究顯示，PAX2 多在宮頸、子宮內(nèi)膜或生殖道等部位表達(dá)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)可發(fā)現(xiàn)，正常情況下子宮內(nèi)膜中的PAX2 無(wú)法被活化，若雌激素分泌紊亂，PAX2 將會(huì)出現(xiàn)異常表達(dá)，可見(jiàn)PAX2 能夠?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌的癌變情況進(jìn)行調(diào)節(jié)，在子宮內(nèi)膜癌診斷中具有輔助意義[22-23]。PAX2 一旦表達(dá)異常升高，人體內(nèi)的細(xì)胞增殖速度會(huì)加快，極易引發(fā)多器官癌變。

本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中Derlin-1、PAX2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）；且FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Derlin-1 陽(yáng)性表達(dá)率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05），提示Derlin-1 在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)，且Derlin-1 的陽(yáng)性表達(dá)率與子宮內(nèi)膜癌FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。結(jié)果表明Derlin-1 表達(dá)異常升高會(huì)加快子宮內(nèi)膜癌的疾病進(jìn)展速度，同時(shí)增加其惡性程度，或可通過(guò)下調(diào)Derlin-1 表達(dá)的方式有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，可見(jiàn)通過(guò)檢測(cè)Derlin-1 的表達(dá)情況，能夠幫助患者選擇較為合適的治療方法，進(jìn)而提高臨床治療效果。但本研究發(fā)現(xiàn)，不同年齡、絕經(jīng)情況、病理類型、FIGO 分期、肌層浸潤(rùn)深度、脈管浸潤(rùn)情況、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理學(xué)分級(jí)子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中PAX2 陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。這可能與本研究樣本量偏少有關(guān)，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，Derlin-1、PAX2 在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者FIGO 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，臨床可根據(jù)其表達(dá)情況判斷患者的病情進(jìn)展情況，從而及時(shí)對(duì)患者開(kāi)展合適的治療，達(dá)到提高患者臨床治療效果的目的。但值得注意的是，本研究納入的樣本量較少，結(jié)果可能存在一定偏差，有待加大樣本量進(jìn)行研究，才能進(jìn)一步保障結(jié)果的可靠性。