肝癌組織中p-STAT3、VIP的表達(dá)及與患者生存的相關(guān)性分析

李 一

河南省鄧州市中心醫(yī)院腫瘤一科 474150

肝癌為主要的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,調(diào)查顯示,全球每年新增85萬例肝癌患者,多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已至中晚期,嚴(yán)重威脅患者生命。研究發(fā)現(xiàn),即使經(jīng)過手術(shù)治療,肝癌的復(fù)發(fā)率仍然較高。目前認(rèn)為,肝癌患者術(shù)后生存與病毒感染、脈管侵犯、甲胎蛋白水平等多種因素相關(guān),但是在評估肝癌患者預(yù)后中的應(yīng)用有限,肝癌患者預(yù)后評估的敏感性指標(biāo)仍需進(jìn)一步探索。磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3(Phosphorylated-signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3(Signal transducer and activator of transcription 3 ,STAT3)的活化產(chǎn)物,研究發(fā)現(xiàn),其與肝硬化組織的癌變明顯相關(guān)[1]。血管活性腸肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)為內(nèi)含28個(gè)氨基酸的堿性腦腸肽,研究發(fā)現(xiàn),其可通過巨噬細(xì)胞的極化促進(jìn)肝癌的發(fā)生和發(fā)展[2]。但是目前關(guān)于肝癌組織p-STAT3、VIP與患者生存的相關(guān)性研究較少。因此,本文以80例肝癌患者為研究對象,對此進(jìn)行了分析,報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2015年3月—2018年2月我院腫瘤科收治的肝癌患者80例,其中男57例,女23例,年齡26～71歲,平均年齡(48.95±13.54)歲,腫瘤直徑3～8cm,平均腫瘤直徑(5.18±1.45)cm,AJCC臨床分期：Ⅰ期35例,Ⅱ期19例,Ⅲ期21例,Ⅳ期5例?；颊呔炇鹬橥鈺?本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為原發(fā)性肝癌[3];資料完整;接受隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前行放化療等相關(guān)治療者;伴其他惡性腫瘤;繼發(fā)性肝癌;自身免疫性疾病;合并其他消化系統(tǒng)疾病;血液系統(tǒng)疾病;不配合治療者。

1.2 觀察指標(biāo) (1)所有患者均行肝切除術(shù),術(shù)中取肝癌組織和癌旁組織制作蠟塊標(biāo)本,肝癌組織蠟塊均經(jīng)病理診斷,確認(rèn)為肝細(xì)胞性肝癌,癌旁組織蠟塊確認(rèn)為肝臟正常組織。將患者石蠟標(biāo)本制成4μm切片后,使用免疫組化法測定肝癌病理組織和癌旁組織中的p-STAT3、VIP表達(dá),其中p-STAT3在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá),VIP在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。隨后將切片置于高倍顯微鏡下觀察,陰性對照為PBS緩沖液,陽性對照為已知的p-STAT3、VIP陽性切片。免疫組化結(jié)果由1名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師隨機(jī)取5個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行染色強(qiáng)度和著色細(xì)胞占比評分：染色強(qiáng)度中,0分未著色,1分輕度著色,2分中度著色,3分重度著色;著色細(xì)胞占比中,0分為占比≤5%,1分為5%<占比≤25%,2分為25%<占比≤50%,3分為占比>50%。兩項(xiàng)乘積即為免疫組化最終評分,評分≥4分為高表達(dá),低于4分即為低表達(dá)。免疫組化S-P試劑盒、p-STAT3抗體、VIP抗體均購買自美國圣克魯斯生物技術(shù)公司。(2)對所有患者術(shù)后進(jìn)行電話或門診隨訪,記錄肝癌患者總生存時(shí)間(Overall survival,OS),其中OS為患者術(shù)后至死亡或末次隨訪的總時(shí)間,末次隨訪日期為2021年2月。使用Kaplan-Meier法對不同p-STAT3、VIP表達(dá)患者進(jìn)行生存分析。(3)分析影響肝癌患者生存的單因素。比較不同臨床特征肝癌患者的3年生存率。(4)將單因素結(jié)果中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入COX多元回歸中,分析影響肝癌患者生存的危險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1 p-STAT3、VIP在肝癌及癌旁組織中的高表達(dá)率比較 p-STAT3、VIP在肝癌組織中的高表達(dá)率高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 p-STAT3、VIP在肝癌及癌旁組織中的高表達(dá)率比較 [n(%)]

2.2 不同p-STAT3、VIP表達(dá)患者的OS比較 80例肝癌患者均獲得有效隨訪,無失訪病例,隨訪時(shí)間7～53個(gè)月,中位隨訪時(shí)間為26個(gè)月。p-STAT3低表達(dá)患者的OS為(36.32±2.59)個(gè)月,高表達(dá)患者為(24.76±2.20)個(gè)月,VIP低表達(dá)患者的OS為(40.53±3.53)個(gè)月,高表達(dá)患者為(26.50±1.91)個(gè)月。p-STAT3和VIP低表達(dá)肝癌患者的OS均高于高表達(dá)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.943、7.311,P<0.05)。見圖1和圖2。

圖1 不同p-STAT3表達(dá)患者的OS比較

圖2 不同VIP表達(dá)患者的OS比較

2.3 影響肝癌患者生存的單因素分析 80例肝癌患者的3年生存率為33.75%(27/80)。單因素分析表明,腫瘤包膜不完整、p-STAT3高表達(dá)、VIP高表達(dá)均與患者3年生存率相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 影響肝癌患者生存的單因素分析[n(%)]

2.4 影響肝癌患者生存的危險(xiǎn)因素 將腫瘤包膜不完整、p-STAT3高表達(dá)、VIP高表達(dá)納入影響肝癌患者生存的COX回歸分析中,賦值方法：腫瘤包膜不完整(是=1,否=0),p-STAT3高表達(dá)(是=1,否=0),VIP高表達(dá)(是=1,否=0)。結(jié)果表明,腫瘤包膜不完整、p-STAT3高表達(dá)、VIP高表達(dá)均為影響肝素患者生存的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3。

表3 影響肝癌患者生存的危險(xiǎn)因素

3 討論

肝癌早期癥狀不典型,大部分患者確診時(shí)已至中晚期,調(diào)查顯示,盡管醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步使肝癌患者預(yù)后得到一定改善,但是5年生存率仍然較低,約為14.1%,目前肝癌已經(jīng)成為惡性腫瘤患者致死的主要疾病類型[4]。肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移為影響肝癌患者術(shù)后生存的主要因素,其中p-STAT3可通過調(diào)控抗凋亡基因survivin等多種活性因子水平,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲,研究發(fā)現(xiàn),肝癌組織中p-STAT3的表達(dá)量與腫瘤直徑、TNM分期等具有明顯的相關(guān)性[5]。VIP為機(jī)體內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因子,研究發(fā)現(xiàn),其可通過磷脂酰肌醇3-激酶、Ras蛋白/絲裂原活化蛋白激酶等通路,阻礙免疫監(jiān)視,促進(jìn)腫瘤逃逸[6]。通過明確p-STAT3和VIP與肝癌患者生存的相關(guān)性,可為肝癌患者治療方案優(yōu)化及預(yù)后評估提供相關(guān)依據(jù)。

本文發(fā)現(xiàn),p-STAT3、VIP在肝癌組織中的高表達(dá)率均明顯高于癌旁組織,提示p-STAT3、VIP均可能與肝癌的進(jìn)展相關(guān)。其中p-STAT3主要位于細(xì)胞核中,可通過激活細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)基因,阻礙缺氧誘導(dǎo)因子-1α的降解,促使細(xì)胞的增殖失調(diào)以及惡性轉(zhuǎn)化,此外,p-STAT3還可通過上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子水平,促進(jìn)腫瘤新生血管的生成,進(jìn)而參與至肝癌的發(fā)生發(fā)展中[7]。正常情況下,VIP可通過與肝細(xì)胞表面的VIP受體相結(jié)合,在肝細(xì)胞內(nèi)與溶酶體作用失活,肝癌的發(fā)生可導(dǎo)致患者肝功能障礙,影響VIP受體活性,進(jìn)而使肝臟組織中VIP失活減少,表達(dá)升高[8]。

本文發(fā)現(xiàn),p-STAT3和VIP低表達(dá)肝癌患者的OS均明顯高于高表達(dá)患者,且p-STAT3高表達(dá)、VIP高表達(dá)均為影響肝素患者生存的危險(xiǎn)因素。其中p-STAT3高表達(dá)可通過胚胎發(fā)育相關(guān)基因Twist和類胰島素生長因子通路調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子Slug水平,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,有助于肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲,增加了肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn),進(jìn)而不利于患者預(yù)后[9]。VIP高表達(dá)可通過增強(qiáng)葡萄糖苷酶2蛋白活性,減少腫瘤細(xì)胞凋亡,促使腫瘤細(xì)胞逃逸,此外,VIP還可通過促使M2型巨噬細(xì)胞水平的增加,減少機(jī)體T細(xì)胞水平,進(jìn)而有助于腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,提高了肝癌患者復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)[10]。此外,本文中,腫瘤包膜不完整與患者生存明顯相關(guān),這可能是由于對于包膜不完整的腫瘤細(xì)胞,可明顯增加其向血管和肝臟浸潤的風(fēng)險(xiǎn),并有助于提高微衛(wèi)星灶的發(fā)生率,使肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)增加,進(jìn)而使生存期縮短[11]。

綜上所述,肝癌組織中p-STAT3和VIP均呈高表達(dá),且與患者生存明顯相關(guān),提示p-STAT3和VIP均可作為肝癌患者預(yù)后評估的有效指標(biāo)。