鴨疫里默氏菌病的診斷與綜合防控技術(shù)

陳美玲 王彩華 林巧彬 周寧縣鄉(xiāng)村振興服務(wù)中心 福建周寧 355400

鴨疫里默氏菌病是由鴨疫里默氏菌（RA）引起的一類傳染病。 鴨疫里默氏菌病能夠引起雛鴨腹瀉、腿翅癱軟、共濟(jì)失調(diào)和抽搐等臨床癥狀[1]，我國(guó)自1982 年首次報(bào)道商品鴨感染鴨疫里默氏菌病以來(lái)[2]，該病一直在全國(guó)各地流行，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)了巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。

1 病原學(xué)

鴨疫里默氏菌是一種無(wú)鞭毛、不運(yùn)動(dòng)、不形成芽孢、有夾膜的革蘭氏陰性小桿菌。 細(xì)菌大小為0.2～0.4 μm，除桿狀外，個(gè)別細(xì)菌呈長(zhǎng)絲狀。 桿菌一般呈單個(gè)散在，兩極著色。超微結(jié)構(gòu)觀察顯示該細(xì)菌的細(xì)胞壁致密，細(xì)胞膜呈3 層結(jié)構(gòu)，細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)之間有明顯的周邊隙[4]。

鴨疫里默氏菌可以在巧克力培養(yǎng)基、LB 培養(yǎng)基、胰蛋白肉湯及改良馬丁肉湯等培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但是其培養(yǎng)需要CO2才能生長(zhǎng)， 該細(xì)菌不能在普通瓊脂和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)， 這個(gè)培養(yǎng)特性常用于鑒別診斷。 RA 在巧克力培養(yǎng)基中上的培養(yǎng)形態(tài)為表面光滑、圓形、稍突起、邊緣光滑，菌落直徑1～1.5 mm；其在加了血清的肉湯和胰蛋白肉湯中培養(yǎng)，菌液呈現(xiàn)輕微渾濁、管底少量灰白色沉淀物。 RA 的生化特性不同地區(qū)報(bào)道不一致，可能與血清型有關(guān)。該菌不發(fā)酵碳水化合物如蔗糖、乳糖、果糖、葡萄糖等，是鑒定該細(xì)菌的一個(gè)重要特征。該菌不產(chǎn)生硫化氫，甲基紅試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)和西蒙硫酸鹽試驗(yàn)均為陰性。

2 流行特點(diǎn)

鴨疫里默氏菌病對(duì)雛鴨有較強(qiáng)的感染性， 其他禽類也會(huì)感染，如黑天鵝、野雞、鵪鶉和鳥(niǎo)類等，該病主要通過(guò)呼吸道、創(chuàng)傷口和消化道等多種途徑傳播，庫(kù)蚊是RA 的重要傳播媒介。 該病一年四季均可發(fā)生，以春、冬兩季發(fā)病率最高，特別是潮濕、陰雨天氣，病死率為30%～90%。該病主要感染1～8 周齡鴨，1 周齡內(nèi)鴨可能由于母源抗體保護(hù)，對(duì)該病不易感；隨著日齡的增加，2～3 周齡雛鴨對(duì)該病易感，病死率高；5～6 周齡鴨對(duì)該病抵抗力增加，8 周齡以上鴨很少見(jiàn)發(fā)生此病。 此外，該病一旦在某個(gè)養(yǎng)鴨場(chǎng)發(fā)生，其周圍的鴨場(chǎng)也都會(huì)相繼發(fā)生，具有明顯的“疫點(diǎn)”特征；父母代鴨感染過(guò)RA，其商品代也會(huì)發(fā)生RA，具有種源傳播特性。

應(yīng)激等環(huán)境因素對(duì)該病的流行、 危害程度具有重要的影響， 感染該病的患鴨初期不表現(xiàn)任何臨床癥狀， 但是衛(wèi)生條件差、 飼養(yǎng)管理差或飼養(yǎng)密度過(guò)高、場(chǎng)地潮濕、冷熱應(yīng)激等因素，會(huì)導(dǎo)致該病發(fā)病率和病死率升高，加劇該病的發(fā)生和流行。 此外，其他病原菌（如大腸桿菌、沙門氏菌等）的存在，會(huì)促進(jìn)該病的發(fā)生，RA 與其他細(xì)菌病的混合感染，會(huì)加劇患鴨死亡。

3 臨床癥狀及病理變化

3.1 臨床癥狀 該病的潛伏期一般為1～3 d， 有的可長(zhǎng)達(dá)7 d，按病程一般可分為最急性、急性、亞急性和慢性。 新建鴨場(chǎng)或未使用抗生素的鴨場(chǎng)發(fā)生該病以急性病例占多數(shù)； 老疫區(qū)或使用過(guò)抗生素的鴨場(chǎng)發(fā)生該病以亞急性和慢性為主。 最急性病例的鴨一般看不到任何臨床癥狀就突然死亡。 急性病例主要發(fā)生于2～3 周齡雛鴨， 主要表現(xiàn)為精神沉郁、嗜睡、點(diǎn)頭、腿軟不愿走動(dòng)、多臥地、共濟(jì)失調(diào)和震顫；眼瞼黏性分泌物增多使眼眶周圍羽毛黏連； 鼻孔堵塞，常見(jiàn)有漿液性分泌物而造成呼吸困難；糞便稀薄呈綠色或黃綠色，部分雛鴨腹部臌脹。亞急性和慢性病例主要發(fā)生在4～7 周齡小鴨，主要表現(xiàn)為精神不好、困倦、少食和腿軟不愿走動(dòng)，安靜時(shí)癥狀較為緩解可采食、飲水，似乎看起來(lái)跟健康鴨一樣，病程可長(zhǎng)達(dá)7～10 d，耐過(guò)的患鴨往往因發(fā)育不良而發(fā)展為僵鴨。

3.2 病理變化 剖檢感染RA 的患鴨可見(jiàn)全身漿膜表面有纖維素性滲出物， 病程長(zhǎng)的病例可見(jiàn)干酪樣滲出物；心臟可見(jiàn)心包積液、心外膜纖維素性滲出物；肝臟表面有灰白色纖維素性物，容易剝離，肝臟質(zhì)地變脆， 病程長(zhǎng)的患鴨可見(jiàn)肝臟表面滲出物形成淡黃色干酪樣團(tuán)塊， 不易剝離； 腎臟腫大呈現(xiàn)暗紅色、 質(zhì)脆； 氣囊由于纖維素性物附著而變得渾濁增厚，部分病例會(huì)與腹腔壁黏連；肺充血、氣管腔積水、小葉間質(zhì)水腫；脾臟腫大或附著纖維素性膜，部分鴨脾臟呈大理石狀； 腦組織常見(jiàn)充血、 水腫和小出血點(diǎn)。 輸卵管明顯增粗，有干酪樣物附著；跗關(guān)節(jié)常見(jiàn)腫脹、關(guān)節(jié)液增多、渾濁或黏稠；皮膚常見(jiàn)有壞死性皮炎，在皮膚和脂肪層之間有淡黃色滲出物，切面可見(jiàn)海綿狀組織樣變化。

4 診 斷

該病可依據(jù)臨床癥狀和剖檢病變作出初步診斷，但由于該病與大腸桿菌病、沙門氏菌病等的癥狀和病理變化相似，還需借助實(shí)驗(yàn)室檢查來(lái)確診，主要借助細(xì)菌學(xué)檢查、間接血凝試驗(yàn)、免疫熒光、PCR 等方法。

4.1 細(xì)菌學(xué)檢查 無(wú)菌取病變樣本，接種于巧克力培養(yǎng)基，在含CO2環(huán)境中培養(yǎng)24～48 h 后，觀察菌落形態(tài)并做純培養(yǎng)和生化試驗(yàn)。 若有標(biāo)準(zhǔn)血清， 可進(jìn)行瓊擴(kuò)試驗(yàn)進(jìn)行血清學(xué)鑒定。

4.2 間接血凝試驗(yàn) 運(yùn)用瓊脂擴(kuò)散制備抗原，與致敏醛化的綿羊紅血球發(fā)生凝集反應(yīng)的程度來(lái)檢測(cè)血清中RA 抗體，從而確定是否感染RA。

4.3 免疫熒光檢測(cè) 取病變組織涂片、 固定后，用特異的熒光抗體染色，在顯微鏡下觀察，可見(jiàn)細(xì)菌呈綠色熒光，多數(shù)單個(gè)散在。 借助免疫抗體的特異性，可鑒別診斷該病與鴨大腸桿菌病、沙門氏菌病等。

4.4 PCR 方法 利用參考毒株的16S rRNA 設(shè)計(jì)特異性引物，借助PCR 擴(kuò)增設(shè)備，可特異性檢測(cè)鴨疫里默氏菌，廣泛應(yīng)用于快速診斷、快速鑒別診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

5 防控技術(shù)

抗生素的使用在細(xì)菌病治療中發(fā)揮重要作用，但臨床上反復(fù)投藥的治療手段只是治標(biāo)不治本，既增加了生產(chǎn)成本， 同時(shí)又會(huì)在養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)形成耐藥菌株，不利于生產(chǎn)和食品安全等。 因此，選擇正確的疫苗進(jìn)行接種， 是預(yù)防該病的有效和安全措施， 由于RA 的血清型較多， 養(yǎng)殖場(chǎng)需要根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍械难逍颓闆r，進(jìn)行疫苗選擇。 此外，還需要通過(guò)環(huán)境控制、飼料改善和消毒等綜合生物安全措施進(jìn)行防治，才能取得良好的防控效果。

5.1 藥物治療 磺胺類抗生素是防治RA 的主要藥物，其他抗生素也有效果，但是許多藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，各地分離的菌株對(duì)抗生素的敏感性存在差異，同一地區(qū)的不同血清型菌株對(duì)藥物的敏感也不同，因此，在選擇藥物治療時(shí)，最好能夠進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇對(duì)流行菌株敏感的藥物。

5.2 疫苗預(yù)防 疫苗是防控RA 最安全的措施，有利于減少養(yǎng)殖場(chǎng)的發(fā)病率，降低經(jīng)濟(jì)損失。目前投入使用的有RA 滅活疫苗、弱毒苗和亞單位疫苗，由于血清型較多且復(fù)雜， 選擇疫苗時(shí)應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍械难逍途?，方能取得良好的免疫效果。我?guó)已經(jīng)研制出血清型1、2 和10 型RA 三價(jià)滅活苗以及血清型1、2、4 和5 型四價(jià)滅活疫苗，經(jīng)過(guò)攻毒保護(hù)試驗(yàn)、抗體的消長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定， 證明研制的疫苗攻毒保護(hù)效果可達(dá)91.7%～100%，具有良好的保護(hù)效果[6-7]。1991 年國(guó)外學(xué)者開(kāi)始對(duì)RA 弱毒疫苗進(jìn)行研究，而我國(guó)學(xué)者直至2008 年才開(kāi)始RA 弱毒疫苗的研究，通過(guò)篩選RA 自然弱毒菌株，免疫雛鴨后21 d 能檢測(cè)較高的血清抗體效價(jià)， 同源攻毒保護(hù)率達(dá)80%，對(duì)雛鴨安全和無(wú)副作用，可產(chǎn)生良好的保護(hù)作用[8]；由于RA 血清型復(fù)雜而又多種， 各種血清型之間缺乏免疫保護(hù)力， 因此研制多血清型的亞單位疫苗是防治該病的理想方法。 有研究報(bào)道通過(guò)表達(dá)純化RA 的OmpA 基因和部分P45N 基因，或者利用培養(yǎng)液進(jìn)行提取外膜蛋白等方法獲得RA 的免疫性蛋白，通過(guò)免疫雛鴨，發(fā)現(xiàn)其對(duì)同源菌株能起到保護(hù)作用，說(shuō)明亞單位疫苗具有良好的免疫原性，但是目前尚未有商品化的亞單位疫苗[9]。 針對(duì)RA 感染，上述疫苗可用于預(yù)防、減少或者改善患鴨的臨床癥狀，但是僅僅依賴疫苗控制此病，也未能完全保護(hù)。 因此，必須通過(guò)綜合防控措施進(jìn)行有效的控制和預(yù)防該病。

5.3 嚴(yán)格生物安全措施 保持鴨舍環(huán)境清潔衛(wèi)生、加強(qiáng)對(duì)人員進(jìn)出的消毒工作，定期對(duì)鴨舍、水池等進(jìn)行清理和消毒；注意飼料、水源和鴨舍周圍環(huán)境的衛(wèi)生；常用的消毒藥有百毒殺、過(guò)氧乙酸等。 加強(qiáng)引種管理，不要從疫區(qū)引種。還應(yīng)該注意場(chǎng)區(qū)周圍的疫病流行情況，做出合理的防控措施。 及時(shí)處理病死鴨、定期清潔鴨舍糞便和無(wú)害化處理垃圾。

5.4 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，科學(xué)飼養(yǎng) 首先，改善飼養(yǎng)環(huán)境，加強(qiáng)通風(fēng)、溫度和濕度控制，夏季要通風(fēng)降溫、冬季既要保溫又要保證一定的換氣量。第二，降低飼養(yǎng)密度，避免因過(guò)度擁擠而造成疾病快速交叉?zhèn)鞑ァ５谌?，減少各種應(yīng)激如高溫、高濕、淋雨或驚恐等，在應(yīng)激情況下，會(huì)增加RA 的發(fā)病率。第四，按照“全進(jìn)全出”的飼養(yǎng)原則進(jìn)行生產(chǎn)，盡量減少不同日齡、不同批次的鴨群混養(yǎng)，減少打斗等應(yīng)激行為發(fā)生。 第五，改善日糧，合理添加保健藥物，根據(jù)不同日齡的營(yíng)養(yǎng)需求選擇滿足生長(zhǎng)需求的飼料， 天氣異常時(shí)可在飼料中添加抗應(yīng)激的電解質(zhì)和多維等。

6 小 結(jié)

自RA 發(fā)現(xiàn)以來(lái)， 由RA 引起的鴨傳染性漿膜炎給現(xiàn)代養(yǎng)鴨業(yè)造成較大影響， 該病由于血清型眾多，且無(wú)交叉保護(hù)，一旦感染難以凈化，并可引起不同批次和不同日齡的幼鴨反復(fù)發(fā)病， 造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病的發(fā)生率和病死率與環(huán)境因素、飼養(yǎng)管理、應(yīng)激因素和種源因素等息息相關(guān)，因此，在做好疫苗預(yù)防和藥物治療的同時(shí)，要從加強(qiáng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理等手段進(jìn)行綜合防控，才能達(dá)到預(yù)期的防治效果。