我國新城疫分子流行病學(xué)研究進展

連 聰，溫肖會，呂殿紅，高小鵬，賈春玲，周秀蓉，常 琦，羅勝軍

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所/廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸用藥物與診斷技術(shù)廣東科學(xué)觀測實驗站/嶺南現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)廣東省實驗室肇慶分中心，廣東 廣州 510640）

新城疫（Newcastle Disease，ND）是一種由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的禽類急性、接觸性傳染?。?］，是嚴重損害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的疾病之一，世界動物衛(wèi)生組織將其劃為A 類傳染病，我國將其列為一類傳染病。自然條件下，NDV 經(jīng)受傷皮膚、消化道、呼吸道黏膜等部位侵入機體，也可通過垂直傳播導(dǎo)致幼禽感染。新城疫可引起雞、鴨、鵝、鴿子、鵪鶉等禽類感染，尤其雞受感染后通常會導(dǎo)致死亡，其他動物的癥狀一般比雞輕［2］。ND一年四季均可發(fā)生，春秋季多發(fā)，臨床上可根據(jù)發(fā)病速度、癥狀及死亡率將其分為最急性、急性、慢性3 種類型，其中急性ND 普遍流行，死亡率高（可達90%以上）。NDV 存在于病禽的所有組織器官、體液及分泌物中，腦、脾、肺含毒量最高，故病禽會出現(xiàn)轉(zhuǎn)脖、站立不穩(wěn)等神經(jīng)癥狀，脾臟充血、出血，亦可見明顯的呼吸困難、咳嗽和氣喘等呼吸道癥狀［3］。

ND 自1926 年在印度尼西亞被首次發(fā)現(xiàn)，至今已引發(fā)4 次全球性大規(guī)模流行［4］，從病毒流行史上看，ND 一直是家禽的毀滅性疾病，目前該疾病在許多國家仍然是影響家禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要問題之一。即使在ND 已經(jīng)得到控制的國家，依然有較重的經(jīng)濟負擔(dān)，主要用于疫苗接種和維持嚴格的生物安全措施［5］。目前市場上存在多種活疫苗和滅活疫苗，包括易于保存、運輸?shù)哪蜔酦DV 疫苗［6］，國內(nèi)普遍使用滅活疫苗防控ND。ND 經(jīng)常被誤診為沙門氏菌病、螺旋體病、喉氣管炎和某些出血性疾病，故對其診斷需要密切的監(jiān)測，以迅速、特異性地識別病原。血清學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測是NDV 檢測的標準方法，血清學(xué)檢測可短時間內(nèi)檢測到NDV 的存在，從而可迅速采取行動控制疫情傳播；分子生物學(xué)檢測則確定其基因分型，為后續(xù)疫苗研發(fā)提供方向。血清學(xué)檢測主要采用血凝抑制試驗與ELISA 檢測。血凝抑制試驗主要測量NDV 特異性抗體抑制NDV顆粒對紅細胞凝集的能力，因其成本較低及操作簡便而成為目前主要的檢測方法。ELISA 檢測高度敏感，產(chǎn)生的結(jié)果與血凝抑制試驗結(jié)果基本一致，也是常用的檢測方法。近年來，分子生物學(xué)檢測方法迅速發(fā)展，各新型技術(shù)的研發(fā)取得了重大成果，其中微陣列雜交技術(shù)、生物傳感器和下一代測序最受關(guān)注，但因成本高、技術(shù)復(fù)雜等原因尚未被廣泛使用，而普遍使用的技術(shù)是逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）和熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qPCR）。qPCR 技術(shù)使用最廣，相較于傳統(tǒng)檢測技術(shù)，該技術(shù)更便捷且具有更高的病毒檢測靈敏度。分子生物學(xué)技術(shù)的進步對分子流行病學(xué)的研究提供了有利條件，本文就NDV 流行病學(xué)及其基因型的遺傳進化等方面研究進展進行綜述，以期為NDV 的防控和疫苗研發(fā)提供參考。

1 NDV 病原學(xué)

NDV 對外界抵抗力較強，在自然環(huán)境中可生存較長時間；對低溫抵抗力強，低溫下可存活數(shù)月；60 ℃環(huán)境下經(jīng)45 min 可滅活，紫外線照射30 min 被滅活［7］；對乙醚等有機溶劑敏感。

NDV 是單股負鏈RNA 病毒，為副黏病毒科新城疫樣病毒屬的禽副黏病毒Ⅰ型［8］。NDV 多為圓形，直徑100～250 nm，有囊膜，單鏈不分節(jié)。NDV 基因組有3 種長度，分別為15 186、15 192、15 198 nt［9］，結(jié)構(gòu)為3'-NP-P-M-F-HN-L-5'（圖1），編碼6 種特異性結(jié)構(gòu)蛋白［10］，分別為核衣殼蛋白（NP）、磷蛋白（P）、基質(zhì)蛋白（M）、融合蛋白（F）、血凝素-神經(jīng)氨酸酶蛋白（HN）和大蛋白（L）。每個特異性結(jié)構(gòu)蛋白的基因都存在起始因子和終止因子序列，各蛋白基因之間通過基因間序列將彼此分隔開，保證其表達的準確性。

圖1 新城疫病毒結(jié)構(gòu)示意圖［3］Fig.1 Schematic diagram of the structure of Newcastle disease［3］

1.1 血凝素-神經(jīng)氨酸酶蛋白（HN）

HN 蛋白和F 蛋白為刺突糖蛋白，刺突長度約為8 nm，分別以三聚體和四聚體的形式存在，位于囊膜表面，在病毒感染過程中參與病毒的入侵，可誘導(dǎo)保護性免疫［11］，它們均為病毒熱穩(wěn)定性的決定因素［12］。HN 是一種Ⅱ型整合膜蛋白，蛋白分子量為74 kD，可使病毒吸附在細胞表面的唾液酸受體，并通過血凝素、神經(jīng)氨酸酶的生物學(xué)活性破壞受體功能，參與病毒入侵。HN的受體識別位點和神經(jīng)氨酸酶活性位點均位于球狀頭部，并且高度保守，球狀頭部區(qū)域也被認為是抗體結(jié)合位點［13］。由于終止密碼子位置不同，自然界中存在不同長度的HN 蛋白，最短的HN蛋白含571 個氨基酸，存在于速發(fā)菌株中；最長的HN 蛋白含616 個氨基酸，存在于緩發(fā)菌株中。HN 蛋白中擴展羧基末端的長度和序列可影響蛋白功能，但尚未明確其對NDV 毒力的作用［5］。

1.2 融合蛋白（F）

F 蛋白是存在于NDV 包膜上的表面糖蛋白，參與病毒穿入、細胞融合等過程。其基因組序列用于對NDV 毒株基因型進行分類，切割位點處序列是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）公認的毒力指標。NDV 系統(tǒng)性傳播及其毒力大小取決于F 蛋白在組織中的裂解。根據(jù)OIE 相關(guān)標準，位于112～116位氨基酸之間的F 蛋白切割位點具有多個堿性氨基酸殘基，并在117 位具有苯丙氨酸殘基的毒株被認為是強毒株；在117 位具有一元F 切割位點和亮氨酸殘基的毒株被認為是弱毒株［2］。

1.3 基質(zhì)蛋白（M）

M 蛋白本質(zhì)為疏水蛋白，位于核衣殼和脂質(zhì)膜之間，分子量約為40 kD，由364 個氨基酸組成。M 蛋白是一種堿性蛋白質(zhì)，具有與病毒核酸相互作用的區(qū)域（17 bp），包括9 個堿性氨基酸［14］，其在RNA 合成及病毒自身裝配中起關(guān)鍵作用［15］。M 蛋白在副粘病毒中高度保守，群體發(fā)生突變后其存在極少的非同義堿基替代，這可作為對不同地域NDV 分離株進行分類的依據(jù)［16］。

1.4 大蛋白（L）

L 蛋白是NDV 基因組中最大的蛋白質(zhì)，由2 204 個氨基酸組成，分子量為250 kD［9］。L 蛋白屬于RNA 依賴性RNA 聚合酶，與病毒組裝、合成相關(guān)，在病毒感染過程中充當病毒復(fù)制酶和轉(zhuǎn)錄酶，其合成病毒mRNA 并協(xié)助基因組RNA復(fù)制，還對新形成的mRNA 進行5'端加帽、甲基化及激活多聚A 聚合酶活性［17］。L 蛋白可調(diào)節(jié)NDV 的毒力，可能通過增加復(fù)制期間病毒RNA的合成速率而發(fā)揮有效作用［18］。

1.5 磷蛋白（P）

P 蛋白連接L 蛋白與NP 蛋白，是聚合酶的輔助因子。P 蛋白由395 個氨基酸組成，在特定的絲氨酸和蘇氨酸殘基處被磷酸化，并作為同源寡聚體發(fā)揮作用，其在病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中也具有至關(guān)重要的作用［5］。P 蛋白的四聚體介導(dǎo)L 蛋白和N-RNA 模板之間的相互作用，以防止NP 蛋白隨機包裹非病毒 RNA。此外，P 蛋白與未組裝的NP 蛋白形成復(fù)合物，調(diào)節(jié)逆轉(zhuǎn)錄過程。在病毒復(fù)制過程中，P 蛋白的不同結(jié)構(gòu)域與NP 蛋白相互作用時發(fā)揮不同功能。NDV 的6 個結(jié)構(gòu)蛋白基因中有5 個蛋白基因編碼單一的蛋白質(zhì)，只有P 蛋白基因通過RNA 編輯編碼3 個蛋白質(zhì)，即P 蛋白、V 蛋白和W 蛋白［9］。V 蛋白和W 蛋白是輔助蛋白，僅存在于病毒感染的細胞中，其中V 蛋白屬于干擾素（IFN）拮抗劑，對NDV 毒力大小起重要作用［19］。

1.6 核衣殼蛋白（NP）

NP 蛋白含489 個氨基酸，分子量為55 kD，覆蓋整個病毒核酸形成核糖核蛋白（RNP），以保護RNA 免受核酸酶的侵害［16］。NP 蛋白是病毒顆粒中最豐富的蛋白質(zhì)，電子顯微鏡下可見“人”字形結(jié)構(gòu)，是病毒復(fù)制和mRNA 生物合成所需的最小模板，與N 蛋白、P 蛋白、L 蛋白及基因組RNA 結(jié)合形成RNP。

2 NDV 分子流行病學(xué)進展

2.1 NDV 基因型

F 蛋白是主要的特異性結(jié)構(gòu)蛋白，根據(jù)其核苷酸序列劃分NDV 的基因型，其基因全長1 792 nt，ORF 長1 662 nt，編碼553 個氨基酸，分子量約55 kD［20-21］。根據(jù)其基因編碼可將NDV 分為I 和Ⅱ兩類。若F 蛋白裂解位點的氨基酸組成為112R/K-R-Q-K/R-R-F117，則其為I 類毒株；若裂解位點的氨基酸組成為112G/EK/R-Q-G/E-R-L117，則其為Ⅱ類毒株［22］。I 類毒株主要來源于野生鳥類，大多毒株為低毒力［23］，家禽中主要感染鴨、鵝等水禽，雞群中偶爾出現(xiàn)，但概率較小。Ⅱ類毒株是可引起禽類明顯癥狀的強毒株，具有多種基因型，分為I 型、Ⅱ型、Ⅲ型等，遺傳進化距離大于0.1 就被判定為不同基因型［3］。巴基斯坦和孟加拉國曾從鴿子中分離出基因型XXI.1.2 毒株［24-25］。因此，Ⅱ類毒株至少分為Ⅰ～XXI 達20 多種。Ⅱ類毒株在野生鳥類中具有某些特定的基因型，例如基因型Ⅵ型毒株為鴿子、鸕鶿等野生鳥類的特有毒株［26］，而至今并無證據(jù)表明該型毒株無感染家禽的風(fēng)險。

我國曾分離出多種基因型NDV毒株。1946年，我國分離到特有的Ⅱ類Ⅸ基因型F48E9 毒株［27］，為嗜神經(jīng)型強毒株，家禽表現(xiàn)出以神經(jīng)癥狀為主導(dǎo)的臨床特征［28］，即出現(xiàn)翅麻痹、跛行、站立不穩(wěn)、頭頸向后側(cè)扭轉(zhuǎn)、伏地旋轉(zhuǎn)等癥狀；在新城疫第3 次大流行時，主要流行株為Ⅱ類Ⅵ型毒株；20世紀90 年代NDV 的Ⅱ類Ⅶd 型成為我國主要優(yōu)勢基因型［29］；2010 年，廣東首次監(jiān)測到Ⅱ類XII型，并證實為強毒株［30］。這些毒株的成功分離為新城疫的診斷與防控提供了巨大幫助。進入21世紀以來，NDV Ⅰ類毒株的致病性有增強趨勢，從而引起人們的關(guān)注，2008 年首次分離出Ⅰ類病毒Duck China/08-004/2008［31］，自此逐漸加強對NDV Ⅰ類病毒的研究，而高致病性的Ⅱ類毒株始終是人們研究新城疫疾病的重點。到目前為止，NDV 的基因型仍在不斷改變，掌握其所有基因型并研究有針對性的防治方法才有可能凈化NDV。

2.2 分子流行病學(xué)

2.2.1 我國NDV 不同基因型流行情況 為了解我國部分地區(qū)NDV 流行毒株的基因型情況，本文統(tǒng)計整理了中國知網(wǎng)和PubMed 報道的NDV分子流行病學(xué)數(shù)據(jù)，結(jié)果（表1）發(fā)現(xiàn)，2008—2020 年間在各地區(qū)收集的14 062 份樣本中共分離到234 株毒株，其中166 株鑒定出具體基因型，涉及基因 型Ⅰ類1 型（4/166，2.41%）、2 型（3/166，1.81%）、3 型（60/166，36.14%），基因型Ⅱ類Ⅰ型（26/166，15.66%）、Ⅱ型（23/166，13.86%）、Ⅵ型（2/166，1.2%）、Ⅶ型（37/166，22.29%）、Ⅷ型（3/166，1.81%）、Ⅸ（7/166，4.22%）、Ⅻ（1/166，0.6%）。

表1 我國各地區(qū)NDV 毒株的基因型統(tǒng)計Table 1 Genotype statistics of NDV strains in various regions of China

由圖2 可知，NDV 在雞流行毒株中，Ⅰ類3 型（37/93，39.78%）占比最高，其次為Ⅱ類Ⅶ型（27/93，29.03%），Ⅱ類Ⅱ型（21/93，22.58%）則占比較少；在鴨流行毒株中，Ⅰ類3型（18/43，41.86%）占比最高，其次為Ⅱ類Ⅰ型（15/43，34.88%），Ⅱ類Ⅶ（7/43，16.28%）占比較低；在鵝流行毒株中，Ⅱ類Ⅰ型（7/16，43.75%）占比最高，其次為Ⅰ類3 型（5/16，31.25%）、Ⅰ類1 型（1/16，6.25%），此外還發(fā)現(xiàn)了1 株Ⅱ類Ⅻ型毒株，未發(fā)現(xiàn)Ⅱ類Ⅶ型病毒，推測其可能在鵝中感染率不高。Ⅰ類3 型毒株在雞、鴨、鵝中均有較強感染力，為保證家禽健康，加強對該型毒株研究具有重大意義。

圖2 不同家禽的NDV 毒株基因型統(tǒng)計Fig.2 Genotype statistics of NDV strains in different poultry species

2.2.2 遺傳進化分析 在我國分離出的NDV 多種基因型毒株中，Ⅱ類Ⅸ型是我國特有的毒株，而Ⅱ類Ⅶ型病毒現(xiàn)已成為我國NDV 流行的主要優(yōu)勢基因型［24］。我國西藏、廣西、河北、寧夏及山東、江蘇等華東地區(qū)都曾分離出Ⅱ類Ⅶ型毒株，其中山東、江蘇、河北分離到Ⅶd 亞型。由此表明，在基因Ⅶ型毒株中，Ⅶd 亞型更為流行。

ND 感染病例中，雞感染最多，以雛雞尤甚。其影響雞的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)，有時亦影響生殖系統(tǒng)。疾病表現(xiàn)受個體的易感性、病毒依賴性及其他壓力因素的影響。感染后所呈現(xiàn)的癥狀因基因型不同而異。感染Ⅰ類中的弱毒株，多表現(xiàn)為輕型癥狀，甚至不引起任何臨床癥狀。若感染Ⅱ類中的強毒株，則會引起機體明顯的臨床癥狀，甚至導(dǎo)致大批量死亡，故Ⅱ類毒株是研究和預(yù)防的主要方向。F 蛋白切割位點是病毒毒力的決定因素。本文選取了NCBI 中15 株不同基因型NDV 的F基因序列，用MEGAX 軟件的最大似然法對這些毒株的F基因序列進行分析，構(gòu)建了基于F基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹（圖3）。當前，基因Ⅱ型與基因Ⅶ型NDV 在雞群中較為流行，根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育樹可知，基因Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅸ型與基因Ⅶ型、Ⅷ型相距甚遠，針對基因Ⅱ型毒株的疫苗對基因Ⅶ型毒株的預(yù)防效果不佳，因此，在疫苗接種時，結(jié)合當?shù)丶梆B(yǎng)殖場內(nèi)實際情況，應(yīng)選擇最完善的接種方案。

圖3 NDV 基于F 基因的系統(tǒng)遺傳進化樹Fig.3 Phylogenetic evolutionary tree of NDV based on F gene

將Ⅱ類Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅶ型、Ⅷ型和Ⅸ型毒株的核苷酸序列進行比對（圖4），Ⅰ型病毒之間同源性為90.7%～93.8%，與其他基因型病毒的同源性為 85.6%～99.8%；Ⅱ型病毒之間同源性為89.5%～99.6%，與其他基因型病毒的同源性為85.1%～99.8%；Ⅶ型病毒之間同源性為85.2%～99.1%，與其他病毒的同源性為84.5%～95.6%；Ⅷ型病毒之間同源性為95.3%，與其他病毒的同源性為84.0%～94.4%；Ⅸ型病毒之間同源性為84.8%～95.6%，與其他病毒之間的同源性為84.0%～91.3%。各基因型病毒之間同源性相差不大，相比之下，Ⅶ型與Ⅷ型病毒與其他病毒之間同源性較小，Ⅸ型病毒與其他毒株同源性更小。

圖4 NDV 中F 基因核苷酸序列同源性分析結(jié)果Fig.4 Results of nucleotide sequence homology analysis of F gene in NDV

3 我國新城疫流行情況與免疫防控

為了解我國部分地區(qū)新城疫流行情況，本文整理2010—2020 年間的相關(guān)文獻，得到不同省區(qū)的NDV 陽性情況。由表2 可知，抗體檢測共45 534 份，陽性樣本41 698 份，陽性率為91.58%；抗原檢測共37 568 份，陽性樣本789 份，陽性率為2.10%?？贵w檢測顯示疫苗接種率良好，各地區(qū)間抗原陽性率在11.00%以下，具有較大差異，在具有NDV 疫情的地區(qū)需結(jié)合該地區(qū)的流行毒株來篩選疫苗，從而更科學(xué)、精準地防控NDV。

表2 NDV 抗原抗體檢測結(jié)果Table 2 Detection results of antibodies to NDV antigens

我國新城疫目前多為地方性散發(fā)流行，NDV中的外源基因具有穩(wěn)定性［51］，故疫苗的廣泛使用可有效減少NDV 的傳播，使疾病發(fā)生率顯著下降。目前，常見新城疫疫苗主要為B1、LaSota 和V4 等毒株的減毒活疫苗［52］，以及LaSota 和VH等毒株的滅活疫苗［53］。疫苗是預(yù)防NDV 發(fā)生、傳播的有效手段，但由于NDV 的F 基因具有較高變異率，基因型種類也不斷增多，疫苗免疫后并不能完全阻止流行毒株的侵襲［54］。因此，臨床上NDV 防控中疫苗（種類和基因型）的選擇至關(guān)重要，免疫方案的制定需要結(jié)合本地NDV 的實際流行情況，滅活疫苗和減毒活疫苗聯(lián)合使用有助于NDV 陽性場的控制，而選擇與NDV 流行毒株同源性較高的疫苗株進行免疫，對本場NDV 的凈化具有重要意義。此外，我們依然要做好傳染源的防控，定期對場內(nèi)環(huán)境進行檢疫，提高人員防疫意識，從根源上預(yù)防疾病暴發(fā)與傳播［55］。

Ⅰ類NDV 主要分離自野生鳥類，且大部分是低毒力甚至無毒力的毒株［56］，因此，我國NDV的防控措施主要針對Ⅱ類毒株。若能加強對Ⅱ類Ⅱ型和Ⅶ型這兩種主要流行毒株的研究，則能使防控工作取得更好成效。掌握主要感染的NDV 基因型有助于了解疾病的流行特征，這為我國NDV防控和新型疫苗研發(fā)提供依據(jù)。

4 結(jié)語

本文通過文獻對我國不同地區(qū)NDV 流行情況進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)NDV 主要分布于華南地區(qū)、華東地區(qū)及部分西北地區(qū)，各地區(qū)暴發(fā)程度具有較大差異，候鳥遷徙區(qū)域感染更為明顯。2010—2020年間，感染較嚴重地區(qū)的陽性率在11.0%左右，有些地區(qū)無陽性記錄，針對NDV 防控需結(jié)合當?shù)貙嶋H情況制定策略。對流行地區(qū)的NDV 基因型進行整理，發(fā)現(xiàn)Ⅰ類3 型、Ⅱ類Ⅱ型和Ⅱ類Ⅶ型是我國雞群中NDV 的主要流行基因型，Ⅰ類3 型和Ⅱ類Ⅰ型基因型是水禽（如鴨、鵝）的主要流行株。Ⅰ類毒株為弱毒株，臨床表現(xiàn)癥狀較輕，近年來其癥狀有加重趨勢，而目前對NDV 的研究依然以Ⅱ類毒株為主。Ⅰ類3 型毒株對雞、鴨、鵝均有較強感染性，且其更易通過野生鳥類進行傳播，故加強對Ⅰ類毒株的研究很有必要。通過對不同Ⅱ類毒株的F 基因序列進行比對，發(fā)現(xiàn)Ⅱ類Ⅰ型毒株與Ⅱ型毒株間同源性為89.7%～99.8%，Ⅰ型毒株與Ⅶ型毒株間同源性為86.6%～90.9%，Ⅱ型毒株與Ⅶ型毒株間同源性為85.4%～95.6%。

ND 是全球家禽業(yè)的主要威脅因素，不同程度毒力的NDV 毒株在禽類中廣泛傳播。ND 與其他疾病相比傳播率更高，傳播范圍更廣。衛(wèi)生條件差、營養(yǎng)缺乏、疫苗接種不完善、與其他禽類接觸等均能促進ND 的傳播。在疾病暴發(fā)前切斷可能感染的途徑，進行免疫保護是預(yù)防ND 的有效措施［57］。加強對病毒的監(jiān)測，即使對Ⅰ類中的弱毒株也不能掉以輕心，病毒入侵可使機體防御力顯著降低，極可能發(fā)生繼發(fā)性感染。繼發(fā)性細菌感染是病毒感染的常見后遺癥，相比輕型NDV 更具有破壞性。不斷完善防御策略是控制NDV 傳播的必要手段，由于NDV 傳播途徑多樣，野生鳥類、商業(yè)鳥類、寵物鳥類均有病毒傳播風(fēng)險，人們以往對其并無過多關(guān)注，這是ND 預(yù)防策略中較為薄弱的點，加強對這些鳥類的控制，嚴格依照生物安全標準進行飼養(yǎng)、檢疫，加固對NDV 的防御墻。一種優(yōu)秀的NDV 疫苗可以有效預(yù)防臨床疾病，目前可用的滅活和減毒活疫苗只能預(yù)防相應(yīng)的病毒感染，不能避免異源病毒入侵。研制新型疫苗及優(yōu)化防治策略的工作仍須繼續(xù)，以期在不久的將來找到有針對性、更簡捷精確控制NDV 的方法。