骨碎補(bǔ)內(nèi)生菌Lecanicillium sp. GZWMJZ-847中3個(gè)新3-氫化萘特特拉姆酸衍生物

陳旭麗，王立平，吳 耽，何文文，左明星，王冬陽(yáng)*，朱偉明

骨碎補(bǔ)內(nèi)生菌sp. GZWMJZ-847中3個(gè)新3-氫化萘特特拉姆酸衍生物

陳旭麗1, 2, 3，王立平1, 2, 3，吳 耽1, 3，何文文1, 3，左明星1, 3，王冬陽(yáng)1, 3*，朱偉明1*

1. 省部共建藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州醫(yī)科大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550014 2. 貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025 3. 貴州省天然產(chǎn)物研究中心，貴州 貴陽(yáng) 550014

研究骨碎補(bǔ)內(nèi)生蠟蚧菌sp. GZWMJZ-847的次級(jí)代謝產(chǎn)物和抑菌活性。采用大米培養(yǎng)基對(duì)菌株sp. GZWMJZ-847發(fā)酵；采用凝膠柱色譜、正反相硅膠色譜等方法對(duì)化合物進(jìn)行分離純化；采用核磁共振譜、質(zhì)譜、NMR計(jì)算等方法確定化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)；采用營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法測(cè)試化合物對(duì)病原細(xì)菌及酵母菌的抑菌活性、平板法測(cè)試化合物對(duì)病原霉菌的抑菌活性。從菌株的發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了3個(gè)新的和3個(gè)已知的3-氫化萘特特拉姆酸衍生物，包括蠟蚧特特拉姆酸A（1）、蠟蚧特特拉姆酸B（2）、蠟蚧特特拉姆酸C（3）、Sch 210971（4）、Sch 210972（5）、Sch 213766（6）?；衔?和4～6對(duì)4株人體革蘭陽(yáng)性病原菌和1株植物革蘭陰性病原菌具有抑制作用，最小抑菌濃度（minimun inhibitory concentration，MIC）為7.8～125mmol/L。化合物6對(duì)油菜菌核病菌和小麥赤霉病菌表現(xiàn)出一定的抑制作用，半數(shù)抑制濃度分別為（22.05±0.62）、（55.54±1.72）μg/mL。蠟蚧特特拉姆酸A～C（1～3）為新的3-氫化萘特特拉姆酸衍生物，骨碎補(bǔ)內(nèi)生菌sp. GZWMJZ-847產(chǎn)生的3-氫化萘特特拉姆酸對(duì)人體病原菌和植物病原菌可表現(xiàn)出抑制作用。

骨碎補(bǔ)；蠟蚧菌；次級(jí)代謝產(chǎn)物；吡咯烷-2,4-二酮；抑菌活性；蠟蚧特特拉姆酸A；蠟蚧特特拉姆酸B；蠟蚧特特拉姆酸C

人類歷史上多數(shù)臨床抗菌藥物均來(lái)源于結(jié)構(gòu)多樣的天然產(chǎn)物，特別是微生物天然產(chǎn)物[1]。從微生物天然產(chǎn)物中尋找抑菌活性化合物仍是一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域[2]。吡咯烷-2,4-二酮，又稱特特拉姆酸（tetramic acid），是一種廣泛存在于天然產(chǎn)物中的結(jié)構(gòu)片段，該片段可結(jié)合不同取代基從而形成多種結(jié)構(gòu)類型[3-5]。其中3-氫化萘特特拉姆酸（3-decalinoyltetramic acids，3-DTAs）主要由微生物代謝產(chǎn)生，并且多數(shù)具有一定的抑菌活性[3]。分離自NRRL 5537的(?)-equisetin是首個(gè)報(bào)道的此類化合物[6-7]，具有抗菌、抗HIV病毒等多種生物活性。此后有多種具有抑菌活性的3-氫化萘特特拉姆酸陸續(xù)從陸地或海洋真菌中分離出來(lái)，如具有抑菌活性的zopfiellamides A-B[8]、neopestalotin B[9]、lydicamycin[10]等。課題組前期對(duì)骨碎補(bǔ)Nakaike活性成分分離得到了liglaurates A～E等具有細(xì)胞毒活性的化合物[11]，同時(shí)得到了多株骨碎補(bǔ)內(nèi)生真菌。菌株篩選過程中發(fā)現(xiàn)蠟蚧菌sp. GZWMJZ-847的次級(jí)代謝產(chǎn)物的液相分析圖譜中顯示出豐富的紫外吸收峰。對(duì)該菌株的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離得到了6個(gè)3-氫化萘特特拉姆酸類化合物，包括蠟蚧特特拉姆酸A（lecanitetramic acid A，1）、蠟蚧特特拉姆酸B（lecanitetramic acid B，2）、蠟蚧特特拉姆酸C（lecanitetramic acid C，3）及其3個(gè)已知同系物，Sch 210971（4）[12]、Sch 210972（5）[12]、Sch 213766（6）[13]。抑菌活性篩選發(fā)現(xiàn)化合物1和4～6對(duì)4株人體革蘭氏陽(yáng)性病原菌和1株植物革蘭氏陰性病原菌表現(xiàn)出抑制作用，化合物6對(duì)2株植物病原霉菌也表現(xiàn)出一定的抑制作用?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)見圖1。

1 儀器與材料

Ascend600型超導(dǎo)核磁共振波譜儀（美國(guó)Bruker公司），2695 LCQ-MS質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司），Primaide分析及半制備型高效液相色譜儀（1430二極管陣列檢測(cè)器及1110四元高壓泵，日本Hitachi公司），柱色譜及薄層色/制備萘鍵合型色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm，日本COSMOSIL公司），AUTOPOL I自動(dòng)旋光儀（美國(guó)Rudolph公司），LDZX-75KBS高壓滅菌機(jī)（上海申安醫(yī)療器械廠），SPX-280恒溫培養(yǎng)箱（寧波江南儀器廠）。提取分離用醋酸乙酯、甲醇、丙酮、二氯甲烷、石油醚等均為分析純（上海沃化化工有限公司），液相用甲醇為色譜純（上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆?。抗菌用?yáng)性對(duì)照環(huán)丙沙星鹽酸鹽[薩恩化學(xué)技術(shù)（上海）有限公司，批號(hào)DF290114]、酮康唑[薩恩化學(xué)技術(shù)（上海）有限公司,批號(hào)BG070130]、多菌靈（北京百靈威科技有限公司,批號(hào)L850O49）。

圖1 化合物1～6的結(jié)構(gòu)

內(nèi)生菌GZWMJZ-847分離自骨碎補(bǔ)的新鮮根莖，并保藏于貴州省天然產(chǎn)物研究中心；經(jīng)ITS序列blast分析鑒定為蠟蚧屬真菌sp.，GenBank登錄號(hào)為No. OP999665。抑菌活性實(shí)驗(yàn)所用的3種植物病原菌由貴州醫(yī)科大學(xué)黃烈軍研究員提供，包括油菜菌核病菌、小麥赤霉病菌、煙草黑脛病菌，植物致病細(xì)菌青枯菌由貴州醫(yī)科大學(xué)李龑研究員提供。其它病原微生物購(gòu)買自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心：枯草芽孢桿菌ATCC6051、銅綠假單胞菌ATCC10145、產(chǎn)氣莢膜梭菌ATCC13124、金黃色葡萄球菌ATCC6538、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ATCC43300、大腸桿菌ATCC11775、白色念珠菌ATCC10231、光滑念珠菌ATCC2001。

2 方法

2.1 菌株發(fā)酵

將?80℃凍存的GZWMJZ-847菌液融化后接種于PDA固體培養(yǎng)皿上，置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d，連續(xù)傳代3次得純培養(yǎng)菌落。挑取單菌落接種到含150 mL PDB液體培養(yǎng)基的500 mL錐形瓶中，放置于28℃溫度下180 r/min振蕩培養(yǎng)3 d制備種子液。吸取9 mL種子液接種于經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌25 min的大米固體培養(yǎng)基中，每袋含50 g大米和50 mL水，共發(fā)酵100袋，靜置于常溫環(huán)境中培養(yǎng)30 d。

2.2 活性產(chǎn)物的提取分離

將發(fā)酵后的培養(yǎng)基合并，每次加入5 L的醋酸乙酯和甲醇的混合物液（10∶1）提取代謝產(chǎn)物，共提取3次；將3次提取液合并后減壓濃縮得到粗提物30.9 g。粗提物首先采用減壓正相硅膠柱色譜分離，依次用石油醚-醋酸乙酯（100∶1～1∶1）、二氯甲烷-甲醇（5∶1～2∶1）梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合樣后得到12個(gè)組分（Fr. 1～12）。Fr. 7（1.6 g）在半制備型C18色譜柱上分離得到Fr. 7.1（R＝9.6 min，135.9 mg）和Fr. 7.2（R＝11.6 min，70.8 mg），流動(dòng)相為90%的甲醇-水（含0.15%三氟乙酸），體積流量4 mL/min。Fr. 7.1和Fr. 7.2先后采用半制備萘鍵合型色譜柱進(jìn)行純化分別得到化合物1（R＝24.0 min，17.2 mg）、6（R＝26.0 min，12.0 mg）和4（R＝20.0 min，10.0 mg）、5（R＝22.0 min，17.0 mg），洗脫劑均為83%的甲醇-水（含0.05%三氟乙酸），體積流量4 mL/min。

Fr. 12（2.9 g）通過Sephadex LH-20葡聚糖凝膠色譜柱分離得到10個(gè)組分（Fr. 12.1～12.10），洗脫劑為甲醇-二氯甲烷（1∶1）。Fr. 12.5（913 mg）采用快速制備液相色譜儀在C18色譜柱上進(jìn)行初步分離，5%～100%的甲醇-水（含0.05%三氟乙酸）變梯度洗脫得到3個(gè)組分（Fr. 12.5.1～12.5.3）。Fr. 12.5.2（479 mg）在半制備型C18色譜柱上分離得到Fr. 12.5.2.1（R＝10.0 min，331 mg）和Fr. 12.5.2.2（R＝12.8 min，68.8 mg），流動(dòng)相為80%的甲醇-水（含0.05%三氟乙酸），體積流量4 mL/min。Fr. 12.5.2.2（68.8 mg）在半制備萘鍵合型色譜柱進(jìn)行純化得到化合物2（R＝22.0 min，6.4 mg）和3（R＝24.0 min，17.8 mg），洗脫條件為60%甲醇-水（含0.05%三氟乙酸），體積流量4 mL/min。

2.3 化合物1的水解

稱取2 mg的化合物1溶解于0.5 mL乙醇中，加入0.5 mL的氫氧化鈉水溶液（4 mol/L），在78℃條件下攪拌4 h。冷卻后在冰浴條件下用2 mol/L的鹽酸將反應(yīng)液的pH調(diào)節(jié)至3。將溶劑減壓蒸干后加入2 mL醋酸乙酯，并用水洗滌3次，每次1 mL。將醋酸乙酯溶液減壓蒸干，剩余物質(zhì)用半制備HPLC純化得到化合物1a（R＝10.0 min，1.2 mg），純化條件為：半制備C18色譜柱，含0.05%三氟乙酸的90%甲醇水洗脫劑洗脫，體積流量4 mL/min。

2.4 抗細(xì)菌及酵母菌活性評(píng)價(jià)

采用營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋法[14]測(cè)試化合物對(duì)7株細(xì)菌（枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、青枯菌）和2株酵母菌（白色念珠菌、光滑念珠菌）的抑制活性。相同濃度的DMSO作為空白對(duì)照、環(huán)丙沙星鹽酸鹽作為細(xì)菌的陽(yáng)性對(duì)照、酮康唑作為真菌的陽(yáng)性對(duì)照。

2.5 抗霉菌活性評(píng)價(jià)

按照本課題組之前報(bào)道的平板法[15]，測(cè)試了化合物對(duì)油菜菌核病菌、小麥赤霉病菌和煙草黑脛病菌的抑制活性。具體步驟如下：準(zhǔn)確量取6 mL融化狀態(tài)的PDA固體培養(yǎng)基裝入50 mL錐形瓶中，在121℃下高壓蒸汽滅菌30 min，待冷卻至約50℃時(shí)加入6 μL化合物的DMSO溶液，獲得一系列2倍濃度梯度的培養(yǎng)基，最大濃度為50 μg/mL?；靹蚝蟮谷胫睆?0 mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，冷卻凝固后待用。在各培養(yǎng)皿中心貼入直徑6 mm的待測(cè)真菌菌餅，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待空白對(duì)照組菌落長(zhǎng)滿平板后，采用十字交叉法測(cè)量各平板中的菌落直徑（Φ），根據(jù)菌落直徑大小按公式計(jì)算化合物的抑制率。含相同濃度DMSO的平板作為空白對(duì)照，多菌靈作為陽(yáng)性對(duì)照。以不同濃度對(duì)應(yīng)的抑制率計(jì)算半數(shù)抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）。

抑制率＝(Φ空白－Φ測(cè)試)/Φ空白

3 結(jié)果與分析

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：橙色粉末；高分辨質(zhì)譜/482.249 60 [M＋Na]+（計(jì)算值C26H37NO6Na，482.251 31）確定化合物分子式為C26H37NO6。[α]25 D＋51.9（0.1，acetone）；ECD（0.001 mol/L，MeOH）：218（＋5.14）、286（＋0.68）nm；紫外-可見光譜max（log）顯示化合物在218（3.10）、286（3.22）nm處有吸收；紅外光譜（KBr，max）顯示化合物在3299、2951、2912、1737、1604、1456、1376、1205、1125 cm?1等波數(shù)下有紅外吸收，說(shuō)明化合物中存在羥基、酯基、共軛羰基和酰胺基團(tuán)等官能團(tuán)。分析其1H、13C和HSQC譜確定化合物含6個(gè)甲基(C13.7、15.9、21.4、22.6、25.7、52.8)、3個(gè)sp3亞甲基(C42.2、42.6、46.7)、7個(gè)sp3次甲基(C33.3、39.9、41.3、46.6、46.9、48.6、59.5)、1個(gè)sp3季碳(C74.2)、3個(gè)sp2次甲基(C122.3、129.3、134.4)、6個(gè)sp2季碳(C101.4、136.2、176.6、176.9、193.8、195.7)（表1）。其核磁數(shù)據(jù)與化合物sch 213766（6）非常接近，僅在C-20、C-23和C-24位置表現(xiàn)出大于1.0的化學(xué)位移差值；進(jìn)一步分析其二維1H-1H COSY和HMBC信號(hào)（圖2）可確定化合物1與6具有相同的平面結(jié)構(gòu)，初步確定化合物1是化合物6的差向異構(gòu)體。

化合物1的NOESY譜中顯示H-5 (H1.82) 與H-1 (H3.95)/H-2 (H3.01)/H-9 (H1.39)、H-16 (H0.84)與H-10 (H1.39)/H-15 (H0.91)、H-12 (H1.56)與H-14 (H1.47) 等3組相關(guān)信號(hào)（圖3）證明化合物1在氫化萘片段與6有相同的相對(duì)構(gòu)型；另外，化合物1與6具有極為相似的ECD譜圖（圖4），特別是286 nm附近相同的正Cotton效應(yīng)，預(yù)示著化合物1中氫化萘上及C-20位的手性中心與化合物6中對(duì)應(yīng)位置具有相同的立體構(gòu)型；而C-23手性碳離發(fā)色團(tuán)較遠(yuǎn)且通過可旋轉(zhuǎn)鍵與母核相連，通過核磁及ECD譜圖無(wú)法確定該位置的構(gòu)型。為了最終確定C-23立體構(gòu)型，在氫氧化鈉溶液中得到了化合物1在23-位酯基水解的產(chǎn)物1a，結(jié)果發(fā)現(xiàn)1a與化合物Sch 210971（4）[12]顯示出相同的1H-NMR數(shù)據(jù)和相近的比旋光數(shù)據(jù)（1a：＋97.0，4：＋80.0），說(shuō)明化合物1a的立體構(gòu)型與化合物4相同，進(jìn)而確定化合物1中各手性碳的構(gòu)型與4中相同，即1,2,5,7,9,10,20,23；化合物1是6在23-位不同立體構(gòu)型的新的差向異構(gòu)體，經(jīng)SciFinder數(shù)據(jù)庫(kù)檢索確定為新化合物，命名為蠟蚧特特拉姆酸A。

表1 化合物1～3的NMR數(shù)據(jù) (600/150 MHz, acetone-d6)

圖2 化合物1～3主要的1H-1H COSY (黑色粗線)、HMBC (紅色箭頭) 相關(guān)信號(hào)

圖3 化合物1～3主要的NOESY相關(guān)(虛線箭頭)

圖4 化合物1～6的ECD圖譜

化合物2：黃色粉末；/498.244 81 [M＋Na]+（計(jì)算值C26H37NO7Na，498.246 22）確定化合物分子式為C26H37NO7；[α]25 D＋52.8 (0.1, acetone-6)；ECD (0.001 mol/L, MeOH)：218 (＋9.13)、286 (?0.12) nm；紫外-可見光譜max(log)顯示化合物在215 (3.03)、286 (3.09) nm處有吸收；紅外光譜 (KBr，max) 顯示化合物在3297、2961、2918、2359、2342、1732、1698、1669、1598、1458、1374、1205、1138、1032 cm?1等波數(shù)下有吸收。與化合物1相近的紫外、紅外光譜以及分子式中多出1個(gè)氧原子預(yù)示著化合物2是1或6的1個(gè)氧化產(chǎn)物。根據(jù)1H、13C和HSQC譜確定化合物含6個(gè)甲基 (C13.7、15.9、21.2、31.6、25.7、52.8)、3個(gè)sp3亞甲基 (C42.2、46.5、50.3)、6個(gè)sp3次甲基 (C35.4、36.5、46.1、46.8、48.7、59.3)、2個(gè)sp3季碳 (C69.2、74.2)、3個(gè)sp2次甲基(C122.3、129.3、134.2)、6個(gè)sp2季碳 (C101.5、136.4、176.6、177.0、193.5、195.8)（表1）?；衔?的分子中比1多1個(gè)氧原子，同時(shí)其核磁譜圖中比1多1個(gè)連氧sp3季碳 (C69.2) 信號(hào)、少1個(gè)sp3次甲基信號(hào)。根據(jù)H-15 (H1.19) 與C-6 (C46.5)/C-7 (C69.2)/C-8 (C50.3) 的HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)可確定化合物2是化合物1的7-位氫被羥基取代的衍生物，化合物2的平面結(jié)構(gòu)確定為7-羥基蠟蚧特特拉姆酸A。

化合物3：黃色粉末；/498.245 09 [M＋Na]+（計(jì)算值C26H37NO7Na，498.246 22）確定化合物分子式為C26H37NO7；[α]25 D＋31.6 (0.1, acetone)；ECD (0.001 mol/L, MeOH)：218 (＋6.74)、286 (＋1.76)nm；紫外-可見光譜max(log)顯示化合物在220 (3.03)、284 (3.22) nm處有吸收；紅外光譜 (KBr，max) 顯示化合物在3295、2959、2918、2357、1737、1653、1605、1557、1457、1373、1206、1137、1031、975、917 cm?1等波數(shù)下有吸收。根據(jù)1H、13C-NMR和HSQC譜確定化合物含6個(gè)甲基 (C13.8、16.0、21.2、31.6、27.9、52.9)、3個(gè)sp3亞甲基 (C42.7、46.4、50.3)、6個(gè)sp3次甲基 (C35.4、36.4、46.3、46.7、48.6、60.5)、2個(gè)sp3季碳 (C69.2、75.4)、3個(gè)sp2次甲基 (C122.3、129.4、134.3)、6個(gè)sp2季碳 (C101.4、136.3、176.6、176.9、193.0、194.9)（表1）?；衔?與2互為同分異構(gòu)體，且核磁數(shù)據(jù)相似，僅在C-20/C-23/C-24處有大于1.0的化學(xué)位移差值，分析化合物的1H-1H COSY和HMBC譜圖（圖2）確定3與2有相同的平面結(jié)構(gòu)，推測(cè)化合物2和3與化合物1和6類似，同樣是一對(duì)23-位構(gòu)型相反的差向異構(gòu)體。

分析化合物2和3的NOESY譜圖（圖3），可確定2個(gè)化合物中的氫化萘片段的相對(duì)構(gòu)型均為1S,2R,5S,7S,9S,10R?；衔?～6相似的ECD譜圖（圖4）說(shuō)明化合物2和3結(jié)構(gòu)中的氫化萘上各手性中心以及C-20位等離發(fā)色團(tuán)較近的手性碳具有與1和6相似的立體構(gòu)型。同樣由于C-23與母核發(fā)色團(tuán)較遠(yuǎn), 且與母核骨架以可旋轉(zhuǎn)單鍵連接，2個(gè)化合物中該位置的立體構(gòu)型無(wú)法通過ECD譜圖或NOE相關(guān)信號(hào)確定。分析化合物的比旋光可知化合物2 (＋52.8) 與1 (＋51.9) 相近，而3 (＋31.6) 與6 (＋31.7) 相近；同時(shí)與化合物3和6對(duì)比，化合物1和2在C-20/C-23/C-24處有相似且較小的化學(xué)位移值，以上數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果預(yù)示著化合物2和3中C-20和C-23位之間的相對(duì)構(gòu)型應(yīng)分別與化合物1和6相同，即化合物2和3中C-20位構(gòu)型均為，C-23位構(gòu)型分別為和。在mpw1pw91/6-311+g (d, p) 水平上計(jì)算了氫化萘取代2,4-吡咯烷二酮母核構(gòu)型依次為1,2,5,7,9,10, 20，而23-位分別為和2種構(gòu)型化合物的核磁數(shù)據(jù)，采用MAE分析化合物2和3與2種構(gòu)型化合物的對(duì)應(yīng)關(guān)系[16]。結(jié)果顯示MAE_calc_SR/exp_23＝0.376、MAE_calc_SR/exp_32＝0.530，從另一方面佐證了化合物2和3的C-23位立體構(gòu)型應(yīng)分別為和。綜上，化合物2和3的立體構(gòu)型分別確定為1,2,5,7,9,10,20,23和1,2,5,7,9,10, 20,23。2個(gè)化合物均經(jīng)SciFinder數(shù)據(jù)庫(kù)檢索確定為新化合物，分別命名為蠟蚧特特拉姆酸B（2）和蠟蚧特特拉姆酸C（3）。

3.2 抑菌活性測(cè)試結(jié)果

化合物1和4～6對(duì)4株人體革蘭陽(yáng)性和1株植物革蘭陰性病原菌表現(xiàn)出了抑制作用，最小抑制濃度（minimun inhibitory concentration，MIC）為7.81～125.00mmol/L（表2），對(duì)另外5株人體病原菌未表現(xiàn)出抑制作用；化合物2和3在最大測(cè)試濃度時(shí)對(duì)所有病原菌均未表現(xiàn)出抑制作用。在測(cè)試的病原真菌中，僅化合物6對(duì)油菜菌核病菌和小麥赤霉病菌表現(xiàn)出弱的抑制作用，IC50分別為（22.05±0.62）、（55.54±1.72）μg/mL，多菌靈對(duì)2株菌的IC50值分別為（0.100±0.003）、（1.010±0.013）μg/mL。

表2 化合物1～6對(duì)病原細(xì)菌的抑制活性

4 討論

在人類歷史上微生物天然產(chǎn)物貢獻(xiàn)了大部分的抗菌藥物，而隨著后抗生素時(shí)代的來(lái)臨，從常規(guī)微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)新型抗生素變得越來(lái)越困難。伴隨著植物微生物組學(xué)的快速發(fā)展，藥用植物內(nèi)生菌活性代謝產(chǎn)物的開發(fā)及應(yīng)用逐漸成為中藥領(lǐng)域研究熱點(diǎn)之一，有望為抗菌藥物的開發(fā)提供更多的候選分子。本研究從骨碎補(bǔ)內(nèi)生蠟蚧菌GZWMJZ-847的發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到3個(gè)新的和3個(gè)已知的3-氫化萘特特拉姆酸，蠟蚧特特拉姆酸A～C（1～3）、Sch 210971 (4)、Sch 210972 (5)、Sch 213766 (6)。新化合物1和已知化合物4～6對(duì)4株人體革蘭陽(yáng)性和1株植物革蘭陰性病原細(xì)菌表現(xiàn)出中等的抑制活性，化合物6對(duì)油菜菌核病菌和小麥赤霉病菌表現(xiàn)出了一定的抑制活性，對(duì)比化合物1～6的活性結(jié)果可以看出7-位氫原子被羥基取代后化合物的抑菌活性完全喪失，可為此類抑菌活性化合物的結(jié)構(gòu)修飾提供參考。本研究首次對(duì)已知化合物4～6進(jìn)行抑菌活性的報(bào)道，再次驗(yàn)證了從藥用植物內(nèi)生菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中尋找抑菌活性分子的可行性。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Three new 3-decalinoyltetramic acids produced by endophytesp. GZWMJZ-847 from

CHEN Xu-li1, 2, 3, WANG Li-ping1, 2, 3, WU Dan1,3, HE Wen-wen1,3, ZUO Ming-xing1,3, WANG Dong-yang1, 3, ZHU Wei-ming1

1. State Key Laboratory of Functions and Applications of Medicinal Plants, Guizhou Medical University, Guiyang 550014, China 2. School of Pharmaceutical Sciences, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, China 3. Natural Product Research Center of Guizhou Province, Guiyang 550014, China

To investigate the secondary metabolites and its anti-microbial activities of the endophytic fungussp. GZWMJZ-847 from Gusuibu()sp. GZWMJZ-847 was cultured on the rice medium and its secondary metabolites were isolated and purified by Sephadex LH-20, silica gel column chromatography. Their structures were identified by the mass spectroscopic analysis and NMR calculation. The activities of isolated compounds against pathogenic bacteria and yeast were assayed by nutrient broth dilution method, and that against pathogenic moulds were tested by plate method.Three new 3-decalinoyltetramic acids,tetramic acids A—C (1—3), along with three known analogs including Sch 210971 (4), Sch 210972 (5) and Sch 213766 (6) were obtained. Compounds 1 and 4—6 showed antimicrobial activity against four human Gram-positive and one plant Gram-negative bacteria with the MIC values ranging from 7.81 to 125.00mmol/L. Compound 6 showed anti-phytopathogenic fungi activities againstandwith IC50values of (22.05 ± 0.62) and (55.54 ± 1.72) μg/mL.tetramic acids A—C (1—3) are new 3-decalinoyltetramic acids.sp.GZWMJZ-847 fromcan produce antimicrobial 3-decalinoyltetramic acids against human- and plant-derived pathogenic microbes.

;sp.; secondary metabolite; pyrrolidine-2,4-dione; anti-microbial activity; lecanitetramic acid A; lecanitetramic acid B; lecanitetramic acid C

R284.1

A

0253 - 2670(2023)13 - 4096 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.13.002

2023-03-29

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（U1812403）；貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目（黔科中引地[2022]4015）；貴州省“百人領(lǐng)軍人才”計(jì)劃（朱偉明）；博士引進(jìn)啟動(dòng)基金（天產(chǎn)自J字[2022] 02號(hào)）

陳旭麗，女，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)槲⑸锼幬锘瘜W(xué)。E-mail: 1964181047@qq.com

通信作者：王冬陽(yáng)，男，博士，研究方向?yàn)槲⑸锼幬锘瘜W(xué)。E-mail: wangdongyang@gmc.edu.cn

朱偉明，男，博士，教授，主要研究方向?yàn)槲⑸锼幬锘瘜W(xué)。E-mail: weimingzhu@ouc.edu.cn

[責(zé)任編輯 王文倩]