二氯異氰脲酸鈉粉消毒劑能量試驗研究

陳峰，盧濤，戴明清

（1.湖南五指峰生化有限公司，湖南 瀏陽 410331；2.湖南省瀏陽市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，湖南 瀏陽 410300）

二氯異氰脲酸鈉粉是目前畜禽消毒工作中常用的含氯消毒劑，廣泛運用于畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中。作為一種新型的內(nèi)吸性殺菌劑，它適用范圍廣、高效且有強殺滅微生物作用，各種致病性微生物（如病毒、細(xì)菌芽孢、真菌等）很難在其水溶液中存活；且具環(huán)境適用性廣，用量低殘留少，性價比高等特點，主要用于禽舍、畜欄、器具及種蛋等消毒。為驗證連續(xù)加入細(xì)菌懸液對消毒劑殺菌作用的影響，并測定該消毒劑用于多次消毒污穢物品或環(huán)境（含有機物較多），如用于畜禽欄舍、器具、運載車輛、種蛋等的實用劑量，特進行消毒劑能量試驗，以供廣大養(yǎng)殖用戶參考。

1.材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 消毒劑：消毒威（二氯異氰脲酸鈉粉，含有效氯20%），湖南五指峰生化有限公司出品（生產(chǎn)批號：20220701）。

1.1.2 細(xì)菌：大腸桿菌44103，金黃色葡萄球菌29213（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院提供）；蠟樣桿菌芽孢CMCC（B）63303（上海魯微科技有限公司），巴氏桿菌GDMCC1.803（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.1.3 培養(yǎng)基：自配LB 液體培養(yǎng)基，蛋白胨10 g，氯化鈉5 g，酵母粉5 g，調(diào)pH 值至7.4~7.6，煮沸3~5 min，濾紙過濾，121℃高壓滅菌20 min。

1.1.4 中和劑：自配通用型中和劑（無水磷酸氫二鈉2.83 g、磷酸二氫鉀1.36 g、胰蛋白胨10 g、牛肉粉3 g、葡萄糖2 g、硫代硫酸鈉5 g、卵磷脂3 g、甘氨酸3 g、吐溫-80 30 mL。將各成分加入到1L 蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH 值至7.2～7.4，于121℃高壓蒸汽滅菌20 min，冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

1.1.5 稀釋液：自配LB 液體培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 菌株的活化培養(yǎng)

取試驗菌，置于37.5℃恒溫培養(yǎng)箱中活化培養(yǎng)24 h，備用。

1.2.2 中和劑鑒定試驗

試驗菌為大腸桿菌，設(shè)計6 組，按懸液定量殺菌試驗程序進行。試驗分為6 組：①（消毒劑＋菌液）＋中和劑；②中和劑＋菌液；③（消毒劑＋中和劑）＋菌液；④消毒劑＋菌懸液；⑤菌液；⑥未接種的培養(yǎng)基。結(jié)果以第1 組不長菌或菌落數(shù)少于第2組，第2 組菌落數(shù)≥100 cfu/mL，第3、4、5 組菌落數(shù)在規(guī)定范圍且組間菌落數(shù)誤差≤15%，第6 組無菌生長，為所選中和劑組成及濃度適宜。

1.2.3 消毒劑能量試驗[1]

(1)將制備的菌液進行活菌計數(shù)，然后用LB液體培養(yǎng)基稀釋成含菌106～107cfu/mL 的試驗菌液。

(2)將消毒劑樣品配制成A、B、C 溶液，測試濃度分別為（以有效氯計）150、100、50 mg/L，各溶液取3 mL 分裝于試管。

(3) 吸取1mL 試驗菌液于3 mL 測試濃度A 的消毒劑溶液試管內(nèi)。

(4)置20℃水浴中作用8 min。

(5)立即吸取上述菌藥混合液50 μL，加入第一批5 支盛有5 mL 含中和劑的LB 培養(yǎng)基管中混勻，標(biāo)記為1。

(6)在2 min 后再次吸取1 mL 試驗菌液于3 mL測試濃度的消毒劑溶液試管內(nèi)。

(7)置20℃水浴中作用8 min。

(8)立即吸取上述菌藥混合液50 μL，加入第二批5 支盛有5 mL 含中和劑的LB 培養(yǎng)基管中混勻，標(biāo)記為2。

(9)在2 min 后再次吸取1 mL 試驗菌液于3 mL測試濃度的消毒劑溶液試管內(nèi)。

(10)置20℃水浴中作用8 min。

(11)立即吸取上述菌藥混合液50 μL，加入第三批5 支盛有5 mL 含中和劑的LB 培養(yǎng)基管中混勻，標(biāo)記為3。

(12)分別吸取1 mL 試驗菌液于3 mL 測試濃度B、C 的消毒劑溶液試管內(nèi)，重復(fù)以上步驟。

(13)以LB 液體培養(yǎng)基代替菌液，同時進行上述各步驟，作為陰性對照組；以LB 液體培養(yǎng)基代替消毒液，同時進行上述各步驟，作為陽性對照組。

(14) 將以上各試管置于37.5℃恒溫培養(yǎng)箱中48 h，觀察是否有菌生長。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果

2.1.1 菌株的活化培養(yǎng)

根據(jù)結(jié)果可以數(shù)菌計算蠟狀桿菌濃度約為3.5×1010cfu/mL，多殺性巴氏桿菌濃度約為3.1×1010cfu/mL，大腸桿菌濃度約為2.6×1012cfu/mL，金黃色葡萄球菌濃度約為2.2×1010cfu/mL，以此確定后續(xù)實驗中菌種的稀釋倍數(shù)（見圖1）。

圖1 四種不同菌種的梯度稀釋涂板結(jié)果

2.1.2 中和劑鑒定試驗

以含有效氯150 mg/L 的二氯異氰脲酸鈉粉消毒劑溶液與大腸桿菌作用5 min 后加入中和劑作用10 min，結(jié)果表明通用型中和劑能有效中和消毒劑，且中和劑及中和產(chǎn)物無抑菌作用（見表1）。

表1 中和劑鑒定試驗結(jié)果

2.1.3 能量試驗

（1）能量試驗對照組渾濁度

我們定義陽性對照組渾濁度為++（很渾濁），陰性對照組渾濁度為-（澄清），見圖2。

圖2 對照組渾濁度

（2）能量試驗結(jié)果

結(jié)果見表2。

表2 能量試驗結(jié)果

2.2 分析

供試樣品消毒威（二氯異氰脲酸鈉粉，含有效氯20%），在含有效氯150 mg/L 的濃度下，對多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌的多次殺滅效果明顯，各管澄清；對蠟狀桿菌芽孢、大腸桿菌殺滅效果明顯，僅在第3 次加入菌液出現(xiàn)渾濁；在含有效氯100 mg/L 的稀釋倍數(shù)下，對多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌殺滅效果明顯，對蠟狀桿菌芽孢、大腸桿菌具有一定的殺滅效果；在含有效氯50 mg/L 的濃度下，各樣管均出現(xiàn)不同程度渾濁，殺滅效果不明顯。試驗中出現(xiàn)對不同菌種表達(dá)效果不同的原因可能是，不同菌種初始濃度不同，稀釋過程中產(chǎn)生誤差等。

3 討論

試驗結(jié)果表明，二氯異氰脲酸鈉粉稀釋液在含有效氯100~150 mg/L 濃度時，多次加入菌液后對多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌殺滅作用明顯，對蠟狀桿菌芽孢、大腸桿菌具有一定殺滅作用；在含有效氯50mg/L 的濃度下，初次加入菌液對各試驗菌的殺滅效果不確切。試驗結(jié)果與文獻(xiàn)報道的結(jié)果基本一致，但有差異[2,3]。產(chǎn)生這種結(jié)果的原因是有效氯濃度不同，本試驗有效濃度為100~150 mg/L，與文獻(xiàn)報道240 mg/L 相比偏低，因此對桿菌與芽孢類微生物殺滅效果較弱?？紤]到對金屬腐蝕性方面的影響[4]，低濃度的二氯異氰脲酸鈉粉稀釋液對金屬器具、設(shè)備更友好，推薦在有效的前提下盡量使用低濃度消毒。

4. 結(jié)論

根據(jù)試驗結(jié)果，可以認(rèn)為湖南五指峰生化有限公司生產(chǎn)的消毒劑產(chǎn)品消毒威（二氯異氰脲酸鈉粉，含有效氯20%） 最低持續(xù)殺滅細(xì)菌濃度在100~150 mg/L 時，在需要長時間持續(xù)殺滅病原體的環(huán)境下（如消毒池、浸泡、空欄消毒等的推薦用量為150 mg/L?！?/p>