液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)食品中金剛烷胺的方法研究

張慧芳，劉俊峰，李松濤

（1.山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心食品與糧食檢驗(yàn)技術(shù)研究所，山西太原 030012；2.山西九牛牧業(yè)股份有限公司，山西太原 030023）

目前，金剛烷胺被很多國(guó)家列為禁用藥物[1]。因其售價(jià)較低，養(yǎng)殖戶(hù)為應(yīng)對(duì)流感爆發(fā)，將金剛烷胺類(lèi)藥物較多地使用在飼料中[2]，致使金剛烷胺在動(dòng)物體內(nèi)形成殘留，食用后會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生特別大的影響[3-4]。因此，我國(guó)有必要研究金剛烷胺的檢測(cè)方法。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法能夠準(zhǔn)確地定性和定量檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中的獸藥殘留。現(xiàn)行的金剛烷胺檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中金剛烷胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB 31660.5——2019）[5]就采用了高效液相色譜質(zhì)譜技術(shù)。本文主要通過(guò)對(duì)液相及質(zhì)譜條件的優(yōu)化，提高分析的準(zhǔn)確性和精密度，進(jìn)而為雞肉和雞蛋中金剛烷胺的檢測(cè)提供一些參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

雞肉和雞蛋樣品購(gòu)置于超市，均屬包裝食品；金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（Bepure，證書(shū)編號(hào)為B0019913）；D15-金剛烷胺（Bepure，證書(shū)編號(hào)為D0015046）；乙腈（默克）、正己烷（美國(guó)Tedia公司）；甲醇（色譜純）、無(wú)水硫酸鈉（分析純）；甲酸（色譜純，F(xiàn)isher公司）、過(guò)濾器（北京科德諾思技術(shù)有限公司，200 mg/3 mL）；本實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)制一級(jí)超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

LCMS-4500三重四極桿色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（使用ESI離子源，美國(guó)AB SCIEX公司）；BSA124S-CW電子天平（精密度0.000 1 g，常熟雙杰測(cè)試儀器廠）；IKA VORTEX 3渦旋儀；離心機(jī)（德國(guó)SIMGA公司）；SB-5200DTDN超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；UGC-45CE電動(dòng)升降圓形水浴氮吹儀（優(yōu)晧聯(lián)合）等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)貯備液。分別準(zhǔn)確稱(chēng)取金剛烷胺、D15-金剛烷胺各10 mg，分別轉(zhuǎn)移至2個(gè)10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，即為1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)配制液。-20 ℃以下保存，有效期為3個(gè)月。

（2）標(biāo)準(zhǔn)工作液。用移液槍分別吸取0.1 mL金剛烷胺和D15-金剛烷胺的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，各自移入100 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成金剛烷胺、D15-金剛烷胺濃度為1 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。2～8 ℃保存，有效期為2周。

1.3.2 樣品前處理

參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中金剛烷胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB 31660.5——2019）的前處理辦法分別對(duì)包裝食品中雞肉和雞蛋樣品進(jìn)行大量重復(fù)處理。

1.3.3 儀器條件

（1）液相條件。兩路流動(dòng)相：0.1%的甲酸水溶液和甲醇；色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1×100 mm，3.5 μm）；洗脫條件：見(jiàn)表1；進(jìn)樣量：10 μL；流速：0.4 mL·min-1；柱溫箱溫度：40 ℃。

表1 液相洗脫條件

（2）質(zhì)譜條件。質(zhì)譜條件見(jiàn)表2，監(jiān)測(cè)離子參數(shù)條件見(jiàn)表3。

表3 監(jiān)測(cè)離子參數(shù)條件

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜圖

由圖1可知，目標(biāo)化合物的響應(yīng)可達(dá)5×104，內(nèi)外標(biāo)出峰時(shí)間重合且穩(wěn)定，峰形細(xì)而尖，信噪比（S/N）遠(yuǎn)超過(guò)10，結(jié)合前期掃描所得定性離子對(duì)（152/93）與定量離子對(duì)（152/135）以及內(nèi)標(biāo)（167.3/150.3）在對(duì)應(yīng)時(shí)間穩(wěn)定出現(xiàn)，充分說(shuō)明目標(biāo)物金剛烷胺和D15-金剛烷胺穩(wěn)定存在，進(jìn)而可以準(zhǔn)確地定性定量研究。

圖1 金剛烷胺和D15-金剛烷胺的色譜圖

2.2 線性范圍、檢出限及定量限信噪比

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

采用逐級(jí)稀釋法配制金剛烷胺的質(zhì)量濃度為2 ng·mL-1、4 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1和100 ng·mL-1，D15-金剛烷胺質(zhì)量濃度均為20 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3.3儀器條件上機(jī)測(cè)試，以金剛烷胺與D15-金剛烷胺濃度比為橫坐標(biāo)，兩者的面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程為y=0.049 9x+0.002 06，相關(guān)系數(shù)r為0.999 9，表明在2～100 ng·mL-1時(shí)，金剛烷胺的線性關(guān)系良好。

2.2.2 檢出限信噪比

方法檢出限為1 μg·kg-1，經(jīng)公式計(jì)算后得上機(jī)濃度為2 ng·mL-1，此時(shí)定量離子m/z=135的信噪比為573.5，當(dāng)信噪比為3時(shí)，儀器檢出限為0.005 23 μg·kg-1，能滿足標(biāo)準(zhǔn)GB 31660.5——2019的要求。

2.2.3 定量限信噪比

方法定量限為2 μg·kg-1，經(jīng)公式計(jì)算后得上機(jī)濃度為4 ng·mL-1，此時(shí)定量離子m/z=135的信噪比為1 037，當(dāng)信噪比為10時(shí)，儀器檢出限為0.019 3 μg·kg-1，能滿足標(biāo)準(zhǔn)GB 31660.5——2019的要求。

2.3 回收率與精密度

參照標(biāo)準(zhǔn)GB/T 27404——2008[6]的要求，本試驗(yàn)分別在雞肉和雞蛋基質(zhì)的空白樣品中添加1、2、5倍定量限濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行雙平行加標(biāo)回收試驗(yàn)，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表5。同時(shí)，在1倍定量限濃度（4 ng·mL-1）添加水平下做6平行試驗(yàn)，計(jì)算精密度RSD值，結(jié)果見(jiàn)表6。經(jīng)測(cè)試，該方法的加標(biāo)回收率為74.4%～117.9%，RSD為0.65%，均能滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。

表5 雞肉和雞蛋基質(zhì)中加標(biāo)回收結(jié)果

表6 方法精密度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

綜上可知，在濃度為2～100 ng·mL-1時(shí)，金剛烷胺的線性關(guān)系好，相關(guān)系數(shù)r為0.999 9，加標(biāo)回收率在74.4%～117.9%，RSD＜10%。此方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定雞蛋和雞肉基質(zhì)中的金剛烷胺，有較好的穩(wěn)定性，且雞蛋基質(zhì)低于雞肉基質(zhì)的加標(biāo)回收率，說(shuō)明雞蛋基質(zhì)更復(fù)雜，對(duì)提取金剛烷胺的影響更大，該試驗(yàn)可對(duì)研究食品中金剛烷胺的檢測(cè)提供一些參考依據(jù)。