HBV與HPV對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變及宮頸癌影響

周 飛,何江耀,夏麗麗,陳昌偉

(東莞東華醫(yī)院 病理科,廣東 東莞523110)

宮頸癌普遍易見(jiàn),嚴(yán)重危害女性健康,報(bào)道發(fā)現(xiàn)2018年全世界將近57萬(wàn)人患宮頸癌,其中我國(guó)患者超過(guò)十萬(wàn),死亡人數(shù)達(dá)4.8萬(wàn)[1]。宮頸癌患者數(shù)量逐年增長(zhǎng),日趨年輕[2],所以,找到宮頸癌新的突破口尤為重要。

通常情況下,宮頸正常上皮感染人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus,HPV)后先發(fā)生宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),包括低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)及高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL),后續(xù)再轉(zhuǎn)化為癌[3]。HPV感染引起宮頸腺上皮病變相對(duì)較少,但病變過(guò)程與鱗狀上皮病變類(lèi)似。

當(dāng)前HPV亞型被發(fā)現(xiàn)100余種,在宮頸組織中近30種[4]。HPV包括高危型和低危型,持續(xù)感染高危型HPV容易導(dǎo)致CIN及官頸癌的發(fā)生[5]。但是只有HPV感染時(shí)不足以引起宮頸癌變,致癌因素多種多樣,發(fā)生免疫疾病、改變?nèi)梭w微環(huán)境[6]以及相關(guān)基因均起著重要作用[7]。

據(jù)報(bào)道人宮頸癌基因在肝癌等多種惡性腫瘤中異常表達(dá)[8],乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染作為肝癌主要致病因素,乙型肝炎病毒X蛋白結(jié)合蛋白是一種腫瘤發(fā)展關(guān)鍵蛋白,能加快腫瘤細(xì)胞增殖和遷移[9],與HPV感染明顯有關(guān),是宮頸癌腫瘤標(biāo)記物[10]。因此,本實(shí)驗(yàn)研究HBV感染對(duì)宮頸癌及其癌前病變影響,以及和HPV感染的相關(guān)性,為探索宮頸癌相關(guān)影響因素奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1研究對(duì)象 收集東莞東華醫(yī)院2014年至2018年首次行宮頸組織病理學(xué)、HPV分型檢查及HBV-DNA載量檢測(cè)的病例,統(tǒng)計(jì)進(jìn)行每?jī)山M檢查的患者,分析各兩組間的關(guān)系。

1.1.2主要檢測(cè)儀器及試劑 Luminex 200多功能流式點(diǎn)陣儀(Luminex公司,美國(guó));ABI Prism 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(ABI公司,美國(guó));5333 PCR儀(Eppendorf公司,德國(guó));全自動(dòng)核酸提取儀(深圳市美德瑞生物科技有限公司,中國(guó));OLYMPUS BX51顯微鏡(OLYMPUS公司,日本);人乳頭瘤病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒(流式熒光雜交法,上海透景診斷科技有限公司);乙型肝炎病毒核酸測(cè)定試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司);核酸提取試劑盒(磁珠法,中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)。

1.2 方法

1.2.1HPV分型檢測(cè) 根據(jù)HPV分型檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作:主要包括以下3個(gè)主要步驟:樣本處理,PCR擴(kuò)增,雜交檢測(cè),最后是上機(jī)(Luminex 200多功能流式點(diǎn)陣儀)檢測(cè)。該試劑盒檢測(cè)27種亞型,包括17種HR-HPV和10種LR-HPV;HPV陽(yáng)性即檢測(cè)到亞型感染。

1.2.2HBV-DNA檢測(cè) 根據(jù)HBV核酸測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)操作:主要包括以下4個(gè)步驟:DNA提取,PCR試劑準(zhǔn)備,加樣,PCR擴(kuò)增(使用ABI Prism 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,程序嚴(yán)格根據(jù)說(shuō)明書(shū)設(shè)定檢測(cè))。本試劑盒線性檢測(cè)范圍是100 IU/mL～5.0×108IU/mL,HBV-DNA定量陽(yáng)性即檢測(cè)濃度大于1 000 IU/mL。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究數(shù)據(jù)均用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理,計(jì)數(shù)資料用n(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)和Fisher精確概率法分析,P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變影響

1 166例受檢者HPV分型及宮頸組織病理學(xué)檢查結(jié)果如表1所示,HPV陽(yáng)性率為46.83%(546/1 166),在546例HPV陽(yáng)性患者中,低級(jí)別上皮內(nèi)病變的發(fā)生率44.14%(241/546)、高級(jí)別上皮內(nèi)病變的發(fā)生率16.85%(92/546)、浸潤(rùn)性癌的發(fā)生率3.30%(18/546);在620例HPV陰性患者中,低級(jí)別上皮內(nèi)病變的發(fā)生率23.06%(143/620)、高級(jí)別上皮內(nèi)病變的發(fā)生率15.65%(97/620)、浸潤(rùn)性癌的發(fā)生率1.13%(7/620);兩組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=89.87,P<0.01)。

表1 HPV感染對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變影響[n(%)]

2.2 HPV亞型感染數(shù)量對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變影響

546例HPV陽(yáng)性患者中,多重感染的感染率為30.04%(164/546),在164例多重感染患者中,低級(jí)別上皮內(nèi)病變發(fā)生率50.61%(83/164)、高級(jí)別上皮內(nèi)病變發(fā)生率12.80%(21/164)、浸潤(rùn)性癌發(fā)生率3.05%(5/164);在382例單純感染患者中,低級(jí)別上皮內(nèi)病變發(fā)生率41.36%(158/382)、高級(jí)別上皮內(nèi)病變發(fā)生率18.32%(70/382)、浸潤(rùn)性癌發(fā)生率3.14%(12/382);兩組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.84,P=0.3038),見(jiàn)表2。

表2 HPV亞型感染數(shù)量對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變影響[n(%)]

2.3 HBV與HPV合并感染情況

本研究1 166例受檢者中,有126例行HBV-DNA載量和HPV分型檢測(cè),結(jié)果如表3所示,HBV-DNA載量>1 000的檢出率為35.71%(45/126),在45例HBV-DNA載量>1 000的患者中,HPV陽(yáng)性率為20.00%(9/45),在81例HBV-DNA載量≤1 000的患者中,HPV陽(yáng)性率為24.69%(20/81),兩組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.36,P=0.5489)。

表3 HBV與HPV合并感染情況

2.4 HBV感染對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變影響

1 166例受檢者中,有140例行HBV-DNA載量檢測(cè)和宮頸組織病理學(xué)檢查。結(jié)果如表4所示,HBV-DNA載量>1 000的檢出率為37.86%(53/140),在53例HBV-DNA載量>1 000的患者中,有宮頸上皮內(nèi)病變的發(fā)生率為47.17%(25/53);在87例HBV-DNA載量≤1 000患者中,有宮頸上皮內(nèi)病變的發(fā)生率為42.53%(37/87);兩組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.29,P=0.5918)。

表4 HBV感染對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變影響

3 討論

宮頸癌作為婦科常見(jiàn)病之一,發(fā)病率逐年上升[11]。在CIN時(shí)期發(fā)現(xiàn)并及時(shí)治療可以提高治愈率,但該時(shí)期無(wú)明顯臨床表現(xiàn),因此找到宮頸癌新的突破點(diǎn),盡早篩查、預(yù)防宮頸病變意義重大[12-13]。

HPV屬于DNA病毒,能感染皮膚和黏膜上皮,唯一宿主是人,高危型HPV感染使宮頸癌患病率增加[14]。HBV和HPV是人類(lèi)病毒感染常見(jiàn)類(lèi)型,當(dāng)人感染病毒后,病毒DNA與宿主基因整合,引起人體抑癌基因失活,癌基因過(guò)度表達(dá)從而致病[15-16]。雖然人體能一定程度抵抗致病菌,但大多患者自身免疫無(wú)法完全清除,容易造成感染[17]。

因此,本研究探索HBV與HPV關(guān)系,研究HBV及HPV亞型感染數(shù)量對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變的影響。結(jié)果顯示,在1 166例HPV分型及宮頸組織病理學(xué)檢查患者中,與HPV陰性組相比,HPV陽(yáng)性組宮頸低級(jí)別、高級(jí)別上皮內(nèi)病變及宮頸癌患病人數(shù)明顯升高,說(shuō)明HPV感染促進(jìn)宮頸癌及其癌前病變發(fā)生;但是HPV亞型多重感染與單純感染相比,宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)病變發(fā)生率無(wú)明顯差異,說(shuō)明HPV亞型感染數(shù)量與宮頸癌及其癌前病變無(wú)關(guān),研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致[18-20]。

在研究HBV與HPV及宮頸上皮病變關(guān)系中結(jié)果顯示,與HBV陰性組相比,HBV陽(yáng)性對(duì)HPV感染及宮頸癌相關(guān)上皮內(nèi)病變沒(méi)有明顯影響,說(shuō)明HBV感染與宮頸癌無(wú)關(guān)聯(lián),與HPV感染也無(wú)關(guān)聯(lián)。乙型肝炎病毒X蛋白結(jié)合蛋白作為腫瘤發(fā)展關(guān)鍵蛋白,雖然被證實(shí)與HPV和宮頸癌[10]關(guān)系緊密,但本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)單純感染乙型肝炎病毒不會(huì)促進(jìn)HPV感染,也不會(huì)導(dǎo)致宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生,為尋找宮頸癌新的突破點(diǎn)研究作鋪墊。