菠蘿黑心病發(fā)生過(guò)程中AcAPXs 的表達(dá)分析及克隆

張媛媛　鹿志偉　李茂富　姚全勝　侯曉婉

關(guān)鍵詞：菠蘿；黑心病，抗壞血酸過(guò)氧化物酶；qPCR；克隆

中圖分類(lèi)號(hào)：S436.68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

菠蘿[Ananas comosus （Linn.） Merr.]是鳳梨科鳳梨屬多年生單子葉常綠草本果樹(shù)，是世界三大熱帶水果之一，也是我國(guó)熱區(qū)的主要經(jīng)濟(jì)作物，主要集中在臺(tái)灣、廣東、廣西、福建、海南等?。▍^(qū)）。廣東省是我國(guó)菠蘿生產(chǎn)第一大省，其主栽品種為‘巴厘菠蘿，種植面積達(dá)35 639 hm²，產(chǎn)量達(dá)111.0 萬(wàn)t[1-3]。然而‘巴厘菠蘿在采后貯藏和運(yùn)輸期間極易發(fā)生黑心?。╥nternal browning，IB），使果髓乃至果肉均變?yōu)楹诤稚瑢?dǎo)致果實(shí)品質(zhì)顯著降低，耐儲(chǔ)能力大幅度縮減，給種植戶以及收果商帶來(lái)嚴(yán)重的損失[3]。

黑心病是由低溫（晝/夜<25 ℃/20 ℃）引起的生理失調(diào)癥，該病害發(fā)生的實(shí)質(zhì)是酶促氧化褐變[1， 4]。前人通過(guò)對(duì)不同園藝物種冷害生理反應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期低溫導(dǎo)致的液泡膜損傷、線粒體腫脹和內(nèi)部組織褐變[3， 5-6] ， 均會(huì)使活性氧（reactive oxygen species， ROS）含量增加。而ROS的過(guò)量積累誘導(dǎo)氧化損傷，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生包括生物膜脂過(guò)氧化、DNA 損傷、蛋白質(zhì)變性等毒害效應(yīng)[7]；對(duì)機(jī)體造成冷害的二次反應(yīng)，使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)由相變成為剛變[5]。菠蘿由于田間或采后的長(zhǎng)時(shí)間低溫冷害，使細(xì)胞膜出現(xiàn)不可逆的滲透性損傷，打破膜質(zhì)區(qū)域化劃分，導(dǎo)致質(zhì)體內(nèi)的多酚氧化酶（polyphenol oxidase， PPO）與液泡內(nèi)的酚類(lèi)底物均釋放到細(xì)胞質(zhì)中，接觸氧形成化醌類(lèi)物質(zhì)，引起果肉褐變[3， 8]。

為了維持自身ROS 的動(dòng)態(tài)平衡，植物進(jìn)化出一系列酶促和非酶促抗氧化防御系統(tǒng)[9]。非酶促抗氧化系統(tǒng)包括抗壞血酸（ascorbic acid， AsA）、還原型谷胱甘肽（lglutathione， GSH）等抗氧化物質(zhì)，而酶促抗氧化清除系統(tǒng)則包括抗壞血酸過(guò)氧化物酶（ascorbate peroxidase， APX）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase， GPX）等抗氧化蛋白酶[10-11] ， 其分別屬于水循環(huán)系統(tǒng)、AsA-GSH 循環(huán)系統(tǒng)和GPX 循環(huán)系統(tǒng)， 其中AsA-GSH 循環(huán)系統(tǒng)在抗氧化防御中發(fā)揮著主要作用[12]。本課題組前期用抗氧化劑AsA 處理采后‘巴厘菠蘿，發(fā)現(xiàn)AsA 能顯著減少機(jī)體內(nèi)H₂O₂含量、膜受損傷程度和PPO 活性，增強(qiáng)抗氧化防御系統(tǒng)關(guān)鍵抗氧化物酶活性，增加菠蘿的抗氧化能力，使ROS 毒害效應(yīng)減弱，顯著降低菠蘿黑心病病情指數(shù)，延緩黑心病的發(fā)生[13-14]，但AsA 在其中的發(fā)生機(jī)制尚不明確。APX 作為AsA-GSH循環(huán)系統(tǒng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶，以AsA 為電子供體，將H₂O₂轉(zhuǎn)換為H₂O，清除機(jī)體過(guò)量ROS，達(dá)到維持ROS 穩(wěn)態(tài)的目的[15]。前人研究發(fā)現(xiàn)APX 通過(guò)清除植物體內(nèi)的H₂O₂參與植物的多種發(fā)育生理過(guò)程和脅迫反應(yīng)，如，ZHANG 等[16]研究表明，過(guò)表達(dá)OsAPX2 可以清除活性氧，提高水稻幼苗對(duì)干旱、鹽和低溫脅迫的耐受性；ZHANG 等[17]發(fā)現(xiàn)異源表達(dá)金孢隱霉菌CfAPX 降低了轉(zhuǎn)基因擬南芥H₂O₂含量，具有較強(qiáng)的脅迫耐受性；CAVERZAN 等[18]研究表明chlAPXs 參與水稻光氧化脅迫下的光合作用和保護(hù)的調(diào)控作用。

本研究從菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中（ https：//phytozome-next.jgi.doe.govinfo/Acomosus_v3）[19]篩選到6 個(gè)APX 基因，對(duì)黑心病發(fā)生過(guò)程以及抗壞血酸處理后的轉(zhuǎn)錄水平變化進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)抗壞血酸處理顯著增強(qiáng)AcAPX1 基因的表達(dá)，相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)， AsA 處理后菠蘿黑心病指數(shù)與AcAPX1 基因表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)，因此，猜想AcAPX1 基因在AsA 延緩黑心病惡化中發(fā)揮重要作用。為探究其作用機(jī)制，進(jìn)一步克隆AcAPX1基因，并對(duì)該基因進(jìn)行氨基酸理化性質(zhì)、同源氨基酸比對(duì)、進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建、功能結(jié)構(gòu)域分析以及亞細(xì)胞定位等一系列生物信息學(xué)分析，為探究菠蘿AcAPX1 基因參與AsA 清除ROS，延緩黑心病惡化的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

選取菠蘿栽培品種‘巴厘（Ananas comosus L.cv. Comte de Paris）為試驗(yàn)材料，樣本采收于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院南亞熱帶作物研究所菠蘿種植基地（21°10′2′′N(xiāo)， 110°16′34′′E）?？箟难幔ˋsA），純度99%，購(gòu)自西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司。

1.2 方法

1.2.1 采后處理方法和RNA 提取 挑選無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)機(jī)械損傷，果實(shí)大小一致的六成熟果60 個(gè)，用0.5 mg/L 咪鮮胺浸泡果實(shí)底部1 min，置陰涼通風(fēng)處晾干備用。各取30 個(gè)果，分別用清水和0.2% AsA 水溶液浸泡果實(shí)底部15 min，待風(fēng)干后，置于（25±2） ℃貯藏箱中，分別于貯藏0、3、6、9、12 d 時(shí)取F/C 處果肉，取樣方式、具體位置以及黑心病指數(shù)參考侯曉婉等[13-14]的方法，液氮冷凍后，研磨，用Quick RNA isolation Kit（北京華越洋生物技術(shù)有限公司）快速通用植物RNA提取試劑盒提取RNA，并選用TransStart? TopGreen qPCR SuperMix 試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，置于–20 ℃冰箱備用。

1.2.2 菠蘿APX 基因轉(zhuǎn)錄水平分析 從菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（ https：//phytozome-next.jgi.doe.govinfo/Acomosus_v3）[19]獲得菠蘿APX 基因序列，利用NCBI Primer designing tool （https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primerblast/）進(jìn)行定量引物設(shè)計(jì)（表1），通過(guò)全式金TransStart? Tip Green qPCRSuperMix 試劑盒進(jìn)行熒光定量PCR 反應(yīng)，其中，反應(yīng)體系為20 μL，cDNA 模板1 μL，引物F（10 μmol/L）和R（10 μmol/L）均為0.4 μL，2×TransStart? Top Green qPCR SuperMix 10 μL，Prssive Reference Dye （50×） 0.4 μL，無(wú)菌去離子水7.8 μL。在Roche LightCycler^?96 熒光定量?jī)x中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)程序如下：預(yù)變性95 ℃ 30 s，循環(huán)反應(yīng)：變性94 ℃ 5 s，58 ℃ 30 s，40 個(gè)循環(huán)，溶解曲線：95 ℃ 15 s；60 ℃ 1 min；95 ℃ 15 s。每個(gè)樣品設(shè)置3 個(gè)重復(fù)，相對(duì)表達(dá)量采用2?ΔΔCT法進(jìn)行分析。

1.2.3 AcAPX1 基因的克隆 從菠蘿基因組數(shù)據(jù)庫(kù)獲得菠蘿AcAPX1 蛋白序列及基因序列，運(yùn)用Primer 5.0 軟件設(shè)計(jì)AcAPX1 基因編碼（codingsequence， CDS）全長(zhǎng)序列克隆引物（表1）。使用TransStart? FastPfu DNA Polymerase 試劑盒對(duì)AcAPX1 基因CDS 全長(zhǎng)序列進(jìn)行擴(kuò)增，PCR 擴(kuò)增體系及反應(yīng)條件如下：總體系50 μL，模板1 μL，引物F（10 μmol/L）和R（10 μmol/L）均為1 μL，5×TransStartd? FastPfu Buffer 10 μL ， NTP（2.5 mmol/L）4 μL，TransStart? FastPfu DNAPolymerase 1 μL， ddH2O 32 μL， 94 ℃ 預(yù)變性4 min；94 ℃變性30 s、55 ℃退火30 s、72 ℃延伸1 min，35 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸7 min。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，切膠回收純化，連接至T1 載體，轉(zhuǎn)化DH5α 感受態(tài)細(xì)胞，在37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)，并進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，挑選白色的陽(yáng)性克隆菌斑后通過(guò)PCR 篩選分析，并送菌液進(jìn)行測(cè)序。

1.2.4 AcAPX1 基因生物信息學(xué)分析 利用NCBI的ORF（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/）在線軟件對(duì)AcAPX1 基因開(kāi)放閱讀框進(jìn)行分析；運(yùn)用NCBI 在線搜索AcAPX1 在不同物種中的同源蛋白序列；通過(guò)Conserved domains 在線軟件（ https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi）對(duì)AcAPX1 蛋白進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)；通過(guò)ExPASy-ProtParam在線軟件（https：//web.expasy.org/ protparam/）對(duì)AcAPX1 蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行分析；利用GSDS 2.0 在線軟件（http：//gsds.gaolab.org/）分析AcAPX1 基因結(jié)構(gòu)；使用DNAMANv.8.0 軟件對(duì)不同物種間的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)；利用MEGA6 軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建；利用在線軟件InterProScan （ https：//www.ebi.ac.uk/interpro/）預(yù)測(cè)AcAPX1 蛋白的結(jié)構(gòu)特征；利用SOPMA 在線軟件（https：// npsa-prabi.ibcp.fr/NPSA/npsa_sopma.html）預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)；用SWISS-MODEL 在線軟件（ https：//www.swissmodel.expasy.org/）預(yù)測(cè)AcAPX1 蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)；通過(guò)在線軟件SignalP（http：∥www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）進(jìn)行蛋白的信號(hào)肽預(yù)測(cè)；使用在線分析軟件TMHMM v2.0（ http：//www.cbs.dtu.dk/services/ TMHMM-2.0/）預(yù)測(cè)序列的跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域；運(yùn)用Cell-PLoc 2.0 在線預(yù)測(cè)軟件（http：//www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc- 2/）對(duì)AcAPX1 蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析[20]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Graphpad prism 9.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和相關(guān)性分析，采用Excel 軟件制表[21]。

2 結(jié)果與分析

2.1 菠蘿RNA 的提取和反轉(zhuǎn)錄cDNA

提取菠蘿果肉（F/S）總RNA，經(jīng)電泳鑒定RNA 條帶完整（圖1），用核酸測(cè)定儀器測(cè)得其OD260/280 在1.6～1.8 之間，可用于反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)。

2.2 菠蘿 APX 基因轉(zhuǎn)錄水平變化及其與黑心病指數(shù)的相關(guān)性前期研究發(fā)現(xiàn)AsA 延緩了黑心病的惡化，通過(guò)RT-qPCR 對(duì)采后貯藏0、3、6、9、12 d 的APX基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，6 個(gè)AcAPX基因均不同程度響應(yīng)AsA 處理（圖2），表明APX以AsA 為電子供體，參與菠蘿的抗氧化過(guò)程，在延緩黑心病的惡化中發(fā)揮一定作用。在各個(gè)貯藏階段，AcAPX3、AcAPX5 基因在CK 和AsA 處理組中的表達(dá)整體變化趨勢(shì)一致，均持續(xù)下降，并且均在9 d 時(shí)，CK 與處理組有顯著差異；AcAPX2、AcAPX4 和AcAPX6 在貯藏初期顯著上調(diào)，3 d 后其表達(dá)呈下降趨勢(shì)；此外，處理組與CK間AcAPX2和AcAPX6 無(wú)顯著差異；而AsA 處理后AcAPX4在3 d 時(shí)極顯著下降，下降時(shí)間點(diǎn)從CK 組的6 d提前到3 d，表明AsA 處理提前了AcAPX4 對(duì)黑心病的響應(yīng)時(shí)間。AcAPX1 在AsA 處理組和CK中的表達(dá)趨勢(shì)呈顯著差異，AsA 處理后AcAPX1基因呈持續(xù)上升的表達(dá)趨勢(shì)；而CK 中在貯藏初期上調(diào)后，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，其表達(dá)量無(wú)顯著差異。

為了進(jìn)一步篩選顯著響應(yīng)AsA 延緩黑心病發(fā)生的關(guān)鍵基因，進(jìn)行黑心病指數(shù)與AcAPXs 基因表達(dá)量的相關(guān)性分析（表2），結(jié)果表明，CK 中，AcAPX5 基因?qū)Σぬ}黑心病指數(shù)的影響最大，相關(guān)系數(shù)為–0.9348，呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05），而與其他基因無(wú)顯著相關(guān)。AsA 處理組中，AcAPX1、AcAPX5 和AcAPX6 基因?qū)Σぬ}黑心病指數(shù)的影響較大，其相關(guān)系數(shù)分別為0.9362、–0.9142 和–0.8998，其中，與AcAPX5 和AcAPX6 基因呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05），與AcAPX1 基因呈顯著正相關(guān)（P<0.05），與AcAPX1 基因的相關(guān)系數(shù)更接近1，說(shuō)明與黑心病指數(shù)的相關(guān)性更大；并且貯藏后期AcAPX1 基因的表達(dá)極顯著高于CK。綜上表明，AcAPX1 基因顯著響應(yīng)AsA 處理，可能在AsA 延緩黑心病的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。

2.3 菠蘿AcAPX1 基因的克隆及編碼蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)

以未處理的‘巴厘菠蘿果肉的cDNA 為模板，使用AcAPX1-F、AcAPX1-R 特異性引物，運(yùn)用RT-PCR 擴(kuò)增AcAPX1 基因的CDS 全長(zhǎng)（圖3）。通過(guò)BLAST 比對(duì)發(fā)現(xiàn)，擴(kuò)增片段包含完整的CDS 序列，全長(zhǎng)為753 bp，編碼250 個(gè)氨基酸殘基（圖4）。AcAPX1 編碼的蛋白分子量大小為27.410 87 kDa，分子式為C1220H1880N338O367S8，理論等電點(diǎn)為5.52，該蛋白有36 個(gè)帶負(fù)電荷的氨基酸殘基（Asp+Glu），28 個(gè)帶正電荷的氨基酸殘基（Arg+Lys），蛋白質(zhì)半衰期為30 h。菠蘿AcAPX1基因編碼的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定系數(shù)為39.87（<40），表明該蛋白為穩(wěn)定蛋白；平均親水性常數(shù)為-0.436，說(shuō)明該蛋白為親水性蛋白，脂溶指數(shù)為72.68，其氨基酸組成如表3 所示。運(yùn)用GSDS 2.0 分析AcAPX1 基因結(jié)構(gòu)表明，該基因含有5′UTR 和3′UTR，9 個(gè)外顯子和8 個(gè)內(nèi)含子（圖5）。

2.4 菠蘿AcAPX1 蛋白功能結(jié)構(gòu)域分析及同源氨基酸序列比對(duì)

利用NCBI Conserved Domain Search 尋找AcAPX1 蛋白的保守區(qū)，發(fā)現(xiàn)其含有APX 蛋白家族的保守序列，表明該蛋白屬于植物過(guò)氧化物酶（POD）超家族，并且具有血紅素結(jié)合位點(diǎn)、K+結(jié)合位點(diǎn)及底物結(jié)合位點(diǎn)（圖6）。通過(guò)NCBI 的Blast 工具對(duì)AcAPX1 氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果表明，菠蘿AcAPX1 與番木瓜、香蕉、椰子、油棕等熱帶植物的序列相似性達(dá)85%以上（圖7）。結(jié)合保守結(jié)構(gòu)域分析可得，AcAPX1 基因編碼的蛋白除了含有植物POD 結(jié)構(gòu)域，還含有XANX、LPDAX 等保守片段（圖7 紅色方框區(qū)域），這些片段是APX 與底物AsA 結(jié)合的關(guān)鍵。

2.5 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建

采用Construct/Test Neighbor-Jouning Tree，Bootstrap 值為1000，利用MEGA6 和Clustalx 軟件構(gòu)建無(wú)根系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，進(jìn)化樹(shù)整體分為三大類(lèi)（圖8），結(jié)果表明，菠蘿AcAPX1 與油棕EgAPX、椰子CnAPX 和海棗PdAPX 分為一組，表明菠蘿與熱帶植物的親緣關(guān)系較近。

2.6 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)、信號(hào)肽預(yù)測(cè)和跨膜結(jié)構(gòu)域分析

通過(guò)SOPMA 在線軟件預(yù)測(cè)AcAPX1 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，α-螺旋有103 個(gè)，占比為41.20%，無(wú)規(guī)則卷曲有93 個(gè)，占比為37.20%，延伸鏈有32 個(gè)，占比為12.80%，β-轉(zhuǎn)角有22 個(gè)，占比為8.8%（圖9A）。用SWISS-MODEL 在線軟件預(yù)測(cè)其蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)（圖9B）。利用TMHMMServer v.2.0 和SignalIP4.1Server 在線軟件分別檢測(cè)AcAPX1 蛋白質(zhì)的蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域，分析表明其蛋白無(wú)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域（圖9C），也無(wú)信號(hào)肽（圖9D）。

2.7 亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)

通過(guò)Cell-PLoc 2.0 在線預(yù)測(cè)軟件（http：//www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/）對(duì)AcAPX1蛋白進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該蛋白可能存在于細(xì)胞質(zhì)中。結(jié)合該蛋白無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)域，加大了其定位在細(xì)胞質(zhì)的可能性。

3 討論

近年來(lái)，APX 基因的功能在水稻、擬南芥和玉米等植物中被廣泛報(bào)道，APX 基因具有響應(yīng)各種非生物脅迫，增強(qiáng)植株抗氧化能力的功能。擬南芥、水稻缺乏APX 基因時(shí)，會(huì)造成H₂O₂含量升高，引起ROS 的過(guò)量積累，對(duì)機(jī)體造成氧化損傷，對(duì)生物大分子產(chǎn)生毒害效應(yīng)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡[7]，降低植株抵御脅迫的能力[22-24]；過(guò)表達(dá)APX增強(qiáng)了水稻、擬南芥等植物的APX 酶活性，具有高效的ROS 清除性，提高了植株對(duì)干旱[15-16]、低溫[16]、重金屬[23]和鹽[25]等脅迫的耐受性。

菠蘿黑心病是一種長(zhǎng)時(shí)間低溫冷害導(dǎo)致的生理失調(diào)癥。長(zhǎng)期低溫冷害造成機(jī)體產(chǎn)生過(guò)量的ROS，引起膜損傷，使得質(zhì)體內(nèi)的PPO 與液泡內(nèi)的酚類(lèi)底物接觸氧化形成醌類(lèi)物質(zhì)。通過(guò)RTq-PCR 分析發(fā)現(xiàn)，AcAPX1-6 基因均響應(yīng)黑心病的發(fā)生。AsA 處理延緩黑心病的惡化后，改變了AcAPX1-6 基因的表達(dá)。特別是AcAPX1 基因，在AsA 處理后，其表達(dá)顯著上調(diào)，并且黑心病指數(shù)與AcAPX1 基因表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)。AsA處理后，可能通過(guò)上調(diào)AcAPX1 的表達(dá)來(lái)延緩黑心病的發(fā)生?；赗Tq-PCR 和相關(guān)性分析結(jié)果，從‘巴厘菠蘿中成功克隆到AcAPX1 基因，分析表明該基因編碼的蛋白質(zhì)與其他物種APX 蛋白具有相同的保守結(jié)構(gòu)域，具有AsA 結(jié)合位點(diǎn)、血紅素結(jié)合位點(diǎn)、K+結(jié)合位點(diǎn)，屬于POD 超家族，在清除ROS 和植物抵抗外界脅迫中發(fā)揮重要作用；系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析表明，菠蘿AcAPX1 與油棕、椰子等熱帶植物的親緣關(guān)系較近；AcAPX1 蛋白為親水性蛋白，并且不含跨膜結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽，亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)其定位于細(xì)胞質(zhì)中。

本研究結(jié)果為探究菠蘿AcAPX1 基因的功能及抗氧化機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。下一步將構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)一步研究該基因在抗氧化方面中的具體作用，解析AcAPX1 基因在AsA延緩菠蘿黑心病惡化中發(fā)揮的作用機(jī)制。