白芍總苷中4個(gè)活性成分在正常和四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)比較研究

陶西雨，程曉羽，魏真真，周菁楊，敖 雷，張小平，韓 豐，鄭永霞*，詹淑玉*

白芍總苷中4個(gè)活性成分在正常和四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)比較研究

陶西雨1，程曉羽1，魏真真1，周菁楊1，敖 雷1，張小平2，韓 豐2，鄭永霞1*，詹淑玉1*

1. 嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江 嘉興 314001 2. 嘉興學(xué)院附屬醫(yī)院，浙江 嘉興 314001

研究白芍總苷中4個(gè)活性成分（芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷）在正常和四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程，并比較其差異。參照臨床給藥劑量給SD大鼠ig白芍總苷后，采集不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血清，建立LC-MS方法測(cè)定血藥濃度，采用WinNonlin5.3藥動(dòng)學(xué)軟件計(jì)算各成分藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的入血濃度較低，可能大部分迅速代謝為中間產(chǎn)物芍藥苷。肝損傷使主要成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷在大鼠體內(nèi)的半衰期（1/2）和平均滯留時(shí)間（MRT）顯著延長(zhǎng)（＜0.05、0.01），藥時(shí)曲線下面積（AUC）顯著增加（＜0.05、0.01），清除率（CL/F）顯著降低（＜0.05、0.01）；沒(méi)食子酰芍藥苷在2組大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)顯著性差異，但其在肝損傷大鼠體內(nèi)的藥-時(shí)曲線出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象；苯甲酰芍藥苷在2組大鼠體內(nèi)的1/2和MRT0～∞無(wú)顯著變化，但肝損傷使其AUC顯著增加（＜0.01）。為進(jìn)一步探究白芍總苷多成分協(xié)同的保肝作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)為該中藥的臨床合理用藥提供指導(dǎo)參考。

白芍總苷；肝損傷；藥動(dòng)學(xué)；芍藥苷；芍藥內(nèi)酯苷；沒(méi)食子酰芍藥苷；苯甲酰芍藥苷

白芍總苷（total glucosides of peony，TGP）為白芍的有效部位，主要含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷、羥基芍藥苷等單萜糖苷類化合物，為白芍的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[1-3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，TGP具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫、保肝等多種藥理活性[4]，其中成藥制劑TGP膠囊（商品名帕夫林）在臨床上已廣泛用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等的輔助治療，療效確切[5]。但是目前對(duì)TGP多成分、多靶點(diǎn)、整合作用的機(jī)制及體內(nèi)過(guò)程研究還較薄弱。

中藥多成分藥動(dòng)學(xué)研究主要揭示中藥多種有效成分的體內(nèi)過(guò)程，對(duì)幫助闡釋中藥整合調(diào)節(jié)作用機(jī)制及指導(dǎo)臨床合理用藥等都具有重要作用。目前，以含量較高的活性成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷為藥動(dòng)學(xué)標(biāo)志物的TGP體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程已有較多研究[6-8]，但對(duì)部分含量較低的單萜糖苷類活性成分如苯甲酰芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷等的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特征還少見(jiàn)報(bào)道。機(jī)體疾病狀態(tài)可能影響藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄等藥動(dòng)學(xué)過(guò)程，闡明藥物在正常生理和病理狀況下的藥動(dòng)學(xué)差異，對(duì)于幫助臨床合理制定給藥方案具有重要意義。對(duì)各種類型肝損傷的保護(hù)作用是TGP的主要臨床療效之一[9-11]，因此探討肝損傷對(duì)TGP多種活性成分藥動(dòng)學(xué)特征的影響，可以幫助較全面揭示TGP保肝作用的藥理機(jī)制及體內(nèi)過(guò)程。本研究前期發(fā)現(xiàn)，TGP入血成分除了主要的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷外，還可監(jiān)測(cè)到少量的沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷，且其藥時(shí)變化過(guò)程具備規(guī)律性。因此，本研究以TGP中4個(gè)活性成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷為藥動(dòng)學(xué)標(biāo)志物，基于LC-MS技術(shù)對(duì)比分析TGP在正常和四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異，以期幫助全面闡明TGP多成分的體內(nèi)過(guò)程特征，為TGP保肝作用的機(jī)制研究及臨床用藥的合理指導(dǎo)提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量260～280 g，由浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（浙）2019-0001。大鼠飼養(yǎng)于嘉興學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)環(huán)境12 h光照黑暗循環(huán)，正常飲食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)嘉興學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核（批準(zhǔn)號(hào)JUMC2022-055），實(shí)驗(yàn)過(guò)程符合各項(xiàng)倫理要求。

1.2 藥品與試劑

對(duì)照品芍藥苷（批號(hào)M28GB143089）、芍藥內(nèi)酯苷（批號(hào)O31GB166251）、沒(méi)食子酰芍藥苷（批號(hào)M20H182502）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%；對(duì)照品苯甲酰芍藥苷（批號(hào)170526，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）、龍膽苦苷（批號(hào)200908，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%）購(gòu)自上海融禾醫(yī)藥科技有限公司；TGP膠囊（批號(hào)210813）由寧波立華制藥有限公司生產(chǎn)，經(jīng)含量測(cè)定分別含芍藥苷360.2 mg/g、芍藥內(nèi)酯苷108.6 mg/g、沒(méi)食子酰芍藥苷7.9 mg/g和苯甲酰芍藥苷6.0 mg/g；質(zhì)譜級(jí)乙腈、甲醇均購(gòu)自上海泰坦科技股份有限公司；質(zhì)譜級(jí)甲酸購(gòu)自上海麥克林生化科技股份有限公司；色譜級(jí)醋酸乙酯購(gòu)自杭州青辰化學(xué)試劑廠；色譜級(jí)CCl4購(gòu)自江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司；注射用生理鹽水購(gòu)自杭州民生藥業(yè)股份有限公司；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）試劑盒（批號(hào)20210819）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）試劑盒（批號(hào)20210818）、總膽汁酸（total bile acid，TBA）試劑盒（批號(hào)20210819）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；超純水為Milli-Q超純化系統(tǒng)自制。

1.3 儀器

超高效液相-ISQ EC單四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）；XS105 DualRange型十萬(wàn)分之一電子天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；VXR basic Vibrax?型振蕩器（德國(guó)IKA公司）；5301型快速真空濃縮機(jī)、5424R型高速離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；Milli-Q超純水處理裝置（美國(guó)Millipore公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 給藥與樣品采集

2.1.1 正常大鼠給藥與樣品采集 隨機(jī)取正常SD大鼠8只，參照TGP膠囊最高臨床給藥劑量，折算成大鼠給藥量（567 mg/kg）后正常大鼠ig TGP生理鹽水溶液，換算成各成分的給藥量分別為芍藥苷204.2 mg/kg、芍藥內(nèi)酯苷61.6 mg/kg、沒(méi)食子酰芍藥苷4.5 mg/kg和苯甲酰芍藥苷3.4 mg/kg。各大鼠分別于給藥后5、10、20、30 min及1、1.5、2、3、4、6、8、12 h經(jīng)眼眶靜脈取全血約0.5 mL，全血在室溫放置1～1.5 h后，4 ℃、14 000 r/min離心10 min，取上層血清凍存于?20 ℃待測(cè)。

2.1.2 肝損傷大鼠模型建立、給藥與樣品采集 隨機(jī)取正常SD大鼠8只，采用一次性ip 40% CCl4溶液（2 mL/kg）誘導(dǎo)建立急性肝損傷模型。造模24 h后，檢測(cè)正常組和模型組血清肝功能指標(biāo)（ALT、AST、TBA），結(jié)果見(jiàn)圖1，經(jīng)雙側(cè)檢驗(yàn)分析模型組大鼠血清中各項(xiàng)指標(biāo)均較正常組顯著升高（＜0.05、0.01），表明造模成功。各模型組大鼠同正常組給藥量ig TGP生理鹽水溶液后，按“2.1.1”項(xiàng)下方法采集血清樣品。

與正常組比較：*P＜0.05 **P＜0.01

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液的制備 各精密稱取對(duì)照品芍藥內(nèi)酯苷3.6 mg、芍藥苷5.2 mg、沒(méi)食子酰芍藥苷5.0 mg、苯甲酰芍藥苷0.8 mg和內(nèi)標(biāo)龍膽苦苷2.5 mg，分別采用甲醇溶解，并定容至1 mL，得質(zhì)量濃度分別為3.6、5.2、5.0、0.8、2.5 mg/mL的對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 高、中、低質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品的制備 精密量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量混合，用甲醇定容配制成高、中、低3種質(zhì)量濃度的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中芍藥內(nèi)酯苷質(zhì)量濃度分別為500、125、25 ng/mL，芍藥苷質(zhì)量濃度分別為2000、500、100 ng/mL，沒(méi)食子酰芍藥苷質(zhì)量濃度分別為10、2.5、0.5 ng/mL，苯甲酰芍藥苷質(zhì)量濃度分別為5、1.25、0.25 ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)溶液于4 ℃保存。使用時(shí)，分別精密量取各質(zhì)量濃度質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)溶液250 μL于2 mL聚丙烯管中，45 ℃離心濃縮蒸干溶劑后，殘?jiān)尤肟瞻状笫笱?50 μL，渦旋振蕩5 min溶解后作為質(zhì)控樣品。

2.3 血清樣品處理

吸取大鼠血清樣品250 μL，加入含內(nèi)標(biāo)（5 ng/mL）的醋酸乙酯萃取液1 mL，1500 r/min渦旋震蕩萃取5 min，10 000 r/min離心5 min，轉(zhuǎn)移上清液850 μL于2 mL聚丙烯管中，在殘留沉淀中再加入含內(nèi)標(biāo)（5 ng/mL）的醋酸乙酯萃取液1 mL，1500 r/min渦旋震蕩萃取5 min，10 000 r/min離心5 min，取上清液950 μL與前面的850 μL上清液合并，于45 ℃離心濃縮蒸干溶劑，殘?jiān)尤?0 μL 80%甲醇，渦旋振蕩5 min溶解，14 000 r/min離心5 min，取上清液進(jìn)樣分析。

2.4 測(cè)定條件

2.4.1 色譜條件 XBridge C18色譜柱（75 mm×4.6 mm，2.5 μm）；流動(dòng)相為0.02%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～3.0 min，92% A；3.0～8.0 min，92%～65% A；8.0～10.0 min，65%～58% A；10.0～12.0 min，58%～30% A；12.0～13.0 min，30%～92% A；13.0～18.0 min，92% A。體積流量0.5 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.4.2 質(zhì)譜條件 離子源為電噴霧離子源（ESI）；離子傳輸管溫度300 ℃；氣化溫度282 ℃；噴霧電壓?2.0 kV；載氣為氮?dú)?；鞘氣?9.9 psi（1 psi＝6.895 kPa）；輔助氣壓5.7 psi；吹掃氣壓0.5 psi。采用選擇負(fù)離子掃描模式，待測(cè)成分及內(nèi)標(biāo)化合物的離子信息分別為芍藥內(nèi)酯苷[M＋HCOO]?525.25、芍藥苷[M＋HCOO]?525.24、沒(méi)食子酰芍藥苷[M－H]?631.27、苯甲酰芍藥苷[M＋HCOO]?629.28和龍膽苦苷[M＋HCOO]?401.11。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 專屬性 分別取大鼠空白血清、加入混合對(duì)照品溶液的空白血清和大鼠ig TGP后的血清樣品，按照“2.3”項(xiàng)下的血清樣品方法處理后，按“2.4”項(xiàng)下測(cè)定條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。各成分分離度良好，芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、苯甲酰芍藥苷和內(nèi)標(biāo)龍膽苦苷的保留時(shí)間分別為9.09、9.41、10.14、12.71、8.79 min，血清內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)待測(cè)成分及內(nèi)標(biāo)均無(wú)干擾。

2.5.2 定量限和線性范圍 精密吸取各對(duì)照品溶液適量，混勻后采用甲醇定容得一定質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，再用甲醇逐級(jí)稀釋成一系列不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液。分別取不同質(zhì)量濃度的各混合對(duì)照品溶液各250 μL，于45 ℃離心濃縮蒸干溶劑，再分別加入250 μL空白血清渦旋振蕩5 min混勻，得到一系列不同質(zhì)量濃度的血清標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.3”項(xiàng)下的血清樣品方法處理后，按“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定。以各待測(cè)物信噪比為10確定各成分的定量下限。采用內(nèi)標(biāo)法，以血清中各待測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)（），各待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為縱坐標(biāo)（），求算各待測(cè)物的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。各待測(cè)物的回歸方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)（2）及定量限見(jiàn)表1。

2.5.3 準(zhǔn)確度和精密度 取高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，按“2.4”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析，計(jì)算各待測(cè)物高、中、低質(zhì)量濃度血清標(biāo)準(zhǔn)樣品的日內(nèi)準(zhǔn)確度和精密度。分別在6 d中配制6份高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的血清質(zhì)控樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，按“2.4”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析，計(jì)算各待測(cè)物高、中、低質(zhì)量濃度血清標(biāo)準(zhǔn)樣品的日間準(zhǔn)確度和精密度。結(jié)果見(jiàn)表2，方法的準(zhǔn)確度和精密度良好。

A-空白血清 B-質(zhì)控樣品 C-給藥后血清樣品

表1 各待測(cè)物的線性范圍、回歸方程、R2及定量限

2.5.4 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng) 取高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，按“2.4”項(xiàng)下方法進(jìn)樣分析，記錄各成分峰面積為A；另取250 μL大鼠空白血清，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，殘?jiān)謩e加入250 μL高、中、低質(zhì)量濃度的質(zhì)控混合對(duì)照品溶液，渦旋震蕩混勻5 min，于45 ℃離心濃縮蒸干溶劑，殘?jiān)偌尤?0 μL 80%甲醇，渦旋震蕩5 min溶解，14 000 r/min離心5 min，取上清液進(jìn)樣分析，記錄各成分峰面積為B，計(jì)算提取回收率（A/B）；另取250 μL高、中、低質(zhì)量濃度的質(zhì)控混合對(duì)照品溶液各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，殘?jiān)謩e加入50 μL 80%甲醇，渦旋震蕩5 min溶解，14 000 r/min離心5 min，取上清液進(jìn)樣分析，記錄各成分峰面積記為C，計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)（B/C）。結(jié)果見(jiàn)表3，方法的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)符合生物樣本分析的要求。

2.5.5 穩(wěn)定性 取高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品，分別考察3種情況下的穩(wěn)定性。①短期穩(wěn)定性：將質(zhì)控樣品處理后，在室溫下放置于進(jìn)樣盤上24 h后進(jìn)樣分析；②凍融穩(wěn)定性：將質(zhì)控樣品在?20 ℃冰箱中反復(fù)凍融3次后再處理分析；③長(zhǎng)期穩(wěn)定性：將質(zhì)控樣品在?20 ℃冰箱凍存7 d后再處理分析。每種穩(wěn)定性考察情況下，每個(gè)質(zhì)量濃度各平行6份。結(jié)果見(jiàn)表4，3種情況下樣品穩(wěn)定性良好，符合生物樣本分析的要求。

表2 各待測(cè)物的日內(nèi)、日間準(zhǔn)確度和精密度(, n = 6)

表3 各待測(cè)物的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)(, n = 6)

表4 各待測(cè)物的穩(wěn)定性(, n = 6)

2.6 藥動(dòng)學(xué)研究

大鼠ig TGP后，按照上述所建立的方法測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)血藥濃度，繪制平均血藥濃度-時(shí)間曲線，見(jiàn)圖3。采用WinNonlin 5.3藥動(dòng)學(xué)軟件以非房室模型分析計(jì)算正常組和模型組各成分的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，主要包括消除半衰期（1/2）、平均滯留時(shí)間（MRT0～∞）、血藥濃度-時(shí)間曲線下面積（AUC）、達(dá)峰濃度（max）、達(dá)峰時(shí)間（max）、表觀分布容積（Vd/F）和消除率（CL/F）。采用雙側(cè)檢驗(yàn)對(duì)正常組和模型組各個(gè)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行顯著性差異分析。結(jié)果見(jiàn)表5，與正常組比較，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷在肝損傷大鼠體內(nèi)的1/2和MRT0～∞均顯著延長(zhǎng)（＜0.05、0.01），AUC顯著增加（＜0.05、0.01），CL/F顯著降低（＜0.05、0.01）；苯甲酰芍藥苷在肝損傷大鼠體內(nèi)的1/2和MRT0～∞無(wú)顯著變化，AUC顯著增加（＜0.01），Vd/F和CL/F顯著降低（＜0.05、0.01）；沒(méi)食子酰芍藥苷在正常組和模型組大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無(wú)顯著性差異。說(shuō)明CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷疾病狀態(tài)對(duì)TGP不同活性成分體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程的影響存在差異。

表5 TGP中4個(gè)成分在正常和肝損傷大鼠血清中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(, n = 8)

與正常組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01normal group

3 討論

芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷為TGP的主要藥效成分，其含量高、活性明確，因此多數(shù)有關(guān)TGP的作用機(jī)制、體內(nèi)過(guò)程及臨床療效評(píng)價(jià)均以這2個(gè)成分為代表展開(kāi)，較少關(guān)注其他單萜糖苷類成分。本課題組在前期對(duì)TGP物質(zhì)組成的研究中發(fā)現(xiàn)，除了芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷外，TGP中還含有少量的沒(méi)食子酰芍藥苷、苯甲酰芍藥苷和羥基芍藥苷，進(jìn)一步的入血成分研究發(fā)現(xiàn)沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷均可少量入血且存在規(guī)律性的藥-時(shí)變化關(guān)系。沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷均為芍藥苷的活性衍生物，近年來(lái)較多研究證明其具有抗炎、抗氧化和免疫調(diào)劑等藥理活性，對(duì)胃炎、骨質(zhì)疏松癥、非小細(xì)胞肺癌和敗血癥等具有潛在的治療功效[12-16]。因此，有必要同時(shí)探討TGP多種活性成分的體內(nèi)過(guò)程，為其多成分協(xié)同作用機(jī)制研究提供依據(jù)。本研究發(fā)現(xiàn)，在TGP的臨床給藥劑量下，可檢測(cè)到的主要入血成分仍為芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷，沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的給藥量約為芍藥苷的1/50～1/100，但是其達(dá)峰濃度僅約為芍藥苷的1/1000，分析原因可能是這2個(gè)成分入血后大部分被迅速代謝為中間產(chǎn)物芍藥苷[17-18]，僅剩少量的入血原型藥物，因此提示在對(duì)TGP多成分協(xié)調(diào)作用的藥效評(píng)價(jià)時(shí)，應(yīng)充分考慮各成分量的差異。

研究發(fā)現(xiàn)在TGP臨床給藥劑量下，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷在正常大鼠體內(nèi)的1/2和MRT分別為2～3 h和3～4 h，與多數(shù)已有研究相符[6]。CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷可顯著延長(zhǎng)芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷在大鼠體內(nèi)的1/2和MRT，并顯著增加AUC，降低CL/F，說(shuō)明肝損傷疾病狀態(tài)使TGP主要成分代謝減慢、體內(nèi)滯留時(shí)間和暴露程度增加。劉恩荔等[19]也考察了CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷對(duì)芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響，同樣發(fā)現(xiàn)急性肝損傷使這2個(gè)成分的max、AUC0～t顯著增大，1/2延長(zhǎng)；Jiang等[20]比較了正常和急性膽汁淤積型肝炎大鼠ig赤芍提取物后，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷在2組大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異，結(jié)果也顯示急性肝損傷可顯著增加2個(gè)成分的max和AUC0～t。綜合文獻(xiàn)報(bào)道及本研究結(jié)果說(shuō)明急性肝損傷在某種程度上可能增強(qiáng)TGP的保肝藥效，也提示臨床上應(yīng)注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整給藥方案。肝臟是藥物在體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化和代謝的最重要器官，肝損傷可能通過(guò)影響肝微粒體CYP450酶的活性從而影響藥物體內(nèi)代謝[21]，研究發(fā)現(xiàn)CCl4對(duì)5種P450酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4）均有顯著的抑制作用[22]；此外，肝損傷可能引起胃腸道菌群紊亂、抑制藥物腸道轉(zhuǎn)運(yùn)從而影響體內(nèi)代謝[23-24]，因此，CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷究竟通過(guò)哪些環(huán)節(jié)影響TGP體內(nèi)過(guò)程還需要深入探究。本研究發(fā)現(xiàn)沒(méi)食子酰芍藥苷在正常組和模型組大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與大鼠組內(nèi)個(gè)體差異大、血藥濃度偏低等有關(guān)，另外，肝損傷使沒(méi)食子酰芍藥苷在大鼠體內(nèi)的藥-時(shí)曲線呈現(xiàn)較明顯的雙峰現(xiàn)象，說(shuō)明肝損傷對(duì)其體內(nèi)過(guò)程的影響較為復(fù)雜，可能涉及腸肝循環(huán)、腎小管重吸收等過(guò)程。研究結(jié)果苯甲酰芍藥苷在正常和肝損傷大鼠體內(nèi)的1/2和MRT0～∞無(wú)顯著差異，但肝損傷使AUC顯著增加、Vd/F和CL/F顯著降低，分析原因可能肝損傷部分抑制了苯甲酰芍藥苷向芍藥苷的代謝轉(zhuǎn)化，使其原型成分的體內(nèi)暴露量增加，但具體原因還需要進(jìn)一步深入研究。

本研究首次對(duì)TGP中4個(gè)活性單萜糖苷類成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒(méi)食子酰芍藥苷和苯甲酰芍藥苷同時(shí)開(kāi)展了藥動(dòng)學(xué)研究，并對(duì)比分析了4個(gè)成分在正常和CCl4誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異，可為進(jìn)一步探究TGP多成分協(xié)同的保肝作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)為該中藥的臨床合理用藥提供指導(dǎo)參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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A comparative pharmacokinetics study of four active ingredients of total glucosides of paeony in normal rats and carbon tetrachloride-induced acute hepatic injury rats

TAO Xi-yu1, CHENG Xiao-yu1, WEI Zhen-zhen1, ZHOU Jing-yang1, AO Lei1, ZHANG Xiao-ping2, HAN Feng2, ZHENG Yong-xia1, ZHAN Shu-yu1

1. Medical College, Jiaxing University, Jiaxing 314001, China 2. Affiliated Hospital of Jiaxing University, Jiaxing 314001, China

To study the pharmacokinetics of four active ingredients (paeoniflorin, albiflorin, galloylpaeoniflorin and benzoylpaeoniflorin) of total glucosides of paeony (TGP) in normal and carbon tetrachloride (CCl4)-induced acute hepatic injury rats, and then compare their differences in pharmacokinetic parameters.TGP was intragastrically administered to SD rats with the reference of its clinical dosage. After administration, serum of rats was collected in planed interval time points. LC-MS method was established to determine drug concentrations in serum. The pharmacokinetic parameters were calculated using WinNonlin 5.3 pharmacokinetic software, and their difference in normal and hepatic injury rats were statistically analyzed.The concentration of galloylpaeoniflorin and benzoylpaeoniflorin were relatively lower than paeoniflorin in blood because they might mainly be metabolized to the intermediate compound paeoniflorin. For the main ingredients of paeoniflorin and albiflorin, their half-life (1/2) and mean residence times (MRT) were significantly extended (< 0.05, 0.01), area under drug-time curve (AUC) were significantly increased (< 0.05, 0.01), and clearance (CL/F) were significantly reduced in hepatic injury rats when comparing with normal rats (< 0.05, 0.01). For galloylpaeoniflorin, there were no significant differences of pharmacokinetic parameters in two groups of rats, but it presented double peak of drug-time curve in hepatic injury rats. For benzoylpaeoniflorin, there were no significant differences of1/2and MRT0～∞in two groups of rats, but its AUCs were significantly increased in hepatic injury rats than in normal rats (< 0.01).This study would provide an experimental basis for further exploring the liver protective mechanism of the synergistic effect of TGP and provide guidance and reference for its clinical rational use.

total glucosides of paeony; hepatic injury; pharmacokinetics; paeoniflorin; albiflorin; galloylpaeoniflorin; benzoylpaeoniflorin

R285.61

A

0253 - 2670(2023)13 - 4224 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.13.015

2022-12-31

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81503338）；浙江省基礎(chǔ)公益研究計(jì)劃項(xiàng)目（LGF22H280004，LGD22H160004）；嘉興市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2020AY10022）；嘉興學(xué)院重點(diǎn)SRT資助項(xiàng)目（8517221147）

陶西雨，本科，研究方向?yàn)橹兴幩巹?dòng)學(xué)。E-mail: 203625310@qq.com

通信作者：詹淑玉，博士，教授，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)與中藥藥動(dòng)學(xué)。E-mail: zhansy2000@163.com

鄭永霞，博士，副教授，研究方向?yàn)楦伟┑陌l(fā)病機(jī)制研究。E-mail: zhengyongxia@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]