海南地區(qū)癲癇兒童HLA-B*1502基因與芳香族抗癲癇藥物治療后皮膚型藥物不良反應(yīng)的相關(guān)性研究

鐘莉莉, 陳 君, 王榆雅, 洪綿慧, 張 瀧

(海南省人民醫(yī)院/海南醫(yī)學(xué)院附屬海南醫(yī)院, 1. 藥學(xué)部, 2. 兒科, 海南 ?？? 570311)

癲癇在兒童中較為常見, 其根治難度大,患兒病情易反復(fù)發(fā)作。癲癇主要由腦細(xì)胞群異常超同步化放電所致,導(dǎo)致腦功能處于紊亂狀態(tài),癥狀表現(xiàn)為全身肌肉陣攣性、強(qiáng)直性抽搐,伴有意識改變,病情反復(fù)發(fā)作可導(dǎo)致患兒精神行為異常、智力減退,嚴(yán)重情況下可致死[1]。目前,抗癲癇藥物是治療該病的主要方式,常用藥物為芳香族抗癲癇藥物(AEDs), 包括奧卡西平、苯巴比妥、拉莫三嗪、卡馬西平等[2]。癲癇治療是一個較長的過程,長期使用AEDs會引起諸多不良反應(yīng),常見表現(xiàn)為藥物超敏綜合征、斑丘疹等,嚴(yán)重反應(yīng)為Stevens-Johnson綜合征(SJS)、藥物超敏綜合征(DHS)等,臨床將這類反應(yīng)稱之為皮膚型藥物不良反應(yīng)(cADRs), 輕度者通常在停藥后能夠自行緩解,但需更換藥物治療,嚴(yán)重者則可能導(dǎo)致死亡[3]。目前, cADRs的發(fā)生機(jī)制尚未徹底明確,有研究[4]認(rèn)為與人類白細(xì)胞抗原基因B(HLA-B)多態(tài)性有關(guān)。HLA-B*1502基因作為HLA-B的一員,也參與了cADRs的發(fā)生[5], 但其與cADRs的具體關(guān)系還有待研究。本研究納入100例癲癇兒童進(jìn)行觀察,分析HLA-B*1502基因與芳香族AEDs治療后cADRs的相關(guān)性,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2020年1月—2022年7月收治的100例癲癇兒童為研究對象,均使用芳香族AEDs治療,并根據(jù)是否發(fā)生cADRs分成cADRs組(n=32)與非cADRs組(n=68)。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合《臨床診療指南: 癲癇病分冊》[6]中的診斷標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)腦電圖檢查結(jié)合癥狀表現(xiàn)證實者; ② 年齡≤14歲者; ③ 使用芳香族AEDs治療者; ④ 均為海南本地患兒; ⑤ 有監(jiān)護(hù)人陪同者,且對研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 近2個月內(nèi)使用過非芳香族AEDs治療者,因其他藥物引起cADRs; ② 合并肝、肺、腎、心等臟器疾病者; ③ 存在免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)以及精神類疾病者; ④ 存在糖尿病、甲狀腺異常等遺傳代謝性疾病者; ⑤ 合并腫瘤疾病者。2組患兒基線資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 見表1。本研究方案已獲得倫理委員會同意。

表1 2組患兒基線資料比較

1.2 檢測方法

采集受試者靜脈全血3 mL, 置于抗凝管[含乙二胺四乙酸(EDTA)]行抗凝處理,存放于4 ℃環(huán)境中。在處理樣本前,上下顛倒充分混勻; 取血樣200.0 μL以及氯化銨1.2 mL, 充分混勻,室溫下放置5 min; 3 000轉(zhuǎn)/min離心5 min, 棄上清液,取生理鹽水1.0 mL加入,使白細(xì)胞懸浮; 3 000轉(zhuǎn)/min離心5 min, 棄上清液,取核酸純化試劑30.0～50.0 μL加入,充分吹打混勻,在室溫下放置30 min; 最終獲取白細(xì)胞混懸液,并經(jīng)數(shù)字熒光染色原位雜交法測定HLA-B*1502基因表達(dá)。取白細(xì)胞混懸液1.8 μL加入測序反應(yīng)通用試劑內(nèi),顛倒混勻,根據(jù)錄入樣本信息位置依次置于熒光檢測儀內(nèi)。本研究包括HLA-B*1502TA、HLA-B*1502TB這2個檢測位點,記錄HLA-B*1502基因分型與等位基因頻率,HLA-B*1502TA位點包括CC、GC、GG基因型,HLA-B*1502TB位點包括CC、CT以及TT基因型,分析HLA-B*1502基因與cADRs的相關(guān)性。HLA-B*1502基因型頻率=等位基因數(shù)/(總例數(shù)×2)。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)與亞分組

診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]: ① 輕微反應(yīng)。輕度的斑丘疹無需特殊處理,停藥后2～3 d癥狀緩解。② SJS與中毒性表皮壞死松解癥(TEN)。這類為重型藥疹,皮膚可見大皰,伴有廣泛黏膜損傷,可累及消化道、咽喉部、口腔、呼吸道、肛周、外陰等部位。若表皮剝脫面積占皮膚表面積的比率<10%, 則提示為SJS型; 若表皮剝脫面積占皮膚表面積的比率為10%～30%, 則提示為TEN與SJS重疊型; 若表皮剝脫面積占皮膚表面積的比率>30%, 則提示為TEN型。③ DHS。此類屬于重型藥疹,主要特點為發(fā)熱、皮疹、內(nèi)臟損害,皮膚可見紅斑丘疹,主要好發(fā)于軀干、面部與上肢部位,丘疹顏色逐漸變暗,待消退后可見色素沉著,維持時間達(dá)數(shù)月或者數(shù)年。根據(jù)cADRs患兒的反應(yīng)程度,將輕微反應(yīng)者納入輕微組, SJS、TEN以及DHS者納入重型組。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件導(dǎo)入數(shù)據(jù)信息,以[n(%)]描述計數(shù)資料,比較行χ2檢驗,基因分型比較自由度為2, 等位基因頻率比較自由度為1。以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述計量資料(呈正態(tài)分布),比較行t檢驗。采用Logistic回歸方法分析HLA-B*1502基因與cADRs的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組HLA-B*1502不同位點的基因分型比較

cADRs組HLA-B*1502TB位點的CT型比率高于非cADRs組,CC型比率低于非cADRs組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05); 2組HLA-B*1502TA位點的基因型比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 2組HLA-B*1502不同位點的基因分型比較[n(%)]

2.2 2組HLA-B*1502基因的等位基因頻率比較

cADRs組HLA-B*1502TB位點的T等位基因頻率為37.50%, 高于非cADRs組的18.38%, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05); 2組HLA-B*1502TA位點的等位基因頻率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 2組HLA-B*1502基因的等位基因頻率比較

2.3 輕微組與重型組HLA-B*1502基因分型比較

在32例發(fā)生cADRs的患兒中,輕微組20例,重型組12例。輕微組與重型組HLA-B*1502TA、HLA-B*1502TB位點的基因分型比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 輕微組與重型組HLA-B*1502基因分型比較[n(%)]

2.4 輕微組與重型組HLA-B*1502基因的等位基因頻率比較

輕微組與重型組HLA-B*1502TA、HLA-B*1502TB位點的等位基因頻率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 見表5。

表5 輕微組與重型組HLA-B*1502基因的等位基因頻率比較

2.5 患兒HLA-B*1502基因型與cADRs發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)性分析

鑒于cADRs組與非cADRs組HLA-B*1502TA位點的基因型差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 故此處無需將其納入風(fēng)險分析。結(jié)果顯示,HLA-B*1502TB位點的CT基因分型及T等位基因會增加癲癇兒童芳香族AEDs治療后cADRs的發(fā)生風(fēng)險,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表6。

表6 患兒HLA-B*1502基因型與cADRs發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)性分析

3 討 論

芳香族AEDs是治療癲癇的常用藥物,但這類藥物容易引起不良反應(yīng),包括血液系統(tǒng)不良反應(yīng)、中樞神經(jīng)不良反應(yīng)、代謝異常、cADRs等,其中以cADRs最為常見,輕者停藥后癥狀可消失,而一旦出現(xiàn)SJS、TEN、DHS等重型反應(yīng),對身體影響較大,會耽誤癲癇治療進(jìn)程[8]。AEDs治療后cADRs的發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜,可能與免疫反應(yīng)、易感基因等因素有關(guān)[9]。張祥等[10]發(fā)現(xiàn)HLA-B類基因與抗癲癇藥物所致的重癥藥疹存在相關(guān)性,其中HLA-B*40:01可能對預(yù)防重癥藥疹有保護(hù)作用。民福利等[11]指出,HLA-B*13:01基因與漢族人群AEDs治療后引起的交叉過敏反應(yīng)存在關(guān)聯(lián),是誘發(fā)交叉過敏反應(yīng)的一種危險基因型。由此可見,HLA-B類基因在cADRs發(fā)生過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,且基因類型不同,對疾病的影響也不同。HLA-B*1502作為HLA-B類基因的亞型,與cADRs發(fā)生也有關(guān)聯(lián)[12]。但現(xiàn)階段對于海南地區(qū)癲癇患兒HLA-B*1502基因與cADRs的關(guān)系尚未徹底明確,通過了解該地區(qū)患兒cADRs的發(fā)生機(jī)制,有望為后續(xù)治療提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示, cADRs組HLA-B*1502TB位點的CT型比率增高, CC型比率下降, T等位基因頻率顯著上調(diào),提示HLA-B*1502TB位點攜帶CT基因型及T等位基因的患兒更容易發(fā)生cADRs。SARGENT B等[13]認(rèn)為,在實施卡馬西平治療前,針對高危人群進(jìn)行HLA-B*1502基因檢測很有必要,對于預(yù)防TEN有一定的作用,也提示HLA-B*1502基因與藥疹發(fā)生有關(guān)。HLA-B*1502的CT基因分型及T等位基因參與cADRs的機(jī)制尚未明確,可能與藥物-免疫受體機(jī)制相關(guān), AEDs以及代謝物能與HLA-B*1502基因結(jié)合的多肽進(jìn)行非共價結(jié)合,形成藥物-免疫受體機(jī)制,即藥物及其代謝產(chǎn)物與多肽、蛋白共價結(jié)合,經(jīng)細(xì)胞處理后傳至主要組織相容性復(fù)合體分子,導(dǎo)致HLA特異性T細(xì)胞激活,介導(dǎo)毒副作用的發(fā)生[14]。因此,臨床要尤為重視對癲癇兒童HLA-B*1502基因的檢測,預(yù)估cADRs的發(fā)生風(fēng)險,以便給予針對性的治療。

SJS、TEN以及DHS是較為嚴(yán)重的cADRs類型,其中SJS與TEN可以共存,患者的前驅(qū)癥狀包括腹瀉、頭痛、發(fā)熱、關(guān)節(jié)疼痛等,隨之突然發(fā)生皮膚黏膜受損,表現(xiàn)為丘疹、大皰、水泡、紅斑等,隨著紅斑擴(kuò)大,可造成典型的靶形損害,紅斑融合成片,伴有紫癜[15]。重型反應(yīng)者的黏膜損害波及范圍非常廣,包括肛周、口腔、咽喉部、消化道、呼吸道等,以口腔黏膜受損最為常見,可導(dǎo)致張口困難,對進(jìn)食造成較大的影響[16]。本研究中,輕微組與重型組HLA-B*1502基因分型與等位基因頻率比較無顯著差異,提示HLA-B*1502基因可能與cADRs嚴(yán)重程度無關(guān)聯(lián),但本研究納入樣本量較少,還有待后續(xù)的進(jìn)一步論證。本研究結(jié)果顯示,HLA-B*1502TB位點的CT基因分型與T等位基因頻率可導(dǎo)致海南地區(qū)癲癇兒童AEDs治療后cADRs的發(fā)生風(fēng)險增高,證實HLA-B*1502基因與cADRs發(fā)生風(fēng)險具有相關(guān)性。皮膚反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制主要與免疫反應(yīng)相關(guān),這類患者皮損部位大多能檢測出自然殺傷細(xì)胞、毒性T細(xì)胞以及炎癥細(xì)胞[17]。HLA-B*1502基因能促進(jìn)藥物-免疫受體機(jī)制的形成,對毒副反應(yīng)有誘導(dǎo)作用,容易引起皮膚過敏反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示,i導(dǎo)HLA-B*1502TA位點的基因分型及等位基因頻率與海南地區(qū)癲癇兒童芳香族AEDs所致的cADRs發(fā)生無關(guān)?；诖私Y(jié)果,在海南地區(qū)癲癇兒童治療前,通過檢測HLA-B*1502TB位點,能為臨床干預(yù)提供依據(jù),有利于盡早預(yù)測cADRs發(fā)生風(fēng)險,采取預(yù)防措施。